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猫源抗氧化益生菌的分离鉴定及其体外益生特性研究
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作者 张琳 高晓洁 +5 位作者 程文雨 房立春 郭立辉 连丽粉 亓丽红 吴家强 《安徽农学通报》 2025年第24期47-52,共6页
为获取具有益生特性的猫源益生菌,丰富本源微生态制剂的菌株资源,研究以猫粪为试验对象,进行乳酸杆菌的分离鉴定,并测定分离菌株的DPPH自由基清除率等抗氧化能力以及生长特性、碳源利用能力、溶血性等益生特性。结果表明,从选择性培养... 为获取具有益生特性的猫源益生菌,丰富本源微生态制剂的菌株资源,研究以猫粪为试验对象,进行乳酸杆菌的分离鉴定,并测定分离菌株的DPPH自由基清除率等抗氧化能力以及生长特性、碳源利用能力、溶血性等益生特性。结果表明,从选择性培养的乳酸杆菌中共获得10株菌,其中M-33菌株(发酵上清液、菌悬液和无菌体破碎物)的DPPH自由基清除率、羟自由基清除率和还原能力分别在102.1%~107.4%、72.9%~84.5%、7.8%~60.6%;M-40菌株分别在102.4%~106.9%、73.3%~79.7%、0.8%~16.9%;两个菌株均具有较强的抗氧化能力。菌落形态及16S rDNA鉴定表明,M-33和M-40菌株呈白色或乳白色,革兰氏染色均呈阳性,M-33为短杆状,而M-40为球状,分别为罗伊氏乳杆菌和乳酸片球菌。体外益生特性鉴定结果表明,M-33生长较M-40相对缓慢,2~22 h为对数生长期;两个菌株对纤维二糖、麦芽糖等的反应均呈阳性,碳源利用范围较广;两个菌株对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌具有较强的抗菌活性,但也表现出一定的耐药性,其中M-33对环丙沙星和红霉素具有耐药性,M-40对环丙沙星具有耐药性;两株菌均未表现出溶血性;两个菌株55℃处理后的存活率均在50%以上,在pH 2的条件下培养4 h的存活率分别为54.92%和27.82%,在0.2%牛胆盐条件下培养4 h的存活率分别为71.87%和70.77%。综合表明,M-33和M-40具有较强的抗氧化能力,具备耐高温、耐酸和耐胆盐的特性,且对常见致病菌具有较好的抑制作用,无溶血性,安全性较高,是具备开发成为猫用益生菌制剂潜力的本源益生菌。 展开更多
关键词 猫源益生菌 分离鉴定 抗氧化 益生特性
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鲫鱼源致病性维氏气单胞菌的分离鉴定及药敏试验 被引量:14
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作者 张冬星 康元环 +7 位作者 田佳鑫 鞠安琪 费亦东 贾俊鹏 孙武文 吴同垒 单晓枫 钱爱东 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期366-374,共9页
为鉴定长春市某渔场鲫鱼病原菌,从患病鲫鱼脾中分离到病原菌J YX-1,通过生理生化试验,16S rRNA、管家基因及毒力基因扩增,系统发育分析和药敏试验进行鉴定。结果显示,分离菌J YX-1对鲫鱼具有致病性;基于16Sr RNA与4种管家基因构建的系... 为鉴定长春市某渔场鲫鱼病原菌,从患病鲫鱼脾中分离到病原菌J YX-1,通过生理生化试验,16S rRNA、管家基因及毒力基因扩增,系统发育分析和药敏试验进行鉴定。结果显示,分离菌J YX-1对鲫鱼具有致病性;基于16Sr RNA与4种管家基因构建的系统发育树显示,该菌与维氏气单胞菌同属一个分支,亲缘关系较近,表明J YX-1为维氏气单胞菌;毒力基因检测发现,能从J YX-1扩增出气溶素(aer)、细胞毒性肠毒素(act)、黏附素(Aha)、丝氨酸蛋白酶(ser)、核酸酶(exu)及脂肪酶(lip)6种毒力因子基因。药敏试验结果显示,分离菌J YX-1对克拉霉素、妥布霉素及链霉素等11种药物敏感。本研究结果为鲫鱼感染维氏气单胞菌的鉴定及治疗提供了理论依据。 展开更多
关键词 16Sr RNA 维氏气单胞菌 鲫鱼 药敏试验
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团头鲂致病性维氏气单胞菌的分离鉴定及耐药性分析 被引量:13
