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布鲁氏菌与宿主天然免疫信号通路相互作用的研究进展 被引量：3
1
作者 刘爱军 黄晓兵 +1 位作者 张传亮 张红丽 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第4期1561-1574,共14页
布鲁氏菌病(brucellosis)是一种由布鲁氏菌(Brucella)感染引起的全球性人兽共患病。近年来,我国布鲁氏菌病防控形势严峻,对牛羊养殖业和公共卫生安全构成较大威胁。天然免疫是抵御病原微生物感染的第一道防线,对维持机体的稳态至关重要... 布鲁氏菌病(brucellosis)是一种由布鲁氏菌(Brucella)感染引起的全球性人兽共患病。近年来,我国布鲁氏菌病防控形势严峻,对牛羊养殖业和公共卫生安全构成较大威胁。天然免疫是抵御病原微生物感染的第一道防线,对维持机体的稳态至关重要。布鲁氏菌能够通过多种策略调节天然免疫信号通路,从而建立持续性感染,也能引起关节炎、肝炎、脑炎、流产等炎症性疾病。全面深入理解布鲁氏菌与天然免疫信号通路相互作用机制,可以为研发安全高效的疫苗或药物提供新的思路。因此,本文综述了Toll样受体(Toll-like receptors, TLRs)、环鸟苷酸腺苷酸合成酶(cyclic guanosine adenylate synthetase, cGAS)、干扰素基因刺激因子(stimulator of interferon genes, STING)、NOD样受体(NOD-like receptors, NLRs)、AIM2样受体(AIM2-like receptors, ALRs)、C型凝集素受体(C-type lectin receptors, CLRs)和RIG-I样受体(RIG-I-like receptors, RLRs)等天然免疫信号通路在抵御布鲁氏菌感染中的作用及机制,并总结了布鲁氏菌逃逸或劫持这些信号通路的策略。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 免疫逃逸 Toll样受体 环鸟苷酸腺苷酸合成酶 干扰素基因刺激因子 NOD样受体 AIM2样受体 C型凝集素受体 RIG-I样受体
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布鲁菌导致流产的风险因素与作用机制 被引量：1
2
作者 刘梦瑶 魏东 +6 位作者 焦磊 李彩玉 刘东慧 权衡 周继章 陈启伟 宫晓炜 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第4期512-519,共8页
布鲁菌对胎盘和妊娠子宫具有明显的趋向性,已发现,该病原体能够在滋养层细胞和蜕膜细胞中复制,通过提高内质网应激而诱导细胞凋亡,触发流产。从布鲁菌感染导致流产的风险因素、布鲁菌在滋养层细胞中的生物学过程进行综述,以期为布鲁菌... 布鲁菌对胎盘和妊娠子宫具有明显的趋向性,已发现,该病原体能够在滋养层细胞和蜕膜细胞中复制,通过提高内质网应激而诱导细胞凋亡,触发流产。从布鲁菌感染导致流产的风险因素、布鲁菌在滋养层细胞中的生物学过程进行综述,以期为布鲁菌病的临床诊疗评估及控制该病的风险传播提供科学理论依据。 展开更多
关键词 布鲁菌 风险因素 胎盘 滋养层 炎症反应
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牛种布鲁氏菌MgtC蛋白在抵抗低Mg^(2+)环境中的生物学功能研究 被引量：1
3
作者 王恒泰 吕浪 +6 位作者 蒋卉 程君生 刘铭赫 储岳峰 许健 李朋 丁家波 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第1期365-377,共13页
MgtC蛋白在多种胞内寄生菌中是一个重要的毒力因子并表现出抵抗低Mg^(2+)环境的能力。布鲁氏菌是一种重要的胞内寄生菌,但是关于MgtC蛋白在布鲁氏菌中的生物学功能报道较少。为了全面阐述MgtC在布鲁氏菌中的生物学特性,本文研究了牛种... MgtC蛋白在多种胞内寄生菌中是一个重要的毒力因子并表现出抵抗低Mg^(2+)环境的能力。布鲁氏菌是一种重要的胞内寄生菌,但是关于MgtC蛋白在布鲁氏菌中的生物学功能报道较少。为了全面阐述MgtC在布鲁氏菌中的生物学特性,本文研究了牛种布鲁氏菌MgtC蛋白对低Mg^(2+)环境的适应性及其它可能的生物学功能。构建牛种布鲁氏菌(S2308株)的mgtC基因缺失突变株S2308ΔmgtC,同时采用质粒回补方式构建回补株S2308ΔmgtC(pBBR1MCS-mgtC),随后对其开展低/高Mg^(2+)环境中生长曲线测定,ATP含量测定,胞内存活,环境应激,生物被膜检测和小鼠攻毒试验等研究,全面分析MgtC在牛种布鲁氏菌中的生物学功能。