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Cas9和PE介导湖羊骨骼肌卫星细胞MSTN基因敲除的研究 被引量:4
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作者 周磊 李东旭 +3 位作者 冒魏佳 刘孜斐 高雪 万永杰 《南京农业大学学报》 北大核心 2025年第2期419-426,共8页
[目的]本文利用CRISPR/Cas9系统和先导编辑(prime editor, PE)对湖羊骨骼肌卫星细胞中的肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因外显子进行敲除,旨在比较2种技术敲除MSTN基因的效率,以验证新型基因编辑工具PE用于湖羊骨骼肌卫星细胞上的可... [目的]本文利用CRISPR/Cas9系统和先导编辑(prime editor, PE)对湖羊骨骼肌卫星细胞中的肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因外显子进行敲除,旨在比较2种技术敲除MSTN基因的效率,以验证新型基因编辑工具PE用于湖羊骨骼肌卫星细胞上的可行性。[方法]针对湖羊MSTN基因的3个外显子分别设计向导RNA(single guide RNA,sgRNA)以及引导RNA(prime editing guide RNA,pegRNA),构建相应的质粒后将含有Cas9/sgRNA或PE/pegRNA的质粒共同转染湖羊骨骼肌卫星细胞。24 h后观察细胞荧光,48 h后再将细胞消化,使用流式细胞分选仪根据荧光强度筛选出转染成功的强阳性细胞,收集细胞,获得基因组DNA后进行桑格测序,检测2种基因编辑工具对MSTN基因的打靶效率。[结果]成功构建了分别针对湖羊骨骼肌卫星细胞MSTN基因3个外显子敲除的基因编辑工具,质粒测序结果显示序列插入正确;CRISPR/Cas9的编辑效率(65%、88%、91%)显著高于PE的编辑效率(57%、29%、33%),而PE的插入缺失率显著低于CRISPR/Cas9。[结论]在转染效率相近的情况下,CRISPR/Cas9相比于PE对于湖羊骨骼肌卫星细胞MSTN基因的敲除有更高的编辑效率。 展开更多
关键词 基因编辑 CRISPR/Cas9 先导编辑(PE) MSTN 湖羊 骨骼肌卫星细胞
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一起鹿呼吸道综合征相关病原的分析与鉴定 被引量:1
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作者 刘永杰 颜新敏 +6 位作者 刘萍 张伟 兰喜 尚佑军 何继军 尚志锋 徐斌 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第1期18-25,共8页
2023年10月,甘肃一梅花鹿养殖场发生因鹿呼吸道疾病引起死亡的病情。为了解造成此次病情的病原,采集发病鹿的鼻腔深部棉拭子和血液样品、病死鹿组织样品,采用qPCR和RT-qPCR方法,分别对绵羊支原体、牛副流感病毒3型、牛疱疹病毒、牛冠状... 2023年10月,甘肃一梅花鹿养殖场发生因鹿呼吸道疾病引起死亡的病情。为了解造成此次病情的病原,采集发病鹿的鼻腔深部棉拭子和血液样品、病死鹿组织样品,采用qPCR和RT-qPCR方法,分别对绵羊支原体、牛副流感病毒3型、牛疱疹病毒、牛冠状病毒、牛呼吸道合胞体病毒、溶血性曼氏杆菌、多杀性巴氏杆菌、化脓隐秘杆菌8种呼吸道综合征相关病原进行检测。结果显示,共检出4种病原,其中绵羊支原体和化脓隐秘杆菌阳性各3份,多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌阳性各4份,证实该场呼吸道病情由以上4种病原混合感染引起。对病原进行分离鉴定,结果获得1株溶血性曼氏杆菌。药敏试验分析发现,该菌株对头孢吡肟、妥布霉素、卡那霉素、麦迪霉素、哌拉西林敏感,对氨苄西林、头孢唑啉、头孢噻吩、头孢呋辛、头孢西叮、头孢哌酮耐药。研究结果为该鹿场呼吸道疾病防控和针对性治疗提供了参考依据。 展开更多
关键词 鹿呼吸道综合征 病原检测 混合感染 病原分离鉴定 药敏试验
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肠道微生物代谢产物介导芳香烃受体信号通路的研究进展 被引量:1
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作者 王汝都 霍磊 郑永军 《饲料工业》 北大核心 2025年第2期154-160,共7页
芳香烃受体是一种依赖于配体激活的转录因子,属于碱性螺旋-环-螺旋-Per-Arnt-Sim转录因子家族的成员。芳香烃受体能整合来自环境、饮食、微生物和代谢的信号启动配体、细胞及环境依赖的靶基因转录,在调节异生代谢、细胞分化、干细胞维... 芳香烃受体是一种依赖于配体激活的转录因子,属于碱性螺旋-环-螺旋-Per-Arnt-Sim转录因子家族的成员。芳香烃受体能整合来自环境、饮食、微生物和代谢的信号启动配体、细胞及环境依赖的靶基因转录,在调节异生代谢、细胞分化、干细胞维持和免疫方面起着重要作用。肠道微生物代谢产物在芳香烃受体信号通路中起着重要作用,可通过调整饮食调控肠道微生物群结构及其代谢产物含量,从而提高机体的健康状况。文章综述了肠道微生物代谢产物介导芳香烃受体信号通路的研究,包括芳香烃受体的结构、配体及其信号通路的概述,以及肠道微生物代谢产物在芳香烃受体信号通路中的作用。 展开更多