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作者 张冬星 康元环 +3 位作者 张海月 安鼎杰 单晓枫 钱爱东 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1300-1307,共8页
为鉴定长春市某水产养殖场团头鲂的病原菌,从患病团头鲂体内分离到致病菌JWC086,对其形态和生理生化特性进行了鉴定,并对16S r DNA和管家基因gyr B序列、毒力基因携带情况及耐药性进行了分析。结果显示,该菌为革兰阴性菌,其生理生化特... 为鉴定长春市某水产养殖场团头鲂的病原菌,从患病团头鲂体内分离到致病菌JWC086,对其形态和生理生化特性进行了鉴定,并对16S r DNA和管家基因gyr B序列、毒力基因携带情况及耐药性进行了分析。结果显示,该菌为革兰阴性菌,其生理生化特性与维氏气单胞菌基本相同。16S r DNA序列比对结果表明,该菌与维氏气单胞菌(KP716691)的同源性在99%以上。基于16S r DNA与gyr B序列的进化分析显示,该菌与维氏气单胞菌同属一个分支,同源性较高。将分离菌人工感染团头鲂,7 d内团头鲂全部死亡,且临床症状与自然病例相似。通过毒力基因检测发现,能从JWC086扩增出气溶素(aer)、细胞毒性肠毒素(act)、黏附素(Aha)、丝氨酸蛋白酶(ser)、核酸酶(exu)、脂肪酶(lip)及密度感应系统调控基因(Lux S)等7种毒力因子。药敏试验结果显示,该菌对氟苯尼考及复方新诺明等药物比较敏感。本研究为团头鲂感染维氏气单胞菌的鉴定及治疗提供了科学依据。 展开更多
关键词 维氏气单胞菌 团头鲂 毒力因子 耐药
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不同宿主来源的维氏气单胞菌外膜蛋白AⅡ基因的克隆及比较 被引量:9
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作者 康元环 杨滨僮 +4 位作者 孟庆峰 陈龙 单晓枫 王惠 钱爱东 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期271-276,共6页
为探讨外膜蛋白AⅡ(OMPAⅡ)作为维氏气单胞菌共同保护性抗原的可能性,对不同宿主来源的维氏气单胞菌OMPAⅡ基因进行了克隆,获得了1 100bp左右的目的基因,并利用多种生物学软件对其序列进行了比较。结果表明,不同宿主来源的维氏气单胞菌O... 为探讨外膜蛋白AⅡ(OMPAⅡ)作为维氏气单胞菌共同保护性抗原的可能性,对不同宿主来源的维氏气单胞菌OMPAⅡ基因进行了克隆,获得了1 100bp左右的目的基因,并利用多种生物学软件对其序列进行了比较。结果表明,不同宿主来源的维氏气单胞菌OMPAⅡ基因序列的同源性在95.1%以上,编码氨基酸序列的同源性在97.3%以上,而且所有分析序列均具有明显的保守结构域,说明不同宿主来源的维氏气单胞菌OMPAⅡ具有很高的保守性;相对于ATCC35624和YP004393583.1来说,它们之间的差异主要表现在,CVCC3700、QXF、WL161、NJ34、NN725和BAF63175.1的OMPAⅡ基因缺失了3个碱基(CAA)。本研究结果为OMPAⅡ作为维氏气单胞菌基因工程亚单位疫苗候选成分提供了一定的理论依据。 展开更多
关键词 不同宿主 维氏气单胞菌 OMPA Ⅱ基因 克隆
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致病性鹿源坏死梭杆菌分离鉴定 被引量:11
5
作者 王克坚 张洪英 +4 位作者 陈立志 刘晓颖 程世鹏 徐敏 钱国成 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第2期84-87,共4页
应用厌氧培养技术 ,从患坏死杆菌病鹿的病变坏死组织和脓汁中分离出一种主要的病原菌 ;通过细菌形态学、染色反应、培养特性、生化试验、血清学反应等鉴定方法 ,确定该病原分离株为严格厌氧性坏死梭杆菌 ,分型鉴定为A、AB和B型 ;实验动... 应用厌氧培养技术 ,从患坏死杆菌病鹿的病变坏死组织和脓汁中分离出一种主要的病原菌 ;通过细菌形态学、染色反应、培养特性、生化试验、血清学反应等鉴定方法 ,确定该病原分离株为严格厌氧性坏死梭杆菌 ,分型鉴定为A、AB和B型 ;实验动物感染证明A和AB型坏死梭杆菌为致病性菌株。 展开更多
关键词 鹿 坏死 杆菌病 坏死梭杆菌 分离 鉴定 厌氧培训
