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布鲁氏菌与宿主天然免疫信号通路相互作用的研究进展 被引量:3
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作者 刘爱军 黄晓兵 +1 位作者 张传亮 张红丽 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第4期1561-1574,共14页
布鲁氏菌病(brucellosis)是一种由布鲁氏菌(Brucella)感染引起的全球性人兽共患病。近年来,我国布鲁氏菌病防控形势严峻,对牛羊养殖业和公共卫生安全构成较大威胁。天然免疫是抵御病原微生物感染的第一道防线,对维持机体的稳态至关重要... 布鲁氏菌病(brucellosis)是一种由布鲁氏菌(Brucella)感染引起的全球性人兽共患病。近年来,我国布鲁氏菌病防控形势严峻,对牛羊养殖业和公共卫生安全构成较大威胁。天然免疫是抵御病原微生物感染的第一道防线,对维持机体的稳态至关重要。布鲁氏菌能够通过多种策略调节天然免疫信号通路,从而建立持续性感染,也能引起关节炎、肝炎、脑炎、流产等炎症性疾病。全面深入理解布鲁氏菌与天然免疫信号通路相互作用机制,可以为研发安全高效的疫苗或药物提供新的思路。因此,本文综述了Toll样受体(Toll-like receptors, TLRs)、环鸟苷酸腺苷酸合成酶(cyclic guanosine adenylate synthetase, cGAS)、干扰素基因刺激因子(stimulator of interferon genes, STING)、NOD样受体(NOD-like receptors, NLRs)、AIM2样受体(AIM2-like receptors, ALRs)、C型凝集素受体(C-type lectin receptors, CLRs)和RIG-I样受体(RIG-I-like receptors, RLRs)等天然免疫信号通路在抵御布鲁氏菌感染中的作用及机制,并总结了布鲁氏菌逃逸或劫持这些信号通路的策略。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 免疫逃逸 Toll样受体 环鸟苷酸腺苷酸合成酶 干扰素基因刺激因子 NOD样受体 AIM2样受体 C型凝集素受体 RIG-I样受体
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猪繁殖与呼吸综合征病毒生命周期的研究进展 被引量:3
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作者 刘爱军 张传亮 +1 位作者 黄晓兵 周彩琴 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第3期1027-1041,共15页
猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的以猪呼吸系统疾病和母猪繁殖障碍为主要特征的传染病,给全球... 猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的以猪呼吸系统疾病和母猪繁殖障碍为主要特征的传染病,给全球养猪业造成了巨大的经济损失。然而,PRRS至今仍没有安全有效的疫苗和药物进行防治。全面深入理解PRRSV生命周期可以为PRRS防控提供新的思路。因此,本文在简述PRRSV生命周期的基础上,重点对病毒侵入、复制与转录、翻译及翻译后修饰、组装等过程的研究进展进行综述,以期为PRRSV致病机制及防控研究提供参考。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 入侵 复制和转录 翻译及翻译后修饰 组装
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Cas9和PE介导湖羊骨骼肌卫星细胞MSTN基因敲除的研究 被引量:5
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作者 周磊 李东旭 +3 位作者 冒魏佳 刘孜斐 高雪 万永杰 《南京农业大学学报》 北大核心 2025年第2期419-426,共8页
[目的]本文利用CRISPR/Cas9系统和先导编辑(prime editor, PE)对湖羊骨骼肌卫星细胞中的肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因外显子进行敲除,旨在比较2种技术敲除MSTN基因的效率,以验证新型基因编辑工具PE用于湖羊骨骼肌卫星细胞上的可... [目的]本文利用CRISPR/Cas9系统和先导编辑(prime editor, PE)对湖羊骨骼肌卫星细胞中的肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因外显子进行敲除,旨在比较2种技术敲除MSTN基因的效率,以验证新型基因编辑工具PE用于湖羊骨骼肌卫星细胞上的可行性。[方法]针对湖羊MSTN基因的3个外显子分别设计向导RNA(single guide RNA,sgRNA)以及引导RNA(prime editing guide RNA,pegRNA),构建相应的质粒后将含有Cas9/sgRNA或PE/pegRNA的质粒共同转染湖羊骨骼肌卫星细胞。24 h后观察细胞荧光,48 h后再将细胞消化,使用流式细胞分选仪根据荧光强度筛选出转染成功的强阳性细胞,收集细胞,获得基因组DNA后进行桑格测序,检测2种基因编辑工具对MSTN基因的打靶效率。[结果]成功构建了分别针对湖羊骨骼肌卫星细胞MSTN基因3个外显子敲除的基因编辑工具,质粒测序结果显示序列插入正确;CRISPR/Cas9的编辑效率(65%、88%、91%)显著高于PE的编辑效率(57%、29%、33%),而PE的插入缺失率显著低于CRISPR/Cas9。[结论]在转染效率相近的情况下,CRISPR/Cas9相比于PE对于湖羊骨骼肌卫星细胞MSTN基因的敲除有更高的编辑效率。 展开更多
