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多杀性巴氏杆菌天然弱毒疫苗的研究进展 被引量:2
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作者 许青原 关丽君 +2 位作者 张俊峰 薛云 赵战勤 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2024年第12期1658-1666,共9页
多杀性巴氏杆菌可感染多种动物,引起出血性败血症或传染性肺炎,在世界范围内广泛流行和致病,但对于动物巴氏杆菌病的防控技术相对滞后,主要使用的仍是20世纪中期研制的传统灭活疫苗和弱毒疫苗。在前期报道中,我们对动物巴氏杆菌病灭活... 多杀性巴氏杆菌可感染多种动物,引起出血性败血症或传染性肺炎,在世界范围内广泛流行和致病,但对于动物巴氏杆菌病的防控技术相对滞后,主要使用的仍是20世纪中期研制的传统灭活疫苗和弱毒疫苗。在前期报道中,我们对动物巴氏杆菌病灭活疫苗的研究进展进行了系统综述,发现灭活疫苗具有较高的同源保护力,但其免疫持续期较短,且不同血清型之间的交叉保护力弱。弱毒疫苗一般具有免疫持续期长、交叉保护力强、生产成本低等明显优势。在疫苗发展史上,多种弱毒疫苗被广泛使用,是防控人类和动物传染病、抗击微生物耐药性的重要工具,大幅度降低了地区性或国际性传染病的发病率和死亡率。纵观多杀性巴氏杆菌弱毒疫苗的研究与应用历史,主要包括天然弱毒疫苗、传统致弱疫苗和基因工程弱毒疫苗三个方面。本文就天然弱毒疫苗予以综述,以期为畜禽巴氏杆菌病新型弱毒疫苗的研发提供理论基础和新思路。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 巴氏杆菌病 弱毒疫苗 研究进展
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山羊伪结核棒状杆菌噬菌体的分离鉴定 被引量:2
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作者 李少飞 刘明杰 +7 位作者 姜悦才 李登亮 曹启航 陈凤强 高士孔 陈德坤 马文涛 赵慧英 《动物医学进展》 北大核心 2024年第1期12-17,共6页
为获得有效抗山羊伪结核棒状杆菌感染的生物制剂,根据NCBI登录的伪结核棒状杆菌菌株及棒状杆菌属噬菌体序列信息分别对其时间和地理分布进行统计,并以山羊伪结核棒状杆菌为宿主菌,从陕西有山羊伪结核患病史羊场的环境污水中分离噬菌体,... 为获得有效抗山羊伪结核棒状杆菌感染的生物制剂,根据NCBI登录的伪结核棒状杆菌菌株及棒状杆菌属噬菌体序列信息分别对其时间和地理分布进行统计,并以山羊伪结核棒状杆菌为宿主菌,从陕西有山羊伪结核患病史羊场的环境污水中分离噬菌体,采用双层平板法对该噬菌体进行分离和表征鉴定。结果显示,山羊伪结核棒状杆菌病的发生呈全球性分布,其中以美国与巴西最为严重,美国也是棒状杆菌属噬菌体分离株的主要来源地;分离出的1株噬菌体命名为M2;噬菌体M2呈典型的20面体结构,最佳感染复数为0.1,潜伏期为20 min,裂解周期为60 min,平均裂解量约为690 PFU/cell,表明获得了1株对伪结核棒状杆菌具有裂解作用的噬菌体。研究结果可为山羊伪结核棒状杆菌感染防控提供流行病学数据参考,并可为山羊伪结核棒状杆菌感染的临床治疗提供潜在新方法。 展开更多
关键词 伪结核棒状杆菌 干酪性淋巴结炎 噬菌体 山羊
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半乳糖基转移酶gttA基因缺失对4b型单增李斯特菌致病性的影响
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作者 郑明浩 郭骞 +5 位作者 刘芳 梁雄燕 刘晶 杨玉莹 田光明 方春 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1214-1222,共9页
