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睡眠嗜组织菌可视化LAMP现场检测方法的建立及初步应用 被引量：1
1
作者 李富祥 高华峰 +1 位作者 赵文华 宋建领 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第4期477-483,共7页
为建立睡眠嗜组织菌(Hi.somni)可视化LAMP检测方法,笔者根据Hi.somni 16S rRNA基因的特异性序列设计了1对LAMP内引物和1对LAMP外引物,优化反应体系和反应程序,评价特异性、敏感性及其与PCR方法的符合率,建立了Hi.somni可视化LAMP现场检... 为建立睡眠嗜组织菌(Hi.somni)可视化LAMP检测方法,笔者根据Hi.somni 16S rRNA基因的特异性序列设计了1对LAMP内引物和1对LAMP外引物,优化反应体系和反应程序,评价特异性、敏感性及其与PCR方法的符合率,建立了Hi.somni可视化LAMP现场检测方法。反应程序优化结果显示,本研究建立LAMP方法的最佳反应程序为58℃反应70 min。特异性试验结果显示,该方法能特异性地检测Hi.somni,与溶血性曼氏杆菌、化脓隐秘杆菌、多杀性巴氏杆菌等14种牛、绵羊和山羊常见细菌无交叉反应,特异性较强。敏感性试验结果显示,该方法能检出最低浓度为4.7 copies/μL的重组质粒标准品pMD19T-His,敏感性较高。临床样品检测结果显示,LAMP方法和普通PCR方法检测Hi.somni的阳性率分别为11.49%(10/87)和9.20%(8/87),LAMP方法与PCR方法的总符合率、阳性符合率和阴性符合率分别为97.70%(85/87)、100%(8/8)和97.47%(77/79)。结果表明,本研究建立的LAMP方法为牛、山羊和绵羊Hi.somni感染的快速可视化现场检测提供技术支撑。 展开更多
关键词 睡眠嗜组织菌 环介等温扩增 现场检测 牛 山羊 绵羊
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三穗鸭源禽致病性大肠杆菌与鸭疫里氏杆菌的分离与鉴定 被引量：2
2
作者 陈泽辉 嵇辛勤 +8 位作者 阮涌 曹伟 安而立 龙丹丹 陈佳琪 杨纯培 吴宗豪 王丽娟 姚碧琼 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第4期500-506,共7页
为确定贵州省三穗县送检病鸭的病原及其生物学特性,从病变组织中分离鉴定细菌性病原,并进行毒力基因检测、血清型鉴定、药敏试验以及动物毒力试验。分离鉴定与基因测序结果表明:分离出2株病原菌GZE6和GZR6;其中GZE6为禽致病性大肠杆菌(A... 为确定贵州省三穗县送检病鸭的病原及其生物学特性,从病变组织中分离鉴定细菌性病原,并进行毒力基因检测、血清型鉴定、药敏试验以及动物毒力试验。分离鉴定与基因测序结果表明:分离出2株病原菌GZE6和GZR6;其中GZE6为禽致病性大肠杆菌(APEC),含yijP、irp2等8种毒力基因,为APEC血清O18型;而GZR6为鸭疫里氏杆菌(RA),含camp、fur等6种毒力基因,为RA血清2型。GZE6、GZR6均对氨基糖苷类、大环内酯类等药物耐药。动物毒力试验显示,肌内接种GZE6和GZR6的雏鸭在24 h后出现临床症状,72 h后全部死亡。结果表明,三穗县送检病鸭为APEC和RA的混合感染,GZE6和GZR6均具有一定的耐药性,携带多种毒力基因,致病性强,为贵州三穗鸭APEC和RA的疫苗选择和药物防制提供了参考。 展开更多
关键词 禽致病性大肠杆菌 鸭疫里氏杆菌 血清型 耐药性 毒力基因
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黑龙江省地区犊牛腹泻源致病性大肠杆菌流行情况调查、毒力基因及耐药性分析 被引量：3
3
作者 孔祥鹤 苏欣雨 +7 位作者 钟一铭 卢赵梓暄 廖献茂 张哲 张旭 高萌萌 周玉龙 樊祜卿 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第7期3390-3398,共9页
大肠杆菌是引起新生犊牛腹泻和死亡的主要病原之一,本研究旨在探明黑龙江省犊牛腹泻源大肠杆菌致病性、携带毒力基因和耐药的流行情况。对2020年1月至2023年7月收集的黑龙江省8个城市35个牛群252份犊牛腹泻样品,进行细菌分离、革兰染色... 大肠杆菌是引起新生犊牛腹泻和死亡的主要病原之一,本研究旨在探明黑龙江省犊牛腹泻源大肠杆菌致病性、携带毒力基因和耐药的流行情况。对2020年1月至2023年7月收集的黑龙江省8个城市35个牛群252份犊牛腹泻样品,进行细菌分离、革兰染色、鉴别培养基鉴定、生化试验、16S rRNA鉴定、小鼠致病性试验和药敏试验,通过PCR方法检测15种毒力基因,试验数据应用SPSS 22.0软件卡方检验方法对致病性大肠杆菌的地区流行情况、不同年限和不同季节因素进行分析。结果显示:共分离鉴定出153株致病性大肠杆菌,其中49.02%(75/153)携带毒力基因,其中Irp-2阳性率最高为37.25%(57/153),FyuA、K99、F41、F17、STa、HlyA、Stxl、Stx2和Eaea阳性率依次为19.61%(30/153)、4.58%(7/153)、4.58%(7/153)、3.92%(6/153)、2.61%(4/153)、3.27%(5/153)、0.65%(1/153)、0.65%(1/153)和0.65%(1/153)。药敏试验结果显示153株分离菌对磷霉素敏感率最高56.21%(86/153),而对磺胺异噁唑、阿莫西林等耐药严重,所有菌株都耐2重及以上药物,部分菌株最高达到11重耐药。通过统计分析发现2020年致病性大肠杆菌分离率77.59%(45/58)显著高于2021年与2022年(P<0.001)。在一年四季中夏季致病性大肠杆菌分离率最低(P<0.05),各地区之间致病性大肠杆菌分离率有统计学差异,其中鸡西市最高,齐齐哈尔市最低(P<0.001)。以上结果表明黑龙江省犊牛腹泻源牛致病性大肠杆菌携带毒力基因种类具有多样性,普遍多重耐药,致病性大肠杆菌的流行与地区、年限和季节均有一定的相关性。本研究为黑龙江地区牛大肠杆菌感染的防治提供了理论依据。 展开更多
