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猪血凝性脑脊髓炎病毒河南株的分离鉴定
1
作者 郭爽 康静静 +4 位作者 罗琴 于瑞 樊明明 李秀青 吴玉臣 《畜牧与兽医》 北大核心 2026年第3期75-81,共7页
为了明确河南地区猪场中猪凝性脑脊髓炎病毒(porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus,PHEV)流毒株的物学特性,采集河南省信阳市某猪场的患病仔猪样本,进行病毒分离、细胞培养,电镜检测、病毒半数感染剂量(TCID50)测定、动物... 为了明确河南地区猪场中猪凝性脑脊髓炎病毒(porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus,PHEV)流毒株的物学特性,采集河南省信阳市某猪场的患病仔猪样本,进行病毒分离、细胞培养,电镜检测、病毒半数感染剂量(TCID50)测定、动物试验以及病毒M、N基因的扩增和序列分析。结果:将分离获得的病毒接种于PK-15细胞后,可诱导明显的细胞病变效应,电镜负染可观察到星状近似球形的病毒粒子,并呈现典型帽子结构;攻毒后小鼠表现神经症状,脑组织病理学检查呈现病毒性脑炎特征,病变组织经PCR鉴定后,出现与PHEV目标片段大小一致的条带;N、M基因遗传进化树分析显示与JT06-China以及比利时的PHEV-VW572亲缘关系较近,属于流行毒株,未见明显变异。本研究结果可为河南猪场猪血凝性脑脊髓炎的防控提供理论依据。 展开更多
关键词 河南 猪血凝性脑脊髓炎病毒 病毒分离 变异毒株
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山羊伪结核棒状杆菌的分离与鉴定
2
作者 陈曦 姜悦才 +6 位作者 刘明杰 李登亮 李少飞 曹启航 戚宇旭 刘军 马文涛 《动物医学进展》 北大核心 2026年第2期132-136,共5页
为探究某羊场羊颈部、腹股沟出现明显脓肿的病因,通过临床检查与ELISA血清抗体检测分离鉴定病原菌,并通过山羊回归试验验证其致病性。结果显示,分离得到一株有β溶血现象的伪结核棒状杆菌(Corynebacterium pseudotuberculosis,CP),其CP... 为探究某羊场羊颈部、腹股沟出现明显脓肿的病因,通过临床检查与ELISA血清抗体检测分离鉴定病原菌,并通过山羊回归试验验证其致病性。结果显示,分离得到一株有β溶血现象的伪结核棒状杆菌(Corynebacterium pseudotuberculosis,CP),其CP特异性16S rDNA基因、pLd基因与CP标准株序列同源性分别为100%和98%。该分离株在山羊回归试验中,能诱发典型脓肿病变,且从病变组织中重新分离鉴定出该菌株,最终确定引起该羊场羊只脓肿发生的病因为CP感染。 展开更多
关键词 干酪性淋巴结炎 伪结核棒状杆菌 pLd基因 山羊 分离鉴定
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格拉瑟菌血清5型cpxAR双组分基因缺失株的生物学特性研究
3
作者 徐引弟 王治方 +8 位作者 蔡旭旺 徐晓娟 张立宪 焦文强 朱文豪 李海利 游一 张家庆 雷亚楠 《河南农业科学》 北大核心 2026年第2期126-135,共10页
为研究cpxAR双组分基因在格拉瑟菌中的致病机制,同时筛选格拉瑟菌血清5型缺失弱毒株,构建格拉瑟菌血清5型临床分离株(GPS5)的cpxAR双基因缺失株(ΔcpxAR),并对缺失株的生长特性、生物膜形成能力、环境胁迫抗性及豚鼠致病力等生物学特性... 为研究cpxAR双组分基因在格拉瑟菌中的致病机制,同时筛选格拉瑟菌血清5型缺失弱毒株,构建格拉瑟菌血清5型临床分离株(GPS5)的cpxAR双基因缺失株(ΔcpxAR),并对缺失株的生长特性、生物膜形成能力、环境胁迫抗性及豚鼠致病力等生物学特性进行系统研究。结果表明,cpxAR基因缺失后,ΔcpxAR与亲本株GPS5相比,菌落形态和生长速率无明显差异,但生物膜形成能力明显减弱,对渗透压、热休克、氧化应激及碱性胁迫的抗性显著降低,对豚鼠的毒力也显著减弱。综上,cpxAR基因对GPS5的生长无明显调控作用,但对其生物膜形成、环境胁迫抗性及毒力均具有重要调控作用,为深入探究cpxAR双组分系统在格拉瑟菌中的生物学功能,以及筛选格拉瑟菌血清5型弱毒株奠定了基础。 展开更多
关键词 格拉瑟菌血清5型 cpxAR基因缺失株 生长 生物膜 抗性 毒力
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鸡传染性喉气管炎弱毒株FJ19株的关键基因遗传演化分析及作为候选疫苗株的安全性、有效性评价
4
作者 王晨燕 张巍嘉 +4 位作者 柳珊 李亚杰 赵丽霞 刘云涛 侯博 《畜牧兽医学报》 北大核心 2026年第2期994-1007,共14页