结果显示:成功构建缺失株S2308ΔmgtC及其回补株S2308ΔmgtC(pBBR1MCS-mgtC)。牛种布鲁氏菌S2308在低Mg^(2+)环境中,mgtC基因转录水平显著上调(P<0.05),与亲本株和回补菌株相比,缺失株S2308ΔmgtC在低Mg^(2+)环境中的生长曲线(P<0.001)、膜结构完整性(P<0.05)、生物被膜形成能力(P<0.01)均低于与亲本菌株和回补菌株,而菌体内ATP含量均高于亲本菌株和回补菌株(P<0.001)。此外,mgtC基因的缺失不影响牛种布鲁氏菌在巨噬细胞内的存活以及对小鼠的致病能力。在低Mg^(2+)环境下,牛种布鲁氏菌通过MgtC保证细菌ATP正常水解,维持自身正常生理活动和膜结构的完整性,但是MgtC对牛种布鲁氏菌的毒力和致病性无明显影响,本研究为深入了解牛种布鲁氏菌提供了数据支撑。 展开更多
关键词 牛种布鲁氏菌S2308 mgtC 低Mg^(2+)环境 生物学功能
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布鲁氏菌BP26蛋白原核表达及双抗原夹心ELISA方法的建立
4
作者 席韬 罗俊聪 +9 位作者 朱昱茜 林永玉 陈婕 张帆 石鑫泰 何印娣 李帅鹏 徐继英 田宏 郑海学 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第5期608-615,共8页
以期建立鉴别检测布鲁氏菌血清抗体的ELISA方法,用于区分BP26基因缺失疫苗免疫。本研究根据NCBI公布的布鲁氏菌M5-90株的参考序列,通过预测BP26的同源性、跨膜区及抗原性等,构建了p ET-28a-BP26和p MAL-c2x-BP26两个载体,利用大肠杆菌... 以期建立鉴别检测布鲁氏菌血清抗体的ELISA方法,用于区分BP26基因缺失疫苗免疫。本研究根据NCBI公布的布鲁氏菌M5-90株的参考序列,通过预测BP26的同源性、跨膜区及抗原性等,构建了p ET-28a-BP26和p MAL-c2x-BP26两个载体,利用大肠杆菌表达蛋白,亲和层析纯化目的蛋白。采用Western-blot方法分析目的蛋白反应活性,以His-BP26作为包被抗原,HRP标记的MBP-BP26作为检测抗原,经过优化,建立了一种双抗原夹心ELISA方法。结果显示,根据统计学分析,双抗原夹心ELISA临界值为0.35;经检验,该方法与口蹄疫病毒-O型、牛结节皮肤病病毒、牛传染性腹泻病毒的抗体阳性血清以及赤羽病病毒多抗均无交叉反应,敏感性可达1∶640;批间及批内变异系数均小于10%。用该方法对40份已知虎红平板凝集试验检测背景的羊血清进行检测,结果检出8份阳性,32份阴性。由此说明,本研究建立的ELISA方法特异性强、敏感性高、重复性好,可区分BP26基因缺失疫苗免疫,用于布鲁氏菌病的血清学调查和临床诊断。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 BP26 原核表达 双抗原夹心ELISA
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布鲁氏菌BtpA蛋白亚单位疫苗的制备及其对小鼠的免疫效果评价
5
作者 任文浩 姚梦欣 +5 位作者 张乾艺 徐艺玫 郭伟 陈创夫 马忠臣 王勇 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第11期5697-5705,共9页
旨在研究布鲁氏菌抗原btpA的免疫原性和对小鼠的免疫保护效果。试验通过PCR扩增布鲁氏菌btpA基因,克隆到pET-22b原核表达载体中,获得重组质粒pET-22b-BtpA,双酶切鉴定后在E.coli BL21(DE3)中用IPTG诱导目的蛋白表达并纯化后通过SDS-PAGE... 旨在研究布鲁氏菌抗原btpA的免疫原性和对小鼠的免疫保护效果。试验通过PCR扩增布鲁氏菌btpA基因,克隆到pET-22b原核表达载体中,获得重组质粒pET-22b-BtpA,双酶切鉴定后在E.coli BL21(DE3)中用IPTG诱导目的蛋白表达并纯化后通过SDS-PAGE与Western blot鉴定。腹腔注射100μg·只^(-1)rbtpA蛋白到6周龄SPF级BALB/c小鼠中,14 d以50μg·只^(-1)加强免疫。分别在7 d、14 d、21 d和28 d对小鼠尾部静脉采血。对小鼠血清中的布鲁氏菌特异性IgG抗体和抗体亚型(IgG1和IgG2a)使用间接ELISA进行检测。使用ELISpot方法检测在小鼠脾中释放IFN-γ的淋巴细胞数量。免疫28 d攻毒布鲁氏菌流行株(含2×10^(5) CFU·只^(-1)),15 d后剖检,根据小鼠脾中的布鲁氏菌载菌量评价亚单位疫苗的保护效力。