关键词 犊牛腹泻 大肠杆菌 毒力基因 耐药性 流行病学
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一株猪源罗伊氏黏液乳杆菌的分离鉴定及其益生特性研究 被引量：2
4
作者 仇聪蕊 舒祥力 +3 位作者 张云飞 司露露 万鲜花 胡慧 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第9期1216-1226,共11页
本研究旨在从健康成年猪新鲜粪便中分离筛选可用于改善仔猪腹泻的潜在益生菌菌株,并对筛选菌株的生长性能、耐酸、耐人工胃肠液、抗生素敏感性、体外抑菌和免疫调节等益生特性进行测定。结果显示,成功分离获得1株罗伊氏黏液乳杆菌(Limos... 本研究旨在从健康成年猪新鲜粪便中分离筛选可用于改善仔猪腹泻的潜在益生菌菌株,并对筛选菌株的生长性能、耐酸、耐人工胃肠液、抗生素敏感性、体外抑菌和免疫调节等益生特性进行测定。结果显示,成功分离获得1株罗伊氏黏液乳杆菌(Limosilactobacillus reuteri),命名为HN-1菌株。该筛选菌株在37℃培养2~8 h处于对数生长期,培养14 h后,其培养液的pH值下降至4.36,说明HN-1菌株具有较强的产酸能力。HN-1菌株在pH=3.0条件下培养2 h后的存活率为49.5%,经人工胃肠液处理后,存活率为53%,说明其具有较强的抗逆能力。对抗生素的敏感性试验结果显示,HN-1菌株对阿莫西林、青霉素、氨苄西林、头孢噻吩、头孢噻肟、庆大霉素、新生霉素和多西环素高度敏感。体外抑菌试验结果显示,该菌株对金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌和大肠杆菌均具有良好的抑制作用。另外,HN-1菌株与IPEC-J2细胞共孵育6 h可显著抑制促炎细胞因子IL-8(P<0.001)、TNF-α(P<0.01)和IL-1β(P<0.01)的表达,说明该菌株具有一定的免疫调节能力。小鼠体内安全性试验结果显示,HN-1菌株具有良好的安全性。综上所述,分离的猪源罗伊氏黏液乳杆菌HN-1益生特性良好,可为后续研制用于防治仔猪腹泻的益生菌制剂提供备选菌株。 展开更多
关键词 罗伊氏黏液乳杆菌 分离鉴定 抑菌活性 益生特性 安全性评价
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Tol-Pal系统tolQ基因对禽致病性大肠杆菌生物学特性及毒力的影响 被引量：1
5
作者 李双阳 张贝贝 +6 位作者 胡剑刚 王欣宇 祁晶晶 田明星 鲍衍清 石玉祥 王少辉 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第1期11-17,共7页
本研究利用Red同源重组系统和互补质粒构建禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)菌株APCE50的tolQ基因缺失株ΔtolQ和互补株CΔtolQ,以探究tolQ基因对APEC生物学特性以及对细菌致病性的影响。对APCE50、ΔtolQ和C... 本研究利用Red同源重组系统和互补质粒构建禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)菌株APCE50的tolQ基因缺失株ΔtolQ和互补株CΔtolQ,以探究tolQ基因对APEC生物学特性以及对细菌致病性的影响。对APCE50、ΔtolQ和CΔtolQ的生长曲线、运动能力、形态特征、生物被膜形成能力、酸碱耐受性、抗血清杀菌、细胞黏附侵袭能力及毒力进行了比较分析。结果显示,ΔtolQ与APCE50、CΔtolQ的生长速度无明显差异,但ΔtolQ的运动能力下降并影响细菌形态。缺失tolQ基因导致APEC生物被膜形成能力、酸碱耐受性及抗血清杀菌能力显著降低。细胞及动物感染试验结果显示,tolQ基因缺失显著降低了APEC的黏附侵袭能力和毒力。综上表明,tolQ基因在APEC运动能力、生物被膜形成、耐受性及致病性方面发挥作用,这为阐明APEC的环境适应性、生存能力及致病机制提供了参考。 展开更多
关键词 禽致病性大肠杆菌 tolQ 生物学特性 毒力
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猪链球菌7型的分离鉴定及致病性研究 被引量：1
6
作者 姜志康 韩先杰 +6 位作者 郭皖露 陈超 柳宇 刘康 王贤文 郝炬源 刘刚 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第2期182-187,共6页