【目的】探究半乳糖基转移酶gttA基因缺失对单增李斯特菌表面蛋白锚定及致病性的影响,以期为单增李斯特菌致病机制研究提供参考。【方法】通过同源重组方法构建gttA基因缺失株,分析亲本株ScottA、缺失株ΔgttA、回补株CΔgttA的生长与... 【目的】探究半乳糖基转移酶gttA基因缺失对单增李斯特菌表面蛋白锚定及致病性的影响,以期为单增李斯特菌致病机制研究提供参考。【方法】通过同源重组方法构建gttA基因缺失株,分析亲本株ScottA、缺失株ΔgttA、回补株CΔgttA的生长与运动能力;通过Western blotting探究gttA基因缺失对单增李斯特菌2种表面毒力蛋白InlB、ActA锚定的影响。采用结肠腺癌细胞系(Caco-2)进行黏附与侵袭试验及小鼠感染试验评估gttA基因缺失后对单增李斯特菌黏附与侵袭能力和致病性的影响。【结果】单增李斯特菌正常生长与运动能力不受gttA基因缺失的影响。Western blotting结果显示,gttA基因缺失导致毒力蛋白InlB和ActA在细菌细胞壁表面的锚定量极显著降低(P<0.01)。细胞黏附与侵袭试验结果显示,ΔgttA对Caco-2细胞的黏附和侵袭能力极显著低于ScottA和CΔgttA(P<0.01)。小鼠感染试验结果显示,gttA基因缺失导致单增李斯特菌在小鼠肝脏及脾脏中的定植能力极显著或显著减弱(P<0.01;P<0.05)。将gttA基因回补后,细菌对Caco-2细胞的黏附与侵袭水平,以及在肝脏、脾脏中的定植能力均能恢复至亲本株ScottA水平。【结论】gttA基因缺失并不影响单增李斯特菌生长与运动能力,但会影响主要毒力蛋白在单增李斯特菌表面的锚定,减弱该菌对Caco-2细胞系的黏附与侵袭能力及对小鼠的致病性。 展开更多
关键词 单增李斯特菌 半乳糖基转移酶 表面蛋白 致病性
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豚鼠气单胞菌研究进展
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作者 袁中华 宋海超 +3 位作者 刘俊彤 康元环 孙武文 单晓枫 《动物医学进展》 北大核心 2024年第6期106-110,共5页
豚鼠气单胞菌属于气单胞菌属,在自然界中通过食物和水广泛传播,是人、动物和水生生物共患的条件性病原菌,严重危害人类身体健康,同时是造成多种淡水鱼疾病的主要原因,给水产养殖业造成了巨大的威胁。目前,对豚鼠气单胞菌发展的研究,学... 豚鼠气单胞菌属于气单胞菌属,在自然界中通过食物和水广泛传播,是人、动物和水生生物共患的条件性病原菌,严重危害人类身体健康,同时是造成多种淡水鱼疾病的主要原因,给水产养殖业造成了巨大的威胁。目前,对豚鼠气单胞菌发展的研究,学界很少从系统去概述,论文从豚鼠气单胞菌的病原学、临床特征、流行现状、致病机理及防治等几个方面的最新研究进展进行概述,旨在为其防治及研究提供参考。 展开更多
关键词 豚鼠气单胞菌 流行病学 临床特征 致病机理 防治
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邯郸市猫疱疹病毒HD1株的分离与鉴定 被引量:1
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作者 余紫葳 蒋艳妹 +3 位作者 宋金祥 崔德福 刘永相 范春艳 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第7期58-64,共7页
为了探究猫疱疹病毒(FHV)在邯郸地区的分子流行病学特征,从邯郸地区不同动物医院收集到有呼吸道症状猫的眼、鼻分泌物共55份,经PCR初检后,将阳性样本接种于猫肾细胞(CRFK),细胞产生病变,经过蚀斑纯化、分子生物学检测、血清学鉴定、病... 为了探究猫疱疹病毒(FHV)在邯郸地区的分子流行病学特征,从邯郸地区不同动物医院收集到有呼吸道症状猫的眼、鼻分泌物共55份,经PCR初检后,将阳性样本接种于猫肾细胞(CRFK),细胞产生病变,经过蚀斑纯化、分子生物学检测、血清学鉴定、病毒形态鉴定,得到1株FHV。用gD基因引物扩增FHV分离株基因后能够得到特异性条带,且经过3轮蚀斑纯化后,得到1株亚克隆毒株,命名为FHV HD1。FHV HD1 P3代在CRFK上的病毒滴度为10^(6) TCID_(50)/100μL,并检测生长过程中8个时间点的病毒滴度,绘制分离株生长曲线。使用FHV-1特异性抗体进行间接免疫荧光检测,结果FHV HD1能够出现特异性荧光。BLAST分析表明FHV HD1株gD基因与其他FHV-1相似性达98.25%~99.91%。进化树分析表明与猫科动物源FHV-1亲缘关系较近,处于同一大分支,与犬疱疹病毒和其他动物疱疹病毒亲缘关系较远。本研究结果为FHV的进化分析和现阶段疫苗研发奠定了基础,对猫病毒性鼻气管炎的病原学、免疫学、临床诊断及分子生物学的研究具有重要参考价值。 展开更多