结果表明,获得30 ku纯化的重组BtpA蛋白(rBtpA);rBtpA免疫7 d后小鼠产生布鲁氏菌特异性抗体,28 d水平最高,而PBS组未检测到特异性抗体;rBtpA免疫小鼠14 d和28 d后IgG2a/IgG1值都大于1,28 d更加显著,说明rBtpA诱导小鼠产生Th1偏向型的免疫应答反应。28 d内,小鼠释放IFN-γ的脾淋巴细胞数量明显超过PBS对照组,表明在rBtpA免疫后小鼠可以产生较高水平的Th1型细胞免疫应答反应。rBtpA组小鼠脾指数SI显著低于PBS组(P<0.001),脾载菌量也显著低于PBS组(P<0.01),表明rBtpA亚单位疫苗组的小鼠脾脏指数和脾载菌量更低。上述研究证明,rBtpA亚单位疫苗有作为布鲁氏菌病候选疫苗的潜质,本试验位研发布鲁氏菌rBtpA亚单位疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 BtpA蛋白 亚单位疫苗 保护效果 ELISPOT
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布鲁菌抗体阻断ELISA检测方法的建立与应用
6
作者 宋国栋 葛家振 +7 位作者 Weldeab Solomon 刘一健 高鹏程 王梓晴 郭双双 谢莹影 储岳峰 郑福英 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第8期1018-1025,共8页
旨在使用布鲁菌脂多糖(LPS)和HRP标记的单克隆抗体(HRP-m Ab)建立阻断ELISA抗体检测方法,并评价其检测性能以及初步应用。结果显示,当布鲁菌LPS的包被量为400 ng/孔,10 g/L阿拉伯树胶溶液封闭2 h,血清稀释4倍后37℃孵育20 min,稀释度为1... 旨在使用布鲁菌脂多糖(LPS)和HRP标记的单克隆抗体(HRP-m Ab)建立阻断ELISA抗体检测方法,并评价其检测性能以及初步应用。结果显示,当布鲁菌LPS的包被量为400 ng/孔,10 g/L阿拉伯树胶溶液封闭2 h,血清稀释4倍后37℃孵育20 min,稀释度为1∶6000的HRP-m Ab 37℃孵育20 min,显色10min时为最佳反应条件,该方法的临界值为PI=46.7%。该方法的最低检测水平为3.125 IU/m L,与常见的细菌病阳性血清无交叉反应,批内和批间变异系数均小于10%,具有良好的敏感性、特异性和重复性。该方法可检测牛、羊、鹿、犬等宿主的布鲁菌阳性血清。使用建立的阻断ELISA方法检测284份临床血清,与虎红凝集试验、竞争ELISA和间接ELISA试剂盒的符合率分别达到97.18%(276/284)、98.59%(280/284)和96.13%(273/284)。结果表明,建立了敏感性高、特异性好、重复性好的布鲁菌抗体阻断ELISA检测方法,全部反应过程不超过1 h,并且可检测多物种布鲁菌阳性血清。该方法弥补了我国布鲁菌抗体阻断ELISA检测技术的空白,为布鲁菌病的快速诊断以及免疫水平监测提供了技术支持。 展开更多
关键词 布鲁菌 脂多糖 单克隆抗体 阻断ELISA
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一种羊种布鲁氏菌复方新诺明耐药株荧光定量PCR检测方法的建立
7
作者 杨晓雯 宁文晴 +3 位作者 周师众 袁雅琴 侯雪新 丁家波 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第3期1465-1472,共8页
近年来,世界范围内已分离获得布鲁氏菌复方新诺明耐药株,快速检测样品中是否含有耐药株有助于指导临床用药。目前国内外尚无布鲁氏菌复方新诺明耐药株的快速检测方法。本研究旨在建立一种羊种布鲁氏菌复方新诺明耐受株的快速检测方法。... 近年来,世界范围内已分离获得布鲁氏菌复方新诺明耐药株,快速检测样品中是否含有耐药株有助于指导临床用药。目前国内外尚无布鲁氏菌复方新诺明耐药株的快速检测方法。本研究旨在建立一种羊种布鲁氏菌复方新诺明耐受株的快速检测方法。基于前期的研究筛选最小抑菌浓度较高的我国羊种布鲁氏菌分离株,利用基因组测序分析全基因组SNPs并筛选SNPs位点,利用MGB探针建立荧光定量检测羊种布鲁氏菌复方新诺明耐药株。研究发现,羊种布鲁氏菌2型标准株可作为耐药株分析的参考株,且64个SNPs和InDels为耐药株特有;12个突变位点可用于建立耐药株快速检测方法;利用染色体1中2014308位点的A/G多态性建立荧光定量检测方法特异性良好,最低能检测2×10^(1)CFU菌量,可用于临床样品是否含有复方新诺明耐药株的检测。本研究建立了一种羊种布鲁氏菌复方新诺明耐药株的荧光定量检测方法,为我国布病耐药株的防控提供科学依据,同时也为临床用药提供参考。 展开更多