为探究猪链球菌7型的致病性,笔者从山东半岛地区病死猪体内分离纯化病原菌,经革兰染色、生化鉴定、PCR鉴定,共分离出4株猪链球菌7型,通过小鼠感染试验测定半数致死量,临床症状观察及组织病理切片分析猪链球菌7型的致病性。结果显示,细... 为探究猪链球菌7型的致病性,笔者从山东半岛地区病死猪体内分离纯化病原菌,经革兰染色、生化鉴定、PCR鉴定,共分离出4株猪链球菌7型,通过小鼠感染试验测定半数致死量,临床症状观察及组织病理切片分析猪链球菌7型的致病性。结果显示,细菌于血平板上呈现圆形或椭圆形的灰白色半透明菌落,菌落周围呈现β溶血环;革兰染色为阳性,菌落呈单个、多个或链条形排列;API 20 Strep生化鉴定结果为链球菌属,PCR扩增cps7结果为阳性。动物试验确定SS7-4菌株对BALB/c小鼠致病力最强,LD_(50)为2.35×10^(4) CFU/mL,攻毒组小鼠各组织肿胀出血严重,器官边缘钝圆,颜色变深,呈暗红色或黑红色。组织病理学观察为心肌纤维断裂,脾小梁异常增多,肾小管肿胀明显,肺充血严重。本试验结果为深入研究猪链球菌7型的致病机理奠定了基础。 展开更多
关键词 猪链球菌7型 分离鉴定 动物试验 BALB/C小鼠 致病性
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赛鸽源大肠杆菌耐药性检测及多重耐药菌株的全基因组测序分析 被引量：2
7
作者 石金川 孙淼 +6 位作者 孟令浩 王永强 耿超 齐朝鲁蒙 陈亨利 王梓 刘锴 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第5期2372-2382,共11页
赛鸽养殖中,普遍存在抗生素滥用现象,造成耐药菌株增加,多重耐药性加剧。本研究旨在了解通辽市赛鸽源大肠杆菌耐药性及耐药基因流行情况,为赛鸽源大肠杆菌病临床治疗提供参考。使用大肠杆菌鉴别培养基,16S rRNA测序等方法对通辽地区送... 赛鸽养殖中,普遍存在抗生素滥用现象,造成耐药菌株增加,多重耐药性加剧。本研究旨在了解通辽市赛鸽源大肠杆菌耐药性及耐药基因流行情况,为赛鸽源大肠杆菌病临床治疗提供参考。使用大肠杆菌鉴别培养基,16S rRNA测序等方法对通辽地区送检腹泻赛鸽粪便病原菌进行分离纯化。通过药敏试验及耐药基因的PCR检测了解分离菌株的耐药性及耐药基因分布情况。对两株耐药性较强的大肠杆菌进行全基因组测序分析。结果显示:分离得到8株赛鸽源大肠杆菌,均为多重耐药菌株,其中卡那霉素和链霉素耐药率均为100%,全部菌株对头孢哌酮/舒巴坦敏感。E-ge1,E-ge2耐药性严重,对两株菌进行全基因组测序分析,获得完整基因组序列,两株菌基因组长度分别为4680817 bp与4691799 bp,分别编码4888与5070个基因,两菌株均携带3个质粒。E-ge1共携带81个耐药基因,E-ge2携带74个耐药基因。通辽地区赛鸽源大肠杆菌耐药形势严峻,菌株携带大量耐药基因,应优化用药策略,控制耐药性的加剧和耐药基因的传播。 展开更多
关键词 赛鸽 大肠杆菌 耐药性 耐药基因 全基因组测序
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羊源肺炎克雷伯菌分离鉴定及其外膜囊泡提取方法的建立 被引量：2
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作者 范维 刘昕昕 +4 位作者 翟艺禄 张新玉 王唯 付佳棋 孙福亮 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第1期353-364,共12页
旨在探究羊源肺炎克雷伯菌的致病性及其外膜囊泡的提取方法。本研究对伴有咳嗽、腹泻症状死亡的绵羊剖检并采集肺,肝,空肠等病变器官,采用形态观察、生化特性鉴定,分子生物学鉴定及测序方法对病原菌进行分离鉴定;通过药敏试验、拉丝试... 旨在探究羊源肺炎克雷伯菌的致病性及其外膜囊泡的提取方法。本研究对伴有咳嗽、腹泻症状死亡的绵羊剖检并采集肺,肝,空肠等病变器官,采用形态观察、生化特性鉴定,分子生物学鉴定及测序方法对病原菌进行分离鉴定;通过药敏试验、拉丝试验、毒力基因检测、致病性试验及病理组织学观察分析其致病性和耐药性;使用改良沉淀法提取其外膜囊泡,通过透射电镜,纳米粒径测定及SDS-PAGE进行鉴定。结果显示病原菌经分离纯化后镜下呈现卵圆形革兰阴性杆菌,结合生化试验及16S rRNA鉴定结果表明该病原菌为肺炎克雷伯菌;药敏试验结果显示病原菌对阿米卡星,头孢他啶,亚胺培南,哌拉西林四种药物敏感;拉丝试验结果符合阳性特征及毒力基因扩增显示荚膜多糖基因wzy-K1及代谢基因peg-344为阳性,确定该病原菌为高毒力肺炎克雷伯菌;小鼠致病性试验结果表明病原菌对小鼠半数致死量(LD_(50))浓度为1.8×10^(5 )CFU,经病理组织学观察肝脏、脾脏淤血且有大量炎性细胞浸润;透射电镜,纳米粒径测定显示沉淀物形态结构、粒径大小均符合细菌外膜囊泡特征,SDS-PAGE显示存在特征性条带。本试验成功从病死绵羊体内分离出高毒力肺炎克雷伯菌并通过沉淀法提取其外膜囊泡,为预防和治疗羊源肺炎克雷伯菌病提供参考及肺炎克雷伯菌外膜囊泡的基础研究提供帮助。 展开更多
关键词 绵羊 肺炎克雷伯菌 致病性 外膜囊泡
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1株牛源A型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及全基因组测序分析 被引量：1
9
作者 王亚平 王世兴 +2 位作者 樊曦雯 孔晓佳 王真 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第4期668-677,共10页