关键词 猫疱疹病毒1型 分离鉴定 生长动力学 GD基因
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鲫鱼源致病性维氏气单胞菌的分离鉴定及药敏试验 被引量:13
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作者 张冬星 康元环 +7 位作者 田佳鑫 鞠安琪 费亦东 贾俊鹏 孙武文 吴同垒 单晓枫 钱爱东 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期366-374,共9页
为鉴定长春市某渔场鲫鱼病原菌,从患病鲫鱼脾中分离到病原菌J YX-1,通过生理生化试验,16S rRNA、管家基因及毒力基因扩增,系统发育分析和药敏试验进行鉴定。结果显示,分离菌J YX-1对鲫鱼具有致病性;基于16Sr RNA与4种管家基因构建的系... 为鉴定长春市某渔场鲫鱼病原菌,从患病鲫鱼脾中分离到病原菌J YX-1,通过生理生化试验,16S rRNA、管家基因及毒力基因扩增,系统发育分析和药敏试验进行鉴定。结果显示,分离菌J YX-1对鲫鱼具有致病性;基于16Sr RNA与4种管家基因构建的系统发育树显示,该菌与维氏气单胞菌同属一个分支,亲缘关系较近,表明J YX-1为维氏气单胞菌;毒力基因检测发现,能从J YX-1扩增出气溶素(aer)、细胞毒性肠毒素(act)、黏附素(Aha)、丝氨酸蛋白酶(ser)、核酸酶(exu)及脂肪酶(lip)6种毒力因子基因。药敏试验结果显示,分离菌J YX-1对克拉霉素、妥布霉素及链霉素等11种药物敏感。本研究结果为鲫鱼感染维氏气单胞菌的鉴定及治疗提供了理论依据。 展开更多
关键词 16Sr RNA 维氏气单胞菌 鲫鱼 药敏试验
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团头鲂致病性维氏气单胞菌的分离鉴定及耐药性分析 被引量:13
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作者 张冬星 康元环 +3 位作者 张海月 安鼎杰 单晓枫 钱爱东 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1300-1307,共8页
为鉴定长春市某水产养殖场团头鲂的病原菌,从患病团头鲂体内分离到致病菌JWC086,对其形态和生理生化特性进行了鉴定,并对16S r DNA和管家基因gyr B序列、毒力基因携带情况及耐药性进行了分析。结果显示,该菌为革兰阴性菌,其生理生化特... 为鉴定长春市某水产养殖场团头鲂的病原菌,从患病团头鲂体内分离到致病菌JWC086,对其形态和生理生化特性进行了鉴定,并对16S r DNA和管家基因gyr B序列、毒力基因携带情况及耐药性进行了分析。结果显示,该菌为革兰阴性菌,其生理生化特性与维氏气单胞菌基本相同。16S r DNA序列比对结果表明,该菌与维氏气单胞菌(KP716691)的同源性在99%以上。基于16S r DNA与gyr B序列的进化分析显示,该菌与维氏气单胞菌同属一个分支,同源性较高。将分离菌人工感染团头鲂,7 d内团头鲂全部死亡,且临床症状与自然病例相似。通过毒力基因检测发现,能从JWC086扩增出气溶素(aer)、细胞毒性肠毒素(act)、黏附素(Aha)、丝氨酸蛋白酶(ser)、核酸酶(exu)、脂肪酶(lip)及密度感应系统调控基因(Lux S)等7种毒力因子。药敏试验结果显示,该菌对氟苯尼考及复方新诺明等药物比较敏感。本研究为团头鲂感染维氏气单胞菌的鉴定及治疗提供了科学依据。 展开更多
关键词 维氏气单胞菌 团头鲂 毒力因子 耐药
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不同宿主来源的维氏气单胞菌外膜蛋白AⅡ基因的克隆及比较 被引量:9
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作者 康元环 杨滨僮 +4 位作者 孟庆峰 陈龙 单晓枫 王惠 钱爱东 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期271-276,共6页