关键词 羊种布鲁氏菌 复方新诺明 全基因组SNPs MGB探针
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马鼻疽和马鼻肺炎双重荧光定量PCR检测方法的建立
8
作者 鱼海琼 李娟 +11 位作者 梁佳琪 李明 王国胜 王莹 陈芳 吴晓薇 曾潇 佟铁铸 魏俊 张璐 孙铭飞 苏飞雄 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第9期1190-1197,共8页
为快速检测进出境马匹样品中马鼻疽和马鼻肺炎病原的核酸,选取两种病原保守基因片段,分别设计了适合的荧光定量PCR引物和探针,筛选和优化了试验最佳反应浓度和反应条件,建立了针对马鼻疽和马鼻肺炎病原核酸检测的双重荧光定量PCR(FQ-PCR... 为快速检测进出境马匹样品中马鼻疽和马鼻肺炎病原的核酸,选取两种病原保守基因片段,分别设计了适合的荧光定量PCR引物和探针,筛选和优化了试验最佳反应浓度和反应条件,建立了针对马鼻疽和马鼻肺炎病原核酸检测的双重荧光定量PCR(FQ-PCR)方法。结果显示,所建立的方法和体系能很好地区分马鼻疽、马鼻肺炎和其他马属动物疫病的病原核酸,检测马鼻疽和马鼻肺炎双重定量PCR标准曲线的相关系数分别为R^(2)=0.996 7和R^(2)=0.996 5,DNA含量最低检测限度分别为44.7 copies/μL和32.6 copies/μL。结果表明,本研究建立的方法具有较高的特异性、敏感性和可重复性。该方法可用于马匹疫病检测实验室快速检测,并能同时检测马鼻疽和马鼻肺炎两种病原核酸,具有重要的实际应用价值。 展开更多
关键词 马鼻疽 马鼻肺炎 双重荧光定量PCR
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羊布鲁菌外膜囊泡蛋白质组学分析及免疫原性评价
9
作者 刘雨欣 陈思 +7 位作者 高阳 顾德媛 彭海涛 张东 张如 许会会 刘亚乔 杨艳玲 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第7期3378-3389,共12页
旨在提取羊布鲁菌生物3型外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)并分析其蛋白组成成分,制备OMVs亚单位疫苗,评价OMVs疫苗的免疫原性。本研究利用差速离心法提取了OMVs,通过SDS-PAGE、透射电镜和ZeTA纳米粒径对OMVs进行鉴定;利用Label ... 旨在提取羊布鲁菌生物3型外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)并分析其蛋白组成成分,制备OMVs亚单位疫苗,评价OMVs疫苗的免疫原性。本研究利用差速离心法提取了OMVs,通过SDS-PAGE、透射电镜和ZeTA纳米粒径对OMVs进行鉴定;利用Label free液相质谱技术鉴定OMVs蛋白质组成成分,并进行GO聚类分析和KEGG富集分析;OMVs亚单位疫苗免疫小鼠后,对小鼠脾脏进行病理检测和T细胞亚群分类检测;对小鼠血清进行IL-2、IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A炎性细胞因子水平检测和IgG 1、IgG 2a和IgG 2b免疫球蛋白含量检测,评价OMVs免疫后小鼠的病理变化和细胞免疫水平。结果显示:成功提取了OMVs,其粒径大小为20~200 nm,相对分子质量在10~130 ku之间。蛋白质组学鉴定结果显示,OMVs中含有1612种蛋白质,其中包括Omp2b、Omp25、Omp31、Omp19和Bp26等多种外膜蛋白,以及脂蛋白和ABC转运体相关蛋白质。OMVs亚单位疫苗免疫小鼠后,小鼠脾脏未见明显的淋巴细胞排列疏松及坏死;诱导小鼠产生高水平IgG免疫球蛋白含量;同时诱导小鼠血清中IFN-γ、IL-2、IL-6、IL-17A和TNF-α炎性细胞因子表达量上升,IL-10和IL-4炎性细胞因子表达量下降;CD4^(+)/CD8^(+)T细胞比值增加。本研究证明OMVs中含有多个有效的免疫原性抗原,能诱导小鼠产生较好的细胞免疫水平,为明确布鲁菌OMVs蛋白成分和布鲁菌亚单位疫苗研发奠定了理论基础。 展开更多
关键词 布鲁菌 外膜囊泡 蛋白质组学 免疫原性
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RAA-DETECTOR布鲁氏菌核酸快速检测方法的建立及应用
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作者 张雲龙 王靖雷 +8 位作者 朱亚杰 张明洁 康澳 周翔 魏凯 曹洪防 李强 王勇 苏峰 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第10期5115-5124,共10页
