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猪血凝性脑脊髓炎病毒河南株的分离鉴定
1
作者 郭爽 康静静 +4 位作者 罗琴 于瑞 樊明明 李秀青 吴玉臣 《畜牧与兽医》 北大核心 2026年第3期75-81,共7页
为了明确河南地区猪场中猪血凝性脑脊髓炎病毒(porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus, PHEV)流行毒株的生物学特性,采集河南省信阳市某猪场的患病仔猪样本,进行病毒分离、细胞培养,电镜检测、病毒半数感染剂量(TCID50)测... 为了明确河南地区猪场中猪血凝性脑脊髓炎病毒(porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus, PHEV)流行毒株的生物学特性,采集河南省信阳市某猪场的患病仔猪样本,进行病毒分离、细胞培养,电镜检测、病毒半数感染剂量(TCID50)测定、动物试验以及病毒M、N基因的扩增和序列分析。结果:将分离获得的病毒接种于PK-15细胞后,可诱导明显的细胞病变效应,电镜负染可观察到星状近似球形的病毒粒子,并呈现典型帽子结构;攻毒后小鼠表现神经症状,脑组织病理学检查呈现病毒性脑炎特征,病变组织经PCR鉴定后,出现与PHEV目标片段大小一致的条带;N、M基因遗传进化树分析显示与JT06-China以及比利时的PHEV-VW572亲缘关系较近,属于流行毒株,未见明显变异。本研究结果可为河南猪场猪血凝性脑脊髓炎的防控提供理论依据。 展开更多
关键词 河南 猪血凝性脑脊髓炎病毒 病毒分离 变异毒株
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山羊伪结核棒状杆菌的分离与鉴定
2
作者 陈曦 姜悦才 +6 位作者 刘明杰 李登亮 李少飞 曹启航 戚宇旭 刘军 马文涛 《动物医学进展》 北大核心 2026年第2期132-136,共5页
为探究某羊场羊颈部、腹股沟出现明显脓肿的病因,通过临床检查与ELISA血清抗体检测分离鉴定病原菌,并通过山羊回归试验验证其致病性。结果显示,分离得到一株有β溶血现象的伪结核棒状杆菌(Corynebacterium pseudotuberculosis,CP),其CP... 为探究某羊场羊颈部、腹股沟出现明显脓肿的病因,通过临床检查与ELISA血清抗体检测分离鉴定病原菌,并通过山羊回归试验验证其致病性。结果显示,分离得到一株有β溶血现象的伪结核棒状杆菌(Corynebacterium pseudotuberculosis,CP),其CP特异性16S rDNA基因、pLd基因与CP标准株序列同源性分别为100%和98%。该分离株在山羊回归试验中,能诱发典型脓肿病变,且从病变组织中重新分离鉴定出该菌株,最终确定引起该羊场羊只脓肿发生的病因为CP感染。 展开更多
关键词 干酪性淋巴结炎 伪结核棒状杆菌 pLd基因 山羊 分离鉴定
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复合添加剂减轻肉鸡急性热应激损伤的机制研究 被引量：1
3
作者 陈卓英 李晓阳 +3 位作者 黄秀英 宋锋 李同峰 唐姝 《南京农业大学学报》 北大核心 2026年第1期122-132,共11页
[目的]本试验通过在肉鸡饮水中添加不同剂量的复合添加剂,研究其对急性热应激下肉鸡生长性能、血液生理生化指标、免疫和抗氧化功能及其物质代谢的影响,明确并探讨其减轻肉鸡急性热应激损伤的机制。[方法]选用150只7日龄AA白羽肉鸡,随... [目的]本试验通过在肉鸡饮水中添加不同剂量的复合添加剂,研究其对急性热应激下肉鸡生长性能、血液生理生化指标、免疫和抗氧化功能及其物质代谢的影响,明确并探讨其减轻肉鸡急性热应激损伤的机制。[方法]选用150只7日龄AA白羽肉鸡,随机分为复合添加剂高剂量组(H组,0.50 g·L^(-1))、低剂量组(L组,0.25 g·L^(-1))和对照组(Con)3组,每组50只,预饲3 d后连续给药5 d,第4天在隔离器中进行40℃热应激处理,观察0、3、5、24 h和恢复24 h后肉鸡临床表现,并检测肉鸡血液生理生化指标、免疫和抗氧化等指标的变化。[结果]与对照组相比,高剂量组与低剂量组肉鸡在热应激过程中采食量、饮水量增加,体温保持稳定,张嘴呼吸数与死亡数减少,肠道损伤减轻;高剂量组与低剂量组肉鸡在热应激过程中,血清中一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)活性、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性和白细胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)含量均显著降低,过氧化氢酶(catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性和皮质酮、维生素A(VA)、维生素C(VC)和维生素E(VE)含量均显著增加;高剂量组与低剂量组肉鸡在热应激3 h时,热休克蛋白(HSP70)含量均明显增加;高剂量组与低剂量组肉鸡在热应激过程中十二指肠、空肠、回肠绒隐比均增大。[结论]肉鸡热应激前饮水添加0.25和0.50 g·L^(-1)复合添加剂均在一定程度上改善急性热应激导致的肉鸡生长性能下降,提高热应激肉鸡机体免疫能力和抗氧化功能,缓解热应激诱导的肉鸡肠道损伤。 展开更多
关键词 热应激 复合添加剂 抗氧化性能 应激标志物 肉鸡