本研究旨在分析鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)弱毒株FJ19株的部分关键抗原基因及毒力基因的遗传演化特点,评估FJ19株对SPF鸡的安全性和免疫原性,为ILTV FJ19株弱毒活疫苗的开发提供参考依据。通过将FJ19株进行多次尿囊腔途径接种适应后,... 本研究旨在分析鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)弱毒株FJ19株的部分关键抗原基因及毒力基因的遗传演化特点,评估FJ19株对SPF鸡的安全性和免疫原性,为ILTV FJ19株弱毒活疫苗的开发提供参考依据。通过将FJ19株进行多次尿囊腔途径接种适应后,对其关键抗原和毒力基因进行测序分析,点眼或口服接种14日龄SPF鸡观察其安全性,并且通过点眼或口服途径免疫14日龄SPF鸡21 d后用ILTV强毒株攻毒评价保护效果,测定免疫持续期等验证FJ19株作为弱毒活疫苗的潜力。结果显示:将FJ19株在10日龄SPF鸡胚以尿囊腔途径接种连续传代适应后,收获P0、P1、P2、P3代病毒液的EID50分别为10^(5.0)、10^(6.5)、10^(6.9)、10^(6.5)·mL^(-1)。核酸序列分析结果表明:FJ19株主要免疫原性基因gB-gC-gD-UL32和毒力相关基因gE-gI-TK-ICP4-gG-gH-gK-gL-gM-gN与弱毒株K317、Nobilis Laringovac®、LT Blen、Poulvac ILT®、Laryngo Vac和我国2009年分离株LJS09株、2012年分离株ck/CH/LHLJ/120305株、2019年分离强毒株WF03的亲缘关系较近。安全性试验显示,FJ19株以104.0EID50·羽-1的剂量(10羽份)点眼接种14日龄SPF鸡后有40%出现轻度眼炎症状,而口服接种SPF鸡未表现出明显的临床症状;当以104.0EID50·羽-1的剂量气管途径接种21日龄SPF鸡时有30%鸡出现一过性的呼吸道反应,未发生严重的ILTV感染典型症状。免疫后强毒攻毒结果显示,FJ19株以0.2羽份或1羽份的剂量点眼或口服途径免疫14日龄SPF鸡21d后,采用ILTV强毒株以104.0EID50·只-1的剂量气管攻毒后,所有免疫组的鸡均获得了至少90%的保护,未观察到明显的临床症状,而未免疫攻毒组至少有90%的鸡出现了严重的ILTV感染典型症状,FJ19株免疫后的免疫持续期至少可达6个月。ILTV FJ19株采用尿囊腔途径接种可获得高滴度病毒含量,其主要抗原基因和毒力基因与我国早期分离株和疫苗株相比未发生明显变异,通过动物试验证实点眼或口服该弱毒株对14日龄SPF鸡具有良好的安全性和免疫有效性,且免疫持续期可达6个月,通过口服接种不影响其安全性和免疫有效性。因此,ILTV弱毒株FJ19株不仅适应尿囊腔接种途径收获病毒,且具备良好的安全性和免疫有效性,还可适应口服接种途径进行免疫,是一株理想的具有潜力的弱毒疫苗候选毒株。 展开更多
关键词 传染性喉气管炎 弱毒株 遗传进化 安全性 有效性
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非洲猪瘟病毒pB602L蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立
5
作者 张向阳 矫健 +8 位作者 黄培 焦翠翠 张梦瑶 黄静波 龚志远 李海伦 李媛媛 张海丽 王化磊 《病毒学报》 北大核心 2026年第1期126-134,共9页
目的为了建立非洲猪瘟病毒(African Swine fever virus,ASFV)pB602L蛋白抗体间接ELISA检测方法。方法本研究利用大肠杆菌表达系统表达了His-pB602L重组蛋白,并以纯化的His-pB602L重组蛋白为包被抗原,以表达pB602L的重组狂犬病病毒免疫... 目的为了建立非洲猪瘟病毒(African Swine fever virus,ASFV)pB602L蛋白抗体间接ELISA检测方法。方法本研究利用大肠杆菌表达系统表达了His-pB602L重组蛋白,并以纯化的His-pB602L重组蛋白为包被抗原,以表达pB602L的重组狂犬病病毒免疫后的小鼠阳性血清和ASFV猪阳性血清为一抗,辣根过氧化物酶(HRP)标记的葡萄球菌A蛋白(SPA)作为广谱二抗,采用棋盘滴定法优化各反应条件,建立针对pB602L蛋白的间接ELISA抗体检测方法,并对其特异性、敏感性和重复性进行评价。结果ASFV pB602L蛋白间接ELISA抗体检测方法的最优反应条件为:抗原包被浓度为4μg/mL,4℃包被16 h~18 h,5%脱脂奶粉37℃封闭0.5 h,待检血清孵育0.5 h,SPA-HRP 1:10000倍稀释后37℃孵育0.5 h。该方法仅对ASFV阳性血清检测结果为阳性,与猪瘟病毒、猪蓝耳病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪乙型脑炎病毒和猪圆环病毒2型阳性血清均无交叉反应,具有良好的特异性;该方法检测稀释度为1∶6400的猪ASFV临床阳性血清时仍呈现阳性,检测分别稀释3200倍和1600倍的ASFVⅠ型和Ⅱ型阳性血清均为阳性;批内重复和批间重复变异系数均小于10%。结论本研究建立的ASFV pB602L蛋白间接ELISA抗体检测方法不仅可用于ASF的临床诊断和流行病学调查,亦能够为ASF疫苗研发过程中免疫动物的特异性抗体评价提供技术支持。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 pB602L蛋白 pB602L抗体 间接ELISA
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鸭短喙矮小综合征病毒单克隆抗体制备及竞争ELISA检测方法的建立
6
作者 朱小丽 王劭 +5 位作者 董慧 程晓霞 江丹丹 肖世峰 陈少莺 陈仕龙 《中国畜牧兽医》 北大核心 2026年第2期948-958,共11页