本研究旨在建立不依赖于专业设备的布鲁氏菌病高效快速检测体系,实现临床样本40 min内快速检测。首先比对不同布鲁氏菌的基因组,找到布鲁氏菌的核心共有序列,以布鲁氏菌S2菌株基因SEQ NO.6(CN 105018489A)为模板构建阳性质粒,用于后续试... 本研究旨在建立不依赖于专业设备的布鲁氏菌病高效快速检测体系,实现临床样本40 min内快速检测。首先比对不同布鲁氏菌的基因组,找到布鲁氏菌的核心共有序列,以布鲁氏菌S2菌株基因SEQ NO.6(CN 105018489A)为模板构建阳性质粒,用于后续试验;通过原核表达的方法分别表达CRISPR/AsCas12a和LwaCas13a蛋白;通过重组酶介导的等温核酸扩增技术(RAA)、体外表达技术结合AsCas12a/LwaCas13a的DETECTOR系统,优化高效检测体系、通过无限稀释法等进行检测。结果发现,设计的RAA引物能够有效扩增样本中的DNA片段,DETECTOR得到最佳反应的AsCas12a浓度为200 nmol·L^(-1),gRNA为200 nmol·L^(-1);Cas13a浓度为300 nmol·L^(-1),crRNA浓度为400 nmol·L^(-1);RAA-AsCas12a和RAA-LwaCas13a的检测体系的最佳反应时间为35 min,侧平流式纸条的最佳检测时间为20 min,细菌最低检测浓度为10 Copies·μL^(-1),且具有较好的检测特异性,临床样本的检测试验表明两种方法均有较好的重复性和检测精度,但LwaCas13a的精测精度更高,但二者无显著差异。该研究建立了2种RAA-CRISPR/Cas布鲁氏菌核酸快速检测体系,在临床上可获得较好的应用,RAA-LwaCas13a的检测方法精度更高。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 RAA DETECTOR系统 SHERLOCK系统 AsCas12a LwaLwaCas13a
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布鲁氏菌bp26基因缺失株的构建 被引量：18
11
作者 潘文 王佳莹 +5 位作者 赵明秋 琚春梅 易琳 常艳 虞红娇 陈金顶 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期280-286,共7页
选择含有反向筛选基因sacB标记的pRE112质粒为自杀载体,利用等位基因交换的方法成功敲除了布鲁氏菌弱毒疫苗S19株、S2株、M5株的bp26基因,构建了具有非抗性基因标记的缺失株S19-Δbp26、S2-Δbp26、M5-Δbp26。将构建的重组自杀质粒pRE-... 选择含有反向筛选基因sacB标记的pRE112质粒为自杀载体,利用等位基因交换的方法成功敲除了布鲁氏菌弱毒疫苗S19株、S2株、M5株的bp26基因,构建了具有非抗性基因标记的缺失株S19-Δbp26、S2-Δbp26、M5-Δbp26。将构建的重组自杀质粒pRE-Δbp26(缺失了bp26基因的681个碱基)电转化入布鲁氏菌后,经过5μg/mL氯霉素筛选单交换子和70g/L蔗糖筛选同源重组双交换子,用菌落PCR及DNA测序的方法进行验证。结果表明,bp26基因的缺失改造成功,连续传20代后菌落PCR及DNA测序的结果显示突变株具有遗传稳定性。以pRE112自杀质粒为基础构建无抗性基因标记的布鲁氏菌缺失株为布鲁氏菌的基因功能研究奠定了基础,同时Δbp26缺失株的构建可为新型布鲁氏菌疫苗的研制奠定基础。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 bp26基因 自杀质粒 基因缺失株
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马耳它布氏杆菌bp26基因缺失株的构建及鉴定 被引量：17
12
作者 胡森 郑孝辉 +8 位作者 王加兰 张倩 刘文兴 王喜军 乔祖建 刘林涛 高红霞 王君伟 步志高 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期583-586,共4页
为了建立马耳他布氏杆菌M5-90株弱毒疫苗株与野生株的鉴别诊断,本研究以bp26基因作为重组靶位点,以M5-90为亲本,利用bp26基因ORF外侧序列作为同源序列,将卡那霉素抗性基因(Kanr)整合到细菌基因组中,双交叉重组阳性菌株,经SDS-PAGE和west... 为了建立马耳他布氏杆菌M5-90株弱毒疫苗株与野生株的鉴别诊断,本研究以bp26基因作为重组靶位点,以M5-90为亲本,利用bp26基因ORF外侧序列作为同源序列,将卡那霉素抗性基因(Kanr)整合到细菌基因组中,双交叉重组阳性菌株,经SDS-PAGE和western blot试验表明迁移率约为29ku的BP26蛋白在亲本菌中表达并可被鼠抗BP26高免血清识别,而突变株M5-90-26反应结果为阴性,表明BP26蛋白在突变疫苗株M5-90-26中未表达。M5-90-26具备从血清学角度区分M5-90-26免疫与野生型布氏杆菌感染,对布氏杆菌病防制、监测及净化具有重要的意义。 展开更多