关键词 基因编辑 CRISPR/Cas9 先导编辑(PE) MSTN 湖羊 骨骼肌卫星细胞
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一起鹿呼吸道综合征相关病原的分析与鉴定 被引量:1
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作者 刘永杰 颜新敏 +6 位作者 刘萍 张伟 兰喜 尚佑军 何继军 尚志锋 徐斌 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第1期18-25,共8页
2023年10月,甘肃一梅花鹿养殖场发生因鹿呼吸道疾病引起死亡的病情。为了解造成此次病情的病原,采集发病鹿的鼻腔深部棉拭子和血液样品、病死鹿组织样品,采用qPCR和RT-qPCR方法,分别对绵羊支原体、牛副流感病毒3型、牛疱疹病毒、牛冠状... 2023年10月,甘肃一梅花鹿养殖场发生因鹿呼吸道疾病引起死亡的病情。为了解造成此次病情的病原,采集发病鹿的鼻腔深部棉拭子和血液样品、病死鹿组织样品,采用qPCR和RT-qPCR方法,分别对绵羊支原体、牛副流感病毒3型、牛疱疹病毒、牛冠状病毒、牛呼吸道合胞体病毒、溶血性曼氏杆菌、多杀性巴氏杆菌、化脓隐秘杆菌8种呼吸道综合征相关病原进行检测。结果显示,共检出4种病原,其中绵羊支原体和化脓隐秘杆菌阳性各3份,多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌阳性各4份,证实该场呼吸道病情由以上4种病原混合感染引起。对病原进行分离鉴定,结果获得1株溶血性曼氏杆菌。药敏试验分析发现,该菌株对头孢吡肟、妥布霉素、卡那霉素、麦迪霉素、哌拉西林敏感,对氨苄西林、头孢唑啉、头孢噻吩、头孢呋辛、头孢西叮、头孢哌酮耐药。研究结果为该鹿场呼吸道疾病防控和针对性治疗提供了参考依据。 展开更多
关键词 鹿呼吸道综合征 病原检测 混合感染 病原分离鉴定 药敏试验
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基于CRISPR-Cas系统的多重耐药菌防治技术研究进展 被引量:1
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作者 周倩 唐梦君 +4 位作者 张小燕 陆俊贤 唐修君 杨星星 高玉时 《生物技术通报》 北大核心 2025年第5期42-51,共10页
动物源细菌耐药性影响动物养殖安全,同时对人类公共卫生和食品安全产生重要威胁。抗生素的滥用加剧了耐药细菌的传播,而新型抗菌药物研发日益困难,动物源细菌耐药污染已成为全球范围内的公共危机,一旦耐药菌从动物向人类扩散,将极大地... 动物源细菌耐药性影响动物养殖安全,同时对人类公共卫生和食品安全产生重要威胁。抗生素的滥用加剧了耐药细菌的传播,而新型抗菌药物研发日益困难,动物源细菌耐药污染已成为全球范围内的公共危机,一旦耐药菌从动物向人类扩散,将极大地威胁人类健康,亟须新的方法和策略应对细菌耐药。CRISPR-Cas(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR-associated)是第三代“基因组定点编辑技术”,该技术能够靶向剪切外源性核酸,保护微生物遗传物质遗传稳定性。与传统的多重耐药菌防治策略相比,CRISPR-Cas系统具备独特的DNA序列的靶向性和灵敏度,通过精准、简便和高效的基因编辑技术,与核酸扩增技术、比色技术等相结合,可以提高灵敏度和检测时效性等性能指标。本文介绍了CRISPR-Cas系统的由来、系统分类、基因编辑的作用机理,在此基础之上,聚焦于该系统在多重耐药菌防治领域的研究进展和应用,在耐药致病菌消除、耐药基因消除以及致病菌诊断检测方面给出案例分析以及目前存在的挑战。总的来说,基于CRISPR-Cas系统的序列特异性抗菌剂能够降低细菌多重耐药性,结合核酸扩增技术和实时监控设备提升检测的精准性和效率,为动物源细菌耐药防控和监测研究提供了新思路。 展开更多
关键词 CRISPR-Cas系统 基因编辑 多重耐药菌 耐药基因 防治技术
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一种基于截短N蛋白的猪丁型冠状病毒抗体ELISA检测方法的建立 被引量:1
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作者 王东升 于瑞明 +5 位作者 张莉萍 白英杰 刘霞 王永录 杜晓华 刘新生 《生物工程学报》 北大核心 2025年第7期2760-2773,共14页
