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G1P[7]型猪轮状病毒的分离鉴定及其全基因组分析
1
作者 王建新 马润超 +5 位作者 周金柱 卞贤宇 朱雪蛟 李昱辰 张雪寒 李彬 《南方农业学报》 北大核心 2025年第3期932-943,共12页
[目的]分离鉴定G1P[7]型猪轮状病毒(PoRV)并进行全基因组分析,为仔猪腹泻病防控及疫苗研发提供理论依据。[方法]腹泻仔猪粪便样本由南京农业大学动物医学院提供,对样本进行猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪德尔塔... [目的]分离鉴定G1P[7]型猪轮状病毒(PoRV)并进行全基因组分析,为仔猪腹泻病防控及疫苗研发提供理论依据。[方法]腹泻仔猪粪便样本由南京农业大学动物医学院提供,对样本进行猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)及PoRV PCR检测。向PCR检测结果为阳性的样本上清液中加入胰蛋白酶,随后接种到MA104细胞进行病毒分离和纯化。通过PCR检测、电镜观察、间接免疫荧光检测和RAN-PAGE检测鉴定毒株。通过绘制病毒增殖曲线和检测病毒对MA104、Vero、IPEC-J2、HT-29、HRT-18和Caco-2细胞的易感性探究毒株生物学特性。利用生物信息学软件分析分离毒株的11个基因与国内外各基因型轮状病毒的同源性并构建病毒全基因组系统发育树。[结果]粪便样本PCR检测结果显示,粪便样本中仅PoRV呈阳性。成功分离出1株PoRV,将该毒株命名为JSNJ2023,病毒在MA104细胞上能稳定增殖和传代,经3次克隆,筛选出适合的克隆株,在第3次克隆中,选择病毒滴度最高的克隆株进行扩大培养,最终成功获得高滴度的单克隆毒株。病毒颗粒呈明显的球形结构,具有清晰的双层衣壳特征,直径约70 nm。间接免疫荧光检测结果显示,JSNJ2023毒株能感染MA104细胞。RNA-PAGE检测结果显示,JSNJ2023毒株具有A群轮状病毒特征性的11条电泳图谱,排列方式为4∶2∶3∶2。病毒增殖曲线显示,接种病毒18 h后JSNJ2023毒株在MA104细胞中的病毒滴度达峰值,随着感染时间的延长,病毒滴度逐渐降低。JSNJ2023毒株对细胞的易感性依次为MA104、IPEC-J2、HRT-18、HT-29、Caco2和Vero细胞。基因同源性分析与系统发育树构建结果显示,JSNJ2023毒株属于猪A群G1P[7]型轮状病毒,其基因型为G1-P[7]-I5。[结论]成功分离获得PoRV JSNJ2023毒株,其属于A群G1P[7]型轮状病毒,基因型为G1-P[7]-I5。JSNJ2023毒株与人、猪及牛轮状病毒存在高度同源性,其进化过程中可能受到人轮状病毒、PoRV与牛轮状病毒的影响,发生了基因重组或交换,形成了独特的基因型(R1-C1-M1-A8-N1-T7-E1-H1)。 展开更多
关键词 猪轮状病毒(PoRV) 全基因组测序 遗传进化分析 基因重组
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猪瘟病毒E2蛋白重复多表位基因的融合表达及其兔体免疫保护研究 被引量：1
2
作者 刘思国 涂长春 +3 位作者 余兴龙 张茂林 刘伯华 李作生 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期127-133,共7页
目的 :研究猪瘟病毒 (CSFV)E2蛋白重复多抗原表位基因的融合表达及其免疫攻毒保护作用。方法 :应用PCR方法扩增猪瘟病毒E2蛋白重复多抗原表位基因 ,构建重复多表位基因的原核重组表达质粒PGEX-3E ,进行融合蛋白的表达和纯化。ELISA和Wes... 目的 :研究猪瘟病毒 (CSFV)E2蛋白重复多抗原表位基因的融合表达及其免疫攻毒保护作用。方法 :应用PCR方法扩增猪瘟病毒E2蛋白重复多抗原表位基因 ,构建重复多表位基因的原核重组表达质粒PGEX-3E ,进行融合蛋白的表达和纯化。ELISA和Westernblot方法测定单表位融合蛋白GST-E和多表位融合蛋白GST-3E与猪抗CSFV的阳性血清和兔抗E2阳性血清的反应性 ,并进行融合蛋白的兔体免疫及免疫攻毒保护的比较研究。结果 :分子克隆和构建了原核重组表达质粒pGEX-3E ,表达和纯化了融合蛋白GST-3E ;单表位融合蛋白与重复多表位融合蛋白均能够与猪抗CSFV的阳性血清反应和兔抗E2的阳性血清产生免疫反应。在刺激兔体产生抗体方面 ,单表位融合蛋白刺激兔体产生抗体的能力较弱 ,而多表位融合蛋白则能够使兔体产生高效价的抗体。接种 10 0MID50 剂量猪瘟兔化弱毒 (HCLV)进行的兔体免疫攻毒保护试验表明 ,空白对照组和载体蛋白GST免疫组无保护作用 ,单表位融合蛋白免疫组具有一定的免疫保护作用 ,而重复多表位融合蛋白免疫组则完全能够抵抗猪瘟病毒的攻击。结论 :猪瘟病毒E2蛋白重复多表位的融合表达具有免疫保护作用 。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2蛋白 蛋白质的融合表达
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一例疑似猪瘟的诊断与处置情况 被引量：3
3
作者 樊二虎 白森 +1 位作者 高美妮 张哲 《畜牧兽医杂志》 2021年第5期115-117,共3页
主要从事发背景、流行病学调查、临床症状、病理变化和实验室血清学鉴别诊断等方面,初步诊断了一起疑似猪瘟病例。叙述了诊治过程,总结了防治经验,为今后做好猪传染病的预防和控制奠定了基础。
关键词 猪瘟 疫情 诊断 处置
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