关键词 重组布氏杆菌 M5—90 bp26基因 突变株
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布鲁氏菌病荧光偏振抗体检测方法的建立 被引量：20
13
作者 孙翠丽 程汝佳 +4 位作者 张阁 程君生 朱良全 蒋卉 丁家波 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期2822-2829,共8页
【目的】布鲁氏菌病(Brucellosis)简称布病,是由布鲁氏菌引起的以感染家畜为主的人畜共患传染病,造成严重的公共卫生问题。目前全世界范围内消除该病的主要方法是扑杀与免疫相结合,所以建立快速准确的诊断方法对防治和清除布病非常必要... 【目的】布鲁氏菌病(Brucellosis)简称布病,是由布鲁氏菌引起的以感染家畜为主的人畜共患传染病,造成严重的公共卫生问题。目前全世界范围内消除该病的主要方法是扑杀与免疫相结合,所以建立快速准确的诊断方法对防治和清除布病非常必要。本文建立布鲁氏菌病荧光偏振(FPA)抗体检测方法,为布鲁氏菌病(布病)的快速高效诊断提供技术手段。【方法】提纯猪种布鲁氏菌S2株脂多糖O链(OPS),经异硫氰酸荧光素(FITC)标记后作为诊断抗原。通过对样品稀释液、抗原稀释度、反应时间等条件的优化,初步建立了布鲁氏菌荧光偏振诊断方法。用该方法对148份布病阳性血清(其中牛血清70份,羊血清78份)和155份布病阴性血清(其中牛血清82份,羊血清73份)进行检测,确定其敏感性和特异性。按确定的技术参数,制备3批布鲁氏菌FPA抗体检测试剂盒,使用质控阴、阳性血清分别评价试剂盒的批内和批间重复性。用400份临床样本比较本研究开发试剂盒与商品化进口FPA试剂盒的符合率。【结果】使用0.5%蔗糖磷酸缓冲液作为血清样品稀释液;标记抗原的使用浓度为90μg/m L;最佳反应时间为3-5 min。本检测方法的判定标准为:δm P值<20时为阴性,δm P值≥20时为阳性。按上述条件建立的FPA检测148份布病阳性血清和155份布病阴性血清,结果敏感性为98.6%,特异性为98.7%。对400份临床样本的比对检测显示,研究建立的FPA方法与进口商品化试剂盒的总符合率为94.0%。【结论】研究建立的布鲁氏菌PFA抗体检测方法具有良好的特异性和敏感性,可作为一种重要的布病诊断快速诊断方法。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 荧光偏振诊断方法 特异性 敏感性
原文传递
动物源性沙门氏菌的耐药性分析及氟苯尼考类耐药基因的鉴定 被引量：33
14
作者 黄凯 陈素娟 +5 位作者 黄骏 杨林 鞠勇 朱相儒 孙志豪 彭大新 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第2期459-466,共8页
为了解动物沙门氏菌的流行情况和药物敏感性及氟苯尼考耐药株的耐药基因分布,本试验对临床上疑似患沙门氏菌病的病料进行病原分离和细菌的多重PCR鉴定;采用K-B法测定分离株对23种抗菌药物的敏感性;选择氟苯尼考耐药菌株扩增floR、fexA、... 为了解动物沙门氏菌的流行情况和药物敏感性及氟苯尼考耐药株的耐药基因分布,本试验对临床上疑似患沙门氏菌病的病料进行病原分离和细菌的多重PCR鉴定;采用K-B法测定分离株对23种抗菌药物的敏感性;选择氟苯尼考耐药菌株扩增floR、fexA、fexB、cfr和pexA基因。结果显示,共鉴定出61株沙门氏菌,其中肠炎沙门氏菌10株,鸡白痢沙门氏菌12株,鼠伤寒沙门氏菌39株。所有菌株对青霉素、红霉素、万古霉素耐药,90.16%对6种及6种以上抗菌药耐药。floR基因广泛存在于鼠伤寒沙门氏菌氟苯尼考耐药菌株中(8/12,66.67%),未发现其他耐药基因。研究结果表明鼠伤寒沙门氏菌是鹅源分离株中的优势血清型;floR基因主要介导沙门氏菌对氟苯尼考耐药性,但可能还存在其他机制。 展开更多
关键词 沙门氏菌 血清型 耐药性 floR基因
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中国大鲵维氏气单胞菌病的组织病理学观察 被引量：22
15
作者 王旭 颜其贵 +4 位作者 陈玥 雷燕 左兰 王志彪 万莉 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期737-740,共4页
