期刊文献+
共找到75,350篇文章
< 1 2 250 >
每页显示 20 50 100
猪FoxP3、IL-10双重实时荧光定量PCR方法建立及应用
1
作者 王艳萍 徐倩倩 +5 位作者 孟卫芹 王金良 魏凤 董林 刘吉山 谢金文 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2025年第1期66-73,共8页
旨在建立双重实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法,对叉头框蛋白P3(FoxP3)、白细胞介素10(IL-10)的RNA转录进行定量检测。设计并合成FoxP3、IL-10的扩增引物和荧光探针,优化引物浓度、退火温度,建立RT-qPCR方法,检测猪圆环病毒2型(PCV2)感染... 旨在建立双重实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法,对叉头框蛋白P3(FoxP3)、白细胞介素10(IL-10)的RNA转录进行定量检测。设计并合成FoxP3、IL-10的扩增引物和荧光探针,优化引物浓度、退火温度,建立RT-qPCR方法,检测猪圆环病毒2型(PCV2)感染外周血调节性T淋巴细胞(Treg)和免疫器官中FoxP3和IL-10的mRNA含量;根据Western blot检测蛋白表达验证方法的可靠性。结果:建立的RT-qPCR方法呈现“S”型扩增曲线,相关系数R^(2)≥0.99;转化生长因子-β(TGF-β)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素17(IL-17)等基因的核酸模板和阴性对照均无扩增曲线,最低检测浓度10 copies/μL,批内、批间变异系数分别为0.87%、1.84%;PCV2攻毒组外周血Treg细胞中FoxP3和IL-10的mRNA含量均出现明显升高,FoxP3的mRNA含量在攻毒第14天到达峰值,IL-10的mRNA含量在攻毒第10天到达峰值,PCV2感染后导致胸腺、淋巴结和脾脏中FoxP3和IL-10转录水平升高;Western blot检测表明,FoxP3蛋白表达量在攻毒第14天、第28天,IL-10在攻毒第10天和第14天显著高于对照组,与RT-qPCR结果一致。综上,本研究建立的猪FoxP3、IL-10双重RT-qPCR方法具有特异、敏感、检测稳定可靠的特点,对于评价猪体的免疫应答水平和机体免疫稳态具有重要意义。 展开更多
关键词 FOXP3 IL-10 实时荧光定量PCR Treg活化 免疫负调控
在线阅读 下载PDF
基于Sf9细胞培养表达鸭短喙侏儒综合征病毒VP2蛋白的工艺优化
2
作者 甘辉群 王永娟 +3 位作者 吴双 傅宏庆 谭菊 刘明生 《畜牧与兽医》 北大核心 2025年第9期87-92,共6页
旨在获得高表达的鸭短喙侏儒综合征病毒VP2抗原蛋白。本试验通过对接毒与表达工艺中pH值、Sf9细胞密度、接毒量、收获时间、搅拌转速和溶氧值等参数进行优化,考察VP2重组杆状病毒的增殖情况,收获病毒液,测定病毒含量变化;同时,对培养物... 旨在获得高表达的鸭短喙侏儒综合征病毒VP2抗原蛋白。本试验通过对接毒与表达工艺中pH值、Sf9细胞密度、接毒量、收获时间、搅拌转速和溶氧值等参数进行优化,考察VP2重组杆状病毒的增殖情况,收获病毒液,测定病毒含量变化;同时,对培养物进行VP2蛋白SDS-PAGE和Western blot分析,并采用SDS-PAGE灰度扫描测定蛋白含量。结果:在pH值维持6.8~7.2,接毒密度为1.0×10^(6)~2.0×10^(6)个/mL,感染复数(MOI)值为0.01~0.1,收获时间为接种后5~7 d,转速100~140 r/min,溶氧度控制在40%~80%时,重组杆状病毒生长较好,含量较高,达10^(7.7)~10^(8.5) TCID_(50)/mL;均出现约65 kDa目的条带,蛋白表达量基本一致,达57μg/mL以上。根据优化的工艺参数在5 L反应器进行5批抗原生产验证,VP2蛋白表达量达58~63μg/mL,蛋白生产稳定,表达量高。 展开更多
关键词 鸭短喙侏儒综合征 重组杆状病毒 SF9细胞 接毒工艺 表达生产工艺
在线阅读 下载PDF
鸭短喙矮小综合征病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与初步应用
3
作者 朱小丽 王劭 +5 位作者 董慧 程晓霞 江丹丹 肖世峰 陈少莺 陈仕龙 《福建农业学报》 北大核心 2025年第7期649-655,共7页