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格拉瑟菌血清5型cpxAR双组分基因缺失株的生物学特性研究
4
作者 徐引弟 王治方 +8 位作者 蔡旭旺 徐晓娟 张立宪 焦文强 朱文豪 李海利 游一 张家庆 雷亚楠 《河南农业科学》 北大核心 2026年第2期126-135,共10页
为研究cpxAR双组分基因在格拉瑟菌中的致病机制,同时筛选格拉瑟菌血清5型缺失弱毒株,构建格拉瑟菌血清5型临床分离株(GPS5)的cpxAR双基因缺失株(ΔcpxAR),并对缺失株的生长特性、生物膜形成能力、环境胁迫抗性及豚鼠致病力等生物学特性... 为研究cpxAR双组分基因在格拉瑟菌中的致病机制,同时筛选格拉瑟菌血清5型缺失弱毒株,构建格拉瑟菌血清5型临床分离株(GPS5)的cpxAR双基因缺失株(ΔcpxAR),并对缺失株的生长特性、生物膜形成能力、环境胁迫抗性及豚鼠致病力等生物学特性进行系统研究。结果表明,cpxAR基因缺失后,ΔcpxAR与亲本株GPS5相比,菌落形态和生长速率无明显差异,但生物膜形成能力明显减弱,对渗透压、热休克、氧化应激及碱性胁迫的抗性显著降低,对豚鼠的毒力也显著减弱。综上,cpxAR基因对GPS5的生长无明显调控作用,但对其生物膜形成、环境胁迫抗性及毒力均具有重要调控作用,为深入探究cpxAR双组分系统在格拉瑟菌中的生物学功能,以及筛选格拉瑟菌血清5型弱毒株奠定了基础。 展开更多
关键词 格拉瑟菌血清5型 cpxAR基因缺失株 生长 生物膜 抗性 毒力
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鸡传染性喉气管炎弱毒株FJ19株的关键基因遗传演化分析及作为候选疫苗株的安全性、有效性评价
5
作者 王晨燕 张巍嘉 +4 位作者 柳珊 李亚杰 赵丽霞 刘云涛 侯博 《畜牧兽医学报》 北大核心 2026年第2期994-1007,共14页
本研究旨在分析鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)弱毒株FJ19株的部分关键抗原基因及毒力基因的遗传演化特点,评估FJ19株对SPF鸡的安全性和免疫原性,为ILTV FJ19株弱毒活疫苗的开发提供参考依据。通过将FJ19株进行多次尿囊腔途径接种适应后,... 本研究旨在分析鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)弱毒株FJ19株的部分关键抗原基因及毒力基因的遗传演化特点,评估FJ19株对SPF鸡的安全性和免疫原性,为ILTV FJ19株弱毒活疫苗的开发提供参考依据。通过将FJ19株进行多次尿囊腔途径接种适应后,对其关键抗原和毒力基因进行测序分析,点眼或口服接种14日龄SPF鸡观察其安全性,并且通过点眼或口服途径免疫14日龄SPF鸡21 d后用ILTV强毒株攻毒评价保护效果,测定免疫持续期等验证FJ19株作为弱毒活疫苗的潜力。结果显示:将FJ19株在10日龄SPF鸡胚以尿囊腔途径接种连续传代适应后,收获P0、P1、P2、P3代病毒液的EID50分别为10^(5.0)、10^(6.5)、10^(6.9)、10^(6.5)·mL^(-1)。核酸序列分析结果表明:FJ19株主要免疫原性基因gB-gC-gD-UL32和毒力相关基因gE-gI-TK-ICP4-gG-gH-gK-gL-gM-gN与弱毒株K317、Nobilis Laringovac®、LT Blen、Poulvac ILT®、Laryngo Vac和我国2009年分离株LJS09株、2012年分离株ck/CH/LHLJ/120305株、2019年分离强毒株WF03的亲缘关系较近。安全性试验显示,FJ19株以104.0EID50·羽-1的剂量(10羽份)点眼接种14日龄SPF鸡后有40%出现轻度眼炎症状,而口服接种SPF鸡未表现出明显的临床症状;当以104.0EID50·羽-1的剂量气管途径接种21日龄SPF鸡时有30%鸡出现一过性的呼吸道反应,未发生严重的ILTV感染典型症状。免疫后强毒攻毒结果显示,FJ19株以0.2羽份或1羽份的剂量点眼或口服途径免疫14日龄SPF鸡21d后,采用ILTV强毒株以104.0EID50·只-1的剂量气管攻毒后,所有免疫组的鸡均获得了至少90%的保护,未观察到明显的临床症状,而未免疫攻毒组至少有90%的鸡出现了严重的ILTV感染典型症状,FJ19株免疫后的免疫持续期至少可达6个月。ILTV FJ19株采用尿囊腔途径接种可获得高滴度病毒含量,其主要抗原基因和毒力基因与我国早期分离株和疫苗株相比未发生明显变异,通过动物试验证实点眼或口服该弱毒株对14日龄SPF鸡具有良好的安全性和免疫有效性,且免疫持续期可达6个月,通过口服接种不影响其安全性和免疫有效性。因此,ILTV弱毒株FJ19株不仅适应尿囊腔接种途径收获病毒,且具备良好的安全性和免疫有效性,还可适应口服接种途径进行免疫,是一株理想的具有潜力的弱毒疫苗候选毒株。 展开更多
关键词 传染性喉气管炎 弱毒株 遗传进化 安全性 有效性
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猪繁殖与呼吸综合征病毒激活mTORC1/HIF-1α通路诱导炎症的作用机制
6
作者 李晓冰 段滇宁 +5 位作者 黄敏 江潜城 杜以梦 刘建奎 邱龙新 陈洪博 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 北大核心 2026年第4期1-9,共9页