为探讨外膜蛋白AⅡ(OMPAⅡ)作为维氏气单胞菌共同保护性抗原的可能性,对不同宿主来源的维氏气单胞菌OMPAⅡ基因进行了克隆,获得了1 100bp左右的目的基因,并利用多种生物学软件对其序列进行了比较。结果表明,不同宿主来源的维氏气单胞菌O... 为探讨外膜蛋白AⅡ(OMPAⅡ)作为维氏气单胞菌共同保护性抗原的可能性,对不同宿主来源的维氏气单胞菌OMPAⅡ基因进行了克隆,获得了1 100bp左右的目的基因,并利用多种生物学软件对其序列进行了比较。结果表明,不同宿主来源的维氏气单胞菌OMPAⅡ基因序列的同源性在95.1%以上,编码氨基酸序列的同源性在97.3%以上,而且所有分析序列均具有明显的保守结构域,说明不同宿主来源的维氏气单胞菌OMPAⅡ具有很高的保守性;相对于ATCC35624和YP004393583.1来说,它们之间的差异主要表现在,CVCC3700、QXF、WL161、NJ34、NN725和BAF63175.1的OMPAⅡ基因缺失了3个碱基(CAA)。本研究结果为OMPAⅡ作为维氏气单胞菌基因工程亚单位疫苗候选成分提供了一定的理论依据。 展开更多
关键词 不同宿主 维氏气单胞菌 OMPA Ⅱ基因 克隆
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致病性鹿源坏死梭杆菌分离鉴定 被引量:11
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作者 王克坚 张洪英 +4 位作者 陈立志 刘晓颖 程世鹏 徐敏 钱国成 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第2期84-87,共4页
应用厌氧培养技术 ,从患坏死杆菌病鹿的病变坏死组织和脓汁中分离出一种主要的病原菌 ;通过细菌形态学、染色反应、培养特性、生化试验、血清学反应等鉴定方法 ,确定该病原分离株为严格厌氧性坏死梭杆菌 ,分型鉴定为A、AB和B型 ;实验动... 应用厌氧培养技术 ,从患坏死杆菌病鹿的病变坏死组织和脓汁中分离出一种主要的病原菌 ;通过细菌形态学、染色反应、培养特性、生化试验、血清学反应等鉴定方法 ,确定该病原分离株为严格厌氧性坏死梭杆菌 ,分型鉴定为A、AB和B型 ;实验动物感染证明A和AB型坏死梭杆菌为致病性菌株。 展开更多
关键词 鹿 坏死 杆菌病 坏死梭杆菌 分离 鉴定 厌氧培训
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上海市动物源性食品中单增李斯特菌的流行病学及生物被膜形成能力研究 被引量:12
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作者 王少辉 刘萍萍 +4 位作者 魏建超 邵东华 史子学 李蓓蓓 马志永 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2015年第4期31-36,共6页
为了解上海市动物源性食品中单增李斯特菌的污染状况,在上海市不同超市和农贸市场采集479份动物源性食品样品,依据国标方法进行菌株分离,并对分离菌株的耐药性、血清型及生物被膜形成能力进行测定。结果共分离鉴定34株单增李斯特菌,分... 为了解上海市动物源性食品中单增李斯特菌的污染状况,在上海市不同超市和农贸市场采集479份动物源性食品样品,依据国标方法进行菌株分离,并对分离菌株的耐药性、血清型及生物被膜形成能力进行测定。结果共分离鉴定34株单增李斯特菌,分离率为7.1%(34/479)。药敏试验结果显示单增李斯特菌分离株的耐药率虽然不高,但日趋严重,对氨苄青霉素和万古霉素均敏感,对头孢曲松的耐药性最高(55.88%),林可霉素次之(41.18%)。血清型鉴定表明单增李斯特菌分离株以血清型1/2a(3a)型为主(76.47%),血清型1/2c(3c)次之(17.65%),而致病性强的血清型4b(4d、4e)仅占2.94%。生物被膜形成能力实验表明,所有的菌株均能形成生物被膜,其中76.47%(26/34)分离株生物被膜形成能力微弱。上海市动物源性食品中单增李斯特菌污染情况较为严重,主要流行1/2a(3a)血清型,耐药率日趋严重,均可形成生物被膜。因此,应加强对动物源性食品中单增李斯特菌的监控。 展开更多
关键词 单增李斯特菌 耐药性 血清型 生物被膜
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产气荚膜梭菌β毒素和ε毒素以及腐败梭菌α毒素三联基因工程灭活疫苗的制备与免疫效力评价 被引量:5