【目的】建立一种快速检测鸭短喙矮小综合征病毒(Short beak and dwarfism syndrome virus,SBDSV)抗体的血清学方法。【方法】以蔗糖密度梯度离心纯化的SBDSV流行株M15,以此灭活全病毒作为固相包被抗原,通过系统性优化反应参数,构建一... 【目的】建立一种快速检测鸭短喙矮小综合征病毒(Short beak and dwarfism syndrome virus,SBDSV)抗体的血清学方法。【方法】以蔗糖密度梯度离心纯化的SBDSV流行株M15,以此灭活全病毒作为固相包被抗原,通过系统性优化反应参数,构建一种高特异性的间接ELISA检测方法,用于鸭短喙矮小综合征病毒(SBDSV)血清抗体的定性分析。【结果】建立的间接ELISA检测方法的最佳反应条件为:抗原包被浓度0.1 mg·mL^(−1),37℃孵育2 h后再4℃过夜包被;1%BSA 37℃封闭2 h;血清样本1∶200稀释;阴阳性临界值为0.3214。该检测方法特异性好,与其他常见水禽病毒阳性血清均无交叉反应;敏感性高,阳性高免血清(LPAI效价2^(8))1∶204800倍稀释时检测结果仍为阳性;批内、批间重复性好,变异系数均小于6%;利用所建立的ELISA方法对70份SBDSV疑似感染病鸭的血清样品进行检测,检测结果与LPAI检测结果符合率为90%。对福建省648份临床送检1日龄雏鸭血清样品进行检测,抗体阳性率约为48.30%,显示福建省养鸭场存在不同程度的SBDSV感染。【结论】本研究建立的SBDSV血清抗体间接ELISA检测方法,该方法特异性高,适合大规模血清学检测,可为监测SBDSV在我国的流行情况以及雏鸭母源抗体水平评价提供技术支撑。 展开更多
关键词 鸭短喙矮小综合征 间接ELISA 抗体检测
在线阅读 下载PDF
一株猪源肠出血性大肠杆菌O157:H7的全基因组测序及毒力和耐药基因分析
4
作者 周艳 万启旸 +3 位作者 朱树娇 张辉 包红朵 王冉 《广东农业科学》 2025年第2期58-70,共13页
[目的]分析一株猪源肠出血性大肠杆菌O157:H7菌株EO157-1的全基因组信息及其毒力和耐药基因。[方法]基于Nanopore三代测序技术平台和Illumina二代测序技术平台对猪源肠出血性大肠杆菌O157:H7菌株EO157-1进行全基因组测序,利用Prokka软... [目的]分析一株猪源肠出血性大肠杆菌O157:H7菌株EO157-1的全基因组信息及其毒力和耐药基因。[方法]基于Nanopore三代测序技术平台和Illumina二代测序技术平台对猪源肠出血性大肠杆菌O157:H7菌株EO157-1进行全基因组测序,利用Prokka软件预测基因组序列信息,并通过UniProt、KEGG、KEGG Pathway、GO、Pfam、COG、TIGERfams、RefSeq和NR数据库进行基因预测和注释,再利用碳水化合物酶(CAZy)、病原与宿主互作(PHI)、毒力因子(VFDB)和耐药基因(CARD)数据库进行基因功能分析。[结果]肠出血性大肠杆菌O157:H7菌株EO157-1基因组大小为5404747 bp,GC含量为50.49%,该菌株含有3个质粒;共预测到5674个蛋白质编码基因,包含22个rRNA(7个23S rRNA、7个16S rRNA、8个5S rRNA)、1个tmRNA、102个tRNA基因和282个小RNA分子;预测出9个CRISPR序列、273个重复序列;KEGG、KEGG Pathway、NR、UniProt、GO、COG、Pfam、RefSeq和TIGERfams数据库分别注释到1712、1693、5265、5264、4029、4294、4688、5252和2741个基因;CAZy数据库注释筛选出100个基因,PHI数据库注释筛选出2354个基因,VFDB数据库注释筛选出的毒力基因主要包括菌毛、鞭毛、Ⅱ型分泌系统、Ⅲ型分泌系统、Ⅵ型分泌系统、紧密黏附素、铁转运系统、脂多糖、荚膜、侵袭素和外毒素;CARD数据库注释筛选出的耐药基因与多重耐药外排泵、大环内酯类抗生素、四环素、多粘菌素、杆菌肽、氨基糖苷类抗生素、肽类抗生素及甲硝唑相关。[结论]获得一株肠出血性大肠杆菌O157:H7菌株EO157-1全基因组序列,序列分析表明该菌株携带大量毒力基因与耐药基因。 展开更多
关键词 肠出血性大肠杆菌O157∶H7 食源性人兽共患病 全基因组测序 基因 功能注释
在线阅读 下载PDF
一例亚洲象亲内皮疱疹病毒感染的临床与分子诊断
5
作者 徐春忠 仉伟 翟俊琼 《畜牧与兽医》 北大核心 2025年第9期117-125,共9页
旨在弄清一例幼年亚洲象突然死亡的病因。对疑似感染象亲内皮疱疹病毒(EEHV)的亚洲象进行病毒检测,通过亚洲象临床症状观察、组织病理学检查、高通量病毒组学测序以及PCR验证等方法对死亡亚洲象进行病原微生物鉴定,并设计引物对EEHV进... 旨在弄清一例幼年亚洲象突然死亡的病因。对疑似感染象亲内皮疱疹病毒(EEHV)的亚洲象进行病毒检测,通过亚洲象临床症状观察、组织病理学检查、高通量病毒组学测序以及PCR验证等方法对死亡亚洲象进行病原微生物鉴定,并设计引物对EEHV进行囊膜糖蛋白gB的基因进行扩增、测序,应用MegAlign及MEGA7软件对本次获得的EEHV gB基因与GenBank上公布的EEHV gB基因进行序列比对分析;同时对EEHV全基因组进行序列分析。结果:死亡亚洲象组织剖检及病理变化与EEHV感染症状相吻合,PCR检测结果显示亚洲象感染EEHV;gB基因同源性分析表明该毒株与Kimba NAP23(KC618527.1)相似性最高,为99.4%。通过高通量测序,组装出177219 bp的基因组,与EEHV 1Raman基因组结构一致,共包含113个CDS区域,与EEHV-1A毒株(OP169006)的全基因组相似性最高,为94.8%。综上,本研究从致死性感染的亚洲象中鉴定到1株EEHV,为EEHV-1A型,对gB等糖蛋白基因进行分析,明确了EEHV的遗传变异情况,为该病的防控提供了参考资料。 展开更多