【目的】建立一种快速检测鸭短喙矮小综合征病毒(Short beak and dwarfism syndrome virus,SBDSV)抗体的血清学方法,为SBDSV抗体检测及诊断试剂盒研发提供技术支撑。【方法】本研究用纯化的SBDSV M15株灭活毒免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠... 【目的】建立一种快速检测鸭短喙矮小综合征病毒(Short beak and dwarfism syndrome virus,SBDSV)抗体的血清学方法,为SBDSV抗体检测及诊断试剂盒研发提供技术支撑。【方法】本研究用纯化的SBDSV M15株灭活毒免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,利用间接ELISA筛选可分泌SBDSV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用筛选出的杂交瘤细胞接种小鼠制备腹水。通过间接ELISA测定单克隆抗体效价,通过间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)和胶乳凝集(latex particle agglutination,LPA)试验鉴定单克隆抗体特性。通过中和试验测定单克隆抗体中和活性,使用试剂盒鉴定单克隆抗体亚类。运用棋盘滴定法优化反应体系,建立基于SBDSV单克隆抗体的竞争ELISA检测方法。通过检测阴性血清确定该方法的临界值。对建立的竞争ELISA检测方法进行特异性、灵敏性和重复性测定。用该方法检测临床血清样品,并与胶乳凝集抑制(latex particle agglutination inhibition,LPAI)试验结果进行比对。【结果】经间接ELISA筛选,获得3株稳定分泌SBDSV单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为D5-3、G11-23和H2-27。间接ELISA结果显示,3株杂交瘤细胞D5-3、G11-23和H2-27培养上清的抗体效价分别为1∶2~6、1∶2~5和1∶2~6,腹水的抗体效价分别为1∶10~5、1∶10~4和1∶10~6。IFA结果显示,单克隆抗体D5-3、G11-23和H2-27均具有较好的结合活性,可用于IFA检测。LPA试验结果显示,仅单克隆抗体H2-27具有致敏胶乳的特性。中和试验结果显示,3株单克隆抗体均具有中和SBDSV的能力,其中单克隆抗体H2-27的中和活性最强。单克隆抗体亚类鉴定结果显示,单克隆抗体D5-3和G11-23均为IgG1,H2-27为IgM。以纯化的SBDSV(M15株)灭活毒作为包被抗原,单克隆抗体H2-27为竞争抗体,建立了一种检测SBDSV抗体的竞争ELISA方法,当抑制率(PI)≥23.70%时,判定为SBDSV抗体阳性;PI≤15.91%时判定为阴性。该方法特异性好,与番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MDPV)、番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,MDRV)、鸭源副黏病毒(Duck paramyxovirus,DPMV)、鸭肝炎病毒1型(Duck hepatitis virus-1,DHV-1)和鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)阳性血清均无交叉反应;敏感性高,高免血清(LPAI效价1∶2~8)1∶25600稀释时仍为阳性;批间、批内重复性好,变异系数均<6%。竞争ELISA检测结果与LPAI结果具有良好的正相关性,二者的符合率为89.10%(188/211)。【结论】本研究成功制备3株SBDSV单克隆抗体,基于单克隆抗体H2-27建立的竞争ELISA方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可高通量检测SBDSV抗体,为监测SBDSV在中国的流行情况及雏鸭母源抗体水平评价提供技术支撑。 展开更多
关键词 鸭 短喙矮小综合征病毒(SBDSV) 单克隆抗体 竞争ELISA
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非洲猪瘟病毒P72蛋白磁微粒化学发光抗体检测技术的建立和应用
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作者 汪葆玥 任雪建 +8 位作者 胡冬梅 吕园园 马静 李秀梅 顾小雪 刘玉良 倪建强 周智 李琦 《病毒学报》 北大核心 2026年第1期135-145,共11页
目的非洲猪瘟缺乏有效的疫苗,防控有赖于及时准确的诊断和清除病原,随着低致病力毒株的出现和持续流行,检测抗体成为感染监测的重要手段。方法本研究在表达纯化非洲猪瘟病毒P72蛋白并筛选获得单克隆抗体的基础上,将羧基磁珠与重组P72蛋... 目的非洲猪瘟缺乏有效的疫苗,防控有赖于及时准确的诊断和清除病原,随着低致病力毒株的出现和持续流行,检测抗体成为感染监测的重要手段。方法本研究在表达纯化非洲猪瘟病毒P72蛋白并筛选获得单克隆抗体的基础上,将羧基磁珠与重组P72蛋白进行偶联反应形成免疫磁珠,建立了磁微粒化学发光抗体检测技术(P72-MPCLIA)。结果在对220份临床样品的检测结果分析后确定其阈值阻断率为50.00%,敏感性检测表明P72-MPCLIA检测为阳性的最大稀释倍数为1:256,特异性试验与其他生猪疫病阳性血清无交叉反应性,重复性检测批内、批间变异系数分别为1.68%~4.70%和1.90%~4.72%。在对66份临床样品的检测中,与世界动物卫生组织推荐的确诊技术间接免疫荧光抗体检测方法和商品化间接ELISA试剂盒,相符率分别为96.97%和100%。结论P72-MPCLIA特异性高、敏感性好,且检测时间缩短至30min以内,可实现自动化操作,为非洲猪瘟的抗体检测技术提供了新的技术手段。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 磁微粒化学发光检测方法 化学发光免疫分析法 间接免疫荧光试验