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作者 彭国瑞 董令赢 +3 位作者 李旭妮 魏津 蒋玉文 彭小兵 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期918-923,共6页
为了获得高表达量的重组C型产气荚膜梭菌β毒素,鉴定其致死性和反应原性,并评价其与D型产气荚膜梭菌ε毒素和腐败梭菌α毒素共表达产物联合制成三联基因工程灭活疫苗的免疫保护效力。设计含不同酶切位点的2对引物,PCR扩增C型产气荚膜梭... 为了获得高表达量的重组C型产气荚膜梭菌β毒素,鉴定其致死性和反应原性,并评价其与D型产气荚膜梭菌ε毒素和腐败梭菌α毒素共表达产物联合制成三联基因工程灭活疫苗的免疫保护效力。设计含不同酶切位点的2对引物,PCR扩增C型产气荚膜梭菌β毒素基因cpb1和cpb2,将二者克隆至pRSFDuet-1质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),自诱导培养基诱导2段基因共表达。用SDS-PAGE和Western-blot以及小鼠毒性试验、抗毒素血清和中和试验对表达产物进行鉴定。将诱导收获的大肠杆菌以及D型产气荚膜梭菌ε毒素和腐败梭菌α毒素的共表达产物1∶2配比灭活制成三联灭活铝佐剂疫苗,以每只1mL剂量皮下免疫家兔2次后,测定血清中和抗体效价,用1MLD的C、D型产气荚膜梭菌毒素和腐败梭菌毒素分别攻击。结果显示,所构建的重组大肠杆菌BL21(pRSFDuet-cpb1-cpb2)能够表达重组β毒素,产物能够与C型产气荚膜梭菌抗毒素血清反应,且具有小鼠致死毒性,抗毒素血清可以将其毒性中和;制成联合疫苗免疫家兔,免疫血清对C型产气荚膜梭菌毒素的中和抗体效价为8MLD/0.1mL,对D型产气荚膜梭菌毒素的中和抗体效价为45MLD/0.1mL,对腐败梭菌毒素的中和抗体效价为1.5MLD/0.1mL;用3种毒素攻击免疫组家兔均全部保护,对照组全部死亡,达到《中华人民共和国兽药典三部(2015版)》效力检验标准。本研究为羊猝狙、肠毒血症和快疫三联疫苗的研制提供了试验基础。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 腐败梭菌 Β毒素 ε毒素 Α毒素 共表达 疫苗
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鸭源多杀性巴氏杆菌在人工感染雏鸭体内的动态研究 被引量:6
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作者 都启晶 蒋文灿 +4 位作者 彭广东 李淑娜 郑维维 刘义铃 刘巍申 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期699-704,共6页
为探索多杀性巴氏杆菌在雏鸭体内的动态病理变化,用小鼠复壮鸭源多杀性巴氏杆菌,经测定其滴鼻途径的LD50=1×10-4.5/0.2mL,口服途径的LD50=1×10-2.375/0.2mL。用100LD50剂量,以口服、滴鼻途径分别感染雏鸭,于感染后6h、12h、18... 为探索多杀性巴氏杆菌在雏鸭体内的动态病理变化,用小鼠复壮鸭源多杀性巴氏杆菌,经测定其滴鼻途径的LD50=1×10-4.5/0.2mL,口服途径的LD50=1×10-2.375/0.2mL。用100LD50剂量,以口服、滴鼻途径分别感染雏鸭,于感染后6h、12h、18h和24h取心、肝、肺、肾及胸腺进行组织活菌计数。口服和滴鼻感染后12h,从胸腺、肝、心、肺检测到生长繁殖的病原菌,18h从口服感染组的肾脏检出目标菌,24h从滴鼻组的肾脏检出目标菌。口服感染12h,胸腺中菌数最高,达5.33×103CFU/g,依次是肝、肺、心、肾。滴鼻感染12h,肺中菌数最高,达5.00×103CFU/g,依次是胸腺、肝、心、肾。24h均以胸腺菌数最高。表明检测体内鸭巴氏杆菌抗原或分离病原菌,首选器官是胸腺和肺,其次是肝、心。同时取心、肝、肺、肾、脾、胸腺、法氏囊、腺胃和十二指肠制作病理切片。消化道途径感染出现病变的最早时间是侵入后6h,呼吸道途径感染出现病变的时间小于6h。口服途径感染雏鸭后6h,各器官都表现以充血为主要特征的轻微病理变化,6h~12h表现以细胞肿胀、开始细胞变性为特征的病理变化。12h~18h表现细胞变性加剧,开始核浓缩、核碎裂为特征的病理变化。18h~24h表现核浓缩、核碎裂加剧,细胞溶解的细菌损伤病理,以及淋巴细胞浸润、免疫器官网状内皮细胞增生相伴的免疫损伤。滴鼻途径的病理变化与口服途径相似,但病理进程有所提前。鸭多杀性巴氏杆菌对胸腺、脾、法氏囊等免疫器官造成病理损伤,以胸腺和脾脏的损伤较为严重。 展开更多