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上海市动物源性食品中单增李斯特菌的流行病学及生物被膜形成能力研究 被引量:12
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作者 王少辉 刘萍萍 +4 位作者 魏建超 邵东华 史子学 李蓓蓓 马志永 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2015年第4期31-36,共6页
为了解上海市动物源性食品中单增李斯特菌的污染状况,在上海市不同超市和农贸市场采集479份动物源性食品样品,依据国标方法进行菌株分离,并对分离菌株的耐药性、血清型及生物被膜形成能力进行测定。结果共分离鉴定34株单增李斯特菌,分... 为了解上海市动物源性食品中单增李斯特菌的污染状况,在上海市不同超市和农贸市场采集479份动物源性食品样品,依据国标方法进行菌株分离,并对分离菌株的耐药性、血清型及生物被膜形成能力进行测定。结果共分离鉴定34株单增李斯特菌,分离率为7.1%(34/479)。药敏试验结果显示单增李斯特菌分离株的耐药率虽然不高,但日趋严重,对氨苄青霉素和万古霉素均敏感,对头孢曲松的耐药性最高(55.88%),林可霉素次之(41.18%)。血清型鉴定表明单增李斯特菌分离株以血清型1/2a(3a)型为主(76.47%),血清型1/2c(3c)次之(17.65%),而致病性强的血清型4b(4d、4e)仅占2.94%。生物被膜形成能力实验表明,所有的菌株均能形成生物被膜,其中76.47%(26/34)分离株生物被膜形成能力微弱。上海市动物源性食品中单增李斯特菌污染情况较为严重,主要流行1/2a(3a)血清型,耐药率日趋严重,均可形成生物被膜。因此,应加强对动物源性食品中单增李斯特菌的监控。 展开更多
关键词 单增李斯特菌 耐药性 血清型 生物被膜
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产气荚膜梭菌β毒素和ε毒素以及腐败梭菌α毒素三联基因工程灭活疫苗的制备与免疫效力评价 被引量:5
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作者 彭国瑞 董令赢 +3 位作者 李旭妮 魏津 蒋玉文 彭小兵 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期918-923,共6页
为了获得高表达量的重组C型产气荚膜梭菌β毒素,鉴定其致死性和反应原性,并评价其与D型产气荚膜梭菌ε毒素和腐败梭菌α毒素共表达产物联合制成三联基因工程灭活疫苗的免疫保护效力。设计含不同酶切位点的2对引物,PCR扩增C型产气荚膜梭... 为了获得高表达量的重组C型产气荚膜梭菌β毒素,鉴定其致死性和反应原性,并评价其与D型产气荚膜梭菌ε毒素和腐败梭菌α毒素共表达产物联合制成三联基因工程灭活疫苗的免疫保护效力。设计含不同酶切位点的2对引物,PCR扩增C型产气荚膜梭菌β毒素基因cpb1和cpb2,将二者克隆至pRSFDuet-1质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),自诱导培养基诱导2段基因共表达。用SDS-PAGE和Western-blot以及小鼠毒性试验、抗毒素血清和中和试验对表达产物进行鉴定。将诱导收获的大肠杆菌以及D型产气荚膜梭菌ε毒素和腐败梭菌α毒素的共表达产物1∶2配比灭活制成三联灭活铝佐剂疫苗,以每只1mL剂量皮下免疫家兔2次后,测定血清中和抗体效价,用1MLD的C、D型产气荚膜梭菌毒素和腐败梭菌毒素分别攻击。结果显示,所构建的重组大肠杆菌BL21(pRSFDuet-cpb1-cpb2)能够表达重组β毒素,产物能够与C型产气荚膜梭菌抗毒素血清反应,且具有小鼠致死毒性,抗毒素血清可以将其毒性中和;制成联合疫苗免疫家兔,免疫血清对C型产气荚膜梭菌毒素的中和抗体效价为8MLD/0.1mL,对D型产气荚膜梭菌毒素的中和抗体效价为45MLD/0.1mL,对腐败梭菌毒素的中和抗体效价为1.5MLD/0.1mL;用3种毒素攻击免疫组家兔均全部保护,对照组全部死亡,达到《中华人民共和国兽药典三部(2015版)》效力检验标准。本研究为羊猝狙、肠毒血症和快疫三联疫苗的研制提供了试验基础。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 腐败梭菌 Β毒素 ε毒素 Α毒素 共表达 疫苗