【目的】探究缺氧诱导因子1α(HIF-1α)在猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)诱导的猪肺泡巨噬细胞炎症中的作用机制。【方法】采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)和实时荧光定量PCR(Real-time PCR,RTqPCR),检测感染PRRSV的猪肺脏、肺泡... 【目的】探究缺氧诱导因子1α(HIF-1α)在猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)诱导的猪肺泡巨噬细胞炎症中的作用机制。【方法】采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)和实时荧光定量PCR(Real-time PCR,RTqPCR),检测感染PRRSV的猪肺脏、肺泡巨噬细胞HIF-1αmRNA和蛋白表达水平。使用BAY87-2243或CoCl2处理PRRSV感染的猪肺泡巨噬细胞,检测PRRSV M蛋白和mRNA表达水平,ELISA检测白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平。将猪肺泡巨噬细胞转染TSC2 siRNA后,用mTORC1抑制剂Rapa和mTOR抑制剂KU0063794处理,用Western Blot检测猪肺泡巨噬细胞mTOR对HIF-1α的调控机制。将猪肺泡巨噬细胞过表达mTORC1后,检测PRRSV对HIF-1α和炎症因子水平的影响。【结果】PRRSV感染可明显提高猪肺脏、肺泡巨噬细胞HIF-1αmRNA和蛋白表达水平。与PRRSV组相比,HIF-1α激活组(CoCl2处理)促进了PRRSV M蛋白和mRNA的表达,IL-1β、IL-6和TNF-α的含量极显著升高(P<0.01);HIF-1α抑制组(BAY87-2243处理)降低了PRRSV M蛋白和mRNA的表达,IL-1β、IL-6和TNF-α的含量显著或极显著降低(P<0.01)。PRRSV促进肺泡巨噬细胞中mTOR表达,抑制mTOR后HIF-1α的表达降低,炎症细胞因子水平显著或极显著降低;重新恢复HIF-1α的表达后,炎症细胞因子水平显著升高(P<0.05)。mTOR主要通过mTORC1上调HIF-1α表达;过表达mTORC1可提高PRRSV M和HIF-1α蛋白水平,促进炎症细胞因子表达(P<0.05)。【结论】HIF-1α可调控PRRSV诱导的肺泡巨噬细胞炎症反应,其表达受mTORC1信号通路调节。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 缺氧诱导因子1Α 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 炎症因子 肺泡巨噬细胞
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非洲猪瘟病毒pB602L蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立
7
作者 张向阳 矫健 +8 位作者 黄培 焦翠翠 张梦瑶 黄静波 龚志远 李海伦 李媛媛 张海丽 王化磊 《病毒学报》 北大核心 2026年第1期126-134,共9页
目的为了建立非洲猪瘟病毒(African Swine fever virus,ASFV)pB602L蛋白抗体间接ELISA检测方法。方法本研究利用大肠杆菌表达系统表达了His-pB602L重组蛋白,并以纯化的His-pB602L重组蛋白为包被抗原,以表达pB602L的重组狂犬病病毒免疫... 目的为了建立非洲猪瘟病毒(African Swine fever virus,ASFV)pB602L蛋白抗体间接ELISA检测方法。方法本研究利用大肠杆菌表达系统表达了His-pB602L重组蛋白,并以纯化的His-pB602L重组蛋白为包被抗原,以表达pB602L的重组狂犬病病毒免疫后的小鼠阳性血清和ASFV猪阳性血清为一抗,辣根过氧化物酶(HRP)标记的葡萄球菌A蛋白(SPA)作为广谱二抗,采用棋盘滴定法优化各反应条件,建立针对pB602L蛋白的间接ELISA抗体检测方法,并对其特异性、敏感性和重复性进行评价。结果ASFV pB602L蛋白间接ELISA抗体检测方法的最优反应条件为:抗原包被浓度为4μg/mL,4℃包被16 h~18 h,5%脱脂奶粉37℃封闭0.5 h,待检血清孵育0.5 h,SPA-HRP 1:10000倍稀释后37℃孵育0.5 h。该方法仅对ASFV阳性血清检测结果为阳性,与猪瘟病毒、猪蓝耳病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪乙型脑炎病毒和猪圆环病毒2型阳性血清均无交叉反应,具有良好的特异性;该方法检测稀释度为1∶6400的猪ASFV临床阳性血清时仍呈现阳性,检测分别稀释3200倍和1600倍的ASFVⅠ型和Ⅱ型阳性血清均为阳性;批内重复和批间重复变异系数均小于10%。结论本研究建立的ASFV pB602L蛋白间接ELISA抗体检测方法不仅可用于ASF的临床诊断和流行病学调查,亦能够为ASF疫苗研发过程中免疫动物的特异性抗体评价提供技术支持。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 pB602L蛋白 pB602L抗体 间接ELISA
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鸭短喙矮小综合征病毒单克隆抗体制备及竞争ELISA检测方法的建立
8