关键词 鸭源多杀性巴氏杆菌 感染雏鸭 致病力 细菌动态繁殖 动态病理
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IBDV感染对T细胞趋化因子受体及其配体基因表达的影响 被引量:6
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作者 欧长波 王秋霞 +6 位作者 张艳红 黄明月 余燕 马金友 魏小兵 刘明成 刘兴友 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期222-226,共5页
传染性腔上囊病毒(IBDV)感染家禽过程中,大量外源T细胞迁移到靶器官腔上囊组织,造成家禽严重的免疫抑制,本试验主要为了弄清影响T细胞定向迁移的关键因子。本试验利用IBDV感染SPF鸡动物模型,收集IBDV感染后第1和3天的腔上囊、胸腺和脾组... 传染性腔上囊病毒(IBDV)感染家禽过程中,大量外源T细胞迁移到靶器官腔上囊组织,造成家禽严重的免疫抑制,本试验主要为了弄清影响T细胞定向迁移的关键因子。本试验利用IBDV感染SPF鸡动物模型,收集IBDV感染后第1和3天的腔上囊、胸腺和脾组织,利用定量PCR技术来测定T细胞趋化因子受体相关基因表达水平。结果显示,感染对照组中CCR4、CCR5、CCR6和CCR7基因表达水平明显升高,与健康对照组差异显著(P<0.01),IBDV感染后第1天趋化因子受体基因表达水平比第3天高;CXCR4基因表达水平先升高后降低,变化明显;同时腔上囊组织中CCR5和CCR7的配体CCL4和CCL19基因表达水平也显著升高。结果表明,CCR5/CCL4、CCR7/CCL19轴可能参与T细胞迁移至腔上囊的过程,从而对IBDV的致病性产生重要作用。 展开更多
关键词 传染性腔上囊病毒 T细胞 趋化因子 趋化因子受体
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腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白的基因克隆与表达 被引量:7
14
作者 王克坚 Dhungyel Om +5 位作者 冯书章 吴广谋 杨海滨 Egerton JR 朱平 殷震 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期362-366,共5页
用 PCR技术从腐蹄病 E型节瘤拟杆菌克隆出具免疫保护性抗原 0 .93 kb纤毛蛋白基因 ( Pili基因 ) ,利用该基因构建了纤毛蛋白基因表达载体。先将 PCR产物 Pili基因克隆于 TA Cloning System,扩增后 ,用Eco R 酶切 ,低熔点胶回收 ,经 Kle... 用 PCR技术从腐蹄病 E型节瘤拟杆菌克隆出具免疫保护性抗原 0 .93 kb纤毛蛋白基因 ( Pili基因 ) ,利用该基因构建了纤毛蛋白基因表达载体。先将 PCR产物 Pili基因克隆于 TA Cloning System,扩增后 ,用Eco R 酶切 ,低熔点胶回收 ,经 Klenow补平后 ,用 T4DNA连接酶与中间载体 p PLλ连接 ,将 Pili基因克隆于 p PLλ载体 ;经 Bam H 、Bgl 、Pvu 和 Smal +Bgl 酶切鉴定和 p PLλ-Pili重组质粒 Pili基因序列测定正确后 ,扩增 p PLλ-Pili重组质粒 ,用 Bam H 酶切出 2 .1 kb大小的片段 ,回收后 ,与 p ME2 90表达质粒连接 ,转染宿主细胞 PAK/2 pfs,在营养肉汤中进行 Pili基因的表达。培养 1 8~ 2 4 h后 ,离心 ,向上清液中加入 0 .1mol/L Mg Cl2 提取重组纤毛蛋白。用羊抗兔 E型节瘤拟杆菌抗血清与提取的重组纤毛蛋白进行对流免疫电泳 ,证明重组纤毛蛋白具有特异性 ;染料结合法测定 1 0 0 0 m L上清液中表达纤毛蛋白粗含量约为 1 1 4mg。SDS-PAGE测定重组纤毛蛋白的表达量占总菌量的 1 1 .8%,Western 展开更多
关键词 腐蹄病 节瘤拟杆菌 纤毛蛋白 基因克隆
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单增李斯特菌inlK基因缺失株的构建及其生物学特性分析 被引量:10
15