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鸭源多杀性巴氏杆菌在人工感染雏鸭体内的动态研究 被引量:6
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作者 都启晶 蒋文灿 +4 位作者 彭广东 李淑娜 郑维维 刘义铃 刘巍申 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期699-704,共6页
为探索多杀性巴氏杆菌在雏鸭体内的动态病理变化,用小鼠复壮鸭源多杀性巴氏杆菌,经测定其滴鼻途径的LD50=1×10-4.5/0.2mL,口服途径的LD50=1×10-2.375/0.2mL。用100LD50剂量,以口服、滴鼻途径分别感染雏鸭,于感染后6h、12h、18... 为探索多杀性巴氏杆菌在雏鸭体内的动态病理变化,用小鼠复壮鸭源多杀性巴氏杆菌,经测定其滴鼻途径的LD50=1×10-4.5/0.2mL,口服途径的LD50=1×10-2.375/0.2mL。用100LD50剂量,以口服、滴鼻途径分别感染雏鸭,于感染后6h、12h、18h和24h取心、肝、肺、肾及胸腺进行组织活菌计数。口服和滴鼻感染后12h,从胸腺、肝、心、肺检测到生长繁殖的病原菌,18h从口服感染组的肾脏检出目标菌,24h从滴鼻组的肾脏检出目标菌。口服感染12h,胸腺中菌数最高,达5.33×103CFU/g,依次是肝、肺、心、肾。滴鼻感染12h,肺中菌数最高,达5.00×103CFU/g,依次是胸腺、肝、心、肾。24h均以胸腺菌数最高。表明检测体内鸭巴氏杆菌抗原或分离病原菌,首选器官是胸腺和肺,其次是肝、心。同时取心、肝、肺、肾、脾、胸腺、法氏囊、腺胃和十二指肠制作病理切片。消化道途径感染出现病变的最早时间是侵入后6h,呼吸道途径感染出现病变的时间小于6h。口服途径感染雏鸭后6h,各器官都表现以充血为主要特征的轻微病理变化,6h~12h表现以细胞肿胀、开始细胞变性为特征的病理变化。12h~18h表现细胞变性加剧,开始核浓缩、核碎裂为特征的病理变化。18h~24h表现核浓缩、核碎裂加剧,细胞溶解的细菌损伤病理,以及淋巴细胞浸润、免疫器官网状内皮细胞增生相伴的免疫损伤。滴鼻途径的病理变化与口服途径相似,但病理进程有所提前。鸭多杀性巴氏杆菌对胸腺、脾、法氏囊等免疫器官造成病理损伤,以胸腺和脾脏的损伤较为严重。 展开更多
关键词 鸭源多杀性巴氏杆菌 感染雏鸭 致病力 细菌动态繁殖 动态病理
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IBDV感染对T细胞趋化因子受体及其配体基因表达的影响 被引量:6
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作者 欧长波 王秋霞 +6 位作者 张艳红 黄明月 余燕 马金友 魏小兵 刘明成 刘兴友 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期222-226,共5页
传染性腔上囊病毒(IBDV)感染家禽过程中,大量外源T细胞迁移到靶器官腔上囊组织,造成家禽严重的免疫抑制,本试验主要为了弄清影响T细胞定向迁移的关键因子。本试验利用IBDV感染SPF鸡动物模型,收集IBDV感染后第1和3天的腔上囊、胸腺和脾组... 传染性腔上囊病毒(IBDV)感染家禽过程中,大量外源T细胞迁移到靶器官腔上囊组织,造成家禽严重的免疫抑制,本试验主要为了弄清影响T细胞定向迁移的关键因子。本试验利用IBDV感染SPF鸡动物模型,收集IBDV感染后第1和3天的腔上囊、胸腺和脾组织,利用定量PCR技术来测定T细胞趋化因子受体相关基因表达水平。结果显示,感染对照组中CCR4、CCR5、CCR6和CCR7基因表达水平明显升高,与健康对照组差异显著(P<0.01),IBDV感染后第1天趋化因子受体基因表达水平比第3天高;CXCR4基因表达水平先升高后降低,变化明显;同时腔上囊组织中CCR5和CCR7的配体CCL4和CCL19基因表达水平也显著升高。结果表明,CCR5/CCL4、CCR7/CCL19轴可能参与T细胞迁移至腔上囊的过程,从而对IBDV的致病性产生重要作用。 展开更多
关键词 传染性腔上囊病毒 T细胞 趋化因子 趋化因子受体
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腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白的基因克隆与表达 被引量:7
10