关键词 象亲内皮疱疹病毒感染 亚洲象 GB基因 临床诊断 分子诊断
在线阅读 下载PDF
2023年苏南地区水禽源沙门菌的检测及耐药性分析
6
作者 王丽群 许诺 +4 位作者 吴菁菁 张凯 张智骕 邱冬 许志芹 《畜牧与兽医》 北大核心 2025年第9期73-80,共8页
旨在调查江苏南部地区水禽养殖场中沙门菌的感染情况及其耐药特性,揭示其主要血清型和序列型(ST)特征,并分析广泛耐药(XDR)菌株的耐药基因分布。采集苏南地区水禽样本,采用细菌分离培养、PCR鉴定、血清型鉴定和多位点序列分型(MLST)对... 旨在调查江苏南部地区水禽养殖场中沙门菌的感染情况及其耐药特性,揭示其主要血清型和序列型(ST)特征,并分析广泛耐药(XDR)菌株的耐药基因分布。采集苏南地区水禽样本,采用细菌分离培养、PCR鉴定、血清型鉴定和多位点序列分型(MLST)对沙门菌进行鉴定,采用K-B纸片法进行耐药性检测,并对XDR菌株进行全基因组检测。结果:在257份水禽样本中,分离到30株沙门菌,阳性率为11.67%。血清型鉴定显示包含27株鼠伤寒、2株肠炎和1株纽波特沙门菌,ST分型包括19株ST19、4株ST2441、2株ST1546、2株ST40、2株ST34和1株ST68;30株细菌包含9株多重耐药(MDR)和3株XDR菌株,耐药性检测结果显示出对β-内酰胺类的耐药性较高。3株XDR菌株同时携带针对氨基糖苷类、β-内酰胺类、氯霉素类、喹诺酮类、四环素类和磺胺类抗生素的多种耐药基因。综上,苏南地区水禽源沙门菌显示出高水平的耐药性和多样的基因型分布。 展开更多
关键词 水禽沙门菌 MLST 耐药性 全基因组测序
在线阅读 下载PDF
布鲁氏菌与宿主天然免疫信号通路相互作用的研究进展 被引量:3
7
作者 刘爱军 黄晓兵 +1 位作者 张传亮 张红丽 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第4期1561-1574,共14页
布鲁氏菌病(brucellosis)是一种由布鲁氏菌(Brucella)感染引起的全球性人兽共患病。近年来,我国布鲁氏菌病防控形势严峻,对牛羊养殖业和公共卫生安全构成较大威胁。天然免疫是抵御病原微生物感染的第一道防线,对维持机体的稳态至关重要... 布鲁氏菌病(brucellosis)是一种由布鲁氏菌(Brucella)感染引起的全球性人兽共患病。近年来,我国布鲁氏菌病防控形势严峻,对牛羊养殖业和公共卫生安全构成较大威胁。天然免疫是抵御病原微生物感染的第一道防线,对维持机体的稳态至关重要。布鲁氏菌能够通过多种策略调节天然免疫信号通路,从而建立持续性感染,也能引起关节炎、肝炎、脑炎、流产等炎症性疾病。全面深入理解布鲁氏菌与天然免疫信号通路相互作用机制,可以为研发安全高效的疫苗或药物提供新的思路。因此,本文综述了Toll样受体(Toll-like receptors, TLRs)、环鸟苷酸腺苷酸合成酶(cyclic guanosine adenylate synthetase, cGAS)、干扰素基因刺激因子(stimulator of interferon genes, STING)、NOD样受体(NOD-like receptors, NLRs)、AIM2样受体(AIM2-like receptors, ALRs)、C型凝集素受体(C-type lectin receptors, CLRs)和RIG-I样受体(RIG-I-like receptors, RLRs)等天然免疫信号通路在抵御布鲁氏菌感染中的作用及机制,并总结了布鲁氏菌逃逸或劫持这些信号通路的策略。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 免疫逃逸 Toll样受体 环鸟苷酸腺苷酸合成酶 干扰素基因刺激因子 NOD样受体 AIM2样受体 C型凝集素受体 RIG-I样受体
在线阅读 下载PDF
猪繁殖与呼吸综合征病毒生命周期的研究进展 被引量:2
8
作者 刘爱军 张传亮 +1 位作者 黄晓兵 周彩琴 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第3期1027-1041,共15页
猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的以猪呼吸系统疾病和母猪繁殖障碍为主要特征的传染病,给全球... 猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的以猪呼吸系统疾病和母猪繁殖障碍为主要特征的传染病,给全球养猪业造成了巨大的经济损失。然而,PRRS至今仍没有安全有效的疫苗和药物进行防治。全面深入理解PRRSV生命周期可以为PRRS防控提供新的思路。因此,本文在简述PRRSV生命周期的基础上,重点对病毒侵入、复制与转录、翻译及翻译后修饰、组装等过程的研究进展进行综述,以期为PRRSV致病机制及防控研究提供参考。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 入侵 复制和转录 翻译及翻译后修饰 组装
在线阅读 下载PDF
Cas9和PE介导湖羊骨骼肌卫星细胞MSTN基因敲除的研究 被引量:4
9
作者 周磊 李东旭 +3 位作者 冒魏佳 刘孜斐 高雪 万永杰 《南京农业大学学报》 北大核心 2025年第2期419-426,共8页