运用病理切片和HE染色技术,对维氏气单胞菌自然感染大鲵的肌肉、肝、肾、肺、肠道等器官的组织病理学变化进行了观察。结果显示,肝可见大量淋巴细胞和少量中性粒细胞,肝细胞空泡状变性,肝血窦内见大量血细胞;肾集合管中可见少量蛋白样物... 运用病理切片和HE染色技术,对维氏气单胞菌自然感染大鲵的肌肉、肝、肾、肺、肠道等器官的组织病理学变化进行了观察。结果显示,肝可见大量淋巴细胞和少量中性粒细胞,肝细胞空泡状变性,肝血窦内见大量血细胞;肾集合管中可见少量蛋白样物,血管球扩张,有的溶解坏死;心肌纤维溶解,甚至坏死,可见充血和出血;胰细胞颗粒变性;肺偶见充血;脾索排列紊乱,脾窦中充满大量红细胞和巨噬细胞;肠道内肠绒毛溶解脱落,有充血现象;肌纤维蜡样坏死,肌细胞核浓缩凝固,深染,破碎。证实,维氏气单胞菌能使中国大鲵的多个组织器官出现严重的病理变化而导致死亡。 展开更多
关键词 中国大鲵 维氏气单胞菌 病理学观察
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猪源奇异变形杆菌的分离鉴定及集群运动分析 被引量：26
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作者 赵振鹏 杨振 +5 位作者 林伟东 于恩琪 李玉 张笛 秦爱建 金文杰 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第10期219-224,共6页
本试验从发病猪肝脏中分离到1株细菌,经革兰氏染色镜检、生化试验、药敏分析、16SrDNA测序,确认该菌为1株多重耐药奇异变形杆菌。该菌与GenBank中其他9株不同来源的奇异变形杆菌进行16SrDNA比对分析,从遗传进化规律方面证明不同来源的... 本试验从发病猪肝脏中分离到1株细菌,经革兰氏染色镜检、生化试验、药敏分析、16SrDNA测序,确认该菌为1株多重耐药奇异变形杆菌。该菌与GenBank中其他9株不同来源的奇异变形杆菌进行16SrDNA比对分析,从遗传进化规律方面证明不同来源的的奇异变形杆菌亲缘性极其相近。周期性群集运动分析结果表明在含0.5%和1.0%琼脂平板上,该菌不以圆环样周期运动;在含1.5%和2.0%琼脂平板上,该菌以圆环样周期运动。 展开更多
关键词 奇异变形杆菌 猪 分离鉴定 周期性群集运动
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布氏杆菌和结核杆菌二重实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用 被引量：17
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作者 孟茹 陈创夫 +4 位作者 张辉 乔军 任艳 王正荣 蒋松 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1012-1017,共6页
本试验旨在利用二重实时荧光定量PCR技术建立鉴别诊断布氏杆菌和结核杆菌的方法。通过筛选布氏杆菌omp10、omp19、omp17、omp25、omp31和结核杆菌cfp10基因的最佳引物组合,建立二重实时定量PCR鉴别诊断方法,对该方法进行稳定性、特异性... 本试验旨在利用二重实时荧光定量PCR技术建立鉴别诊断布氏杆菌和结核杆菌的方法。通过筛选布氏杆菌omp10、omp19、omp17、omp25、omp31和结核杆菌cfp10基因的最佳引物组合,建立二重实时定量PCR鉴别诊断方法,对该方法进行稳定性、特异性和敏感性试验,并对临床样品及模拟样品进行检测。经筛选布氏杆菌的omp25基因与结核杆菌cfp10基因引物组合最佳,该二重实时荧光定量PCR方法中布氏杆菌Tm值为88～89℃,结核杆菌Tm值为90～91℃,对其他供试的菌株则为阴性;该方法对布氏杆菌的DNA最低检出量为20拷贝.μL-1,结核杆菌为50拷贝.μL-1,两病原都存在时为100拷贝.μL-1,比常规PCR高100倍。利用所建立的二重荧光定量PCR方法及常规PCR,对24份结核痰样、11份布氏杆菌基因粗提物及30份模拟奶样进行检测,符合率为100%。本试验建立的方法可用于同时检测布氏杆菌和结核杆菌,并且具有良好的特异性、敏感性和稳定性。 展开更多
关键词 布氏杆菌 结核杆菌 二重实时荧光定量PCR
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布鲁氏菌VirB8变异株的构建及其感染力和毒力的测定 被引量：10