作者 朱小丽 王劭 +5 位作者 董慧 程晓霞 江丹丹 肖世峰 陈少莺 陈仕龙 《中国畜牧兽医》 北大核心 2026年第2期948-958,共11页
【目的】建立一种快速检测鸭短喙矮小综合征病毒(Short beak and dwarfism syndrome virus,SBDSV)抗体的血清学方法,为SBDSV抗体检测及诊断试剂盒研发提供技术支撑。【方法】本研究用纯化的SBDSV M15株灭活毒免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠... 【目的】建立一种快速检测鸭短喙矮小综合征病毒(Short beak and dwarfism syndrome virus,SBDSV)抗体的血清学方法,为SBDSV抗体检测及诊断试剂盒研发提供技术支撑。【方法】本研究用纯化的SBDSV M15株灭活毒免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,利用间接ELISA筛选可分泌SBDSV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用筛选出的杂交瘤细胞接种小鼠制备腹水。通过间接ELISA测定单克隆抗体效价,通过间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)和胶乳凝集(latex particle agglutination,LPA)试验鉴定单克隆抗体特性。通过中和试验测定单克隆抗体中和活性,使用试剂盒鉴定单克隆抗体亚类。运用棋盘滴定法优化反应体系,建立基于SBDSV单克隆抗体的竞争ELISA检测方法。通过检测阴性血清确定该方法的临界值。对建立的竞争ELISA检测方法进行特异性、灵敏性和重复性测定。用该方法检测临床血清样品,并与胶乳凝集抑制(latex particle agglutination inhibition,LPAI)试验结果进行比对。【结果】经间接ELISA筛选,获得3株稳定分泌SBDSV单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为D5-3、G11-23和H2-27。间接ELISA结果显示,3株杂交瘤细胞D5-3、G11-23和H2-27培养上清的抗体效价分别为1∶2~6、1∶2~5和1∶2~6,腹水的抗体效价分别为1∶10~5、1∶10~4和1∶10~6。IFA结果显示,单克隆抗体D5-3、G11-23和H2-27均具有较好的结合活性,可用于IFA检测。LPA试验结果显示,仅单克隆抗体H2-27具有致敏胶乳的特性。中和试验结果显示,3株单克隆抗体均具有中和SBDSV的能力,其中单克隆抗体H2-27的中和活性最强。单克隆抗体亚类鉴定结果显示,单克隆抗体D5-3和G11-23均为IgG1,H2-27为IgM。以纯化的SBDSV(M15株)灭活毒作为包被抗原,单克隆抗体H2-27为竞争抗体,建立了一种检测SBDSV抗体的竞争ELISA方法,当抑制率(PI)≥23.70%时,判定为SBDSV抗体阳性;PI≤15.91%时判定为阴性。该方法特异性好,与番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MDPV)、番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,MDRV)、鸭源副黏病毒(Duck paramyxovirus,DPMV)、鸭肝炎病毒1型(Duck hepatitis virus-1,DHV-1)和鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)阳性血清均无交叉反应;敏感性高,高免血清(LPAI效价1∶2~8)1∶25600稀释时仍为阳性;批间、批内重复性好,变异系数均<6%。竞争ELISA检测结果与LPAI结果具有良好的正相关性,二者的符合率为89.10%(188/211)。【结论】本研究成功制备3株SBDSV单克隆抗体,基于单克隆抗体H2-27建立的竞争ELISA方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可高通量检测SBDSV抗体,为监测SBDSV在中国的流行情况及雏鸭母源抗体水平评价提供技术支撑。 展开更多
关键词 鸭 短喙矮小综合征病毒(SBDSV) 单克隆抗体 竞争ELISA
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非洲猪瘟病毒P72蛋白磁微粒化学发光抗体检测技术的建立和应用
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作者 汪葆玥 任雪建 +8 位作者 胡冬梅 吕园园 马静 李秀梅 顾小雪 刘玉良 倪建强 周智 李琦 《病毒学报》 北大核心 2026年第1期135-145,共11页