[目的]本文利用CRISPR/Cas9系统和先导编辑(prime editor, PE)对湖羊骨骼肌卫星细胞中的肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因外显子进行敲除,旨在比较2种技术敲除MSTN基因的效率,以验证新型基因编辑工具PE用于湖羊骨骼肌卫星细胞上的可... [目的]本文利用CRISPR/Cas9系统和先导编辑(prime editor, PE)对湖羊骨骼肌卫星细胞中的肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因外显子进行敲除,旨在比较2种技术敲除MSTN基因的效率,以验证新型基因编辑工具PE用于湖羊骨骼肌卫星细胞上的可行性。[方法]针对湖羊MSTN基因的3个外显子分别设计向导RNA(single guide RNA,sgRNA)以及引导RNA(prime editing guide RNA,pegRNA),构建相应的质粒后将含有Cas9/sgRNA或PE/pegRNA的质粒共同转染湖羊骨骼肌卫星细胞。24 h后观察细胞荧光,48 h后再将细胞消化,使用流式细胞分选仪根据荧光强度筛选出转染成功的强阳性细胞,收集细胞,获得基因组DNA后进行桑格测序,检测2种基因编辑工具对MSTN基因的打靶效率。[结果]成功构建了分别针对湖羊骨骼肌卫星细胞MSTN基因3个外显子敲除的基因编辑工具,质粒测序结果显示序列插入正确;CRISPR/Cas9的编辑效率(65%、88%、91%)显著高于PE的编辑效率(57%、29%、33%),而PE的插入缺失率显著低于CRISPR/Cas9。[结论]在转染效率相近的情况下,CRISPR/Cas9相比于PE对于湖羊骨骼肌卫星细胞MSTN基因的敲除有更高的编辑效率。 展开更多
关键词 基因编辑 CRISPR/Cas9 先导编辑(PE) MSTN 湖羊 骨骼肌卫星细胞
在线阅读 下载PDF
一起鹿呼吸道综合征相关病原的分析与鉴定 被引量:1
10
作者 刘永杰 颜新敏 +6 位作者 刘萍 张伟 兰喜 尚佑军 何继军 尚志锋 徐斌 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第1期18-25,共8页
2023年10月,甘肃一梅花鹿养殖场发生因鹿呼吸道疾病引起死亡的病情。为了解造成此次病情的病原,采集发病鹿的鼻腔深部棉拭子和血液样品、病死鹿组织样品,采用qPCR和RT-qPCR方法,分别对绵羊支原体、牛副流感病毒3型、牛疱疹病毒、牛冠状... 2023年10月,甘肃一梅花鹿养殖场发生因鹿呼吸道疾病引起死亡的病情。为了解造成此次病情的病原,采集发病鹿的鼻腔深部棉拭子和血液样品、病死鹿组织样品,采用qPCR和RT-qPCR方法,分别对绵羊支原体、牛副流感病毒3型、牛疱疹病毒、牛冠状病毒、牛呼吸道合胞体病毒、溶血性曼氏杆菌、多杀性巴氏杆菌、化脓隐秘杆菌8种呼吸道综合征相关病原进行检测。结果显示,共检出4种病原,其中绵羊支原体和化脓隐秘杆菌阳性各3份,多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌阳性各4份,证实该场呼吸道病情由以上4种病原混合感染引起。对病原进行分离鉴定,结果获得1株溶血性曼氏杆菌。药敏试验分析发现,该菌株对头孢吡肟、妥布霉素、卡那霉素、麦迪霉素、哌拉西林敏感,对氨苄西林、头孢唑啉、头孢噻吩、头孢呋辛、头孢西叮、头孢哌酮耐药。研究结果为该鹿场呼吸道疾病防控和针对性治疗提供了参考依据。 展开更多
关键词 鹿呼吸道综合征 病原检测 混合感染 病原分离鉴定 药敏试验
在线阅读 下载PDF
基于CRISPR-Cas系统的多重耐药菌防治技术研究进展 被引量:1
11
作者 周倩 唐梦君 +4 位作者 张小燕 陆俊贤 唐修君 杨星星 高玉时 《生物技术通报》 北大核心 2025年第5期42-51,共10页
动物源细菌耐药性影响动物养殖安全,同时对人类公共卫生和食品安全产生重要威胁。抗生素的滥用加剧了耐药细菌的传播,而新型抗菌药物研发日益困难,动物源细菌耐药污染已成为全球范围内的公共危机,一旦耐药菌从动物向人类扩散,将极大地... 动物源细菌耐药性影响动物养殖安全,同时对人类公共卫生和食品安全产生重要威胁。抗生素的滥用加剧了耐药细菌的传播,而新型抗菌药物研发日益困难,动物源细菌耐药污染已成为全球范围内的公共危机,一旦耐药菌从动物向人类扩散,将极大地威胁人类健康,亟须新的方法和策略应对细菌耐药。CRISPR-Cas(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR-associated)是第三代“基因组定点编辑技术”,该技术能够靶向剪切外源性核酸,保护微生物遗传物质遗传稳定性。与传统的多重耐药菌防治策略相比,CRISPR-Cas系统具备独特的DNA序列的靶向性和灵敏度,通过精准、简便和高效的基因编辑技术,与核酸扩增技术、比色技术等相结合,可以提高灵敏度和检测时效性等性能指标。本文介绍了CRISPR-Cas系统的由来、系统分类、基因编辑的作用机理,在此基础之上,聚焦于该系统在多重耐药菌防治领域的研究进展和应用,在耐药致病菌消除、耐药基因消除以及致病菌诊断检测方面给出案例分析以及目前存在的挑战。总的来说,基于CRISPR-Cas系统的序列特异性抗菌剂能够降低细菌多重耐药性,结合核酸扩增技术和实时监控设备提升检测的精准性和效率,为动物源细菌耐药防控和监测研究提供了新思路。 展开更多