作者 王克坚 Dhungyel Om +5 位作者 冯书章 吴广谋 杨海滨 Egerton JR 朱平 殷震 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期362-366,共5页
用 PCR技术从腐蹄病 E型节瘤拟杆菌克隆出具免疫保护性抗原 0 .93 kb纤毛蛋白基因 ( Pili基因 ) ,利用该基因构建了纤毛蛋白基因表达载体。先将 PCR产物 Pili基因克隆于 TA Cloning System,扩增后 ,用Eco R 酶切 ,低熔点胶回收 ,经 Kle... 用 PCR技术从腐蹄病 E型节瘤拟杆菌克隆出具免疫保护性抗原 0 .93 kb纤毛蛋白基因 ( Pili基因 ) ,利用该基因构建了纤毛蛋白基因表达载体。先将 PCR产物 Pili基因克隆于 TA Cloning System,扩增后 ,用Eco R 酶切 ,低熔点胶回收 ,经 Klenow补平后 ,用 T4DNA连接酶与中间载体 p PLλ连接 ,将 Pili基因克隆于 p PLλ载体 ;经 Bam H 、Bgl 、Pvu 和 Smal +Bgl 酶切鉴定和 p PLλ-Pili重组质粒 Pili基因序列测定正确后 ,扩增 p PLλ-Pili重组质粒 ,用 Bam H 酶切出 2 .1 kb大小的片段 ,回收后 ,与 p ME2 90表达质粒连接 ,转染宿主细胞 PAK/2 pfs,在营养肉汤中进行 Pili基因的表达。培养 1 8~ 2 4 h后 ,离心 ,向上清液中加入 0 .1mol/L Mg Cl2 提取重组纤毛蛋白。用羊抗兔 E型节瘤拟杆菌抗血清与提取的重组纤毛蛋白进行对流免疫电泳 ,证明重组纤毛蛋白具有特异性 ;染料结合法测定 1 0 0 0 m L上清液中表达纤毛蛋白粗含量约为 1 1 4mg。SDS-PAGE测定重组纤毛蛋白的表达量占总菌量的 1 1 .8%,Western 展开更多
关键词 腐蹄病 节瘤拟杆菌 纤毛蛋白 基因克隆
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单增李斯特菌inlK基因缺失株的构建及其生物学特性分析 被引量:10
11
作者 王少辉 刘萍萍 +4 位作者 魏建超 邵东华 赵秋华 史子学 马志永 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2017年第4期19-23,共5页
为了分析内化素InlK对单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)生物学特性及致病性的影响,利用自杀性质粒进行同源重组构建LM标准菌株10403s的inlK基因缺失株,然后比较分析野生株、inlK基因缺失株的生长特性、生物被膜形成能力、细胞... 为了分析内化素InlK对单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)生物学特性及致病性的影响,利用自杀性质粒进行同源重组构建LM标准菌株10403s的inlK基因缺失株,然后比较分析野生株、inlK基因缺失株的生长特性、生物被膜形成能力、细胞侵袭能力、动物致病力等差异。结果显示,inlK基因缺失不影响LM的生长速度,但可导致LM的生物被膜形成能力下降。细胞感染试验表明基因缺失株ΔinlK对RAW264.7细胞的侵袭及胞内存活能力分别下降了18%和31%。动物感染试验显示野生株和基因缺失株ΔinlK对小鼠的致死率分别为80%(4/5)和40%(2/5),且基因缺失株ΔinlK的体内定殖能力显著低于野生株。本研究表明内化素InlK在LM感染过程中发挥着重要作用,为了解LM的致病作用提供参考。 展开更多
关键词 单增李斯特菌 inlK基因 致病性
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青藏高原牦牛多杀性巴氏杆菌荧光定量RQ-PCR检测方法的建立 被引量:6
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作者 赵静 张红见 +2 位作者 马梅琴 廖明 陈刚 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2013年第10期18-20,24,共4页