目的非洲猪瘟缺乏有效的疫苗,防控有赖于及时准确的诊断和清除病原,随着低致病力毒株的出现和持续流行,检测抗体成为感染监测的重要手段。方法本研究在表达纯化非洲猪瘟病毒P72蛋白并筛选获得单克隆抗体的基础上,将羧基磁珠与重组P72蛋... 目的非洲猪瘟缺乏有效的疫苗,防控有赖于及时准确的诊断和清除病原,随着低致病力毒株的出现和持续流行,检测抗体成为感染监测的重要手段。方法本研究在表达纯化非洲猪瘟病毒P72蛋白并筛选获得单克隆抗体的基础上,将羧基磁珠与重组P72蛋白进行偶联反应形成免疫磁珠,建立了磁微粒化学发光抗体检测技术(P72-MPCLIA)。结果在对220份临床样品的检测结果分析后确定其阈值阻断率为50.00%,敏感性检测表明P72-MPCLIA检测为阳性的最大稀释倍数为1:256,特异性试验与其他生猪疫病阳性血清无交叉反应性,重复性检测批内、批间变异系数分别为1.68%~4.70%和1.90%~4.72%。在对66份临床样品的检测中,与世界动物卫生组织推荐的确诊技术间接免疫荧光抗体检测方法和商品化间接ELISA试剂盒,相符率分别为96.97%和100%。结论P72-MPCLIA特异性高、敏感性好,且检测时间缩短至30min以内,可实现自动化操作,为非洲猪瘟的抗体检测技术提供了新的技术手段。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 磁微粒化学发光检测方法 化学发光免疫分析法 间接免疫荧光试验
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口蹄疫病毒3D蛋白与宿主互作蛋白的筛选及鉴定
10
作者 刘永杰 兰喜 +4 位作者 李玉星 张勇 何继军 尚佑军 郑海学 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第1期13-19,共7页
口蹄疫是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的猪、牛、羊等偶蹄类动物急性、热性,高度接触性传染病。FMDV 3D蛋白是病毒编码RNA的RNA依赖性聚合酶(3D^(pol)),是病毒RNA复制的重要蛋白,有关3D蛋白与宿主蛋白相互作用的报道较少。本研究应用PK-15细... 口蹄疫是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的猪、牛、羊等偶蹄类动物急性、热性,高度接触性传染病。FMDV 3D蛋白是病毒编码RNA的RNA依赖性聚合酶(3D^(pol)),是病毒RNA复制的重要蛋白,有关3D蛋白与宿主蛋白相互作用的报道较少。本研究应用PK-15细胞cDNA酵母表达文库,利用酵母双杂交技术,最终获得与3D有潜在相互作用的15个宿主潜在蛋白,通过免疫共沉淀和共聚焦试验进一步验证,鉴定出宿主ataxin-3和voltage-dependent anion channel 1(VDAC1)与3D具有相互作用,研究结果为宿主蛋白与3D蛋白相互作用在病毒复制中的功能提供了数据支撑。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 3D蛋白 酵母双杂交技术 蛋白质相互作用
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猫杯状病毒感染性克隆的构建及拯救病毒的鉴定
11
作者 朱雪敏 李鑫基 +7 位作者 华炯钢 陈柳 叶伟成 张传亮 朱寅初 付媛 张存 云涛 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第1期20-26,共7页
旨在建立猫杯状病毒(FCV)反向遗传系统,以探究FCV的致病机制,为后续疫苗研发提供科学依据。以FCV HZ2024株为对象,构建DNA-launched感染性克隆系统。FCV全基因组的4个片段被依次插入pAY-CHS重组质粒后转染F81细胞并传代鉴定。结果显示,F... 旨在建立猫杯状病毒(FCV)反向遗传系统,以探究FCV的致病机制,为后续疫苗研发提供科学依据。以FCV HZ2024株为对象,构建DNA-launched感染性克隆系统。FCV全基因组的4个片段被依次插入pAY-CHS重组质粒后转染F81细胞并传代鉴定。结果显示,FCV HZ2024基因片段扩增后插入DNA-launched系统质粒,成功构建DNA-launched系统拯救病毒rFCV HZ2024-RE,转染细胞24 h后出现细胞病变效应,病毒滴度稳定在10^(7)~10^(8T)CID_(50)/m L。间接免疫荧光检测证实VP1蛋白抗原表位完全保留,重组病毒的衣壳蛋白成功表达。且重组病毒与亲本毒株的复制动力学高度相似,蚀斑形态无显著差异。Eco R V酶切及测序验证表明,突变位点(C7183T、A7186C)被精准引入且稳定遗传。总之,构建的DNA-launched系统实现了FCV高效拯救与精准遗传。 展开更多
关键词 猫杯状病毒 感染性克隆 反向遗传学 病毒拯救
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奶山羊源反刍链球菌的分离鉴定
12
作者 刘萍 李美文 +5 位作者 德珍 王敏 曹小安 刘志杰 何继军 尚佑军 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第2期235-240,共6页
为明确陕西省某奶山羊养殖场羔羊关节炎的病因,取发病羔羊关节积液和主要脏器组织进行了病原菌检测和细菌分离培养、生化试验、药敏试验及小鼠致病性试验。结果显示,羔羊关节液和脾组织中链球菌属细菌核酸呈阳性,从关节积液中成功分离出... 为明确陕西省某奶山羊养殖场羔羊关节炎的病因,取发病羔羊关节积液和主要脏器组织进行了病原菌检测和细菌分离培养、生化试验、药敏试验及小鼠致病性试验。结果显示,羔羊关节液和脾组织中链球菌属细菌核酸呈阳性,从关节积液中成功分离出1株链球菌,经形态学观察、生化试验和16S rRNA基因序列比对,鉴定为反刍链球菌。药敏试验表明,该分离株对链霉素、阿米卡星、妥布霉素、多黏菌素B、万古霉素和诺氟沙星高度敏感,对红霉素中度敏感,但对青霉素G、头孢类、四环素和复方新诺明等多种常用抗生素存在耐药性。致病性试验证实该分离株对小鼠具有较强致病性,可致感染小鼠死亡。本研究为反刍链球菌的实验室诊断、抗菌药物合理选用以及后续研究其耐药机制和防控技术奠定了基础。 展开更多