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口蹄疫病毒3D蛋白与宿主互作蛋白的筛选及鉴定
8
作者 刘永杰 兰喜 +4 位作者 李玉星 张勇 何继军 尚佑军 郑海学 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第1期13-19,共7页
口蹄疫是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的猪、牛、羊等偶蹄类动物急性、热性,高度接触性传染病。FMDV 3D蛋白是病毒编码RNA的RNA依赖性聚合酶(3D^(pol)),是病毒RNA复制的重要蛋白,有关3D蛋白与宿主蛋白相互作用的报道较少。本研究应用PK-15细... 口蹄疫是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的猪、牛、羊等偶蹄类动物急性、热性,高度接触性传染病。FMDV 3D蛋白是病毒编码RNA的RNA依赖性聚合酶(3D^(pol)),是病毒RNA复制的重要蛋白,有关3D蛋白与宿主蛋白相互作用的报道较少。本研究应用PK-15细胞cDNA酵母表达文库,利用酵母双杂交技术,最终获得与3D有潜在相互作用的15个宿主潜在蛋白,通过免疫共沉淀和共聚焦试验进一步验证,鉴定出宿主ataxin-3和voltage-dependent anion channel 1(VDAC1)与3D具有相互作用,研究结果为宿主蛋白与3D蛋白相互作用在病毒复制中的功能提供了数据支撑。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 3D蛋白 酵母双杂交技术 蛋白质相互作用
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猫杯状病毒感染性克隆的构建及拯救病毒的鉴定
9
作者 朱雪敏 李鑫基 +7 位作者 华炯钢 陈柳 叶伟成 张传亮 朱寅初 付媛 张存 云涛 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第1期20-26,共7页
旨在建立猫杯状病毒(FCV)反向遗传系统,以探究FCV的致病机制,为后续疫苗研发提供科学依据。以FCV HZ2024株为对象,构建DNA-launched感染性克隆系统。FCV全基因组的4个片段被依次插入pAY-CHS重组质粒后转染F81细胞并传代鉴定。结果显示,F... 旨在建立猫杯状病毒(FCV)反向遗传系统,以探究FCV的致病机制,为后续疫苗研发提供科学依据。以FCV HZ2024株为对象,构建DNA-launched感染性克隆系统。FCV全基因组的4个片段被依次插入pAY-CHS重组质粒后转染F81细胞并传代鉴定。结果显示,FCV HZ2024基因片段扩增后插入DNA-launched系统质粒,成功构建DNA-launched系统拯救病毒rFCV HZ2024-RE,转染细胞24 h后出现细胞病变效应,病毒滴度稳定在10^(7)~10^(8T)CID_(50)/m L。间接免疫荧光检测证实VP1蛋白抗原表位完全保留,重组病毒的衣壳蛋白成功表达。且重组病毒与亲本毒株的复制动力学高度相似,蚀斑形态无显著差异。Eco R V酶切及测序验证表明,突变位点(C7183T、A7186C)被精准引入且稳定遗传。总之,构建的DNA-launched系统实现了FCV高效拯救与精准遗传。 展开更多
关键词 猫杯状病毒 感染性克隆 反向遗传学 病毒拯救
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奶山羊源反刍链球菌的分离鉴定
10
作者 刘萍 李美文 +5 位作者 德珍 王敏 曹小安 刘志杰 何继军 尚佑军 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第2期235-240,共6页
为明确陕西省某奶山羊养殖场羔羊关节炎的病因,取发病羔羊关节积液和主要脏器组织进行了病原菌检测和细菌分离培养、生化试验、药敏试验及小鼠致病性试验。结果显示,羔羊关节液和脾组织中链球菌属细菌核酸呈阳性,从关节积液中成功分离出... 为明确陕西省某奶山羊养殖场羔羊关节炎的病因,取发病羔羊关节积液和主要脏器组织进行了病原菌检测和细菌分离培养、生化试验、药敏试验及小鼠致病性试验。结果显示,羔羊关节液和脾组织中链球菌属细菌核酸呈阳性,从关节积液中成功分离出1株链球菌,经形态学观察、生化试验和16S rRNA基因序列比对,鉴定为反刍链球菌。药敏试验表明,该分离株对链霉素、阿米卡星、妥布霉素、多黏菌素B、万古霉素和诺氟沙星高度敏感,对红霉素中度敏感,但对青霉素G、头孢类、四环素和复方新诺明等多种常用抗生素存在耐药性。致病性试验证实该分离株对小鼠具有较强致病性,可致感染小鼠死亡。本研究为反刍链球菌的实验室诊断、抗菌药物合理选用以及后续研究其耐药机制和防控技术奠定了基础。 展开更多
关键词 反刍链球菌 关节炎 耐药性 奶山羊
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鸭星状病毒1型信阳株全基因组扩增及遗传进化分析
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作者 张敏 李迎晓 +5 位作者 张璐璐 何书海 曲哲会 秦东升 刘纪成 焦凤超 《中国畜牧兽医》 北大核心 2026年第2期959-972,共14页