采集一病牛鼻咽拭子和组织病料,并进行细菌分离纯化、16S rRNA基因扩增、荚膜血清型分型、毒力基因检测和分离株全基因组测序。结果显示,经细菌分离纯化、生化试验及PCR鉴定发现1株A型多杀性巴氏杆菌菌株,命名为“Pm WZ01”株;毒力基因... 采集一病牛鼻咽拭子和组织病料,并进行细菌分离纯化、16S rRNA基因扩增、荚膜血清型分型、毒力基因检测和分离株全基因组测序。结果显示,经细菌分离纯化、生化试验及PCR鉴定发现1株A型多杀性巴氏杆菌菌株,命名为“Pm WZ01”株;毒力基因扩增发现Pm WZ01基因组含有tadD、nanH、ompA、exbB、exbD、fur基因;基因组测序获得Pm WZ01株全基因组大小为2 383 021 bp,GC含量为40.28%;含有56个tRNA、19个rRNA;155个假基因,3个基因岛,5个前噬菌体,55个碳水化合物活性酶基因;CARD注释分析发现1个PBP3抗性基因和2个EF-Tu抗性基因;VFDB和PHI-base注释分析发现582个毒力因子相关基因及888个表型突变基因。系统进化树分析发现Pm WZ01菌株与中国长春Pm-3菌株(CP014618.1)、英国P1933菌株(CP132898.1)以及中国湖北HB01菌株(CP006976.1)属于同一分支,进化关系最近。本研究完成了1株A型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定以及生物学特性和全基因组测序分析,为牛源A型多杀性巴氏杆菌病的防控研究提供了理论依据。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 牛源 全基因组测序 耐药性 毒力
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湖北省某鸽场大肠埃希氏菌的分离鉴定与耐药性分析
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作者 王娟 卢琴 +3 位作者 张记高 程伊洛 张腾飞 刘静波 《动物医学进展》 北大核心 2025年第5期134-138,共5页
大肠杆菌病是危害鸽养殖业的重要细菌性传染病,然而相关的流行及耐药数据却相对较少。为研究湖北省鸽场大肠埃希氏菌的流行及耐药情况,采集了肉鸽屠宰后的肝、脾、肠内容物等285份,经伊红美蓝琼脂培养基分离培养,通过PCR鉴定,分离到了19... 大肠杆菌病是危害鸽养殖业的重要细菌性传染病,然而相关的流行及耐药数据却相对较少。为研究湖北省鸽场大肠埃希氏菌的流行及耐药情况,采集了肉鸽屠宰后的肝、脾、肠内容物等285份,经伊红美蓝琼脂培养基分离培养,通过PCR鉴定,分离到了199株鸽源大肠埃希氏菌,分离率为69.82%。经过双重PCR扩增对菌株进行系统进化群鉴定,筛选出高致病群菌株60株(B2群34株,D群26株),占分离株的30.15%。采用药敏纸片法对60株高致病群菌株进行了12种抗菌药物的耐药性分析,结果表明,这些菌株对林可霉素、氟苯尼考、四环素、氨苄西林、红霉素和甲氧苄氨嘧啶的耐药率高于95%,而对大观霉素、替加环素、头孢噻肟、环丙沙星、多黏菌素B和美罗培南等较为敏感。所有菌株均耐3种以上的抗菌药物,最多可耐9种抗菌药物,其中51.67%的菌株耐6种抗菌药物,占比最多。研究结果可为湖北省鸽场大肠杆菌病的预防与合理用药提供科学数据。 展开更多
关键词 大肠埃希氏菌 分离鉴定 致病群 耐药性 鸽
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新疆幼畜致泻性大肠埃希菌的毒力基因、耐药性和生物膜的相关性分析
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作者 白怡馨 张梦菲 +10 位作者 迪娜拉·叶尔波力 王磊 靳婉婧 黄颖 谢金鑫 郑晓风 王美玲 王传锋 苏战强 张炜 佟盼盼 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第10期5125-5136,共12页
近年来细菌耐药性越来越成为威胁畜牧养殖和人类健康的重要问题,但细菌耐药性的调控机制非常复杂,本研究旨在分析致泻性大肠埃希菌(diarrheagenic Escherichia coli,DEC)毒力基因、耐药性和生物膜形成能力的相关性。对新疆腹泻幼畜76株E... 近年来细菌耐药性越来越成为威胁畜牧养殖和人类健康的重要问题,但细菌耐药性的调控机制非常复杂,本研究旨在分析致泻性大肠埃希菌(diarrheagenic Escherichia coli,DEC)毒力基因、耐药性和生物膜形成能力的相关性。对新疆腹泻幼畜76株E.coli进行毒力基因、系统进化分群、药物敏感性检测、生物膜形成能力测定及溶血试验。结果表明,76株DEC包括ETEC(n=28)、STEC(n=6)、EPEC(n=5)、ETEC/STEC(n=23)、ETEC/EPEC(n=1)、ETEC/EPEC/STEC(n=13),以B1(40.8%)和A群(28.9%)为主,对阿莫西林、氨苄西林、四环素、头孢噻肟的耐药率在53.9%~80.3%,对链霉素、氟苯尼考、磺胺甲基异恶唑、头孢曲松、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星的耐药率为21.1%~47.4%,对左氧氟沙星、氨苄西林-舒巴坦、阿米卡星、磷霉素、多黏菌素B的耐药率为1.3%~15.8%,73.7%强成膜,17.1%中成膜,7.9%弱成膜,1.3%未成膜,14株呈β溶血。强成膜菌株在携带STb、stx1、hly和eae的DEC中更常见(P<0.001)。成膜能力与溶血相关(P<0.05),与多重耐药性无关(P>0.05),与头孢他啶耐药性显著相关(P<0.001),与氨苄西林-舒巴坦耐药性相关(P=0.0279,P<0.05)。研究结果表明,新疆地区腹泻幼畜DEC类型复杂,多数菌株都具有成膜能力,其成膜能力与毒力基因和溶血性相关,与头孢他啶和氨苄西林-舒巴坦耐药性有关,生物膜形成能力可能与抗生素治疗失败和持续感染相关,本研究为防治幼畜腹泻提供了参考。 展开更多