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作者 钟旗 何倩倪 +6 位作者 范伟兴 谷文喜 易新萍 吴冬玲 叶锋 李博 刘丽娅 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期892-897,共6页
作者拟对缺失致病力因子——四型分泌系统中的VirB8基因后布鲁氏菌感染力和毒力的变化进行测定与分析。首先,构建了布鲁氏菌VirB8基因缺失株(△B8B.suis),用缺失株感染巨噬细胞和BALB/c小鼠,再用B.suis强毒攻击BALB/c小鼠并检测脾脏含菌... 作者拟对缺失致病力因子——四型分泌系统中的VirB8基因后布鲁氏菌感染力和毒力的变化进行测定与分析。首先,构建了布鲁氏菌VirB8基因缺失株(△B8B.suis),用缺失株感染巨噬细胞和BALB/c小鼠,再用B.suis强毒攻击BALB/c小鼠并检测脾脏含菌数,观察其在动物体内定居能力、毒力及抗感染保护力。鉴定△B8B.suis为VirB8基因完全缺失株,△B8B.suis感染巨噬细胞6、24和48 h,其CFU分别为49、165和355;△B8B.suis感染BALB/c小鼠的每克脾含菌数为3.6×107(1×108CFU腹腔接种)和5×106(1×109CFU蹊部接种);BALB/c小鼠攻毒试验显示△B8B.suis免疫组每克脾平均含菌数为7.61×102,非免疫对照组为2.98×105。结果表明布鲁氏菌缺失VirB8基因后,其毒力较亲本株弱,但能在小鼠脾脏定居,为弱毒株;△B8B.suis呈现出作为疫苗的生物学特性,但毒株能否作为疫苗株使用,还需进一步验证。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 致病因子 毒力 保护力
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IS711和omp2作为布氏杆菌种属及种株间分子鉴别诊断标记的研究 被引量：16
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作者 陈伟业 胡森 +1 位作者 黄克和 步志高 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期676-680,共5页
布氏杆菌为世界性具重要公共卫生意义的人兽共患疫病原,分6个种。建立种间及种株间安全敏感、经济有效的快速鉴别诊断方法对布病防制及分子流行病学研究具有重要意义。布氏杆菌IS711和omp2基因具有种属特异性,可用于布氏杆菌的PCR分子... 布氏杆菌为世界性具重要公共卫生意义的人兽共患疫病原,分6个种。建立种间及种株间安全敏感、经济有效的快速鉴别诊断方法对布病防制及分子流行病学研究具有重要意义。布氏杆菌IS711和omp2基因具有种属特异性,可用于布氏杆菌的PCR分子诊断。其中IS711为转座因子,在不同种布菌种存在插入位置的多态性,外膜蛋白OMP2编码基因则存在反向重复序列及种株间的多态性。为此,分别采用复式—PCR、PCR和限制性酶切片段长多态性(RFLP)分析,对分属于B．melitensis、B．suis和B．abortus的不同种布氏杆菌的不同种株,M5、M16、S2、S6和S19进行分子鉴别诊断。结果显示,根据IS711基因特定PCR扩增片段长多态性,可进行布氏杆菌种间的快速鉴别；而omp2编码基因PCR扩增片段PstⅠ、KpnⅠ、NcoⅠ和Eco47Ⅲ等4种限制酶片段长多态性,则可成为布氏杆菌菌株间特异的分子鉴别诊断标记,甚至疫苗株M5和野毒株M16之间的分子诊断标记。 展开更多
关键词 布氏杆菌 分子标记 IS711 omp2 限制性酶切片段长多态性(RFLP)
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嗜麦芽寡养单胞菌研究进展 被引量：21
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作者 耿毅 汪开毓 +1 位作者 陈德芳 黄小丽 《动物医学进展》 CSCD 2006年第5期28-31,共4页
嗜麦芽寡养单胞菌是一种严格的非发酵型需氧的极生多鞭毛的革兰氏阴性杆菌,该菌已成为人、山羊、猪、卵型鲳鯵和鳄鱼等多种动物的条件致病菌,其感染可致肺炎、败血症、脑炎、心内膜炎、化脓性淋巴结炎和脓肿等。文章对该菌的分类、生物... 嗜麦芽寡养单胞菌是一种严格的非发酵型需氧的极生多鞭毛的革兰氏阴性杆菌,该菌已成为人、山羊、猪、卵型鲳鯵和鳄鱼等多种动物的条件致病菌,其感染可致肺炎、败血症、脑炎、心内膜炎、化脓性淋巴结炎和脓肿等。文章对该菌的分类、生物学特性、耐药机制、感染与致病机理和防治等方面的研究进行了综述。 展开更多
关键词 嗜麦芽寡养单胞菌 分类 耐药机制 致病性 防治
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