【目的】了解信阳地区鸭星状病毒1型(Duck astrovirus type 1,DAstV1)流行株基因组的演化特征,为进一步研究信阳地区DAstV1的流行、遗传进化及致病特性提供参考依据。【方法】对某养殖场送检的病鸭进行禽腺病毒、禽星状病毒和鸭甲型肝... 【目的】了解信阳地区鸭星状病毒1型(Duck astrovirus type 1,DAstV1)流行株基因组的演化特征,为进一步研究信阳地区DAstV1的流行、遗传进化及致病特性提供参考依据。【方法】对某养殖场送检的病鸭进行禽腺病毒、禽星状病毒和鸭甲型肝炎病毒等12种常见病毒的PCR/RT-PCR筛查。采集病鸭肝脏组织,无菌处理后经卵黄囊途径接种10日龄SPF鸭胚,连续传代4次,并逐代收集尿囊液进行DAstV RT-PCR鉴定。对分离到的病毒进行全基因组测序,并对ORF1a、ORF1b和ORF2基因序列及其编码蛋白的氨基酸变异位点进行比对分析。【结果】送检病料筛查结果显示,禽星状病毒呈阳性。第1~4代鸭胚尿囊液中均呈DAstV1阳性,将该病毒命名为HN24XY06。第4代接种鸭胚全部死亡,死亡胚体发育不良且体表出血。HN24XY06基因组全长7 755 nt,包含ORF1a、ORF1b和ORF2 3个开放阅读框。序列比对和系统发育分析表明,HN24XY06属于DAstV1毒株,与山东分离株DAstV-SDZZ和DAstV-SDWF亲缘关系较近。ORF1a、ORF1b和ORF2蛋白的氨基酸序列分析显示,存在不同程度的突变,多发生在ORF1a编码的氨基酸序列中。【结论】本研究分离到了1株DAstV1,丰富了信阳地区DAstV1的分子流行病学资料,并为进一步研究DAstV1的致病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 鸭星状病毒1型(DAstV1) 病毒分离与鉴定 全基因组扩增 遗传进化分析
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新疆地区奶牛乳腺炎肺炎克雷伯菌的分离鉴定与耐药性分析
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作者 蔡扩军 徐敏 +2 位作者 孙鹏亮 夏利宁 赵红琼 《畜牧兽医学报》 北大核心 2026年第1期464-475,共12页
旨在了解新疆地区奶牛乳腺炎肺炎克雷伯菌的流行情况与耐药特性。本研究从新疆奶牛集约化养殖集中的9个地区采集15个规模奶牛养殖场奶牛2083份临床乳腺炎和隐性乳腺炎奶样,对样品中的肺炎克雷伯菌进行分离培养、革兰染色,并采用PCR及16S... 旨在了解新疆地区奶牛乳腺炎肺炎克雷伯菌的流行情况与耐药特性。本研究从新疆奶牛集约化养殖集中的9个地区采集15个规模奶牛养殖场奶牛2083份临床乳腺炎和隐性乳腺炎奶样,对样品中的肺炎克雷伯菌进行分离培养、革兰染色,并采用PCR及16S rRNA测序进行鉴定,对分离菌株采用微量肉汤稀释法检测耐药情况。结果表明,从奶样中分离出266株肺炎克雷伯菌,分离率为12.8%(266/2083),临床乳腺炎和隐性乳腺炎奶样肺炎克雷伯菌分离率无显著差异(P>0.05)。采用微量肉汤稀释法测定266个分离株对16种抗菌药物的敏感性及产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)情况,结果显示分离株对四环素、头孢噻呋、头孢吡肟、头孢噻肟和头孢唑林的耐药率较高(23.7%~41.0%)。16.9%(45/266)的分离株为多重耐药菌,6.4%(17/266)的分离株产ESBLs。结果提示,新疆15家规模化奶牛场乳腺炎肺炎克雷伯菌平均分离率在全国处于相对较低水平。分离株对四环素和头孢类抗菌药物具有较强的耐药性,本研究为掌握奶牛乳腺炎肺炎克雷伯菌的流行特征及指导临床用药提供了依据。 展开更多
关键词 奶牛乳腺炎 肺炎克雷伯菌 分离鉴定 耐药特性
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四川肉牛源疣状毛癣菌的分离鉴定、系统发育分析与药敏试验
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作者 王娅 李志国 +3 位作者 罗荣艳 刘瑞国 左之才 马晓平 《中国畜牧兽医》 北大核心 2026年第1期459-468,共10页
【目的】探究四川肉牛真菌性皮肤病的病原,为该病的防治提供参考。【方法】采集四川各地疑似皮肤癣病的患畜皮屑,用三点接种法将采集的样本接种于皮肤癣菌鉴别培养基,将分离得到的菌株经内部转录间隔区(ITS)序列扩增后通过NCBI数据库BL... 【目的】探究四川肉牛真菌性皮肤病的病原,为该病的防治提供参考。【方法】采集四川各地疑似皮肤癣病的患畜皮屑,用三点接种法将采集的样本接种于皮肤癣菌鉴别培养基,将分离得到的菌株经内部转录间隔区(ITS)序列扩增后通过NCBI数据库BLAST分析基因相似性并构建系统发育树,以10^(7) CFU/mL分离菌孢子悬液感染免疫抑制小鼠,观察临床症状和病理学特征,微量二倍稀释法探究分离菌耐药表型。【结果】从24个样本中分离到10株真菌(rntv01~rntv10)。PCR扩增结果显示,分离株均得到大小为681 bp的扩增片段;BLAST比对结果显示,分离株与疣状毛癣菌相似性为97%~100%;动物试验结果显示,免疫抑制小鼠感染该菌后皮肤出现被毛脱落、结痂、皮屑增多等症状,HE染色后观察到表皮角质层角化不全、炎性细胞增生,PAS染色后观察到大量菌丝侵染;药敏试验结果显示,除rntv10外,其余菌株对两性霉素B中介;分离菌对伊曲康唑敏感性不同,rntv09、rntv10敏感,rntv01、rntv04~rntv08中介,rntv02、rntv03耐药;rntv10对酮康唑敏感、对5-氟胞嘧啶中介,其余菌株均为耐药株;所有菌株对环吡酮胺中介,对氟康唑和特比萘芬耐药。【结论】四川肉牛真菌性皮肤病主要病原是疣状毛癣菌,该菌可引起小鼠皮肤的侵袭性感染,患病牛可用两性霉素B、伊曲康唑或环吡酮胺进行治疗。 展开更多