关键词 芳香烃受体 色氨酸代谢物 酚类代谢物 短链脂肪酸 信号通路
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豌豆活性肽对猪流行性腹泻病毒复制的体外抑制作用
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作者 焦文强 徐引弟 +9 位作者 邢广旭 王方雨 赵攀登 郭振华 张家庆 李栋梁 张立宪 黄慧敏 白红杰 雷亚楠 《畜牧与兽医》 北大核心 2025年第10期61-67,共7页
旨在研究豌豆活性肽对猪流行性腹泻病毒(PEDV)复制的体外抑制作用。合成豌豆活性肽KYGPTPVRDGFK,采用CCK-8试验测定该豌豆活性肽在12.5、25、50、100、200μmol/L浓度下对Vero细胞的毒性,将只含DMEM培养基、不含Vero细胞的样品设置为空... 旨在研究豌豆活性肽对猪流行性腹泻病毒(PEDV)复制的体外抑制作用。合成豌豆活性肽KYGPTPVRDGFK,采用CCK-8试验测定该豌豆活性肽在12.5、25、50、100、200μmol/L浓度下对Vero细胞的毒性,将只含DMEM培养基、不含Vero细胞的样品设置为空白对照组,将含DMEM培养基和Vero细胞的样品设置为未添加豌豆活性肽组,将含有Vero细胞和豌豆活性肽的样品设置为添加豌豆活性肽组,通过病毒拷贝数、Western blot、半数组织培养感染量(TCID_(50))测定该豌豆活性肽对PEDV在Vero细胞中复制的抑制作用,进一步采用Western blot分析该豌豆活性肽对PEDV生命周期的作用。结果:与对照组相比,该豌豆活性肽在12.5~200μmol/L浓度范围内对Vero细胞活性无显著性影响(P>0.05);200μmol/L豌豆活性肽处理Vero细胞后,PEDV感染细胞病毒拷贝数、N蛋白灰度值和TCID_(50)值均显著低于对照组(P<0.05);Western blot分析表明,该豌豆活性肽可以促进PEDV吸附和入侵到Vero细胞(P<0.05),而抑制作用主要发生在病毒复制阶段(P<0.05),对于病毒释放无显著作用。Western blot分析表明,该活性肽主要通过抑制内质网氧化还原酶(ERO1a)表达抑制PEDV复制。本研究为新型抗PEDV小分子的研制提供了思路。 展开更多
关键词 豌豆活性肽 抗病毒 吸附 入侵 复制
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唾液乳杆菌的分离鉴定及其对产蛋后期蛋鸡产蛋率、蛋品质和血清生化指标的影响
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作者 陈大伟 刘茵茵 +5 位作者 马丽娜 唐修君 葛庆联 陆俊贤 丁红梅 高玉时 《畜牧与兽医》 北大核心 2025年第6期20-25,共6页
旨在从健康白羽肉鸡肠道中分离鉴定乳杆菌。采用微生物分离培养技术、16S rRNA测序鉴定,牛津杯扩散法检测抑菌能力,并检测其对酸碱和胆盐的耐受能力,最后通过产酸性能进行菌株筛选;动物试验选取500日龄体重、产蛋率相近的华绿1号绿壳蛋... 旨在从健康白羽肉鸡肠道中分离鉴定乳杆菌。采用微生物分离培养技术、16S rRNA测序鉴定,牛津杯扩散法检测抑菌能力,并检测其对酸碱和胆盐的耐受能力,最后通过产酸性能进行菌株筛选;动物试验选取500日龄体重、产蛋率相近的华绿1号绿壳蛋鸡270只,随机分成3组,分别为对照组、低剂量唾液乳杆菌组和高剂量唾液乳杆菌组,探讨了该乳杆菌对产蛋后期蛋鸡产蛋率、蛋品质和血清生化指标的影响,试验期为6周。结果:分离菌是具有较强的产酸性能的革兰阳性菌,结合16S rRNA鉴定结果命名为唾液乳杆菌JQ07,该菌发酵上清液可抑制大肠杆菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌的生长,该菌具有一定的耐酸、耐胆盐的特性;动物试验表明,与对照组比较,高剂量唾液乳杆菌组产蛋率显著升高(P<0.05),添加唾液乳杆菌改善了蛋品质,表现为蛋壳厚度、强度和哈氏单位均有升高趋势;生化指标分析发现,饲喂唾液乳杆菌提高了血清中白蛋白和总蛋白含量,高剂量唾液乳杆菌组血清碱性磷酸酶活性显著升高。综上,源自健康白羽肉鸡肠道的唾液乳杆菌JQ07,通过改善产蛋后期蛋鸡肠道消化吸收功能,提高产蛋率,提升蛋品质,对产蛋后期蛋鸡生产性能有提升作用,可作为益生菌备选菌株。 展开更多
关键词 蛋鸡 唾液乳杆菌 产蛋率 生化指标
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2021—2023年江苏省部分地区鹅源禽致病性大肠杆菌的分离鉴定及生物学特性分析
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作者 郭长明 袁橙 +3 位作者 封琦 杨静静 朱善元 于圣青 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第10期4989-4999,共11页