作者 王少辉 刘萍萍 +4 位作者 魏建超 邵东华 赵秋华 史子学 马志永 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2017年第4期19-23,共5页
为了分析内化素InlK对单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)生物学特性及致病性的影响,利用自杀性质粒进行同源重组构建LM标准菌株10403s的inlK基因缺失株,然后比较分析野生株、inlK基因缺失株的生长特性、生物被膜形成能力、细胞... 为了分析内化素InlK对单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)生物学特性及致病性的影响,利用自杀性质粒进行同源重组构建LM标准菌株10403s的inlK基因缺失株,然后比较分析野生株、inlK基因缺失株的生长特性、生物被膜形成能力、细胞侵袭能力、动物致病力等差异。结果显示,inlK基因缺失不影响LM的生长速度,但可导致LM的生物被膜形成能力下降。细胞感染试验表明基因缺失株ΔinlK对RAW264.7细胞的侵袭及胞内存活能力分别下降了18%和31%。动物感染试验显示野生株和基因缺失株ΔinlK对小鼠的致死率分别为80%(4/5)和40%(2/5),且基因缺失株ΔinlK的体内定殖能力显著低于野生株。本研究表明内化素InlK在LM感染过程中发挥着重要作用,为了解LM的致病作用提供参考。 展开更多
关键词 单增李斯特菌 inlK基因 致病性
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青藏高原牦牛多杀性巴氏杆菌荧光定量RQ-PCR检测方法的建立 被引量:6
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作者 赵静 张红见 +2 位作者 马梅琴 廖明 陈刚 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2013年第10期18-20,24,共4页
参照GenBank中已发表的多杀性巴氏杆菌种特异性基因KMT-1的保守序列设计1对引物,建立了牦牛多杀性巴氏杆菌实时荧光定量RQ-PCR检测方法。获得的标准曲线相关系数R值为0.9998,标准曲线的线性范围达到1.0×100~1×1010拷贝。对... 参照GenBank中已发表的多杀性巴氏杆菌种特异性基因KMT-1的保守序列设计1对引物,建立了牦牛多杀性巴氏杆菌实时荧光定量RQ-PCR检测方法。获得的标准曲线相关系数R值为0.9998,标准曲线的线性范围达到1.0×100~1×1010拷贝。对大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯氏菌和伤寒沙门菌等非巴氏杆菌进行检测,结果均为阴性。结果表明,本研究建立的荧光定量RQ-PCR方法敏感性高,特异性强,为青藏高原牦牛多杀性巴氏杆菌病的早期诊断及分子流行病学调查提供了一种新的快速检测方法。 展开更多
关键词 牦牛 多杀性巴氏杆菌 SYBR Green 实时荧光定量RQ-PCR
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上海市动物源性食品中单增李斯特菌的MLST分析 被引量:9
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作者 刘萍萍 王少辉 +5 位作者 赵秋华 李蓓蓓 邵东华 史子学 魏建超 马志永 《中国动物传染病学报》 CAS 2013年第4期18-22,共5页
为了解上海市动物性食品中单增李斯特菌的进化情况和群体遗传学特征,本研究采用MLST法和eBURST软件对33株分离株进行分子分型及进化树分析。结果共分成8个型别,并且33株单增李斯特菌之间遗传相关性不是很大。分为4个进化谱系:ST11和ST19... 为了解上海市动物性食品中单增李斯特菌的进化情况和群体遗传学特征,本研究采用MLST法和eBURST软件对33株分离株进行分子分型及进化树分析。结果共分成8个型别,并且33株单增李斯特菌之间遗传相关性不是很大。分为4个进化谱系:ST11和ST196为一个进化谱系,ST9、ST8和ST155为一个进化谱系,ST87和ST277/589为一个进化谱系,所占比例最多的ST121单独一个进化谱系。 展开更多
关键词 单增李斯特菌 MLST分型 管家基因 进化树