关键词 致泻性大肠杆菌 生物膜 耐药性 毒力基因 幼畜
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蛋内沙门菌新型增菌方法的建立及其在Sm24/Rif12/Ssq活疫苗降低散养蛋鸡污染率中的应用
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作者 齐志颖 陈松彪 +7 位作者 张宁 耿云腾 贾艳艳 尚珂 廖成水 丁轲 郭荣显 余祖华 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第11期1462-1469,共8页
旨在建立蛋内沙门菌新型增菌方法,并对其在Sm24/Rif12/Ssq活疫苗降低散养蛋鸡污染率中的应用效果进行评价。首先,在TSB预增菌肉汤中添加35μg/m L硫酸亚铁和2 mmol/L丙酮酸钠,以提高低污染水平下沙门菌的检测灵敏度以及复苏处于活的不... 旨在建立蛋内沙门菌新型增菌方法,并对其在Sm24/Rif12/Ssq活疫苗降低散养蛋鸡污染率中的应用效果进行评价。首先,在TSB预增菌肉汤中添加35μg/m L硫酸亚铁和2 mmol/L丙酮酸钠,以提高低污染水平下沙门菌的检测灵敏度以及复苏处于活的不可培养(VBNC)状态的细菌。在开产后6个月内,每隔15 d随机收取40枚鸡蛋(共480枚)进行沙门菌分离鉴定;在每次采样时,使用0.1%蛋白胨水湿润的棉签从鸡舍随机采集10份环境样本。结果显示,优化的增菌肉汤m TSB显著提升蛋内沙门菌的检出率,对VBNC状态沙门菌的恢复显著优于TSB增菌(P<0.01),接种肠炎沙门菌疫苗Sm24/Rif12/Ssq的散养母鸡所产鸡蛋的蛋内和蛋壳均未检出沙门菌。结果表明,m TSB适用于蛋内低污染水平和VBNC状态下沙门菌的分离,肠炎沙门菌活疫苗Sm24/Rif12/Ssq可降低散养地方品种鸡蛋的沙门菌污染风险,为保障散养蛋鸡的蛋品安全提供了可靠解决方案。 展开更多
关键词 肠炎沙门菌 活疫苗 鸡蛋污染 散养 VBNC
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紫杉醇协同替加环素逆转tet(X4)和tet(A)介导的耐药性
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作者 郑梦香 吴晓颖 +6 位作者 赵世允 李甜甜 吴华 刘建华 苑丽 胡功政 贺丹丹 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第12期10-19,共10页
为了探究紫杉醇协同替加环素逆转tet(X4)和tet(A)介导的大肠杆菌和肺炎克雷伯菌的替加环素耐药性的机制。本试验采用棋盘试验测定紫杉醇和替加环素联合的协同作用,采用微量肉汤稀释法确定紫杉醇对替加环素的最小耐药逆转浓度,绘制时间-... 为了探究紫杉醇协同替加环素逆转tet(X4)和tet(A)介导的大肠杆菌和肺炎克雷伯菌的替加环素耐药性的机制。本试验采用棋盘试验测定紫杉醇和替加环素联合的协同作用,采用微量肉汤稀释法确定紫杉醇对替加环素的最小耐药逆转浓度,绘制时间-杀菌曲线评价两药联合的体外抗菌效果,通过生化因子(细胞膜完整性、质子动力、ATP含量、外排泵活性)测定试验、分子对接和动物试验探究两药联合的抗菌机制。结果显示,两药联合对tet(X4)和tet(A)介导的替加环素耐药大肠杆菌和肺炎克雷伯菌均具有协同作用[部分抑菌浓度指数(FICI)<0.5],最小逆转浓度为128μg/mL,并且有显著的杀菌作用(菌落数减少>2 log10CFU/mL)。生化因子测定结果显示,与替加环素单药相比,两药联合破坏了细胞膜的完整性;通过破坏质子动力,降低胞内ATP含量;抑制外排泵活性。分子对接结果显示,紫杉醇通过疏水作用与Tet(X4)和Tet(A)蛋白稳定结合。动物试验结果显示,两药联合能够提高携带tet(X4)的大肠杆菌小鼠腹腔感染模型的存活率。本试验为治疗tet(X4)和tet(A)介导的替加环素耐药菌引起的感染提供了新的候选物。 展开更多
关键词 紫杉醇 替加环素 tet(X4) tet(A) 大肠杆菌 肺炎克雷伯菌
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羊源溶血性曼氏杆菌分离株对RAW264.7细胞炎症因子表达的影响
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作者 王佳佳 贾艳艳 +4 位作者 陈松彪 廖成水 郭荣显 余祖华 丁轲 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第7期965-972,共8页