为了建立一种猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)抗体检测方法,将PDCoV CH/XJYN/2016毒株N基因序列插入原核表达质粒载体pColdⅡ中,表达重组蛋白PDCoV-N1和PDCoV-N2,经SDS-PAGE分析和Ni+-NTA纯化后,检测重组原核蛋白PDCoV... 为了建立一种猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)抗体检测方法,将PDCoV CH/XJYN/2016毒株N基因序列插入原核表达质粒载体pColdⅡ中,表达重组蛋白PDCoV-N1和PDCoV-N2,经SDS-PAGE分析和Ni+-NTA纯化后,检测重组原核蛋白PDCoV-N1和PDCoV-N2与猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)阳性血清的反应原性和特异性。同时对重组真核蛋白PDCoV-N1和PDCoV-N2进行Western blotting和间接免疫荧光实验验证分析。最后使用重组原核蛋白PDCoV-N2建立间接ELISA方法,优化反应条件,检测敏感性、特异性及重复性,并对102份临床血清进行了检测。重组原核蛋白PDCoV-N2与PEDV抗血清交叉反应较低。以PDCoV-N2蛋白制备的间接ELISA方法的最优条件为:抗原包被浓度1.25μg/mL,37℃包被1 h,BSA封闭液4℃过夜,血清最佳稀释浓度1:50,37℃孵育1 h,酶标二抗最佳稀释比例为1:80000,37℃孵育1 h,加入四甲基联苯胺(tetramethylbenzidine,TMB)显色液37℃反应10 min。待检样品的S/P值(样本值–阴性对照值)/(阳性对照值–阴性对照值)≥0.45为阳性,S/P值≤0.38为阴性,S/P值介于0.45和0.38之间,则为可疑。检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2,PCV2)、猪传染性胃肠炎病毒(transmissiblegastroenteritis of swine,TGEV)、口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)、非洲猪瘟病毒(african swine fever virus,ASFV)阳性血清,结果显示,其他冠状病毒的S/P值均小于0.38,表明其具有良好的特异性;PDCoV抗血清800倍稀释后仍为阳性;批间和批内重复性实验结果显示,本方法变异系数均小于10%;临床血清样本检测结果显示,该方法与中和实验的符合率为94.12%。本研究基于截短的PDCoV N蛋白,建立了能够检测抗PDCoV特异性IgG抗体的ELISA方法,且该方法敏感、特异、稳定、重复性好,为PDCoV的临床诊断提供了新的方法。 展开更多
关键词 猪δ冠状病毒 截短N蛋白 IGG抗体 间接ELISA
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睡眠嗜组织菌可视化LAMP现场检测方法的建立及初步应用 被引量:1
7
作者 李富祥 高华峰 +1 位作者 赵文华 宋建领 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第4期477-483,共7页
为建立睡眠嗜组织菌(Hi.somni)可视化LAMP检测方法,笔者根据Hi.somni 16S rRNA基因的特异性序列设计了1对LAMP内引物和1对LAMP外引物,优化反应体系和反应程序,评价特异性、敏感性及其与PCR方法的符合率,建立了Hi.somni可视化LAMP现场检... 为建立睡眠嗜组织菌(Hi.somni)可视化LAMP检测方法,笔者根据Hi.somni 16S rRNA基因的特异性序列设计了1对LAMP内引物和1对LAMP外引物,优化反应体系和反应程序,评价特异性、敏感性及其与PCR方法的符合率,建立了Hi.somni可视化LAMP现场检测方法。反应程序优化结果显示,本研究建立LAMP方法的最佳反应程序为58℃反应70 min。特异性试验结果显示,该方法能特异性地检测Hi.somni,与溶血性曼氏杆菌、化脓隐秘杆菌、多杀性巴氏杆菌等14种牛、绵羊和山羊常见细菌无交叉反应,特异性较强。敏感性试验结果显示,该方法能检出最低浓度为4.7 copies/μL的重组质粒标准品pMD19T-His,敏感性较高。临床样品检测结果显示,LAMP方法和普通PCR方法检测Hi.somni的阳性率分别为11.49%(10/87)和9.20%(8/87),LAMP方法与PCR方法的总符合率、阳性符合率和阴性符合率分别为97.70%(85/87)、100%(8/8)和97.47%(77/79)。结果表明,本研究建立的LAMP方法为牛、山羊和绵羊Hi.somni感染的快速可视化现场检测提供技术支撑。 展开更多
关键词 睡眠嗜组织菌 环介等温扩增 现场检测 山羊 绵羊
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热休克蛋白100家族ClpL对猪链球菌2型应激和致病性的影响 被引量:1
8
作者 祝昊丹 王锐 +4 位作者 周俊明 王丹丹 胡屹屹 倪艳秀 李彬 《微生物学通报》 北大核心 2025年第2期668-678,共11页