关键词 CRISPR-Cas系统 基因编辑 多重耐药菌 耐药基因 防治技术
在线阅读 下载PDF
一种基于截短N蛋白的猪丁型冠状病毒抗体ELISA检测方法的建立 被引量:1
12
作者 王东升 于瑞明 +5 位作者 张莉萍 白英杰 刘霞 王永录 杜晓华 刘新生 《生物工程学报》 北大核心 2025年第7期2760-2773,共14页
为了建立一种猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)抗体检测方法,将PDCoV CH/XJYN/2016毒株N基因序列插入原核表达质粒载体pColdⅡ中,表达重组蛋白PDCoV-N1和PDCoV-N2,经SDS-PAGE分析和Ni+-NTA纯化后,检测重组原核蛋白PDCoV... 为了建立一种猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)抗体检测方法,将PDCoV CH/XJYN/2016毒株N基因序列插入原核表达质粒载体pColdⅡ中,表达重组蛋白PDCoV-N1和PDCoV-N2,经SDS-PAGE分析和Ni+-NTA纯化后,检测重组原核蛋白PDCoV-N1和PDCoV-N2与猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)阳性血清的反应原性和特异性。同时对重组真核蛋白PDCoV-N1和PDCoV-N2进行Western blotting和间接免疫荧光实验验证分析。最后使用重组原核蛋白PDCoV-N2建立间接ELISA方法,优化反应条件,检测敏感性、特异性及重复性,并对102份临床血清进行了检测。重组原核蛋白PDCoV-N2与PEDV抗血清交叉反应较低。以PDCoV-N2蛋白制备的间接ELISA方法的最优条件为:抗原包被浓度1.25μg/mL,37℃包被1 h,BSA封闭液4℃过夜,血清最佳稀释浓度1:50,37℃孵育1 h,酶标二抗最佳稀释比例为1:80000,37℃孵育1 h,加入四甲基联苯胺(tetramethylbenzidine,TMB)显色液37℃反应10 min。待检样品的S/P值(样本值–阴性对照值)/(阳性对照值–阴性对照值)≥0.45为阳性,S/P值≤0.38为阴性,S/P值介于0.45和0.38之间,则为可疑。检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2,PCV2)、猪传染性胃肠炎病毒(transmissiblegastroenteritis of swine,TGEV)、口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)、非洲猪瘟病毒(african swine fever virus,ASFV)阳性血清,结果显示,其他冠状病毒的S/P值均小于0.38,表明其具有良好的特异性;PDCoV抗血清800倍稀释后仍为阳性;批间和批内重复性实验结果显示,本方法变异系数均小于10%;临床血清样本检测结果显示,该方法与中和实验的符合率为94.12%。本研究基于截短的PDCoV N蛋白,建立了能够检测抗PDCoV特异性IgG抗体的ELISA方法,且该方法敏感、特异、稳定、重复性好,为PDCoV的临床诊断提供了新的方法。 展开更多
关键词 猪δ冠状病毒 截短N蛋白 IGG抗体 间接ELISA
原文传递
睡眠嗜组织菌可视化LAMP现场检测方法的建立及初步应用 被引量:1
13
作者 李富祥 高华峰 +1 位作者 赵文华 宋建领 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第4期477-483,共7页
为建立睡眠嗜组织菌(Hi.somni)可视化LAMP检测方法,笔者根据Hi.somni 16S rRNA基因的特异性序列设计了1对LAMP内引物和1对LAMP外引物,优化反应体系和反应程序,评价特异性、敏感性及其与PCR方法的符合率,建立了Hi.somni可视化LAMP现场检... 为建立睡眠嗜组织菌(Hi.somni)可视化LAMP检测方法,笔者根据Hi.somni 16S rRNA基因的特异性序列设计了1对LAMP内引物和1对LAMP外引物,优化反应体系和反应程序,评价特异性、敏感性及其与PCR方法的符合率,建立了Hi.somni可视化LAMP现场检测方法。反应程序优化结果显示,本研究建立LAMP方法的最佳反应程序为58℃反应70 min。特异性试验结果显示,该方法能特异性地检测Hi.somni,与溶血性曼氏杆菌、化脓隐秘杆菌、多杀性巴氏杆菌等14种牛、绵羊和山羊常见细菌无交叉反应,特异性较强。敏感性试验结果显示,该方法能检出最低浓度为4.7 copies/μL的重组质粒标准品pMD19T-His,敏感性较高。临床样品检测结果显示,LAMP方法和普通PCR方法检测Hi.somni的阳性率分别为11.49%(10/87)和9.20%(8/87),LAMP方法与PCR方法的总符合率、阳性符合率和阴性符合率分别为97.70%(85/87)、100%(8/8)和97.47%(77/79)。结果表明,本研究建立的LAMP方法为牛、山羊和绵羊Hi.somni感染的快速可视化现场检测提供技术支撑。 展开更多