为探究羊源溶血性曼氏杆菌(Mannheimiahaemolytica,Mh)分离株MH-1对RAW264.7细胞炎症因子表达的影响及可能的机制,本研究以不同剂量的MH-1菌株感染RAW264.7细胞,经CCK-8法确定合适的感染复数(MOI),采用RT-qPCR检测细胞中NLRP3、Caspase-... 为探究羊源溶血性曼氏杆菌(Mannheimiahaemolytica,Mh)分离株MH-1对RAW264.7细胞炎症因子表达的影响及可能的机制,本研究以不同剂量的MH-1菌株感染RAW264.7细胞,经CCK-8法确定合适的感染复数(MOI),采用RT-qPCR检测细胞中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、TNF-α和IL-6的mRNA转录水平,采用间接ELISA检测细胞上清中IL-1β、TNF-α和IL-6的分泌水平,通过Western-blot检测细胞中NLRP3和Caspase-1的蛋白表达水平。结果显示,以MOI=20的MH-1菌株感染RAW264.7细胞时,细胞无明显损伤,故以此剂量进行后续试验。RT-qPCR结果显示,与对照组相比,在MH-1菌株感染的RAW264.7细胞中,IL-1β、TNF-α、IL-6及NLRP3的mRNA转录水平极显著升高(P<0.01),Caspase-1的mRNA转录水平显著升高(P<0.05)。间接ELISA结果显示,与对照组相比,MH-1菌株感染的RAW264.7细胞上清中,IL-1β、TNF-α和IL-6蛋白分泌水平极显著升高(P<0.01)。Western-blot结果显示,与对照组相比,MH-1菌株感染的RAW264.7细胞中NLRP3和Caspase-1的蛋白表达水平极显著升高(P<0.01)。加入MCC950抑制NLRP3炎性小体的激活后,Caspase-1的活化也被抑制,与此同时,炎症因子IL-1β、TNF-α和IL-6的转录和分泌也被显著抑制。本研究结果表明,MH-1菌株感染可诱导RAW264.7细胞发生炎症反应,且NLRP3炎性小体在此炎症反应中发挥重要作用,为Mh发病机制研究及其所致疾病的防治提供了参考依据。 展开更多
关键词 羊源溶血性曼氏杆菌 RAW264.7细胞 炎症因子 NLRP3炎性小体
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海藻糖比伯斯坦杆菌对小鼠与绵羊致病性分析
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作者 相浩雨 王晶 +5 位作者 贾琦 杨鸣发 常继涛 王芳 姜志刚 尹鑫 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第12期6450-6457,共8页
为了系统评估海藻糖比伯斯坦杆菌(Bibersteinia trehalosi,B.trehalosi)对实验动物小鼠和靶动物绵羊的致病特征,本研究将分离自因肺炎死亡绵羊的B.trehalosi GD01菌株以不同剂量进行接种小鼠与绵羊,并确定动物接种后的临床表现、病理变... 为了系统评估海藻糖比伯斯坦杆菌(Bibersteinia trehalosi,B.trehalosi)对实验动物小鼠和靶动物绵羊的致病特征,本研究将分离自因肺炎死亡绵羊的B.trehalosi GD01菌株以不同剂量进行接种小鼠与绵羊,并确定动物接种后的临床表现、病理变化与病原载量等关键指标。结果表明:在小鼠的试验中,通过腹腔接种该菌后,表现出剂量依赖性致死效应,随着剂量的增加,死亡率逐渐上升,并伴随着严重的肺部病变和细菌载量的显著升高。在绵羊的试验中,将该菌以不同剂量经气管内接种绵羊后,可诱发急性发热、咳嗽、流涕和食欲减退等症状,且随着接种剂量的增加,症状表现逐渐加重。剖检结果显示,绵羊肺脏呈现不同程度的淤血、实变、纤维素渗出、胸肺黏连及化脓等大体病变,病理变化呈现典型的纤维素性肺炎与胸膜肺炎,病变程度与感染剂量呈正相关;组织病理学观察可见纤维细胞增生和炎症性细胞浸润等病理变化,且免疫组化显示肺泡内病原明显聚集。qPCR检测绵羊感染后能够通过鼻腔持续排菌,且肺脏中检测到高细菌载量,表明该菌能够在绵羊肺脏中成功定植并引发疾病。综上所述,本研究对B.trehalosi感染小鼠和绵羊后的临床症状、病理变化与病原载量等方面进行了详细表征,确定了B.trehalosi能够以剂量依赖性的方式诱发小鼠和绵羊的致病反应,这些结果将为进一步了解该菌致病机制、建立动物感染模型、以及防控技术的开发提供了重要实验依据。 展开更多
关键词 海藻糖比伯斯坦杆菌 致病性 临床症状 病理变化 细菌载量
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多杀性巴氏杆菌OmpH蛋白间接ELISA方法的建立
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作者 王润清 孙航 +4 位作者 阚威 李歌 李琦 侯晓林 孙雨 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第4期492-499,共8页
本试验在大肠杆菌原核表达系统中诱导出了多杀性巴氏杆菌OmpH抗原,建立了一种牛多杀性巴氏杆菌抗体ELISA检测方法。本试验分析了OmpH序列的信号肽与跨膜疏水区序列,对选择的目的基因片段进行稀有密码子优化,将化学合成后的核苷酸序列连... 本试验在大肠杆菌原核表达系统中诱导出了多杀性巴氏杆菌OmpH抗原,建立了一种牛多杀性巴氏杆菌抗体ELISA检测方法。本试验分析了OmpH序列的信号肽与跨膜疏水区序列,对选择的目的基因片段进行稀有密码子优化,将化学合成后的核苷酸序列连接pET32a载体上,并构建相应的重组质粒pET32a-OmpH,将重组质粒转化进大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞株中,扩大培养并成功诱导表达出了纯度较高的包涵体OmpH蛋白,大小约为57 kDa,蛋白纯度约为94%,且OmpH重组蛋白与其他疫病抗体无非特异性交叉。将纯化后的pET32a-OmpH重组蛋白作为包被抗原,建立了间接ELISA检测方法,该方法特异性强,对其他牛类病原无交叉反应,且其组内与组间变异系数均低于10%,具有良好的稳定性与重复性。本研究为进一步开发成熟的多杀性巴氏杆菌抗体检测试剂盒奠定了基础。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 OmpH蛋白 原核表达 蛋白纯化 ELISA