参照GenBank中已发表的多杀性巴氏杆菌种特异性基因KMT-1的保守序列设计1对引物,建立了牦牛多杀性巴氏杆菌实时荧光定量RQ-PCR检测方法。获得的标准曲线相关系数R值为0.9998,标准曲线的线性范围达到1.0×100~1×1010拷贝。对... 参照GenBank中已发表的多杀性巴氏杆菌种特异性基因KMT-1的保守序列设计1对引物,建立了牦牛多杀性巴氏杆菌实时荧光定量RQ-PCR检测方法。获得的标准曲线相关系数R值为0.9998,标准曲线的线性范围达到1.0×100~1×1010拷贝。对大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯氏菌和伤寒沙门菌等非巴氏杆菌进行检测,结果均为阴性。结果表明,本研究建立的荧光定量RQ-PCR方法敏感性高,特异性强,为青藏高原牦牛多杀性巴氏杆菌病的早期诊断及分子流行病学调查提供了一种新的快速检测方法。 展开更多
关键词 牦牛 多杀性巴氏杆菌 SYBR Green 实时荧光定量RQ-PCR
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上海市动物源性食品中单增李斯特菌的MLST分析 被引量:9
13
作者 刘萍萍 王少辉 +5 位作者 赵秋华 李蓓蓓 邵东华 史子学 魏建超 马志永 《中国动物传染病学报》 CAS 2013年第4期18-22,共5页
为了解上海市动物性食品中单增李斯特菌的进化情况和群体遗传学特征,本研究采用MLST法和eBURST软件对33株分离株进行分子分型及进化树分析。结果共分成8个型别,并且33株单增李斯特菌之间遗传相关性不是很大。分为4个进化谱系:ST11和ST19... 为了解上海市动物性食品中单增李斯特菌的进化情况和群体遗传学特征,本研究采用MLST法和eBURST软件对33株分离株进行分子分型及进化树分析。结果共分成8个型别,并且33株单增李斯特菌之间遗传相关性不是很大。分为4个进化谱系:ST11和ST196为一个进化谱系,ST9、ST8和ST155为一个进化谱系,ST87和ST277/589为一个进化谱系,所占比例最多的ST121单独一个进化谱系。 展开更多
关键词 单增李斯特菌 MLST分型 管家基因 进化树
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C型产气荚膜梭菌致病机理研究进展 被引量:7
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作者 李凡飞 张云 +3 位作者 李强 赵泽慧 何小丽 许立华 《动物医学进展》 北大核心 2016年第12期82-85,共4页
C型产气荚膜梭菌能够引起人类和一些动物的坏死性肠炎。该菌能产生α外毒素和β外毒素,大部分该菌菌株也能分泌出产气梭菌细胞溶素O(PFO)和TpeL。试验证明β外毒素是C型产气荚膜梭菌的主要致病毒素。在兔子肠襻和小鼠模型试验中发现,通... C型产气荚膜梭菌能够引起人类和一些动物的坏死性肠炎。该菌能产生α外毒素和β外毒素,大部分该菌菌株也能分泌出产气梭菌细胞溶素O(PFO)和TpeL。试验证明β外毒素是C型产气荚膜梭菌的主要致病毒素。在兔子肠襻和小鼠模型试验中发现,通过细胞中同源基因C型产气荚膜梭菌β毒素敲除基因突变株而导致该菌株失去毒力。当野生型β毒素基因补充这些突变体时毒素的活力将会复活。大多数C型产气荚膜梭菌产生的所有毒素(除TpeL外)都易与肠癌(Caco-2)细胞紧密结合并发生反应,比它在体外生长更加迅速。VirS/virR双组分调节系统(TCRS)被证明是在Coca-2细胞中导致β毒素和PFO产生快速上调。当virR基因被抑制时,pfoA和β毒素基因的表达也会受阻,这种系统是可逆的,virR表达时会恢复。通过β毒素作用于动物模型的试验研究,来寻找有效的预防措施。 展开更多
关键词 C型产气荚膜梭菌 Β毒素 致病机制 坏死性肠炎
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家犬的鼠疫监测意义探讨 被引量:10
15
作者 卢苗贵 李岩金 +9 位作者 骆瑞丰 赵芝雅 石国祥 姜理平 叶小娜 张智秀 吴因平 楼俊 吴军民 黄子达 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1998年第3期72-73,F003,共3页
关键词 犬病 鼠疫 监测
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兔多杀性巴氏杆菌16S rRNA PCR检测方法的建立 被引量:4
16