关键词 肉牛 疣状毛癣菌 分离鉴定 ITS序列 系统发育分析 药敏试验
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肠炎沙门氏菌快速检测技术研究进展
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作者 李佳 刘垚 +4 位作者 李珊珊 何坤淼 余秋颖 陈琳琳 王娜 《动物医学进展》 北大核心 2026年第2期103-108,共6页
肠炎沙门氏菌是沙门氏菌属中最重要的血清型之一,主要通过受污染的饮用水、食物等传播,与人类食源性疾病密切相关。该菌不仅对畜牧业造成重大经济损失,还会威胁人类健康,严重病例甚至导致死亡。因此,建立快速检测食品中肠炎沙门氏菌的... 肠炎沙门氏菌是沙门氏菌属中最重要的血清型之一,主要通过受污染的饮用水、食物等传播,与人类食源性疾病密切相关。该菌不仅对畜牧业造成重大经济损失,还会威胁人类健康,严重病例甚至导致死亡。因此,建立快速检测食品中肠炎沙门氏菌的技术对于预防食源性疾病的暴发具有重要意义。论文综述了肠炎沙门氏菌的分子生物学技术、免疫学技术和生物传感器技术等快速检测技术的原理、优势与局限性,探讨了相关领域的研究概况,了解肠炎沙门氏菌快速检测技术的研究现状,为未来肠炎沙门氏菌快速检测技术的开发与应用提供参考。 展开更多
关键词 肠炎沙门氏菌 快速检测 分子生物学技术 免疫学技术 生物传感器技术
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猪肠道病毒和猪捷申病毒双重荧光RT-PCR检测方法的建立
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作者 莫玲 于新友 +5 位作者 吕素芳 毕艳丽 张颖 李天芝 Ashenafi Kiros Wubshet 王文秀 《动物医学进展》 北大核心 2026年第2期49-53,共5页
为建立同时检测猪肠道病毒(PEV)和猪捷申病毒(PTV)的荧光RT-PCR方法,根据NCBI中PEV VP1(NCBI AF363453)和PTV VP1(NCBI GQ293092)基因序列,分别设计特异性引物和探针,通过优化反应体系和扩增程序,建立了一种无需提取核酸即可同时检测PEV... 为建立同时检测猪肠道病毒(PEV)和猪捷申病毒(PTV)的荧光RT-PCR方法,根据NCBI中PEV VP1(NCBI AF363453)和PTV VP1(NCBI GQ293092)基因序列,分别设计特异性引物和探针,通过优化反应体系和扩增程序,建立了一种无需提取核酸即可同时检测PEV和PTV的双重荧光RT-PCR检测方法,对该方法的特异性、敏感性及重复性进行评估,并对临床样品进行检测。结果表明,20μL体系中各引物和探针最适加入量为:PEV-F 0.8μL、PEV-R 1.3μL、PEV-P 0.6μL、PTV-F 1.2μL、PTV-R 1.4μL和PTV-P 0.7μL,优化后的扩增程序为:90℃3 min;60℃反转录5 min;95℃5 s,52℃退火延伸20 s(此处收集荧光),共计40个循环。该对猪常见病原均无扩增,对PEV和PTV检测敏感性分别为5.13 TCID 50/100μL和3.47 TCID 50/100μL,对135份临床样品检测结果与传统核酸提取法结果一致。成功建立了PEV和PTV的免提取核酸双重荧光RT-PCR方法,特异性好,敏感性高,可用于临床两种疑似病例的快速检测。 展开更多
关键词 猪肠道病毒 猪捷申病毒 免提取核酸 荧光PCR
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兔源多杀性巴氏杆菌、奇异变形杆菌、大肠杆菌分离鉴定及混合感染致病性分析
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作者 陈冬冬 胡子喆 +6 位作者 黄叶娥 崔雪梅 石团员 季权安 宋厚辉 刘燕 鲍国连 《畜牧兽医学报》 北大核心 2026年第2期1046-1062,共17页
旨在确定引起宁夏某规模化肉兔养殖场家兔死亡可疑病原并进行致病性分析。通过病死兔剖检、细菌分离培养、16S rRNA测序分析、PCR鉴定、药敏试验、小鼠和家兔攻毒试验,确定引起家兔死亡的病原菌及其致病性。结果显示,细菌分离培养出3株... 旨在确定引起宁夏某规模化肉兔养殖场家兔死亡可疑病原并进行致病性分析。通过病死兔剖检、细菌分离培养、16S rRNA测序分析、PCR鉴定、药敏试验、小鼠和家兔攻毒试验,确定引起家兔死亡的病原菌及其致病性。结果显示,细菌分离培养出3株革兰阴性菌,经16S rRNA测序分析和PCR鉴定为荚膜A型多杀性巴氏杆菌、奇异变形杆菌和大肠杆菌,分别命名为QF24-Pm01、QF24-Ps02和QF24-Ec03。通过K-B法药敏试验发现QF24-Pm01、QF24-Ps02和QF24-Ec03共同对青霉素、卡那霉素、头孢唑林等临床常用药物耐药,对头孢曲松敏感。耐药基因检测结果,3株分离菌均检出耐药基因aadB、strA、strB、blaTEM和sul1。毒力基因检测结果,巴氏杆菌携带exbB、exbD和hgbA等16种毒力基因,奇异变形杆菌携带ureC、zapA、atfC、atfA和pmfA毒力基因,大肠杆菌携带eaeA和fimC毒力基因。小鼠致病性试验显示,QF24-Pm01、QF24-Ps02和QF24-Ec03的LD_(50)分别为9.27×10^(5)CFU、1.43×10^(6)CFU和1.88×10^(7)CFU。