关键词 睡眠嗜组织菌 环介等温扩增 现场检测 山羊 绵羊
在线阅读 下载PDF
热休克蛋白100家族ClpL对猪链球菌2型应激和致病性的影响 被引量:1
14
作者 祝昊丹 王锐 +4 位作者 周俊明 王丹丹 胡屹屹 倪艳秀 李彬 《微生物学通报》 北大核心 2025年第2期668-678,共11页
【背景】酪蛋白水解蛋白酶L(caseinolytic protease L,ClpL)是热休克蛋白100(heat shock protein 100,HSP100)家族成员,参与多种细胞内生物学过程包括应激耐受反应、长期存活、毒力和抗生素抗性等,在病原菌的致病过程中发挥重要作用。... 【背景】酪蛋白水解蛋白酶L(caseinolytic protease L,ClpL)是热休克蛋白100(heat shock protein 100,HSP100)家族成员,参与多种细胞内生物学过程包括应激耐受反应、长期存活、毒力和抗生素抗性等,在病原菌的致病过程中发挥重要作用。【目的】阐明HSP100/ClpL对猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2)强毒株的应激耐受和毒力的影响。【方法】利用温敏自杀质粒pSET4s构建了SsClpL基因缺失株ΔclpL;利用大肠杆菌-猪链球菌穿梭质粒pSET2构建了互补株CΔclpL;比较亲本株SS2-1、ΔclpL和CΔclpL在各种应激环境(高温、氧化性应激和酸应激)和血液中的生存能力;利用小鼠感染模型和体内竞争试验评价clpL缺失前后细菌的毒力变化。【结果】clpL缺失后,SS2在各种应激环境中的生存能力明显减弱;同时在猪全血中的存活能力也显著降低;对BALB/c小鼠的致病力有所降低,在体内的定殖能力明显降低。【结论】SsClpL与猪链球菌的应激耐受和致病性密切相关。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 热休克蛋白100家族ClpL 应激耐受 致病性
原文传递
原花青素对镉致小鼠肝肾损伤的保护作用 被引量:1
15
作者 李潭 李雅文 +9 位作者 赵昕蕊 李彬 刘丹 仝锡帅 卞建春 刘学忠 袁燕 邹辉 刘宗平 顾建红 《畜牧与兽医》 北大核心 2025年第2期46-53,共8页
旨在研究低聚原花青素(OPC)对镉(Cd)致小鼠肝肾损伤的保护作用。Cd与不同剂量OPC(50和100 mg/kg)单独或联合处理6月龄BALB/c雌性小鼠3个月,称取小鼠体重,计算肝脏和肾脏脏器系数,自动生化分析仪检测肝肾相关血液生化指标,HE染色观察肝... 旨在研究低聚原花青素(OPC)对镉(Cd)致小鼠肝肾损伤的保护作用。Cd与不同剂量OPC(50和100 mg/kg)单独或联合处理6月龄BALB/c雌性小鼠3个月,称取小鼠体重,计算肝脏和肾脏脏器系数,自动生化分析仪检测肝肾相关血液生化指标,HE染色观察肝脏和肾脏组织病理学变化,试剂盒测定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性和丙二醛(MDA)含量,透射电镜观察线粒体和细胞核形态,免疫组化分析半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达情况,Western blot法检测Caspase-3、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平。结果:与对照组相比,Cd组小鼠体重与肝肾脏器系数降低,血清乳酸脱氢酶活性(LDH)和磷(P)含量升高,肝组织出现水样变性、少量细胞脂肪变性、单核炎性细胞浸润、肝细胞索排列紊乱,肾囊腔扩张、散在单核炎性细胞浸润,肾小管上皮细胞坏死和脱落,肝脏和肾脏组织SOD、GSH-Px活性下降,而MDA水平升高,线粒体和细胞核损伤,促凋亡蛋白Caspase-3升高,Bcl-2/Bax比值降低。与Cd组相比,OPC+Cd联合处理组上述指标均明显改善。提示:OPC能缓解Cd致小鼠肝肾损伤,是Cd中毒的潜在治疗剂。 展开更多
关键词 原花青素 肝脏 肾脏 氧化应激 凋亡
在线阅读 下载PDF
捻转血矛线虫伊维菌素抗药性相关miRNA鉴定及其功能分析 被引量:1
16
作者 辛连喜 瓦热斯·吐尔松 +7 位作者 艾力西热·买买提 热依兰木·吐尔洪 胡敏 卡力比夏提·艾木拉江 巴音查汗·盖力克 赛福丁·阿不拉 张伟 郭庆勇 《畜牧与兽医》 北大核心 2025年第9期93-103,共11页