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喀什地区某鸽场大肠埃希氏菌毒力和耐药性及ERIC-PCR分型研究
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作者 黄颖 兰雪琴 +7 位作者 白怡馨 杜小莉 张毅 张梦菲 王金泉 苏战强 谢金鑫 佟盼盼 《动物医学进展》 北大核心 2025年第11期62-67,共6页
为了掌握喀什地区某鸽场大肠埃希氏菌(Escherichia coli)的感染和耐药情况,从喀什地区某鸽场采集了69份病鸽的粪便、肝、肾和脾组织样品,从中分离E.coli,采用PCR鉴定其血清型和毒力基因,K-B纸片法检测药物敏感性,并通过PCR扩增耐药基因... 为了掌握喀什地区某鸽场大肠埃希氏菌(Escherichia coli)的感染和耐药情况,从喀什地区某鸽场采集了69份病鸽的粪便、肝、肾和脾组织样品,从中分离E.coli,采用PCR鉴定其血清型和毒力基因,K-B纸片法检测药物敏感性,并通过PCR扩增耐药基因、ERIC-PCR分析菌株间的同源性,运用二代测序技术分析代表菌株的MLST型,并对小鼠攻毒分析其致病性。结果显示,从69份病鸽样中分离到18株E.coli,血清分型共定型3株,分别为O8:H10、O15:H18和O149:H20。毒力基因papA、ompT、irp2、fyuA、iutA和Vat的检出率为50%~100%。这些菌株对16种抗菌药呈不同程度耐药,对β-内酰胺类耐药率较高,15株为多重耐药,主要耐药谱为β-内酰胺类-四环素-复方新诺明(55.6%)。耐药基因bla TEM、floR、sul1、strA、aadA1、aac、tet(A)、bla CTX-M-9G和qnrS的检出率分别为72.2%、55.6%、38.9%、27.8%、22.2%、22.2%、22.2%、16.7%和16.7%。ERIC-PCR分析显示,18株菌被划分为3个聚类,同源性较高,至少包含3种ST型,分别为ST136、ST4118和ST69,对小鼠的LD 50为1.0×10^(7) CFU/mL。从喀什地区某鸽场分离的E.coli同时携带多种毒力基因,多重耐药情况严峻,且存在克隆传播现象。研究结果可为更好地预防和控制鸽E.coli感染提供参考。 展开更多
关键词 鸽 大肠埃希氏菌 血清型 毒力基因 耐药性
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大黄素逆转鸡源大肠杆菌头孢噻呋耐药机制研究
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作者 石晴晴 高丽平 +7 位作者 赵恒 雷佳妮 张菡 李佳怡 李向阳 吴华 胡功政 刘建华 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第10期1391-1398,共8页
探索大黄素对鸡源大肠杆菌头孢噻呋耐药性的逆转作用及其潜在机制。首先,通过微量肉汤稀释法和时间-杀菌曲线测定,确定大黄素联合头孢噻呋的协同作用;将不加药对照组、头孢噻呋组、大黄素组及二者联合组,通过测定荧光探针的强度变化确... 探索大黄素对鸡源大肠杆菌头孢噻呋耐药性的逆转作用及其潜在机制。首先,通过微量肉汤稀释法和时间-杀菌曲线测定,确定大黄素联合头孢噻呋的协同作用;将不加药对照组、头孢噻呋组、大黄素组及二者联合组,通过测定荧光探针的强度变化确定膜通透性、质子动力、外排泵活性及活性氧(ROS)水平,探究其可能的作用机制;最后,测定联用前后小鼠存活率、组织内细菌载量及病理变化,确定其在体内的治疗效果。结果显示,头孢噻呋对10株菌的最小抑菌浓度(MIC)范围为8~2 048μg/m L,大黄素MIC均为1 280μg/m L,二者联用对其中5株分级抑菌浓度指数为0.250~0.500,为协同增效作用;时间-杀菌曲线显示,二者联用时,与头孢噻呋单用相比,细菌生长明显受到抑制,24 h时菌落数量差异为5.04 lg CFU/m L。相较于头孢噻呋单药组,联合组碘化丙啶荧光强度极显著下降(P<0.01),表明内膜通透性增加;膜电位和跨膜质子梯度均减小,差异极显著(P<0.01);胞内溴化乙啶荧光强度极显著下降(P<0.001),显示外排泵活性被抑制;ROS水平极显著下降(P<0.000 1),细菌代谢活性降低;体内治疗效果表明,大黄素联合头孢噻呋能够增加小鼠存活率,降低肝、脾细菌载量及病理损伤水平。结果提示,大黄素通过增强内膜通透性、破坏质子动力稳态、抑制外排泵活性,从而逆转大肠杆菌的头孢噻呋耐药性。 展开更多
关键词 大肠杆菌 大黄素 头孢噻呋 耐药性逆转
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1株含有LIPI-4的单增李斯特菌弱毒株的比较基因组分析