【目的】了解鹅源禽致病性大肠杆菌(APEC)的分子流行特点及耐药性,为水禽大肠杆菌病的预防与控制提供参考。【方法】从江苏省不同地区采集病鹅病料240份,采用平板划线法分离纯化细菌,通过16S rDNA PCR扩增鉴定阳性菌株,并检测分离株O抗... 【目的】了解鹅源禽致病性大肠杆菌(APEC)的分子流行特点及耐药性,为水禽大肠杆菌病的预防与控制提供参考。【方法】从江苏省不同地区采集病鹅病料240份,采用平板划线法分离纯化细菌,通过16S rDNA PCR扩增鉴定阳性菌株,并检测分离株O抗原血清型、系统进化分群和毒力基因携带情况,通过药敏试验检测其耐药情况,并进行多重耐药分析。【结果】从240份病料中分离获得31株APEC分离株。血清型检测结果显示,O145血清型检出率最高,为19.35%,其次为O1(6.45%)、O78(6.45%)和O2(3.23%)血清型。系统进化分群分析结果显示,分离株属于A、B1、B2和D进化分群的比例分别为38.71%、22.58%、9.68%和29.03%。毒力基因检测结果显示,fimA和hlyF基因检出率均>90%,iroN、ompT、iucD、ECs 3737、ECs 3703基因检出率为60%~90%,iss、tsh、irp 2、cvaC、papC和hlyE基因检出率<50%,eaeA基因未检出,且所有分离株均至少含有4个毒力基因。药敏试验结果显示,分离株对强力霉素、林可霉素、氨苄青霉素和阿莫西林的耐药率均>80%,对新霉素、氟苯尼考、恩诺沙星等5种抗菌药的耐药率达50%~70%,而大观霉素(74.19%)和庆大霉素(54.84%)敏感率较高,14重耐药的菌株占比最高(19.35%),7重以上耐药菌株占64.52%。【结论】江苏省鹅源APEC分离株血清型复杂,携带多种毒力基因,多重耐药严重。研究结果为该地区水禽大肠杆菌病的防治提供了数据支撑。 展开更多
关键词 禽致病性大肠杆菌 血清型 进化分群 毒力基因 耐药
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1株猪源动物联合乳杆菌S7全基因组测序及生物信息学分析
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作者 刘辉 季海峰 +2 位作者 王四新 陈美霞 张董燕 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第1期25-38,共14页
[目的]旨在对1株具有较强耐酸耐胆盐特性的猪源动物联合乳杆菌S7进行全基因组测序及生物信息学分析。[方法]结合三代PacBio RSⅡ和二代Illumina HiSeq 2000测序技术对动物联合乳杆菌S7进行了全基因组测序,在此基础上使用GO、EggNOG、KEG... [目的]旨在对1株具有较强耐酸耐胆盐特性的猪源动物联合乳杆菌S7进行全基因组测序及生物信息学分析。[方法]结合三代PacBio RSⅡ和二代Illumina HiSeq 2000测序技术对动物联合乳杆菌S7进行了全基因组测序,在此基础上使用GO、EggNOG、KEGG、CAZy、VFDB和CARD等数据库注释功能基因,利用TYGS(Type Strain Genome Server)构建系统发育树,并与2株同源模式菌株进行了共线性分析。[结果]动物联合乳杆菌S7的基因组大小为2.03 Mb, GC含量为44.14%,共预测到1 993个编码基因,包含65个tRNA、19个rRNA、35个sRNA、29个持家基因、11个基因组岛、6个前噬菌体、4个CRISPR-Cas、8个插入序列和10个转座子;分别有1 521、1 567、1 185和60个基因在GO、EggNOG、KEGG和CAZy数据库中得到注释;在VFDB和CARD数据库中注释到181个毒力基因和110个耐药基因;另外有14个基因参与耐酸,2个基因参与耐胆盐,22个基因参与黏附和聚集;基因组中还包括与温度应激、氧化应激和细菌素合成等多种与益生功能相关的基因。系统发育树和共线性分析发现,该菌株与模式菌株Ligilactobacillus animalis P38的进化关系最近。[结论]动物联合乳杆菌S7基因组中具有与耐酸、耐胆盐、黏附和聚集、温度应激、氧化应激和细菌素等相关的功能基因,可为菌株在饲料添加剂中的科学应用提供理论依据。 展开更多
关键词 动物联合乳杆菌 全基因组测序 基因注释
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克州地区传统发酵乳制品中抗氧化益生菌的筛选
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作者 周闯 宋俊雅 +6 位作者 张华 许志芹 乔怡然 时璐 王星迪 萨吉代姆·麦麦提 张海彬 《畜牧与兽医》 北大核心 2025年第2期54-61,共8页
旨在从新疆克州传统发酵乳制品中分离出良好抗氧化活性的益生菌菌株。通过耐过氧化氢(H_(2)O_(2))试验、自由基清除或抑制试验,初步筛选出抗氧化活性良好的菌株,建立H_(2)O_(2)诱导的猪小肠上皮细胞系(IPEC-J2)细胞氧化损伤模型,通过比... 旨在从新疆克州传统发酵乳制品中分离出良好抗氧化活性的益生菌菌株。通过耐过氧化氢(H_(2)O_(2))试验、自由基清除或抑制试验,初步筛选出抗氧化活性良好的菌株,建立H_(2)O_(2)诱导的猪小肠上皮细胞系(IPEC-J2)细胞氧化损伤模型,通过比较对照组(正常培养)、模型组(400μmol·L^(-1) H_(2)O_(2)处理3 h)以及JK-8+H_(2)O_(2)组、JK-16+H_(2)O_(2)组、JK-23+H_(2)O_(2)组、JK-24+H_(2)O_(2)组(分别用菌株JK-8、JK-16、JK-23、JK-24无细胞提取物处理6 h后400μmol·L^(-1) H_(2)O_(2)处理3 h)细胞存活状态,筛选出抗氧化效果最好的菌株,进行16S rRNA鉴定。