作者 季权安 刘燕 +3 位作者 庞安娜 肖琛闻 韦强 鲍国连 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期468-470,共3页
为建立一种快速准确检测兔多杀性巴氏杆菌(P.multocida)的PCR方法,本研究以P.multocida的高度保守的16S rRNA为靶基因,参考已公布的P.multocida的16S rRNA基因设计1对特异性引物,优化PCR反应条件,建立了P.multocida PCR快速检测方法。该... 为建立一种快速准确检测兔多杀性巴氏杆菌(P.multocida)的PCR方法,本研究以P.multocida的高度保守的16S rRNA为靶基因,参考已公布的P.multocida的16S rRNA基因设计1对特异性引物,优化PCR反应条件,建立了P.multocida PCR快速检测方法。该PCR方法的敏感性达到60 cfu/mL,采用该PCR方法扩增P.multocida标准株和分离株均能扩增出643 bp的目的片段,扩增兔大肠杆菌、支气管败血波氏杆菌结果为阴性,证明本实验所建立的P.multocida PCR检测方法快速、敏感、特异、可靠,可用于P.multocida的快速鉴定与诊断。同时用建立的PCR方法对临床疑似病兔的脏器分离菌进行扩增,可扩增出目的条带,与细菌的分离结果相一致。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 PCR 16S RRNA
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产气荚膜梭菌β2蛋白的高效可溶性表达与基因工程亚单位疫苗的制备 被引量:3
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作者 孙雨 杨林 +7 位作者 赵柏林 董浩 王晓英 曲萍 胡冬梅 杨天意 石慧 宋晓晖 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1531-1537,共7页
β2毒素是一种新近报道的产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)毒素,A、B、C、D、E等5个型的梭菌均可产生,该毒素也是制备基因工程亚单位疫苗的主要研究对象。本研究通过优化β2蛋白的密码子、去除蛋白信号肽,选择亲水性与抗原性较... β2毒素是一种新近报道的产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)毒素,A、B、C、D、E等5个型的梭菌均可产生,该毒素也是制备基因工程亚单位疫苗的主要研究对象。本研究通过优化β2蛋白的密码子、去除蛋白信号肽,选择亲水性与抗原性较好的序列,同时优化表达条件等方法的探索,在大肠杆菌表达系统中获得了高效表达的可溶性重组β2蛋白,用该蛋白免疫小鼠可使动物产生较高的血清抗体水平,针对A型、B型、C型和D型产气荚膜梭菌的保护率分别为90%、100%、80%和90%,小鼠三免后第7~14天抗体效价达到峰值。本研究表达的β2蛋白具有较好的免疫原性,可进一步用于研制预防产气荚膜梭菌的基因工程亚单位疫苗。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 β2蛋白 可溶性表达与纯化 基因工程亚单位疫苗
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维氏气单胞菌OmpAⅠ基因重组植物乳杆菌的构建及其表达产物的免疫原性分析 被引量:3
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作者 张冬星 康元环 +6 位作者 田佳鑫 安鼎杰 贾俊鹏 孙武文 吴同垒 单晓枫 钱爱东 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期227-234,共8页