关键词 反刍链球菌 关节炎 耐药性 奶山羊
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鸭星状病毒1型信阳株全基因组扩增及遗传进化分析
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作者 张敏 李迎晓 +5 位作者 张璐璐 何书海 曲哲会 秦东升 刘纪成 焦凤超 《中国畜牧兽医》 北大核心 2026年第2期959-972,共14页
【目的】了解信阳地区鸭星状病毒1型(Duck astrovirus type 1,DAstV1)流行株基因组的演化特征,为进一步研究信阳地区DAstV1的流行、遗传进化及致病特性提供参考依据。【方法】对某养殖场送检的病鸭进行禽腺病毒、禽星状病毒和鸭甲型肝... 【目的】了解信阳地区鸭星状病毒1型(Duck astrovirus type 1,DAstV1)流行株基因组的演化特征,为进一步研究信阳地区DAstV1的流行、遗传进化及致病特性提供参考依据。【方法】对某养殖场送检的病鸭进行禽腺病毒、禽星状病毒和鸭甲型肝炎病毒等12种常见病毒的PCR/RT-PCR筛查。采集病鸭肝脏组织,无菌处理后经卵黄囊途径接种10日龄SPF鸭胚,连续传代4次,并逐代收集尿囊液进行DAstV RT-PCR鉴定。对分离到的病毒进行全基因组测序,并对ORF1a、ORF1b和ORF2基因序列及其编码蛋白的氨基酸变异位点进行比对分析。【结果】送检病料筛查结果显示,禽星状病毒呈阳性。第1~4代鸭胚尿囊液中均呈DAstV1阳性,将该病毒命名为HN24XY06。第4代接种鸭胚全部死亡,死亡胚体发育不良且体表出血。HN24XY06基因组全长7 755 nt,包含ORF1a、ORF1b和ORF2 3个开放阅读框。序列比对和系统发育分析表明,HN24XY06属于DAstV1毒株,与山东分离株DAstV-SDZZ和DAstV-SDWF亲缘关系较近。ORF1a、ORF1b和ORF2蛋白的氨基酸序列分析显示,存在不同程度的突变,多发生在ORF1a编码的氨基酸序列中。【结论】本研究分离到了1株DAstV1,丰富了信阳地区DAstV1的分子流行病学资料,并为进一步研究DAstV1的致病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 鸭星状病毒1型(DAstV1) 病毒分离与鉴定 全基因组扩增 遗传进化分析
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新疆地区奶牛乳腺炎肺炎克雷伯菌的分离鉴定与耐药性分析
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作者 蔡扩军 徐敏 +2 位作者 孙鹏亮 夏利宁 赵红琼 《畜牧兽医学报》 北大核心 2026年第1期464-475,共12页
旨在了解新疆地区奶牛乳腺炎肺炎克雷伯菌的流行情况与耐药特性。本研究从新疆奶牛集约化养殖集中的9个地区采集15个规模奶牛养殖场奶牛2083份临床乳腺炎和隐性乳腺炎奶样,对样品中的肺炎克雷伯菌进行分离培养、革兰染色,并采用PCR及16S... 旨在了解新疆地区奶牛乳腺炎肺炎克雷伯菌的流行情况与耐药特性。本研究从新疆奶牛集约化养殖集中的9个地区采集15个规模奶牛养殖场奶牛2083份临床乳腺炎和隐性乳腺炎奶样,对样品中的肺炎克雷伯菌进行分离培养、革兰染色,并采用PCR及16S rRNA测序进行鉴定,对分离菌株采用微量肉汤稀释法检测耐药情况。结果表明,从奶样中分离出266株肺炎克雷伯菌,分离率为12.8%(266/2083),临床乳腺炎和隐性乳腺炎奶样肺炎克雷伯菌分离率无显著差异(P>0.05)。采用微量肉汤稀释法测定266个分离株对16种抗菌药物的敏感性及产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)情况,结果显示分离株对四环素、头孢噻呋、头孢吡肟、头孢噻肟和头孢唑林的耐药率较高(23.7%~41.0%)。16.9%(45/266)的分离株为多重耐药菌,6.4%(17/266)的分离株产ESBLs。结果提示,新疆15家规模化奶牛场乳腺炎肺炎克雷伯菌平均分离率在全国处于相对较低水平。分离株对四环素和头孢类抗菌药物具有较强的耐药性,本研究为掌握奶牛乳腺炎肺炎克雷伯菌的流行特征及指导临床用药提供了依据。 展开更多
关键词 奶牛乳腺炎 肺炎克雷伯菌 分离鉴定 耐药特性
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六株PRRSV分离毒株的基因组特征与致病性分析
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作者 李刚 阮胜男 +5 位作者 于学祥 张硕 白平 李文涛 何启盖 江云波 《畜牧兽医学报》 北大核心 2026年第3期1752-1758,共7页