旨在探究捻转血矛线虫伊维菌素(IVM)抗药相关的miRNA及其功能。本研究以IVM敏感虫株与抗药虫株为试验材料,采用Illumina novaseq 6000平台进行测序,构建cDNA文库,质控分析后采用生信软件筛选2个虫株之间的差异miRNA。结果:IVM敏感株和... 旨在探究捻转血矛线虫伊维菌素(IVM)抗药相关的miRNA及其功能。本研究以IVM敏感虫株与抗药虫株为试验材料,采用Illumina novaseq 6000平台进行测序,构建cDNA文库,质控分析后采用生信软件筛选2个虫株之间的差异miRNA。结果:IVM敏感株和抗药株雌雄虫共鉴定到441个miRNA,其中已知160个,新鉴定到的281个。与敏感株相比,抗药株雄虫中30个miRNA显著上调,21个显著下调;抗药株雌虫中,4个miRNA显著上调,5个显著下调。后续差异miRNA分析预测miR-1、miR-2、miR-133和miR-5912b可能与IVM抗药性有关。基因本体论(GO)分析显示,雌雄虫差异miRNA靶基因主要富集到细胞修饰氨基酸生物合成过程、磷代谢过程、细胞蛋白质代谢过程、嘌呤核苷酸结合等。此外,京都基因和基因组百科全书(KEGG)显示雌雄虫差异基因富集趋势具有一定的相似性,主要富集到mTOR信号通路、促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、环核苷酸(cAMP)信号通路、赖氨酸降解、嘌呤代谢及三羧酸循环(TCA cycle)等。最终选取6个差异miRNA进行实时荧光定量PCR(RT-qPCR)验证,发现结果与测序结果一致。综上,捻转血矛线虫对IVM抗药性的产生与其代谢过程(尤其是氨基酸代谢)有一定的联系,本研究为揭示IVM抗药机制奠定了理论基础。 展开更多
关键词 捻转血矛线虫 伊维菌素 抗药性 MIRNA
在线阅读 下载PDF
信阳地区鹅源大肠杆菌的分离鉴定、系统进化分群与耐药性分析 被引量:1
17
作者 李迎晓 方燕子 +2 位作者 武娴 曲哲会 焦凤超 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2025年第1期82-93,共12页
为了解信阳地区鹅源大肠杆菌的系统进化分群、毒力基因携带情况和耐药情况,试验从信阳地区部分养殖户送检的46只疑似大肠杆菌感染病鹅的肝脏、脾脏等组织中进行大肠杆菌的分离、鉴定,并对分离菌株进行系统进化分群、毒力基因检测、耐药... 为了解信阳地区鹅源大肠杆菌的系统进化分群、毒力基因携带情况和耐药情况,试验从信阳地区部分养殖户送检的46只疑似大肠杆菌感染病鹅的肝脏、脾脏等组织中进行大肠杆菌的分离、鉴定,并对分离菌株进行系统进化分群、毒力基因检测、耐药性分析、耐药基因检测。结果表明:共分离到23株大肠杆菌,分别命名为GE1~GE23。23株大肠杆菌在4种系统进化群中均有一定比例的分布,其中A群有3株(GE11、GE12、GE19,占比为13.04%),B1群有3株(GE4、GE15、GE23,占比为13.04%),B2群有9株(GE1、GE2、GE8、GE10、GE14、GE16、GE17、GE20、GE21,占比为39.13%),D群有8株(GE3、GE5、GE6、GE7、GE9、GE13、GE18、GE22,占比为34.78%)。在毒力基因检测中,23株大肠杆菌marA、fimC、fyuA、iroN、iss、hlyF、ompT、iutA和irp2基因的检出率分别为100%、95.65%、52.17%、47.83%、43.48%、39.13%、34.78%、30.43%和17.39%。23株分离菌对阿莫西林/克拉维酸钾的耐药率最高,为65.22%;然后依次为磺胺甲口恶唑/甲氧苄啶、强力霉素、氟苯尼考、多黏毒素B、头孢噻呋和左氧氟沙星、环丙沙星,耐药率分别为56.52%、52.17%、47.83%、34.78%、17.39%和17.39%、8.70%。23株分离菌对亚胺培南的敏感率最高,为100%;然后依次为丁胺卡那、链霉素、新霉素、环丙沙星和左氧氟沙星、头孢噻呋、氟苯尼考、多黏菌素B、强力霉素、磺胺甲口恶唑/甲氧苄啶,敏感率分别为82.61%、82.61%、47.83%、47.83%和47.83%、34.78%、26.09%、21.74%、17.39%、8.70%。23株分离菌中有12株表现为多重耐药,其中6,7耐菌株各有1株,占比为4.35%;4,5耐菌株各有3株,占比为13.04%;3耐菌株有4株,占比为17.39%。在耐药基因检测中,tetA基因的检出率最高,为82.61%;然后依次为folR、sul2、aadA、bla_(TEM)、bla_(CTX-M)、aphA1、clmA、sul3、sul1、aphA2,检出率分别为73.91%、65.22%、56.32%、52.17%、47.83%、47.83%、43.48%、26.09%、13.04%和13.04%。说明信阳地区鹅源大肠杆菌B2群和D群占比较大,携带多种毒力基因和耐药基因,且多表现为多重耐药。 展开更多
关键词 大肠杆菌 系统进化分群 毒力基因 耐药性 耐药基因
原文传递
2023年河南省禽流感抗体与病原监测 被引量:1
18
作者 刘敏 宋丹 +4 位作者 朱前磊 赵美雪 张利平 刘礼杰 闫若潜 《动物医学进展》 北大核心 2025年第4期131-135,共5页