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作者 祁亚涛 刘嘉 +6 位作者 康立超 王静 马勋 刘彩霞 钱瑞宣 刘璐 殷中科 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第9期4291-4303,共13页
【目的】探究单增李斯特菌Lm873含有毒力岛4(LIPI-4)却毒力较弱的原因,并基于基因组学评估菌株Lm873引发人李斯特菌病暴发的潜在公共卫生风险。【方法】以单增李斯特菌弱毒株Lm873为研究对象,比较其与强毒株Lm928在不同温度、pH、NaCl... 【目的】探究单增李斯特菌Lm873含有毒力岛4(LIPI-4)却毒力较弱的原因,并基于基因组学评估菌株Lm873引发人李斯特菌病暴发的潜在公共卫生风险。【方法】以单增李斯特菌弱毒株Lm873为研究对象,比较其与强毒株Lm928在不同温度、pH、NaCl浓度条件下的生长曲线差异,在不同温度下运动能力差异及在不同浓度氧化剂条件下的抗氧化应激能力差异;对菌株Lm873进行全基因组测序,对其基因组特点、毒力基因、基因组进化、功能注释进行分析。【结果】在不同温度及pH为3.0、7.0、9.0的条件下,菌株Lm873和Lm928的生长曲线均无显著差异(P>0.05),但在pH 5.0的培养基中菌株Lm873在12 h时生长能力显著低于菌株Lm928(P<0.05)。在4.5%、7.0%NaCl溶液中二者生长能力无显著差异(P>0.05),但在0.5%和10.0%NaCl溶液中,菌株Lm873生长能力分别在8和12 h显著低于菌株Lm928(P<0.05)。在运动性试验中,28和37℃培养时,菌株Lm873运动圈平均直径均显著低于菌株Lm928(P<0.05)。菌株Lm928能在含CdCl_(2)的培养基上生长,而Lm873不生长;菌株Lm873与Lm928在含0.25、0.5、1 mmol/L CuCl_(2)的培养基上的生长能力无明显差异,在低浓度H_(2)O_(2)培养基条件下,菌株Lm928生长,菌株Lm873不生长,在高浓度H_(2)O_(2)培养基上菌株Lm928与Lm873均不生长。基因组分析显示,菌株Lm873的全长序列为2972618 bp,GC含量为37.88%,并含有特定的基因特征;16S rRNA系统发育树分析显示,菌株Lm873与意大利胃肠炎相关菌株HPB2262相似性最高,亲缘关系最近;基于SNP构建的系统发育树显示,菌株Lm873与中国临床分离株SHL012和引发美国人李斯特菌病的菌株FSLJ1-194亲缘关系最近,相似性最高。比较基因组学分析发现,菌株Lm873相较于Lm928,缺少与镉离子转运相关的基因和阳离子转运ATP酶。KEGG通路分析揭示菌株Lm873在鞭毛组装方面具有较少的注释基因。此外,菌株Lm873携带多种耐药性基因,表现出多重耐药性。【结论】单增李斯特菌Lm873含有LIPI-4却是弱毒的原因与其传播能力、感染能力及对环境的抵抗力有关;通过基因进化树得出菌株Lm873具有引起人李斯特菌病暴发的潜在可能。 展开更多
关键词 单增李斯特菌 生长曲线 氧化应激 运动性 全基因组分析
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布劳恩脂蛋白对大肠杆菌感染的奶牛骨髓源巨噬细胞细胞因子分泌作用机制研究
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作者 刘谕泽 毛伟 +7 位作者 张双翼 巩志国 于琢雅 任佩佩 赵佳敏 王奕心 代佳山 刘博 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第11期1551-1558,共8页
为了探讨布劳恩脂蛋白(BLP)对大肠杆菌感染诱导奶牛子宫内膜炎中的作用机制,本研究使用LPS、BLP以及LPS联合BLP刺激奶牛骨髓源巨噬细胞(bovine bone marrow-derived macrophages,bBMMs);E.coli JE5505、E.coli DH5α感染以及E.coli JE5... 为了探讨布劳恩脂蛋白(BLP)对大肠杆菌感染诱导奶牛子宫内膜炎中的作用机制,本研究使用LPS、BLP以及LPS联合BLP刺激奶牛骨髓源巨噬细胞(bovine bone marrow-derived macrophages,bBMMs);E.coli JE5505、E.coli DH5α感染以及E.coli JE5505感染联合BLP刺激bBMMs。采用ELISA、实时荧光定量PCR和Western-blot等方法检测bBMMs细胞因子分泌、促炎及抗炎信号通路的激活情况,以及TLR2受体的激活对细胞因子分泌的影响。试验结果表明,与E.coli JE5505感染组相比,E.coli DH5α感染组以及E.coli JE5505感染联合BLP刺激组的bBMMs,促炎细胞因子TNF-α和IL-1β的分泌水平显著下降,而抗炎性细胞因子IL-10的分泌水平显著升高。Western-blot分析显示,BLP对bBMMs NF-κB/MAPK通路的激活,以及抗炎信号通路STAT3的表达具有调控作用。在大肠杆菌感染过程中,BLP通过TLR2受体识别,可能依赖于MAPK和NF-κB信号通路的激活,减少了bBMMs促炎因子和趋化因子的产生。此外,BLP还可能通过激活STAT3信号通路增加抗炎因子IL-10的产生,从而有效减轻大肠杆菌感染引起的炎症反应。这表明BLP在调节感染性炎症过程中具有潜在的治疗作用。 展开更多
关键词 子宫内膜炎 大肠杆菌 布劳恩脂蛋白 脂多糖 奶牛骨髓源巨噬细胞
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