结核分支杆菌复合群引起的人和动物结核病,对人类健康及畜牧业发展造成了严重的威胁,早期诊断对于结核病的防控至关重要。在结核病众多诊断方法中,免疫学诊断方法中γ干扰素释放试验具有很好的应用前景。γ干扰素释放试验刺激抗原以结...结核分支杆菌复合群引起的人和动物结核病,对人类健康及畜牧业发展造成了严重的威胁,早期诊断对于结核病的防控至关重要。在结核病众多诊断方法中,免疫学诊断方法中γ干扰素释放试验具有很好的应用前景。γ干扰素释放试验刺激抗原以结核菌素(purified protein derivative,PPD)为主,然而PPD抗原成分复杂,诊断特异性和敏感性有待提高,因此寻找可以代替PPD的特异性刺激抗原成为了研究热点。论文系统综述了近年来报道用于γ干扰素释放试验的刺激抗原,重点概述了刺激抗原的免疫特性、刺激效果以及各类刺激抗原的优势、局限性和应用前景,以期为人和动物结核病的诊断及防控提供参考。展开更多
应用PCR方法从牛分枝杆菌Vallee株基因组中扩增获得mpb70、mpb83和esat-6三个目的基因片段。采用重叠延伸剪接技术(splicing by overlap extension,SOE)获得融合基因mpb70-mpb83后,将mpb70-mpb83和esat-6串连于同一表达载体pET32a(+)中...应用PCR方法从牛分枝杆菌Vallee株基因组中扩增获得mpb70、mpb83和esat-6三个目的基因片段。采用重叠延伸剪接技术(splicing by overlap extension,SOE)获得融合基因mpb70-mpb83后,将mpb70-mpb83和esat-6串连于同一表达载体pET32a(+)中得到重组质粒pET70-83-E6。转化BL21(DE3)大肠杆菌感受态后,经IPTG诱导以可溶的形式表达融合蛋白。用Ni2+亲合层析的方法纯化该融合蛋白。Western blot分析显示:该融合蛋白能与抗牛分枝杆菌阳性血清发生特异性反应,而与牛副结核病阳性血清不反应。用该纯化蛋白初步建立了间接ELISA方法,并检测了117份临床血清样本(其中67份为PPD阳性牛血清),阳性率为39.32%(46/117)份,与PPD皮试诊断的符合率为82.05%(96/117)。展开更多
文摘结核分支杆菌复合群引起的人和动物结核病,对人类健康及畜牧业发展造成了严重的威胁,早期诊断对于结核病的防控至关重要。在结核病众多诊断方法中,免疫学诊断方法中γ干扰素释放试验具有很好的应用前景。γ干扰素释放试验刺激抗原以结核菌素(purified protein derivative,PPD)为主,然而PPD抗原成分复杂,诊断特异性和敏感性有待提高,因此寻找可以代替PPD的特异性刺激抗原成为了研究热点。论文系统综述了近年来报道用于γ干扰素释放试验的刺激抗原,重点概述了刺激抗原的免疫特性、刺激效果以及各类刺激抗原的优势、局限性和应用前景,以期为人和动物结核病的诊断及防控提供参考。
文摘应用PCR方法从牛分枝杆菌Vallee株基因组中扩增获得mpb70、mpb83和esat-6三个目的基因片段。采用重叠延伸剪接技术(splicing by overlap extension,SOE)获得融合基因mpb70-mpb83后,将mpb70-mpb83和esat-6串连于同一表达载体pET32a(+)中得到重组质粒pET70-83-E6。转化BL21(DE3)大肠杆菌感受态后,经IPTG诱导以可溶的形式表达融合蛋白。用Ni2+亲合层析的方法纯化该融合蛋白。Western blot分析显示:该融合蛋白能与抗牛分枝杆菌阳性血清发生特异性反应,而与牛副结核病阳性血清不反应。用该纯化蛋白初步建立了间接ELISA方法,并检测了117份临床血清样本(其中67份为PPD阳性牛血清),阳性率为39.32%(46/117)份,与PPD皮试诊断的符合率为82.05%(96/117)。