为有效防范风险,扎实做好河南省高致病性禽流感(HPAI)的监测工作,全面掌握HPAI的感染状况和流行趋势,对全省部分种禽场、商品禽场、活禽交易市场、禽屠宰场、野鸟栖息地等场点开展了HPAIV专项监测,主要通过血凝抑制试验和RT-PCR方法分... 为有效防范风险,扎实做好河南省高致病性禽流感(HPAI)的监测工作,全面掌握HPAI的感染状况和流行趋势,对全省部分种禽场、商品禽场、活禽交易市场、禽屠宰场、野鸟栖息地等场点开展了HPAIV专项监测,主要通过血凝抑制试验和RT-PCR方法分别检测采集样本的免疫抗体水平与病毒核酸。统计结果显示,HPAIV H5亚型Re-13株、H5亚型Re-14株、H7N9亚型Re-4株平均免疫抗体合格率分别为94.12%、96.62%、95.95%,平均场群合格率分别为93.96%、95.97%、95.30%,且种禽场免疫抗体合格率普遍高于商品场,鸡场免疫抗体合格率高于鹅场、鸭场,不同区域的免疫抗体合格率在91.48%~99.29%之间,8个不同疫苗生产厂家生产的疫苗免疫抗体合格率均在90%以上;全省未检出HPAIV H5亚型和H7N9亚型病毒核酸阳性样品,但检测到其他亚型低致病禽流感病毒(LPAIV)的存在,将检测到的禽流感病毒(AIV)核酸样品(91份、8个群体)用荧光RT-PCR试验方法进一步分析得到均为LPAIV H9亚型,阳性样本均来自于鸡,且分布于商品禽场(0.5%)、屠宰场(7.50%)、市场(8.25%)等多种场点类型。表明河南省HPAI整体免疫效果较好,近期省内发生HPAI的风险较低,但仍需关注LPAIV在多个群体间的传播和低水平的流行。 展开更多
关键词 高致病性禽流感 监测 评估 免疫抗体 病毒核酸 亚型
在线阅读 下载PDF
山西地区鸽圆环病毒全基因组序列的测定与分析 被引量:2
19
作者 张娟 任鹏飞 +3 位作者 李兴 高振 王仲兵 梁立滨 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第1期96-101,共6页
为了解山西地区鸽圆环病毒(PiCV)的遗传演化特征,本研究从山西太原、晋中等地区鸽养殖场采集10份疑似感染PiCV的病料样品经常规处理后进行Cap基因的PCR检测。结果显示,从10份病料样品中检测到1份PiCV阳性样品,将鉴定的PiCV命名为SX01/Sh... 为了解山西地区鸽圆环病毒(PiCV)的遗传演化特征,本研究从山西太原、晋中等地区鸽养殖场采集10份疑似感染PiCV的病料样品经常规处理后进行Cap基因的PCR检测。结果显示,从10份病料样品中检测到1份PiCV阳性样品,将鉴定的PiCV命名为SX01/Shanxi/2023株。通过PCR分段扩增SX01/Shanxi/2023株的全基因组序列并测序,利用SeqMan软件将序列拼接。结果显示,分别获得759bp和1560bp的目的片段,经测序拼接后获得了PiCV全长2038bp的全基因组序列。利用MegAlign软件分析PiCV全基因组序列的同源性;采用IQ-tree软件构建PiCV全基因组的遗传进化树;利用ClusterW软件分析PiCV全基因组编码氨基酸序列的变异;利用Simplot和RDP4软件对SX01/Shanxi/2023株进行重组分析。结果显示:SX01/Shanxi/2023株与国内外PiCV全基因组序列的同源性在84.6%~96.3%,其中与德国PiCVCoCV株同源性最高达95.1%,与我国陕西TF1/SN/2016株的同源性最高达96.3%。进化树结果显示,SX01/Shanxi/2023株与国内陕西TF1/SN/2016株及DS1/GS/2018株处于同一进化分支,亲缘关系较近。氨基酸序列分析结果显示,SX01/Shanxi/2023株Cap蛋白及Rep蛋白氨基酸序列与PiCV参考株相比均发生了部分氨基酸位点的插入、缺失或突变,其中Cap蛋白氨基酸序列变异多于Rep蛋白。重组分析结果显示,该株病毒是由陕西TF1/SN/2016株为主要亲本,陕西WL1/SN/2018株为次要亲本形成的重组病毒,重组断点位于nt520。基于IQ-tree软件构建的重组断裂点位点前后(nt1~nt520、nt521~nt2038)的进化树进一步验证了上述结果。本研究首次在山西地区检测到PiCV,丰富了PiCV分子生物学特征和流行病学研究内容,也为山西地区PiCV感染的防控提供了重要参考依据。 展开更多
关键词 鸽圆环病毒 全基因组 遗传进化分析 重组分析
在线阅读 下载PDF
禽白血病病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与应用 被引量:1
20
作者 苏晓月 吕转平 +2 位作者 沈亚安 赵明明 唐思静 《家畜生态学报》 北大核心 2025年第1期64-69,共6页
为了建立一种禽白血病病毒(ALV)抗体检测方法,利用原核表达禽白血病病毒的p27蛋白建立一种检测ALV抗体的间接ELISA方法。结果显示,p27蛋白以包涵体形式表达,Western blot检测显示p27蛋白具有良好的反应活性,以p27蛋白为包被抗原建立的间... 为了建立一种禽白血病病毒(ALV)抗体检测方法,利用原核表达禽白血病病毒的p27蛋白建立一种检测ALV抗体的间接ELISA方法。结果显示,p27蛋白以包涵体形式表达,Western blot检测显示p27蛋白具有良好的反应活性,以p27蛋白为包被抗原建立的间接ELISA方法检测NDV、IBDV、IBV、AIV-H9、ILTV阳性血清均为阴性,最低抗体检出效价为1︰12800,与进口试剂盒的符合率为94.87%,检测临床血清样品的阳性率为14.02%。结果说明该研究建立的间接ELISA方法特异性强、敏感性高、符合性好,可为ALV的检测和净化等提供一种简单快速的方法。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 间接ELISA方法 抗体检测 净化
在线阅读 下载PDF
上一页 1 2 250 下一页 到第
使用帮助 返回顶部