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家犬的鼠疫监测意义探讨 被引量:10
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作者 卢苗贵 李岩金 +9 位作者 骆瑞丰 赵芝雅 石国祥 姜理平 叶小娜 张智秀 吴因平 楼俊 吴军民 黄子达 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1998年第3期72-73,F003,共3页
关键词 犬病 鼠疫 监测
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兔多杀性巴氏杆菌16S rRNA PCR检测方法的建立 被引量:4
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作者 季权安 刘燕 +3 位作者 庞安娜 肖琛闻 韦强 鲍国连 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期468-470,共3页
为建立一种快速准确检测兔多杀性巴氏杆菌(P.multocida)的PCR方法,本研究以P.multocida的高度保守的16S rRNA为靶基因,参考已公布的P.multocida的16S rRNA基因设计1对特异性引物,优化PCR反应条件,建立了P.multocida PCR快速检测方法。该... 为建立一种快速准确检测兔多杀性巴氏杆菌(P.multocida)的PCR方法,本研究以P.multocida的高度保守的16S rRNA为靶基因,参考已公布的P.multocida的16S rRNA基因设计1对特异性引物,优化PCR反应条件,建立了P.multocida PCR快速检测方法。该PCR方法的敏感性达到60 cfu/mL,采用该PCR方法扩增P.multocida标准株和分离株均能扩增出643 bp的目的片段,扩增兔大肠杆菌、支气管败血波氏杆菌结果为阴性,证明本实验所建立的P.multocida PCR检测方法快速、敏感、特异、可靠,可用于P.multocida的快速鉴定与诊断。同时用建立的PCR方法对临床疑似病兔的脏器分离菌进行扩增,可扩增出目的条带,与细菌的分离结果相一致。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 PCR 16S RRNA
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产气荚膜梭菌β2蛋白的高效可溶性表达与基因工程亚单位疫苗的制备 被引量:3
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作者 孙雨 杨林 +7 位作者 赵柏林 董浩 王晓英 曲萍 胡冬梅 杨天意 石慧 宋晓晖 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1531-1537,共7页
β2毒素是一种新近报道的产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)毒素,A、B、C、D、E等5个型的梭菌均可产生,该毒素也是制备基因工程亚单位疫苗的主要研究对象。本研究通过优化β2蛋白的密码子、去除蛋白信号肽,选择亲水性与抗原性较... β2毒素是一种新近报道的产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)毒素,A、B、C、D、E等5个型的梭菌均可产生,该毒素也是制备基因工程亚单位疫苗的主要研究对象。本研究通过优化β2蛋白的密码子、去除蛋白信号肽,选择亲水性与抗原性较好的序列,同时优化表达条件等方法的探索,在大肠杆菌表达系统中获得了高效表达的可溶性重组β2蛋白,用该蛋白免疫小鼠可使动物产生较高的血清抗体水平,针对A型、B型、C型和D型产气荚膜梭菌的保护率分别为90%、100%、80%和90%,小鼠三免后第7~14天抗体效价达到峰值。本研究表达的β2蛋白具有较好的免疫原性,可进一步用于研制预防产气荚膜梭菌的基因工程亚单位疫苗。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 β2蛋白 可溶性表达与纯化 基因工程亚单位疫苗
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