小鼠混合感染致病性试验结果,QF24-Pm01组、QF24-Ps02组和QF24-Ec03组小鼠分别于攻毒后9、18和16 h发生死亡,QF24-Pm01+QF24-Ec03混合感染组及QF24-Ps02+QF24-Ec03混合感染组小鼠分别于攻毒后6和13 h出现死亡。病理组织学观察显示,单纯感染与混合感染均可导致肺、肝、肠等组织出现显著损伤。主要病理变化表现为:肺组织出现间质水肿、毛细血管充血及中性粒细胞浸润;肝组织呈现肝细胞脂肪变性及肝细胞索排列紊乱;小肠组织则表现为上皮细胞脱落及肠绒毛断裂等病变。家兔致病性试验结果显示,QF24-Pm01+QF24-Ec03混合感染组和QF24-Pm01组家兔分别于攻毒后24和36 h全部死亡,QF24-Ps02+QF24-Ec03混合感染组、QF24-Ec03和QF24-Ps02组家兔攻毒后7 d死亡率分别为60%、20%和40%。试验兔剖检结果显示,QF24-Pm01+QF24-Ps02+QF24-Ec03混合感染组家兔的肺出现充血、水肿,呈现花玻璃样改变,脾萎缩并呈深褐色,该病理变化与临床解剖所观察到的家兔病变一致。综上表明,多杀性巴氏杆菌与大肠杆菌混合后致病性增强,大肠杆菌与奇异变形杆菌混合后亦如此。多杀性巴氏杆菌、奇异变形杆菌与大肠杆菌的混合感染可能是该场肉兔高死亡率的主要原因。因此在预防多杀性巴氏杆菌感染同时,还应加强对大肠杆菌和奇异变形杆菌的防控,以降低混合感染风险和死亡率。 展开更多
关键词 兔 多杀性巴氏杆菌 奇异变形杆菌 大肠杆菌 耐药性 毒力基因 混合感染
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一株猪流行性腹泻病毒G2b亚型细胞适应性毒株的复制特性及致病性
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作者 杨帆 胡国芳 +5 位作者 魏子文 周莹珊 宋厚辉 何海健 董婉玉 王晓杜 《畜牧兽医学报》 北大核心 2026年第2期955-964,共10页
旨在探究猪流行性腹泻病毒(PEDV)流行株细胞适应后的复制特性及致病性,本研究将分离自某规模化猪场的PEDV流行毒株在Vero细胞中连续传代至不同代次,分别评价该毒株在细胞上的生物学特性,并将第25代和第141代病毒接种至3日龄仔猪,以比较... 旨在探究猪流行性腹泻病毒(PEDV)流行株细胞适应后的复制特性及致病性,本研究将分离自某规模化猪场的PEDV流行毒株在Vero细胞中连续传代至不同代次,分别评价该毒株在细胞上的生物学特性,并将第25代和第141代病毒接种至3日龄仔猪,以比较其致病性差异。结果表明:临床病料接种液盲传至第4代时,在Vero细胞上形成PEDV典型合胞体病变;传代至25代时,细胞病变形态与病毒滴度趋于稳定;传代至141代时,病毒滴度显著提高,并诱发更快速的细胞病变效应。间接免疫荧光试验(IFA)可特异性检出PEDV N蛋白表达,序列分析表明该毒株为G2b型。仔猪攻毒试验表明,与亲本低代次毒株(YJH/2017/F25)相比,YJH/2017/F141接种组未出现明显临床症状或组织病理损伤,且肛拭子病毒排放量显著减少,各项指标与DMEM对照组无显著差异,该毒株的致病性较低而具有较好安全性。以上结果说明该流行毒株在体外连续传代后获得了更好的细胞适应性且对新生仔猪的致病性降低,本研究为PEDV弱毒疫苗研发提供新的候选毒株,其全基因组序列和生物学特征也为后续重组病毒研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 G2b型 细胞适应毒株 生物学特性
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广深地区3种常见猫病毒的分离鉴定及遗传进化分析
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作者 孙媛 梁爽爽 +2 位作者 罗志莹 王婷 马静云 《华南农业大学学报》 北大核心 2026年第1期11-20,共10页
【目的】猫杯状病毒(Feline calicivirus,FCV)、猫细小病毒(Feline parvovirus,FPV)和猫疱疹病毒1型(Feline herpesvirus-1,FHV-1)是常见的高传染性、高致病性病原体,本文针对广深地区的这3种病毒开展研究,以期明确本地FCV、FPV和FHV-1... 【目的】猫杯状病毒(Feline calicivirus,FCV)、猫细小病毒(Feline parvovirus,FPV)和猫疱疹病毒1型(Feline herpesvirus-1,FHV-1)是常见的高传染性、高致病性病原体,本文针对广深地区的这3种病毒开展研究,以期明确本地FCV、FPV和FHV-1的流行情况、遗传变异和演化方向。【方法】本研究于2021年10月至2022年6月收集了广州、深圳地区的动物医院、动物收容所和华南农业大学病猫的眼鼻口拭子、肛拭子样本,通过提取临床样本核酸、one step RT-PCR、常规PCR技术检测FCV、FPV及FHV-1;对阳性样品进行基因扩增及测序,利用DNAStar分析核苷酸序列相似性,使用MEGA 7.0构建系统发育树;使用克兰德尔−里斯猫肾(Crandell-Reese feline kidney,CRFK)细胞接种FCV、FHV-1阳性样品进行病毒分离,连续盲传至出现细胞病变,利用PCR、电子显微镜等技术鉴定分离毒株。【结果】379例具有临床症状的病猫中,FPV、FCV、FHV-1感染率分别为22.16%、19.00%和3.17%;病毒阳性率与猫只性别无关,6月龄及以下患猫中FCV、FPV检出率最高,分别为63.89%、58.33%,FHV-1在12月龄及以上患猫中阳性占比最高,为66.67%。已免疫“妙三多”疫苗的患猫中FCV、FHV-1、FPV均有检出,阳性率分别为75.00%、75.00%、20.24%。成功分离到7株FCV、1株FHV-1和2株FPV。7株FCV分离株全基因组与参考株的核苷酸相似性为75.0%~87.5%,7株FCV分离株形成了两大分支,GZ-1-249和GZ-1-184属于GI分支,而其他5株分离株均属于GII分支。14条FPV VP2基因序列与参考株的核苷酸相似性为97.4%~100.0%,14条序列与“妙三多”疫苗株M38246.1(FPV USA Cu4)等序列共同归属于一大分支。【结论】研究结果丰富了FCV、FPV和FHV-1相关流行病学数据,增强了对本地流行毒株的认识,为未来本土疫苗的研发和优化提供了重要支持。 展开更多