旨在了解我国当前猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的病原特征与致病性,探究其重组等变异情况。采集处理病料后使用Marc-145细胞和PAM细胞连续盲传三代,IFA检测后空斑纯化,测序分析分离毒株的全基因组序列,仔猪感染试验系统评估... 旨在了解我国当前猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的病原特征与致病性,探究其重组等变异情况。采集处理病料后使用Marc-145细胞和PAM细胞连续盲传三代,IFA检测后空斑纯化,测序分析分离毒株的全基因组序列,仔猪感染试验系统评估分离毒株的致病性。结果显示:本研究分离出6株2型PRRSV毒株,命名为WH-2021A、GZ-2021W、SX-2022M、HB-2021A、H-1和C-1。WH-2021A、GZ-2021W、SX-2022M属于L1.8的NADC30-like毒株,其中GZ-2021W是以NADC30为主要亲本,高致病毒株HuN4为次要亲本的重组毒株,SX-2022M是以NADC30为主要亲本,经典毒株CH-1a为次要亲本的重组毒株。HB-2021A属于L3.5 QYYZ分支,H-1和C-1分别属于L8.7高致病性毒株和L5.1经典毒株。仔猪感染试验发现,WH-2021A致病性最强,仔猪死亡率达100%,其次是H-1,死亡率达80%,GZ-2021W和SX-2022M两株重组毒株可引起一系列临床病变,但无仔猪死亡。病理剖检发现感染组猪肺、淋巴结及扁桃体病变均明显。本研究分离到6株2型PRRSV毒株,探究了其基因组特征和致病性,为PRRS免疫防控提供早期预警以及为PRRSV-2的重组进化分析提供重要的数据支撑。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 分离鉴定 重组分析 致病性
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沙门菌与宿主细胞的互作机制:从胃酸耐受到肠上皮细胞定植
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作者 杨海峰 陈鋆 +5 位作者 殷韶杰 陈晓兰 王婧 解肖羽婷 卢霞 朱建民 《中国畜牧兽医》 北大核心 2026年第4期1840-1851,共12页
沙门菌是一种重要的人兽共患肠道病原体,其致病机制依赖于突破宿主细胞的多重防御屏障。近年来,沙门菌与宿主细胞的互作机制研究取得了重大进展,尤其是沙门菌入侵宿主细胞过程中所涉及的关键环节、重要分子及其调控网络。笔者系统阐述... 沙门菌是一种重要的人兽共患肠道病原体,其致病机制依赖于突破宿主细胞的多重防御屏障。近年来,沙门菌与宿主细胞的互作机制研究取得了重大进展,尤其是沙门菌入侵宿主细胞过程中所涉及的关键环节、重要分子及其调控网络。笔者系统阐述了沙门菌从突破物理化学屏障到入侵宿主细胞,最后重塑胞内微环境的过程。重点探讨了沙门菌通过Ⅲ型分泌系统递送多种效应蛋白,协同靶向宿主细胞,并由此介导宿主细胞骨架重构、膜运输操控和脂代谢重编程等关键环节。理解沙门菌入侵宿主细胞的互作机制,为突破传统抗菌策略瓶颈、开发靶向宿主-病原体互作的新型抗感染方案提供关键的理论依据。 展开更多
关键词 沙门菌 宿主-病原体互作 上皮屏障 毒力因子 细菌入侵 细胞内定植
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四川肉牛源疣状毛癣菌的分离鉴定、系统发育分析与药敏试验
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作者 王娅 李志国 +3 位作者 罗荣艳 刘瑞国 左之才 马晓平 《中国畜牧兽医》 北大核心 2026年第1期459-468,共10页
【目的】探究四川肉牛真菌性皮肤病的病原,为该病的防治提供参考。【方法】采集四川各地疑似皮肤癣病的患畜皮屑,用三点接种法将采集的样本接种于皮肤癣菌鉴别培养基,将分离得到的菌株经内部转录间隔区(ITS)序列扩增后通过NCBI数据库BL... 【目的】探究四川肉牛真菌性皮肤病的病原,为该病的防治提供参考。【方法】采集四川各地疑似皮肤癣病的患畜皮屑,用三点接种法将采集的样本接种于皮肤癣菌鉴别培养基,将分离得到的菌株经内部转录间隔区(ITS)序列扩增后通过NCBI数据库BLAST分析基因相似性并构建系统发育树,以10^(7) CFU/mL分离菌孢子悬液感染免疫抑制小鼠,观察临床症状和病理学特征,微量二倍稀释法探究分离菌耐药表型。【结果】从24个样本中分离到10株真菌(rntv01~rntv10)。PCR扩增结果显示,分离株均得到大小为681 bp的扩增片段;BLAST比对结果显示,分离株与疣状毛癣菌相似性为97%~100%;动物试验结果显示,免疫抑制小鼠感染该菌后皮肤出现被毛脱落、结痂、皮屑增多等症状,HE染色后观察到表皮角质层角化不全、炎性细胞增生,PAS染色后观察到大量菌丝侵染;药敏试验结果显示,除rntv10外,其余菌株对两性霉素B中介;分离菌对伊曲康唑敏感性不同,rntv09、rntv10敏感,rntv01、rntv04~rntv08中介,rntv02、rntv03耐药;rntv10对酮康唑敏感、对5-氟胞嘧啶中介,其余菌株均为耐药株;所有菌株对环吡酮胺中介,对氟康唑和特比萘芬耐药。【结论】四川肉牛真菌性皮肤病主要病原是疣状毛癣菌,该菌可引起小鼠皮肤的侵袭性感染,患病牛可用两性霉素B、伊曲康唑或环吡酮胺进行治疗。 展开更多
关键词 肉牛 疣状毛癣菌 分离鉴定 ITS序列 系统发育分析 药敏试验
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鸭坦布苏病毒E蛋白结构域Ⅲ抗体间接ELISA检测方法的建立与应用
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作者 曲哲会 张孟云 +7 位作者 陈晶晶 聂雅诺 王凤瑞 刘志科 焦凤超 郝香琪 梁成成 郭晓秋 《中国畜牧兽医》 北大核心 2026年第4期2082-2092,共11页