【背景】酪蛋白水解蛋白酶L(caseinolytic protease L,ClpL)是热休克蛋白100(heat shock protein 100,HSP100)家族成员,参与多种细胞内生物学过程包括应激耐受反应、长期存活、毒力和抗生素抗性等,在病原菌的致病过程中发挥重要作用。... 【背景】酪蛋白水解蛋白酶L(caseinolytic protease L,ClpL)是热休克蛋白100(heat shock protein 100,HSP100)家族成员,参与多种细胞内生物学过程包括应激耐受反应、长期存活、毒力和抗生素抗性等,在病原菌的致病过程中发挥重要作用。【目的】阐明HSP100/ClpL对猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2)强毒株的应激耐受和毒力的影响。【方法】利用温敏自杀质粒pSET4s构建了SsClpL基因缺失株ΔclpL;利用大肠杆菌-猪链球菌穿梭质粒pSET2构建了互补株CΔclpL;比较亲本株SS2-1、ΔclpL和CΔclpL在各种应激环境(高温、氧化性应激和酸应激)和血液中的生存能力;利用小鼠感染模型和体内竞争试验评价clpL缺失前后细菌的毒力变化。【结果】clpL缺失后,SS2在各种应激环境中的生存能力明显减弱;同时在猪全血中的存活能力也显著降低;对BALB/c小鼠的致病力有所降低,在体内的定殖能力明显降低。【结论】SsClpL与猪链球菌的应激耐受和致病性密切相关。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 热休克蛋白100家族ClpL 应激耐受 致病性
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山西地区鸽圆环病毒全基因组序列的测定与分析 被引量:3
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作者 张娟 任鹏飞 +3 位作者 李兴 高振 王仲兵 梁立滨 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第1期96-101,共6页
为了解山西地区鸽圆环病毒(PiCV)的遗传演化特征,本研究从山西太原、晋中等地区鸽养殖场采集10份疑似感染PiCV的病料样品经常规处理后进行Cap基因的PCR检测。结果显示,从10份病料样品中检测到1份PiCV阳性样品,将鉴定的PiCV命名为SX01/Sh... 为了解山西地区鸽圆环病毒(PiCV)的遗传演化特征,本研究从山西太原、晋中等地区鸽养殖场采集10份疑似感染PiCV的病料样品经常规处理后进行Cap基因的PCR检测。结果显示,从10份病料样品中检测到1份PiCV阳性样品,将鉴定的PiCV命名为SX01/Shanxi/2023株。通过PCR分段扩增SX01/Shanxi/2023株的全基因组序列并测序,利用SeqMan软件将序列拼接。结果显示,分别获得759bp和1560bp的目的片段,经测序拼接后获得了PiCV全长2038bp的全基因组序列。利用MegAlign软件分析PiCV全基因组序列的同源性;采用IQ-tree软件构建PiCV全基因组的遗传进化树;利用ClusterW软件分析PiCV全基因组编码氨基酸序列的变异;利用Simplot和RDP4软件对SX01/Shanxi/2023株进行重组分析。结果显示:SX01/Shanxi/2023株与国内外PiCV全基因组序列的同源性在84.6%~96.3%,其中与德国PiCVCoCV株同源性最高达95.1%,与我国陕西TF1/SN/2016株的同源性最高达96.3%。进化树结果显示,SX01/Shanxi/2023株与国内陕西TF1/SN/2016株及DS1/GS/2018株处于同一进化分支,亲缘关系较近。氨基酸序列分析结果显示,SX01/Shanxi/2023株Cap蛋白及Rep蛋白氨基酸序列与PiCV参考株相比均发生了部分氨基酸位点的插入、缺失或突变,其中Cap蛋白氨基酸序列变异多于Rep蛋白。重组分析结果显示,该株病毒是由陕西TF1/SN/2016株为主要亲本,陕西WL1/SN/2018株为次要亲本形成的重组病毒,重组断点位于nt520。基于IQ-tree软件构建的重组断裂点位点前后(nt1~nt520、nt521~nt2038)的进化树进一步验证了上述结果。本研究首次在山西地区检测到PiCV,丰富了PiCV分子生物学特征和流行病学研究内容,也为山西地区PiCV感染的防控提供了重要参考依据。 展开更多
关键词 鸽圆环病毒 全基因组 遗传进化分析 重组分析
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信阳地区鹅源大肠杆菌的分离鉴定、系统进化分群与耐药性分析 被引量:1
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作者 李迎晓 方燕子 +2 位作者 武娴 曲哲会 焦凤超 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2025年第1期82-93,共12页
为了解信阳地区鹅源大肠杆菌的系统进化分群、毒力基因携带情况和耐药情况,试验从信阳地区部分养殖户送检的46只疑似大肠杆菌感染病鹅的肝脏、脾脏等组织中进行大肠杆菌的分离、鉴定,并对分离菌株进行系统进化分群、毒力基因检测、耐药... 为了解信阳地区鹅源大肠杆菌的系统进化分群、毒力基因携带情况和耐药情况,试验从信阳地区部分养殖户送检的46只疑似大肠杆菌感染病鹅的肝脏、脾脏等组织中进行大肠杆菌的分离、鉴定,并对分离菌株进行系统进化分群、毒力基因检测、耐药性分析、耐药基因检测。结果表明:共分离到23株大肠杆菌,分别命名为GE1~GE23。23株大肠杆菌在4种系统进化群中均有一定比例的分布,其中A群有3株(GE11、GE12、GE19,占比为13.04%),B1群有3株(GE4、GE15、GE23,占比为13.04%),B2群有9株(GE1、GE2、GE8、GE10、GE14、GE16、GE17、GE20、GE21,占比为39.13%),D群有8株(GE3、GE5、GE6、GE7、GE9、GE13、GE18、GE22,占比为34.78%)。在毒力基因检测中,23株大肠杆菌marA、fimC、fyuA、iroN、iss、hlyF、ompT、iutA和irp2基因的检出率分别为100%、95.65%、52.17%、47.83%、43.48%、39.13%、34.78%、30.43%和17.39%。