结果:从28株益生菌中筛选出8株H_(2)O_(2)耐受能力强的菌株。复筛发现对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除能力最强的是JK-23,无细胞提取物清除率为64.93%,菌体混悬液清除率为87.10%,显著高于其他菌株的菌体混悬液(P<0.05);抑制羟自由基能力最强的菌体混悬液是JK-16且活力为43.00 U·mL^(-1),最强的无细胞提取物是JK-24且活力为39.59 U·mL^(-1);抗超氧阴离子自由基活力最强的菌体混悬液是JK-23且活力为74.57 U·L^(-1),最强的无细胞提取物是JK-8且活力为118.63 U·L^(-1)。4株菌均能缓解H_(2)O_(2)诱导的IPEC-J2细胞的氧化损伤,JK-23缓解效果最好,细胞存活率显著提高(P<0.05),高达84.59%。经16S rRNA分析,JK-23被鉴定为加纳醋杆菌(Acetobacter ghanensis),具有较强的抗氧化活性,能为饲料和食品加工中天然抗氧化剂的开发和应用提供菌种来源。 展开更多
关键词 克州 传统发酵乳制品 益生菌 抗氧化
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离子交换色谱技术在大鼠粪便肠道菌群分析中的应用研究
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作者 陈灼娟 邱丹腾 +1 位作者 张海玲 刘树滔 《食品与生物技术学报》 北大核心 2025年第2期154-162,共9页
【目的】探究离子交换色谱技术作为大鼠粪便样本预处理方法的可行性。【方法】采集大鼠粪便样本后分别进行3种预处理:对照组(Con组)、离心分离预处理组(Cen组)和色谱分离预处理组(Chr组),比较不同预处理方法下样本的DNA提取质量、16S r... 【目的】探究离子交换色谱技术作为大鼠粪便样本预处理方法的可行性。【方法】采集大鼠粪便样本后分别进行3种预处理:对照组(Con组)、离心分离预处理组(Cen组)和色谱分离预处理组(Chr组),比较不同预处理方法下样本的DNA提取质量、16S rRNA扩增子高通量测序结果及特定菌群的实时荧光定量PCR结果的差异。【结果】Chr组样本提取的DNA质量浓度分别是Cen组和Con组的1.44倍和6.49倍;Con组样本的操作分类单元(OTUs)数量为2630个,而Cen组和Chr组分别增至3220个和3223个。α多样性分析和β多样性分析结果表明,Chr组样本具有更高的微生物多样性,且组内样本间相似度高、重现性好。实时荧光定量PCR结果表明,3组样品的青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis)丰度差异极显著:Chr组样本的青春双歧杆菌丰度最高,其次是Cen组,Con组最低;当菌悬液添加量从100μL增至200μL时,Con组的青春双歧杆菌丰度无显著差异(P>0.05),而Cen组和Chr组分别提升至1.32倍和1.70倍,这表明离子交换色谱能更好地保留粪便样本中的微生物。【结论】离子交换色谱作为大鼠粪便样本的预处理方法,能够显著提高肠道菌群分析的重现性和灵敏度。 展开更多
关键词 离子交换色谱 肠道菌群 高通量测序 微生物多样性 荧光定量PCR
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鸽源血清4型禽腺病毒分离鉴定及免疫原性分析
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作者 吴旭锦 朱小甫 +2 位作者 尹宝英 郑红青 翁茂洋 《山西农业科学》 2025年第3期128-134,共7页
为研究鸽源禽腺病毒病原的致病性及其灭活苗的保护效果,通过采集临床样品,采用LMH细胞接种传代分离病毒、PCR检测及序列分析鉴定病毒,测定分离毒株的半数组织细胞感染量(TCID_(50)),制备油乳剂灭活苗,免疫SPF鸡后每7 d采血定量测定禽腺... 为研究鸽源禽腺病毒病原的致病性及其灭活苗的保护效果,通过采集临床样品,采用LMH细胞接种传代分离病毒、PCR检测及序列分析鉴定病毒,测定分离毒株的半数组织细胞感染量(TCID_(50)),制备油乳剂灭活苗,免疫SPF鸡后每7 d采血定量测定禽腺病毒抗体水平。结果表明,病料接种LMH细胞4代后细胞病变出现规律性,序列测定表明,分离毒株为血清4型禽腺病毒,将获得的病毒命名为XAYB2022株。TCID_(50)测定结果为每毫升10^(-6.1)。发病死亡鸡病理检查肝脏、肾脏、心包以及肺脏均有典型变化。灭活苗免疫结果表明,抗体在第4周达到顶峰,质量浓度为14.266 ng/L,随后抗体质量浓度缓慢下降,16周时抗体质量浓度为5.471 ng/L,此时攻毒抗体仍能够完全保护。综上所述,成功分离到鸽源禽腺病毒流行毒株,该毒株制备的灭活苗显示出良好的保护效果。 展开更多
关键词 鸽源 禽腺病毒 灭活苗 血清4型 抗体
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PRRSV nsp4蛋白的结构和功能研究进展