关键词 猫杯状病毒 猫细小病毒 猫疱疹病毒1型 分离 鉴定 遗传进化
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基于代谢组学和网络药理学探究槲皮素抑制PRRSV诱导炎症的作用机制
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作者 陈洪博 江雨蔓 +3 位作者 李佳铠 唐歆 曹翀 邱龙新 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 北大核心 2026年第3期133-142,152,共11页
【目的】探究槲皮素治疗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)诱导炎症的作用机制。【方法】将28日龄仔猪随机分为PRRSV组和PRRSV+槲皮素低、中、高剂量组(分别在基础日粮中添加12.5,25和50 mg/kg的槲皮素),并设置空白对照组。于PRRSV感染后7,... 【目的】探究槲皮素治疗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)诱导炎症的作用机制。【方法】将28日龄仔猪随机分为PRRSV组和PRRSV+槲皮素低、中、高剂量组(分别在基础日粮中添加12.5,25和50 mg/kg的槲皮素),并设置空白对照组。于PRRSV感染后7,14,35 d采集血清样品,测定各组猪血清炎症因子;感染后35 d采集猪肺脏,检测肺脏组织病变;对猪血清代谢谱进行分析,筛选差异代谢物及相关代谢通路;采用网络药理学,构建槲皮素治疗炎症的“成分-靶点-通路-疾病”图。采用分子对接法验证活性成分与核心靶点的相互作用。将血清代谢组学与网络药理学联合分析,构建“靶点-代谢途径-代谢物”网络图,检测关键调控靶点磷脂酶A2(PLA2)、环氧合酶(COX)、脂氧化酶(LOX)mRNA的表达水平。【结果】与空白对照组相比,PRRSV感染7~35 d PRRSV组仔猪血清炎症因子蛋白和肺脏炎症因子mRNA均显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01);与PRRSV组相比,不同浓度槲皮素组仔猪血清炎症因子蛋白、肺脏炎症因子mRNA和PRRSV N基因的表达水平均显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01);病理组织学检测结果显示,槲皮素可改善PRRSV引起的间质性肺炎。通过代谢组学技术,从血清中筛选出16个差异代谢物,与PRRSV组相比,槲皮素能回调这些差异代谢物水平;筛选出5条关键代谢途径(甘油酯代谢、醚脂代谢、甘油磷脂代谢、酪氨酸代谢和花生四烯酸代谢)。网络药理学分析表明,槲皮素治疗间质性肺炎主要作用于EGFR、MMP9、PTGS2、CDK2和APP等靶点蛋白,与代谢通路、PI3K-Akt信号通路、IL-17信号通路和T细胞受体信号通路等密切相关。整合分析显示,甘油磷脂代谢和花生四烯酸代谢是槲皮素治疗间质性肺炎的关键代谢途径。整合分析验证结果显示,与PRRSV组相比,槲皮素组仔猪肺脏PLA2、COX1和LOX mRNA水平大多显著或极显著降低。【结论】槲皮素可通过甘油磷脂代谢和花生四烯酸代谢途径调节血清代谢物,调控炎症相关核心靶点,降低炎症水平,缓解机体代谢紊乱,发挥治疗炎症的作用。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 槲皮素 猪 网络药理学 代谢组学
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宏基因组测序技术在蜱媒病原体检测中的应用研究进展
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作者 彭永帅 王梦迪 宋予震 《中国兽医杂志》 北大核心 2026年第1期38-44,共7页
蜱可传播多种病原体,引发一系列蜱媒疾病,对动物和人类健康构成严重威胁。传统检测方法(如聚合酶链式反应)在多病原体同步检测中存在明显局限。近年来,宏基因组测序(mNGS)技术在蜱媒病原体检测中展现出独特的优势,已成为发现和鉴定新发... 蜱可传播多种病原体,引发一系列蜱媒疾病,对动物和人类健康构成严重威胁。传统检测方法(如聚合酶链式反应)在多病原体同步检测中存在明显局限。近年来,宏基因组测序(mNGS)技术在蜱媒病原体检测中展现出独特的优势,已成为发现和鉴定新发病原体、解析复杂微生物群落的有力工具。随着mNGS的不断发展和完善,该技术有望在蜱媒疾病的早期诊断、监测预警和综合防控中发挥更加重要的作用。本文对蜱媒病原体的特点及mNGS技术在蜱媒病原体检测领域的研究进展进行综述,以期为蜱媒疾病的诊断和防控提供技术思路。 展开更多
关键词 宏基因组测序(mNGS) 蜱媒病原体 快速检测 应用
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