23株分离菌对阿莫西林/克拉维酸钾的耐药率最高,为65.22%;然后依次为磺胺甲口恶唑/甲氧苄啶、强力霉素、氟苯尼考、多黏毒素B、头孢噻呋和左氧氟沙星、环丙沙星,耐药率分别为56.52%、52.17%、47.83%、34.78%、17.39%和17.39%、8.70%。23株分离菌对亚胺培南的敏感率最高,为100%;然后依次为丁胺卡那、链霉素、新霉素、环丙沙星和左氧氟沙星、头孢噻呋、氟苯尼考、多黏菌素B、强力霉素、磺胺甲口恶唑/甲氧苄啶,敏感率分别为82.61%、82.61%、47.83%、47.83%和47.83%、34.78%、26.09%、21.74%、17.39%、8.70%。23株分离菌中有12株表现为多重耐药,其中6,7耐菌株各有1株,占比为4.35%;4,5耐菌株各有3株,占比为13.04%;3耐菌株有4株,占比为17.39%。在耐药基因检测中,tetA基因的检出率最高,为82.61%;然后依次为folR、sul2、aadA、bla_(TEM)、bla_(CTX-M)、aphA1、clmA、sul3、sul1、aphA2,检出率分别为73.91%、65.22%、56.32%、52.17%、47.83%、47.83%、43.48%、26.09%、13.04%和13.04%。说明信阳地区鹅源大肠杆菌B2群和D群占比较大,携带多种毒力基因和耐药基因,且多表现为多重耐药。 展开更多
关键词 大肠杆菌 系统进化分群 毒力基因 耐药性 耐药基因
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2023年河南省禽流感抗体与病原监测 被引量:1
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作者 刘敏 宋丹 +4 位作者 朱前磊 赵美雪 张利平 刘礼杰 闫若潜 《动物医学进展》 北大核心 2025年第4期131-135,共5页
为有效防范风险,扎实做好河南省高致病性禽流感(HPAI)的监测工作,全面掌握HPAI的感染状况和流行趋势,对全省部分种禽场、商品禽场、活禽交易市场、禽屠宰场、野鸟栖息地等场点开展了HPAIV专项监测,主要通过血凝抑制试验和RT-PCR方法分... 为有效防范风险,扎实做好河南省高致病性禽流感(HPAI)的监测工作,全面掌握HPAI的感染状况和流行趋势,对全省部分种禽场、商品禽场、活禽交易市场、禽屠宰场、野鸟栖息地等场点开展了HPAIV专项监测,主要通过血凝抑制试验和RT-PCR方法分别检测采集样本的免疫抗体水平与病毒核酸。统计结果显示,HPAIV H5亚型Re-13株、H5亚型Re-14株、H7N9亚型Re-4株平均免疫抗体合格率分别为94.12%、96.62%、95.95%,平均场群合格率分别为93.96%、95.97%、95.30%,且种禽场免疫抗体合格率普遍高于商品场,鸡场免疫抗体合格率高于鹅场、鸭场,不同区域的免疫抗体合格率在91.48%~99.29%之间,8个不同疫苗生产厂家生产的疫苗免疫抗体合格率均在90%以上;全省未检出HPAIV H5亚型和H7N9亚型病毒核酸阳性样品,但检测到其他亚型低致病禽流感病毒(LPAIV)的存在,将检测到的禽流感病毒(AIV)核酸样品(91份、8个群体)用荧光RT-PCR试验方法进一步分析得到均为LPAIV H9亚型,阳性样本均来自于鸡,且分布于商品禽场(0.5%)、屠宰场(7.50%)、市场(8.25%)等多种场点类型。表明河南省HPAI整体免疫效果较好,近期省内发生HPAI的风险较低,但仍需关注LPAIV在多个群体间的传播和低水平的流行。 展开更多
关键词 高致病性禽流感 监测 评估 免疫抗体 病毒核酸 亚型
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禽白血病病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与应用 被引量:1
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作者 苏晓月 吕转平 +2 位作者 沈亚安 赵明明 唐思静 《家畜生态学报》 北大核心 2025年第1期64-69,共6页
为了建立一种禽白血病病毒(ALV)抗体检测方法,利用原核表达禽白血病病毒的p27蛋白建立一种检测ALV抗体的间接ELISA方法。结果显示,p27蛋白以包涵体形式表达,Western blot检测显示p27蛋白具有良好的反应活性,以p27蛋白为包被抗原建立的间... 为了建立一种禽白血病病毒(ALV)抗体检测方法,利用原核表达禽白血病病毒的p27蛋白建立一种检测ALV抗体的间接ELISA方法。结果显示,p27蛋白以包涵体形式表达,Western blot检测显示p27蛋白具有良好的反应活性,以p27蛋白为包被抗原建立的间接ELISA方法检测NDV、IBDV、IBV、AIV-H9、ILTV阳性血清均为阴性,最低抗体检出效价为1︰12800,与进口试剂盒的符合率为94.87%,检测临床血清样品的阳性率为14.02%。结果说明该研究建立的间接ELISA方法特异性强、敏感性高、符合性好,可为ALV的检测和净化等提供一种简单快速的方法。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 间接ELISA方法 抗体检测 净化
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2012—2024年我国部分地区禽源沙门氏菌耐药情况研究进展 被引量:2