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作者 李兴玉 于吉锋 +3 位作者 李金海 康玮笠 毛从剑 康润敏 《中国动物检疫》 2025年第10期82-90,共9页
猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)基因组编码至少14种非结构蛋白(nonstructural protein,nsp)。其中,nsp4蛋白具备3C样丝氨酸蛋白酶(3C-like serine proteinase,3CLSP)活性,在病毒... 猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)基因组编码至少14种非结构蛋白(nonstructural protein,nsp)。其中,nsp4蛋白具备3C样丝氨酸蛋白酶(3C-like serine proteinase,3CLSP)活性,在病毒复制、抑制宿主天然免疫反应以及诱导宿主细胞凋亡过程中扮演关键角色。本文系统梳理了nsp4蛋白的最新研究进展,重点探讨了其结构特征及其在抑制宿主天然免疫和促进病毒复制等领域的最新研究成果,旨在为猪繁殖与呼吸综合征防控工作提供创新思路,为新型疫苗及防治药物研发提供理论参考。 展开更多
关键词 猪繁殖和呼吸综合征病毒 nsp4蛋白 3C样丝氨酸蛋白酶 宿主免疫 病毒复制
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化脓隐秘杆菌肝素高亲和蛋白的提取、鉴定及其免疫原性分析
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作者 徐登峰 张素辉 +3 位作者 余远迪 杨欢 赵自亮 沈克飞 《中国生物制品学杂志》 2025年第4期413-417,共5页
目的提取化脓隐秘杆菌肝素高亲和蛋白(Trueperella pyogenes heparin high affinity protein,THHAP),经鉴定后,分析其免疫原性,为探讨化脓隐秘杆菌与肝素间的相互作用提供参考。方法用细菌膜蛋白提取试剂盒提取化脓隐秘杆菌表面蛋白,经... 目的提取化脓隐秘杆菌肝素高亲和蛋白(Trueperella pyogenes heparin high affinity protein,THHAP),经鉴定后,分析其免疫原性,为探讨化脓隐秘杆菌与肝素间的相互作用提供参考。方法用细菌膜蛋白提取试剂盒提取化脓隐秘杆菌表面蛋白,经肝素琼脂糖珠吸附、1 mol/L NaCl溶液洗涤、8 mol/L尿素溶液洗脱后,提取THHAP,经SDS-PAGE和液相色谱-串联质谱(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)法鉴定后,进行生物信息学分析。将THHAP免疫15只雌性昆明小鼠,第2次免疫后2周,5只小鼠采集眶前静脉血,分离血清,10只小鼠经腹腔注射9×10^(8)CFU化脓隐秘杆菌,检测免疫保护效果及抗血清溶血抑制活性。结果THHAP形成1条约占蛋白质总含量98%的主带;检测到1767条溶血素(pyolysin,PLO)多肽,占检测到的多肽数的98.06%(1767/1802)。THHAP由1种细胞壁蛋白、11种分泌蛋白、1种脂蛋白、7种膜蛋白、1种细胞质蛋白构成,其中8种蛋白质可能是具有免疫保护性的抗原。用THHAP免疫的小鼠(9/10)能够抵抗化脓隐秘杆菌感染,其抗血清表现出溶血抑制活性。结论从化脓隐秘杆菌表面蛋白中成功提取了THHAP,PLO是其主要成分,能诱导小鼠产生保护性免疫应答。 展开更多
关键词 化脓隐秘杆菌 肝素高亲和蛋白 免疫原性 溶血素
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腹泻猪群肠道微生物宏基因组分析
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作者 张洁 贾骁晔 +4 位作者 童泽宇 马岩 雷晨莹 原霖 田克恭 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第2期512-521,共10页
[目的]了解腹泻猪群病毒混合感染情况及病毒感染下肠道微生物群落结构变化。[方法]收集73份临床猪腹泻样品,使用单端100 bp读长(SE100)进行宏基因组测序。下机数据经FastQC工具质控获得clean data,利用BWA工具去除宿主序列获得unmapped ... [目的]了解腹泻猪群病毒混合感染情况及病毒感染下肠道微生物群落结构变化。[方法]收集73份临床猪腹泻样品,使用单端100 bp读长(SE100)进行宏基因组测序。下机数据经FastQC工具质控获得clean data,利用BWA工具去除宿主序列获得unmapped data。使用Kraken 2工具将unmapped data比对到动物病原数据库进行物种分类注释并生成物种分类表。使用主成分分析(PCA)对数据降维处理,并使用每百万读数(RPM)进行数据归一化,利用Z-score统计方法生成热图进行差异分析可视化。使用MEGAHIT工具从头拼接病毒序列,使用BWA将unmapped data比对到contigs评估拼接效果,选择高质量contigs在NCBI上比对找到最相似序列,将ummapped data比对到该序列后提取一致序列,作为该病毒序列,使用IQ-TREE工具进行猪流行性腹泻病毒(PEDV)S基因和猪星状病毒(PAstV)ORF1a基因遗传进化分析。