为构建维氏气单胞菌OmpAⅠ基因重组植物乳杆菌并检测其表达产物的免疫原性,将目的基因克隆至大肠杆菌-乳杆菌穿梭表达载体p SIP409中,并电转至植物乳杆菌中,经诱导后对表达产物进行Western-blot分析。结果显示,LP/p SIP409-OmpAⅠ重组... 为构建维氏气单胞菌OmpAⅠ基因重组植物乳杆菌并检测其表达产物的免疫原性,将目的基因克隆至大肠杆菌-乳杆菌穿梭表达载体p SIP409中,并电转至植物乳杆菌中,经诱导后对表达产物进行Western-blot分析。结果显示,LP/p SIP409-OmpAⅠ重组植物乳杆菌出现一条约42 ku的印迹,与预期大小相符,表明重组蛋白具有反应原性。LP/p SIP409-OmpAⅠ重组植物乳杆菌免疫鲫鱼后,在第25天血清中Ig M水平达到高峰;RT-PCR检测发现免疫后鲫鱼肝、脾、肾及心组织中的细胞因子IL-8、IFN-γ与IL-1β表达水平均有不同程度提升;攻毒后LP/p SIP409-OmpAⅠ免疫组的保护率在65%以上,高于对照组的存活率。结果表明,应用重组植物乳杆菌LP/p SIP409-OmpAⅠ免疫鲫鱼能刺激机体产生免疫应答反应,为预防鱼类维氏气单胞菌感染的重组植物乳杆菌口服制剂的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 维氏气单胞菌 外膜蛋白AⅠ 重组植物乳杆菌 免疫原性
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单增李斯特菌srtA基因缺失株的构建及srtA基因对其毒力的影响研究 被引量:5
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作者 张奇文 凌晨 +2 位作者 吴学林 马勋 薄新文 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第4期23-31,共9页
为了研究srtA 基因对单增李斯特菌LM90SB2毒力的影响,本研究利用同源重组技术构建了LM90SB2 srtA 基因缺失株LM90SB2-ΔsrtA,比较分析了亲本株LM90SB2与缺失株LM90SB2-ΔsrtA对MBMEC、HBMEC、RAW264.7、SIEC 4种细胞系的粘附、侵袭、胞... 为了研究srtA 基因对单增李斯特菌LM90SB2毒力的影响,本研究利用同源重组技术构建了LM90SB2 srtA 基因缺失株LM90SB2-ΔsrtA,比较分析了亲本株LM90SB2与缺失株LM90SB2-ΔsrtA对MBMEC、HBMEC、RAW264.7、SIEC 4种细胞系的粘附、侵袭、胞内增值能力及LM90SB2和LM90SB2-ΔsrtA 感染小鼠后,小鼠的LD50及肝脏、脾脏、脑载菌量变化差异。结果显示,本研究成功构建了srtA 基因缺失株;与亲本株LM90SB2比较,缺失株LM90SB2-ΔsrtA 对RAW264.7和SIEC的粘附率、侵袭率及胞内细菌数量均下降,且差异具有显著统计学意义(p <0.05);小鼠 LD50降低了21.38倍,肝脏、脾脏载菌量降低,差异具有显著统计学意义(p <0.05)。本研究结果表明,srtA 基因对单增李斯特菌LM90SB2的毒力具有关键作用,参与粘附、侵袭BMEC,该研究结果为进一步阐明单增李斯特菌毒力因子的致病机制提供理论依据。 展开更多
关键词 单增李斯特菌 srtA基因 毒力 粘附 侵袭
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一株鸭源巴氏杆菌强毒株的分离鉴定及致病性研究 被引量:5
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作者 颜赟 刁有祥 +1 位作者 程彦丽 国纪垒 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期584-588,共5页
为确定导致山东某地区种鸭发病的病原,从病鸭肝、心、肺中分离并纯化细菌,根据其形态特征培养特性、生化试验结果及PCR鉴定,确定为禽多杀性巴氏杆菌。致病性试验结果表明,1.3×109CFU/m的菌液10倍系列稀释后,感染20日龄健康雏鸡和1... 为确定导致山东某地区种鸭发病的病原,从病鸭肝、心、肺中分离并纯化细菌,根据其形态特征培养特性、生化试验结果及PCR鉴定,确定为禽多杀性巴氏杆菌。致病性试验结果表明,1.3×109CFU/m的菌液10倍系列稀释后,感染20日龄健康雏鸡和1日龄健康雏鸭,该分离菌对20日龄健康雏鸡和1日龄健康雏鸭的半数致死量分别为10-4.5CFU/mL、10-5.3CFU/mL;死亡雏鸡(鸭)的剖检病变与发病鸭类似并分离出与感染菌株形态特征完全一致的菌落。药敏试验结果显示,该分离菌株对头孢曲松、氨苄西林、阿莫西林、环丙沙星、卡那霉素等较为敏感。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 分离鉴定 致病性
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