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作者 罗丹丹 鲁志平 +3 位作者 文永平 邬旭龙 吴翠蓉 俞宁 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第2期178-193,共16页
沙门氏菌是肠杆菌科中具有重要公共卫生意义的人兽共患病原菌,受沙门氏菌污染的禽类制品是人感染沙门氏菌最主要的来源之一。在农业和医疗领域,随着抗菌药物长期使用甚至滥用、沙门氏菌耐药基因的传播以及环境和宿主因素的变化,导致沙... 沙门氏菌是肠杆菌科中具有重要公共卫生意义的人兽共患病原菌,受沙门氏菌污染的禽类制品是人感染沙门氏菌最主要的来源之一。在农业和医疗领域,随着抗菌药物长期使用甚至滥用、沙门氏菌耐药基因的传播以及环境和宿主因素的变化,导致沙门氏菌的耐药性每年都在发生变化。因此,本文就2012—2024年国内外发表的关于我国禽源沙门氏菌耐药性文献作一综述,以期了解沙门氏菌在不同地区不同年份耐药性变化情况,从而为指导临床合理用药和控制疾病流行提供科学依据。 展开更多
关键词 沙门氏菌 禽源 耐药性
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表达GoAstV-2 Cap蛋白的重组FAdV-4的构建与鉴定 被引量:1
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作者 李星雨 李岩 +14 位作者 杨盼盼 刘俊杰 相梦佳 朱玉涛 邱路遥 乔麒龙 张伯顺 卜德新 韩城昊 于春梅 丛雁方 王增 李建丽 王白玉 赵军 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第3期443-448,513,共7页
为构建表达鹅星状病毒基因2型(GoAstV-2)衣壳蛋白(Cap)的重组禽腺病毒4型(FAdV-4),本研究将GoAstV-2的Cap基因表达盒插入到含有FAdV-4感染性克隆p15A-cm-FAdV4-HNJZ中FAdV4基因组的1966 bp自然缺失区,将获得的重组感染性克隆p15A-cm-FAd... 为构建表达鹅星状病毒基因2型(GoAstV-2)衣壳蛋白(Cap)的重组禽腺病毒4型(FAdV-4),本研究将GoAstV-2的Cap基因表达盒插入到含有FAdV-4感染性克隆p15A-cm-FAdV4-HNJZ中FAdV4基因组的1966 bp自然缺失区,将获得的重组感染性克隆p15A-cm-FAdV4-HNJZ-Cap/GoAstV-2利用限制性内切酶线性化后转染鸡肝癌细胞系(chicken hepatoma cell line,LMH),拯救出表达Cap蛋白的重组病毒rFAdV4-Cap/GoAstV-2。将重组病毒在LMH细胞中连续传至第15代,提取重组病毒基因组DNA,用插入位点两侧的鉴定引物进行PCR和利用抗Cap蛋白多克隆抗体进行间接免疫荧光试验和Western blot对重组病毒进行鉴定,同时对重组病毒在LMH细胞中的复制动态进行了研究。结果显示,GoAstV-2的Cap基因能够稳定存在于重组病毒rFAdV4-Cap/GoAstV-2基因组中,而且获得稳定表达;重组病毒具有良好的体外复制能力。本研究所制备的重组病毒rFAdV4-Cap/GoAstV-2为研制防控鹅FAdV-4和GoAstV-2混合感染的新型高效二联灭活疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 鹅星状病毒基因2型 禽病毒4型 CAP蛋白 二联灭活疫苗
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猪源致病性大肠杆菌bla_(CTX-M-123)基因的传播特性和适应性代价研究 被引量:1
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作者 李琼 胡紫微 +4 位作者 金钢铸 陈峥 刘伟成 韩生义 许春燕 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第6期2884-2892,共9页
【目的】阐明猪源大肠杆菌中bla_(CTX-M-123)基因的位置,同时探究其携带的移动遗传元件的传播能力与适应性代价。【方法】通过化学转化试验评估bla_(CTX-M-123)基因的种内转移能力,并利用全基因组测序确定bla_(CTX-M-123)基因的位置,分... 【目的】阐明猪源大肠杆菌中bla_(CTX-M-123)基因的位置,同时探究其携带的移动遗传元件的传播能力与适应性代价。【方法】通过化学转化试验评估bla_(CTX-M-123)基因的种内转移能力,并利用全基因组测序确定bla_(CTX-M-123)基因的位置,分析大肠杆菌中bla_(CTX-M-123)基因的遗传环境;使用微量肉汤稀释法测定大肠杆菌911菌株、大肠杆菌DH5α感受态细胞及转化子的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)。此外,通过竞争试验评估携带bla_(CTX-M-123)基因质粒的适应性代价,并使用大蜡螟感染模型进行致病性评价。【结果】通过转化试验得到了1株转化子DH5α-pL1,其对头孢噻呋的MIC值为256μg/mL,生长速率高于受体菌大肠杆菌DH5α感受态细胞,但低于野生型菌株911。DH5α-pL1在培养7 d后,质粒留存率逐渐下降,培养24 h后表现出一定的适应性代价,相对竞争指数<1。致病性试验结果显示,对照组及大肠杆菌DH5α感受态细胞组大蜡螟幼虫存活率为100%;注射菌株911和DH5α-pL1 120 h后,幼虫存活率分别为50%和70%。【结论】携带bla_(CTX-M-123)基因的质粒可在种内转移并介导转化子耐药,且该质粒的稳定性弱,具有一定的适应性代价。此外,携带bla_(CTX-M-123)基因的质粒具有增强受体菌致病力的作用,增加了感染的几率和治疗难度。研究结果为细菌的耐药机制研究和防控提供理论依据。 展开更多