[结果]73份猪腹泻样品中检出多种病毒,阳性率分别为:PAstV 26.03%、猪嵴病毒(PKV)20.55%、猪轮状病毒(PoRV)19.18%、PEDV 19.18%、猪札幌病毒(PSaV)6.85%、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)4.11%。混合感染情况复杂,主要为PEDV+PAstV组合,在全部样品中占比为17.81%(13/73),在混合感染样品中占比为30.95%(13/42)。不同病毒感染下肠道微生物结构发生变化,PEDV阳性组样品乳杆菌属(Lactobacillus)相对丰度高于阴性组,PAstV阳性组样品梭菌属(Clostridium)和密螺旋体属(Treponema)相对丰度高于阴性组。拼接得到2条PEDV全基因组序列SE18和SE22,均属于GⅡa谱系,以及4条PAstV ORF1a基因组序列SE18、PE31、PE36和PE70,SE18为PAstV2型,其余3条序列与HAstV-HMO-B株亲缘关系较近。[结论]本研究通过宏基因组学技术揭示了临床腹泻猪群中PAstV和PEDV的高阳性率及混合感染情况,发现PEDV和PAstV感染显著改变了肠道微生物结构,为猪腹泻混合感染的防控提供了重要数据支持。 展开更多
关键词 腹泻 混合感染 宏基因组学
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肺炎克雷伯菌的耐药机制与耐药基因
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作者 蔡扩军 苏睿 徐敏 《中国兽医卫生》 2025年第2期16-20,共5页
肺炎克雷伯菌是一种重要的条件型人兽共患致病菌,广泛存在于自然环境和宿主体内,可引发人体呼吸道、泌尿生殖道等感染。近年来,随着抗生素的广泛使用,动物源和人源肺炎克雷伯菌的耐药性呈不断上升趋势,尤其是多重耐药菌株的出现,给临床... 肺炎克雷伯菌是一种重要的条件型人兽共患致病菌,广泛存在于自然环境和宿主体内,可引发人体呼吸道、泌尿生殖道等感染。近年来,随着抗生素的广泛使用,动物源和人源肺炎克雷伯菌的耐药性呈不断上升趋势,尤其是多重耐药菌株的出现,给临床治疗和公共卫生安全带来了巨大挑战。本研究对肺炎克雷伯菌耐药机制与主要耐药基因进行综述,旨在为临床合理用药及制定有效的防控策略以遏制耐药菌的传播提供理论依据。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯菌 耐药机制 耐药基因
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布鲁氏菌与宿主天然免疫信号通路相互作用的研究进展 被引量:3
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作者 刘爱军 黄晓兵 +1 位作者 张传亮 张红丽 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第4期1561-1574,共14页
布鲁氏菌病(brucellosis)是一种由布鲁氏菌(Brucella)感染引起的全球性人兽共患病。近年来,我国布鲁氏菌病防控形势严峻,对牛羊养殖业和公共卫生安全构成较大威胁。天然免疫是抵御病原微生物感染的第一道防线,对维持机体的稳态至关重要... 布鲁氏菌病(brucellosis)是一种由布鲁氏菌(Brucella)感染引起的全球性人兽共患病。近年来,我国布鲁氏菌病防控形势严峻,对牛羊养殖业和公共卫生安全构成较大威胁。天然免疫是抵御病原微生物感染的第一道防线,对维持机体的稳态至关重要。布鲁氏菌能够通过多种策略调节天然免疫信号通路,从而建立持续性感染,也能引起关节炎、肝炎、脑炎、流产等炎症性疾病。全面深入理解布鲁氏菌与天然免疫信号通路相互作用机制,可以为研发安全高效的疫苗或药物提供新的思路。因此,本文综述了Toll样受体(Toll-like receptors, TLRs)、环鸟苷酸腺苷酸合成酶(cyclic guanosine adenylate synthetase, cGAS)、干扰素基因刺激因子(stimulator of interferon genes, STING)、NOD样受体(NOD-like receptors, NLRs)、AIM2样受体(AIM2-like receptors, ALRs)、C型凝集素受体(C-type lectin receptors, CLRs)和RIG-I样受体(RIG-I-like receptors, RLRs)等天然免疫信号通路在抵御布鲁氏菌感染中的作用及机制,并总结了布鲁氏菌逃逸或劫持这些信号通路的策略。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 免疫逃逸 Toll样受体 环鸟苷酸腺苷酸合成酶 干扰素基因刺激因子 NOD样受体 AIM2样受体 C型凝集素受体 RIG-I样受体
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猪繁殖与呼吸综合征病毒生命周期的研究进展 被引量:2
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作者 刘爱军 张传亮 +1 位作者 黄晓兵 周彩琴 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第3期1027-1041,共15页
猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的以猪呼吸系统疾病和母猪繁殖障碍为主要特征的传染病,给全球... 猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的以猪呼吸系统疾病和母猪繁殖障碍为主要特征的传染病,给全球养猪业造成了巨大的经济损失。然而,PRRS至今仍没有安全有效的疫苗和药物进行防治。全面深入理解PRRSV生命周期可以为PRRS防控提供新的思路。因此,本文在简述PRRSV生命周期的基础上,重点对病毒侵入、复制与转录、翻译及翻译后修饰、组装等过程的研究进展进行综述,以期为PRRSV致病机制及防控研究提供参考。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 入侵 复制和转录 翻译及翻译后修饰 组装
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基于CRISPR-Cas系统的多重耐药菌防治技术研究进展 被引量:1
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作者 周倩 唐梦君 +4 位作者 张小燕 陆俊贤 唐修君 杨星星 高玉时 《生物技术通报》 北大核心 2025年第5期42-51,共10页
动物源细菌耐药性影响动物养殖安全,同时对人类公共卫生和食品安全产生重要威胁。抗生素的滥用加剧了耐药细菌的传播,而新型抗菌药物研发日益困难,动物源细菌耐药污染已成为全球范围内的公共危机,一旦耐药菌从动物向人类扩散,将极大地... 动物源细菌耐药性影响动物养殖安全,同时对人类公共卫生和食品安全产生重要威胁。抗生素的滥用加剧了耐药细菌的传播,而新型抗菌药物研发日益困难,动物源细菌耐药污染已成为全球范围内的公共危机,一旦耐药菌从动物向人类扩散,将极大地威胁人类健康,亟须新的方法和策略应对细菌耐药。CRISPR-Cas(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR-associated)是第三代“基因组定点编辑技术”,该技术能够靶向剪切外源性核酸,保护微生物遗传物质遗传稳定性。与传统的多重耐药菌防治策略相比,CRISPR-Cas系统具备独特的DNA序列的靶向性和灵敏度,通过精准、简便和高效的基因编辑技术,与核酸扩增技术、比色技术等相结合,可以提高灵敏度和检测时效性等性能指标。本文介绍了CRISPR-Cas系统的由来、系统分类、基因编辑的作用机理,在此基础之上,聚焦于该系统在多重耐药菌防治领域的研究进展和应用,在耐药致病菌消除、耐药基因消除以及致病菌诊断检测方面给出案例分析以及目前存在的挑战。总的来说,基于CRISPR-Cas系统的序列特异性抗菌剂能够降低细菌多重耐药性,结合核酸扩增技术和实时监控设备提升检测的精准性和效率,为动物源细菌耐药防控和监测研究提供了新思路。 展开更多
关键词 CRISPR-Cas系统 基因编辑 多重耐药菌 耐药基因 防治技术
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一种基于截短N蛋白的猪丁型冠状病毒抗体ELISA检测方法的建立 被引量:1
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作者 王东升 于瑞明 +5 位作者 张莉萍 白英杰 刘霞 王永录 杜晓华 刘新生 《生物工程学报》 北大核心 2025年第7期2760-2773,共14页
为了建立一种猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)抗体检测方法,将PDCoV CH/XJYN/2016毒株N基因序列插入原核表达质粒载体pColdⅡ中,表达重组蛋白PDCoV-N1和PDCoV-N2,经SDS-PAGE分析和Ni+-NTA纯化后,检测重组原核蛋白PDCoV... 为了建立一种猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)抗体检测方法,将PDCoV CH/XJYN/2016毒株N基因序列插入原核表达质粒载体pColdⅡ中,表达重组蛋白PDCoV-N1和PDCoV-N2,经SDS-PAGE分析和Ni+-NTA纯化后,检测重组原核蛋白PDCoV-N1和PDCoV-N2与猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)阳性血清的反应原性和特异性。同时对重组真核蛋白PDCoV-N1和PDCoV-N2进行Western blotting和间接免疫荧光实验验证分析。最后使用重组原核蛋白PDCoV-N2建立间接ELISA方法,优化反应条件,检测敏感性、特异性及重复性,并对102份临床血清进行了检测。重组原核蛋白PDCoV-N2与PEDV抗血清交叉反应较低。以PDCoV-N2蛋白制备的间接ELISA方法的最优条件为:抗原包被浓度1.25μg/mL,37℃包被1 h,BSA封闭液4℃过夜,血清最佳稀释浓度1:50,37℃孵育1 h,酶标二抗最佳稀释比例为1:80000,37℃孵育1 h,加入四甲基联苯胺(tetramethylbenzidine,TMB)显色液37℃反应10 min。待检样品的S/P值(样本值–阴性对照值)/(阳性对照值–阴性对照值)≥0.45为阳性,S/P值≤0.38为阴性,S/P值介于0.45和0.38之间,则为可疑。