【目的】建立鸭坦布苏病毒(DTMUV)E蛋白结构域Ⅲ(E-DⅢ)抗体间接ELISA检测方法,为DTMUV血清学监测提供一种检测手段。【方法】利用PCR扩增DTMUV E-DⅢ基因,连接至pET-30a(+)载体构建重组质粒pET-E-DⅢ,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细... 【目的】建立鸭坦布苏病毒(DTMUV)E蛋白结构域Ⅲ(E-DⅢ)抗体间接ELISA检测方法,为DTMUV血清学监测提供一种检测手段。【方法】利用PCR扩增DTMUV E-DⅢ基因,连接至pET-30a(+)载体构建重组质粒pET-E-DⅢ,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后,SDS-PAGE和Western blotting鉴定表达产物,建立E-DⅢ蛋白抗体间接ELISA检测方法,优化抗原浓度和抗体稀释度、封闭条件、待检血清反应条件、酶标二抗反应条件和显色时间,明确临界值判断标准,评价所建立抗体间接ELISA检测方法的特异性、敏感性和重复性,并对背景清楚的126份血清进行检测。【结果】成功构建含大小约300 bp目的条带的重组质粒pET-E-DⅢ,诱导表达获得分子质量约16 ku的重组蛋白E-DⅢ,且以可溶性和包涵体共存表达,浓度为284.5 mg/L。经筛选确定最佳间接ELISA工作条件为:E-DⅢ蛋白包被浓度为250 ng/mL,待检血清稀释度为1∶80,封闭条件为25℃封闭1.5 h,待检血清反应条件为37℃孵育1 h,酶标二抗为1∶7500稀释,37℃孵育1 h,显色时间为10 min。确定D_(450nm)值≥0.337为阳性,D_(450nm)值≤0.282为阴性。特异性试验结果显示,该方法仅DTMUV阳性血清检测结果为阳性,新城疫病毒、H9亚型禽流感病毒、鸭瘟病毒、鸭肝炎病毒1型和3型阳性血清检测结果均为阴性。敏感性试验结果显示,该方法检测阳性血清的最大稀释度为1∶1280。重复性试验结果显示,批内试验和批间试验变异系数分别为2.11%~5.09%和3.25%~6.95%。126份背景清楚血清检测结果显示,阳性和阴性血清符合率分别为95.83%和96.30%。【结论】本研究表达纯化了DTMUV E-DⅢ蛋白,并成功建立了基于E-DⅢ蛋白的特异性好、敏感性高、重复性良好的抗体间接ELISA检测方法。 展开更多
关键词 鸭坦布苏病毒(DTMUV) E蛋白结构域Ⅲ 原核表达 间接ELISA 抗体
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肠炎沙门氏菌快速检测技术研究进展
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作者 李佳 刘垚 +4 位作者 李珊珊 何坤淼 余秋颖 陈琳琳 王娜 《动物医学进展》 北大核心 2026年第2期103-108,共6页
肠炎沙门氏菌是沙门氏菌属中最重要的血清型之一,主要通过受污染的饮用水、食物等传播,与人类食源性疾病密切相关。该菌不仅对畜牧业造成重大经济损失,还会威胁人类健康,严重病例甚至导致死亡。因此,建立快速检测食品中肠炎沙门氏菌的... 肠炎沙门氏菌是沙门氏菌属中最重要的血清型之一,主要通过受污染的饮用水、食物等传播,与人类食源性疾病密切相关。该菌不仅对畜牧业造成重大经济损失,还会威胁人类健康,严重病例甚至导致死亡。因此,建立快速检测食品中肠炎沙门氏菌的技术对于预防食源性疾病的暴发具有重要意义。论文综述了肠炎沙门氏菌的分子生物学技术、免疫学技术和生物传感器技术等快速检测技术的原理、优势与局限性,探讨了相关领域的研究概况,了解肠炎沙门氏菌快速检测技术的研究现状,为未来肠炎沙门氏菌快速检测技术的开发与应用提供参考。 展开更多
关键词 肠炎沙门氏菌 快速检测 分子生物学技术 免疫学技术 生物传感器技术
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噬菌体调控宿主菌抗生素耐药性与耐受性的机制及其应用前景
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作者 刘文婷 李晓婷 +5 位作者 陈乐乐 陈柳洁 杨江萍 曹胜亮 李玉保 司振书 《动物医学进展》 北大核心 2026年第4期116-121,共6页
噬菌体是地球上最丰富的生物实体,对微生物群落的结构、全球生态系统的生物地球化学循环以及细菌的进化有着深远影响。作为一种感染并在细菌内复制的病毒,噬菌体可用于治疗细菌感染。相比抗生素,噬菌体具有高度特异性、高效裂解且不干... 噬菌体是地球上最丰富的生物实体,对微生物群落的结构、全球生态系统的生物地球化学循环以及细菌的进化有着深远影响。作为一种感染并在细菌内复制的病毒,噬菌体可用于治疗细菌感染。相比抗生素,噬菌体具有高度特异性、高效裂解且不干扰宿主免疫系统的优势,因此成为了抗击细菌感染的研究热点及减抗替代物的候选者。研究表明,裂解性噬菌体能够增强细菌对抗生素的敏感性,噬菌体与抗生素联合可能产生协同作用。然而,噬菌体的溶原性也可能通过转导或其他机制促使抗生素耐药基因(ARGs)的水平转移,进而推动细菌耐药性的传播。此外,噬菌体也可通过促进生物膜形成增强细菌对抗生素的耐受性。论文综述了噬菌体对抗生素敏感性、耐药性及耐受性的影响及相关机制,探讨了其对细菌适应性的影响,分析了其与抗生素的协同杀菌治疗作用。 展开更多
关键词 噬菌体 抗生素 耐药基因 耐受性 协同作用
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