关键词 大肠杆菌 bla_(CTX-M-123)基因 转化试验 适应性代价 致病性
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抗猪流行性腹泻病毒活性物质及其作用机制研究进展 被引量:1
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作者 刘宇 苏思思 +3 位作者 汪子骞 吴佳壕 陈红伟 杨洪早 《生物工程学报》 北大核心 2025年第7期2519-2533,共15页
猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是一种能引起猪流行性腹泻的肠道冠状病毒,可致仔猪腹泻、呕吐、消瘦甚至死亡。由于PEDV毒株类型多样,传统疫苗难以持续有效防治。本文综述了活性物质调控胞内信号通路及病毒蛋... 猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是一种能引起猪流行性腹泻的肠道冠状病毒,可致仔猪腹泻、呕吐、消瘦甚至死亡。由于PEDV毒株类型多样,传统疫苗难以持续有效防治。本文综述了活性物质调控胞内信号通路及病毒蛋白、微生物代谢产物提高宿主免疫机能等抗PEDV策略及其作用机理,并强调了PEDV耐药性产生和PEDV突破种间屏障可能带来的危害,为新型抗病毒药物或疫苗研制提供了参考。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 混合感染 信号通路 病毒蛋白 微生物代谢产物
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肠道微生物代谢产物介导芳香烃受体信号通路的研究进展 被引量:1
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作者 王汝都 霍磊 郑永军 《饲料工业》 北大核心 2025年第2期154-160,共7页
芳香烃受体是一种依赖于配体激活的转录因子,属于碱性螺旋-环-螺旋-Per-Arnt-Sim转录因子家族的成员。芳香烃受体能整合来自环境、饮食、微生物和代谢的信号启动配体、细胞及环境依赖的靶基因转录,在调节异生代谢、细胞分化、干细胞维... 芳香烃受体是一种依赖于配体激活的转录因子,属于碱性螺旋-环-螺旋-Per-Arnt-Sim转录因子家族的成员。芳香烃受体能整合来自环境、饮食、微生物和代谢的信号启动配体、细胞及环境依赖的靶基因转录,在调节异生代谢、细胞分化、干细胞维持和免疫方面起着重要作用。肠道微生物代谢产物在芳香烃受体信号通路中起着重要作用,可通过调整饮食调控肠道微生物群结构及其代谢产物含量,从而提高机体的健康状况。文章综述了肠道微生物代谢产物介导芳香烃受体信号通路的研究,包括芳香烃受体的结构、配体及其信号通路的概述,以及肠道微生物代谢产物在芳香烃受体信号通路中的作用。 展开更多
关键词 芳香烃受体 色氨酸代谢物 酚类代谢物 短链脂肪酸 信号通路
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牦牛源大肠杆菌OmpA外膜蛋白的原核表达及免疫效果评价 被引量:1
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作者 章石楠 韩生义 +6 位作者 石田 李淑萍 胡国元 高瑞 田嘉琪 周雯雯 李生庆 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第3期458-465,472,共9页
用生物信息学软件将本实验室分离的Escherichia coli QML2206-1(E.coli QML2206-1)株与不同菌种的外膜蛋白A(OmpA)蛋白氨基酸序列进行同源性分析,并对OmpA蛋白进行理化性质分析、跨膜结构和信号肽预测、B细胞抗原表位预测、二级和三级... 用生物信息学软件将本实验室分离的Escherichia coli QML2206-1(E.coli QML2206-1)株与不同菌种的外膜蛋白A(OmpA)蛋白氨基酸序列进行同源性分析,并对OmpA蛋白进行理化性质分析、跨膜结构和信号肽预测、B细胞抗原表位预测、二级和三级结构预测;将OmpA基因片段与pET-32a载体连接,构建原核表达载体,在BL21(DE3)进行原核表达并优化表达条件后用镍柱亲和纯化系统进行纯化;将纯化后的重组蛋白与弗氏佐剂充分混匀后免疫小鼠,利用ELISA方法检测小鼠特异性IgG抗体水平及小鼠血清中细胞因子CD4、CD8、IL-4的表达水平,并通过小鼠攻毒保护试验评价其免疫保护效果。结果显示,OmpA蛋白为亲水性蛋白,无跨膜结构域,二级结构主要由无规则卷曲(47.98%)和α-螺旋(29.77%)构成,有12个能与B细胞产生的抗体结合的抗原表位。经原核表达成功获得相对分子质量约为55 kDa的重组蛋白OmpA,且在37℃、IPTG浓度0.0004 mol/L诱导6 h的表达量最高。重组蛋白免疫小鼠后血清特异性IgG抗体效价最高可达1∶32000;与对照组相比,免疫小鼠血清中CD4、CD8及IL-4的表达水平均有升高。用最小致死量(minimum lethal dose,MLD)、2倍最小致死量(2MLD)攻毒后小鼠存活率分别为80%、40%。结果表明,OmpA重组蛋白具有良好的抗原性和一定的免疫保护作用。该研究为下一步基于OmpA蛋白的牦牛适用性E.coli基因工程亚单位疫苗的研制提供了技术依据。 展开更多