检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2,PCV2)、猪传染性胃肠炎病毒(transmissiblegastroenteritis of swine,TGEV)、口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)、非洲猪瘟病毒(african swine fever virus,ASFV)阳性血清,结果显示,其他冠状病毒的S/P值均小于0.38,表明其具有良好的特异性;PDCoV抗血清800倍稀释后仍为阳性;批间和批内重复性实验结果显示,本方法变异系数均小于10%;临床血清样本检测结果显示,该方法与中和实验的符合率为94.12%。本研究基于截短的PDCoV N蛋白,建立了能够检测抗PDCoV特异性IgG抗体的ELISA方法,且该方法敏感、特异、稳定、重复性好,为PDCoV的临床诊断提供了新的方法。 展开更多
关键词 猪δ冠状病毒 截短N蛋白 IGG抗体 间接ELISA
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睡眠嗜组织菌可视化LAMP现场检测方法的建立及初步应用 被引量:1
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作者 李富祥 高华峰 +1 位作者 赵文华 宋建领 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第4期477-483,共7页
为建立睡眠嗜组织菌(Hi.somni)可视化LAMP检测方法,笔者根据Hi.somni 16S rRNA基因的特异性序列设计了1对LAMP内引物和1对LAMP外引物,优化反应体系和反应程序,评价特异性、敏感性及其与PCR方法的符合率,建立了Hi.somni可视化LAMP现场检... 为建立睡眠嗜组织菌(Hi.somni)可视化LAMP检测方法,笔者根据Hi.somni 16S rRNA基因的特异性序列设计了1对LAMP内引物和1对LAMP外引物,优化反应体系和反应程序,评价特异性、敏感性及其与PCR方法的符合率,建立了Hi.somni可视化LAMP现场检测方法。反应程序优化结果显示,本研究建立LAMP方法的最佳反应程序为58℃反应70 min。特异性试验结果显示,该方法能特异性地检测Hi.somni,与溶血性曼氏杆菌、化脓隐秘杆菌、多杀性巴氏杆菌等14种牛、绵羊和山羊常见细菌无交叉反应,特异性较强。敏感性试验结果显示,该方法能检出最低浓度为4.7 copies/μL的重组质粒标准品pMD19T-His,敏感性较高。临床样品检测结果显示,LAMP方法和普通PCR方法检测Hi.somni的阳性率分别为11.49%(10/87)和9.20%(8/87),LAMP方法与PCR方法的总符合率、阳性符合率和阴性符合率分别为97.70%(85/87)、100%(8/8)和97.47%(77/79)。结果表明,本研究建立的LAMP方法为牛、山羊和绵羊Hi.somni感染的快速可视化现场检测提供技术支撑。 展开更多
关键词 睡眠嗜组织菌 环介等温扩增 现场检测 山羊 绵羊
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热休克蛋白100家族ClpL对猪链球菌2型应激和致病性的影响 被引量:1
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作者 祝昊丹 王锐 +4 位作者 周俊明 王丹丹 胡屹屹 倪艳秀 李彬 《微生物学通报》 北大核心 2025年第2期668-678,共11页
【背景】酪蛋白水解蛋白酶L(caseinolytic protease L,ClpL)是热休克蛋白100(heat shock protein 100,HSP100)家族成员,参与多种细胞内生物学过程包括应激耐受反应、长期存活、毒力和抗生素抗性等,在病原菌的致病过程中发挥重要作用。... 【背景】酪蛋白水解蛋白酶L(caseinolytic protease L,ClpL)是热休克蛋白100(heat shock protein 100,HSP100)家族成员,参与多种细胞内生物学过程包括应激耐受反应、长期存活、毒力和抗生素抗性等,在病原菌的致病过程中发挥重要作用。【目的】阐明HSP100/ClpL对猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2)强毒株的应激耐受和毒力的影响。【方法】利用温敏自杀质粒pSET4s构建了SsClpL基因缺失株ΔclpL;利用大肠杆菌-猪链球菌穿梭质粒pSET2构建了互补株CΔclpL;比较亲本株SS2-1、ΔclpL和CΔclpL在各种应激环境(高温、氧化性应激和酸应激)和血液中的生存能力;利用小鼠感染模型和体内竞争试验评价clpL缺失前后细菌的毒力变化。【结果】clpL缺失后,SS2在各种应激环境中的生存能力明显减弱;同时在猪全血中的存活能力也显著降低;对BALB/c小鼠的致病力有所降低,在体内的定殖能力明显降低。【结论】SsClpL与猪链球菌的应激耐受和致病性密切相关。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 热休克蛋白100家族ClpL 应激耐受 致病性
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