关键词 牦牛源大肠杆菌 OmpA蛋白 原核表达 生物信息学分析 免疫保护效果
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1株羊源D型产气荚膜梭菌的分离鉴定及耐药性分析 被引量:3
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作者 李娜 刘重阳 +4 位作者 张靖靖 玛丽雅其其格 珠娜 陆斌 海鹰 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第3期1352-1359,共8页
【目的】D型产气荚膜梭菌是一种革兰阳性厌氧菌,可引起山羊、绵羊和牛等动物发生肠毒血症,对反刍动物的健康造成巨大的影响。本研究旨在了解内蒙古乌审旗地区D型产气荚膜梭菌耐药情况,为该地区由D型产气荚膜梭菌引起的疾病的治疗提供科... 【目的】D型产气荚膜梭菌是一种革兰阳性厌氧菌,可引起山羊、绵羊和牛等动物发生肠毒血症,对反刍动物的健康造成巨大的影响。本研究旨在了解内蒙古乌审旗地区D型产气荚膜梭菌耐药情况,为该地区由D型产气荚膜梭菌引起的疾病的治疗提供科学依据。【方法】通过培养特性及革兰染色镜检对分离菌进行初步鉴定,通过16S rRNA基因序列比对和毒素基因PCR扩增对可疑菌株进一步鉴定,并采用K-B纸片法进行药敏试验,PCR检测分离菌耐药基因。【结果】分离菌在TSC培养基中长出黑色的圆形菌落,革兰染色镜检可见菌体粗短,成单个或双个排列的革兰阳性直杆菌,形态学及镜检结果符合产气荚膜梭菌特点。16S rRNA基因序列比对结果显示,分离菌与NCBI数据库中已公布的产气荚膜梭菌16S rRNA基因序列相似性均>99%,鉴定该菌株为产气荚膜梭菌。毒素基因PCR检测扩增出cpa和etx基因,表明该菌株为D型产气荚膜梭菌。药敏试验结果显示,分离菌对头孢曲松、头孢呋新、庆大霉素等16种抗菌药耐药。耐药基因检测结果显示,分离菌检出bla CTX-M、bla SHV、qnrA和aac(6′)-Ⅰb-cr 4种耐药基因,未检出bla TEM和qnrS 2种耐药基因。【结论】本试验成功从绵羊体内分离出1株D型产气荚膜梭菌,该菌株存在多重耐药,该研究结果为D型产气荚膜梭菌感染绵羊的诊断、流行病学调查和治疗提供了参考依据。 展开更多
关键词 绵羊 D型产气荚膜梭菌 分离鉴定 耐药性
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脱氢表雄酮对饲喂高脂饲料肉鸡脂肪沉积、血脂、抗氧化能力和血管内皮功能的影响 被引量:2
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作者 姜锦鹏 李磊 闻爱友 《安徽科技学院学报》 2025年第1期1-8,共8页
为探讨脱氢表雄酮(Dehydroepiandrosterone,DHEA)对饲喂高脂饲料肉鸡脂质代谢、抗氧化和血管内皮功能的影响,将200只15日龄青脚麻鸡随机分为5组,其中对照组(CON)饲喂基础饲料,高脂饲料组(High Fat Diet,HFD)、DHEA低剂量干预组(HFD+D5)... 为探讨脱氢表雄酮(Dehydroepiandrosterone,DHEA)对饲喂高脂饲料肉鸡脂质代谢、抗氧化和血管内皮功能的影响,将200只15日龄青脚麻鸡随机分为5组,其中对照组(CON)饲喂基础饲料,高脂饲料组(High Fat Diet,HFD)、DHEA低剂量干预组(HFD+D5)、DHEA中剂量干预组(HFD+D15)、DHEA高剂量干预组(HFD+D45)分别饲喂添加0、5、15、45 mg/kg DHEA的高脂饲料。于试验第2、4周,测定肌间脂肪宽、皮下脂肪厚、皮脂质量、腹脂质量,计算腹脂率、皮脂率;采集血样检测激素和生化指标;采集肝脏组织检测抗氧化功能和肝脂酶(Hepatic Lipase,HL)活性。与对照组相比,高脂饲料显著增加肉鸡的腹脂质量、腹脂率、皮脂率及血液甘油三酯(Triglyceride,TG)、脂蛋白a(Lipoprotein a,LP(a))、血管紧张素Ⅱ(AngiotensimⅡ,AngⅡ)水平,但降低血清高密度脂蛋白(High Density Lipoprotein,HDL)、T_(3)、T_(4)、FT_(3)、FT_(4)和一氧化氮(NO)水平;同时,高脂饲料显著提高肝脏丙二醛(Malondiadehyde,MDA)含量,但降低肝脏(HL)、总超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione Peroxidase,GSH-Px)活性。与HFD组相比,DHEA处理对饲喂高脂饲料肉鸡的体脂沉积及血清中TG、TC、LP(a)含量均有降低趋势;同时,DHEA能够升高血清T_(3)、T_(4)、FT_(3)、FT_(4)、NO水平及肝脏HL、SOD、GSH-Px活性,并降低肝脏MDA含量和血浆AngⅡ水平。补充DHEA对高脂饲料引发的肉鸡脂代谢紊乱、氧化应激和内皮功能障碍有一定缓解作用,其作用机理可能是通过调节血清甲状腺激素水平,增强肝脏HL活性,从而加速脂肪的分解,抑制脂肪沉积,继而减弱氧化应激,并改善血管内皮功能。 展开更多
关键词 肉鸡 高脂饲料 脂肪代谢 氧化应激 内皮功能 脱氢表雄酮
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