G1P[7]型猪轮状病毒的分离鉴定及其全基因组分析

1

作者 王建新 马润超 +5 位作者 周金柱 卞贤宇 朱雪蛟 李昱辰 张雪寒 李彬 《南方农业学报》 北大核心 2025年第3期932-943,共12页

[目的]分离鉴定G1P[7]型猪轮状病毒(PoRV)并进行全基因组分析,为仔猪腹泻病防控及疫苗研发提供理论依据。[方法]腹泻仔猪粪便样本由南京农业大学动物医学院提供,对样本进行猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪德尔塔... [目的]分离鉴定G1P[7]型猪轮状病毒(PoRV)并进行全基因组分析,为仔猪腹泻病防控及疫苗研发提供理论依据。[方法]腹泻仔猪粪便样本由南京农业大学动物医学院提供,对样本进行猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)及PoRV PCR检测。向PCR检测结果为阳性的样本上清液中加入胰蛋白酶,随后接种到MA104细胞进行病毒分离和纯化。通过PCR检测、电镜观察、间接免疫荧光检测和RAN-PAGE检测鉴定毒株。通过绘制病毒增殖曲线和检测病毒对MA104、Vero、IPEC-J2、HT-29、HRT-18和Caco-2细胞的易感性探究毒株生物学特性。利用生物信息学软件分析分离毒株的11个基因与国内外各基因型轮状病毒的同源性并构建病毒全基因组系统发育树。[结果]粪便样本PCR检测结果显示,粪便样本中仅PoRV呈阳性。成功分离出1株PoRV,将该毒株命名为JSNJ2023,病毒在MA104细胞上能稳定增殖和传代,经3次克隆,筛选出适合的克隆株,在第3次克隆中,选择病毒滴度最高的克隆株进行扩大培养,最终成功获得高滴度的单克隆毒株。病毒颗粒呈明显的球形结构,具有清晰的双层衣壳特征,直径约70 nm。间接免疫荧光检测结果显示,JSNJ2023毒株能感染MA104细胞。RNA-PAGE检测结果显示,JSNJ2023毒株具有A群轮状病毒特征性的11条电泳图谱,排列方式为4∶2∶3∶2。病毒增殖曲线显示,接种病毒18 h后JSNJ2023毒株在MA104细胞中的病毒滴度达峰值,随着感染时间的延长,病毒滴度逐渐降低。JSNJ2023毒株对细胞的易感性依次为MA104、IPEC-J2、HRT-18、HT-29、Caco2和Vero细胞。基因同源性分析与系统发育树构建结果显示,JSNJ2023毒株属于猪A群G1P[7]型轮状病毒,其基因型为G1-P[7]-I5。[结论]成功分离获得PoRV JSNJ2023毒株,其属于A群G1P[7]型轮状病毒,基因型为G1-P[7]-I5。JSNJ2023毒株与人、猪及牛轮状病毒存在高度同源性,其进化过程中可能受到人轮状病毒、PoRV与牛轮状病毒的影响,发生了基因重组或交换,形成了独特的基因型(R1-C1-M1-A8-N1-T7-E1-H1)。 展开更多

关键词 猪轮状病毒(PoRV) 全基因组测序 遗传进化分析 基因重组

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尼帕病毒研究进展

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作者 王洋洋 《中国兽药杂志》 2025年第8期45-51,共7页

尼帕病毒(NiV)是一种人畜共患病原体,天然宿主为狐蝠科果蝠,传播途径多样,包括动物传人及有限的人传人等。该病毒于1998年在马来西亚首次被发现,此后在孟加拉国等地频发疫情,中国存在传入风险。2024年,中国团队在自组装蛋白纳米颗粒疫... 尼帕病毒(NiV)是一种人畜共患病原体,天然宿主为狐蝠科果蝠,传播途径多样,包括动物传人及有限的人传人等。该病毒于1998年在马来西亚首次被发现,此后在孟加拉国等地频发疫情,中国存在传入风险。2024年,中国团队在自组装蛋白纳米颗粒疫苗研发上取得突破,但临床应用仍需进一步推进。本文聚焦NiV研究进展,从病原学、流行病学、临床症状及病理变化、实验室诊断、疫苗研发等维度进行综述,为该病的防控、诊断及疫苗临床应用提供参考。 展开更多

关键词 尼帕病毒 病原学 流行病学 研究进展

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B亚型禽偏肺病毒逆转录套式PCR检测方法的建立与应用 被引量：6

3

作者 薛聪 刁有祥 +4 位作者 唐熠 陈琳 鞠小军 崔京腾 欧全宾 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期171-174,180,共5页

根据GenBank发布的B亚型禽偏肺病毒Fusion(F)基因的保守序列设计2对引物,建立了一种适用于B亚型禽偏肺病毒的逆转录套式PCR检测方法。采用该方法对B亚型禽偏肺病毒山东分离株进行检测,可以特异性地扩增出415bp的目的片段。此方法具有高... 根据GenBank发布的B亚型禽偏肺病毒Fusion(F)基因的保守序列设计2对引物,建立了一种适用于B亚型禽偏肺病毒的逆转录套式PCR检测方法。采用该方法对B亚型禽偏肺病毒山东分离株进行检测,可以特异性地扩增出415bp的目的片段。此方法具有高度特异性和敏感性,以H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、传染性喉气管炎病毒作为模板进行扩增,结果均为阴性。经检测,该方法第1次PCR扩增的敏感性为107copies/μL,第2次扩增的敏感性为102copies/μL,第2次扩增敏感性比第1次高105倍。应用本方法对采自山东省不同地区的64份可疑临床病料进行检测,最终从64份疑似病料中检测出37份为阳性。结果表明,所建立的套式PCR检测方法具有特异、敏感、实用等优点,为B亚型禽偏肺病毒的快速诊断以及深入研究奠定了基础。 展开更多

关键词 B亚型禽偏肺病毒 F基因 逆转录套式PCR

原文传递

流感病毒PA蛋白与宿主SSR4蛋白的相互作用研究 被引量：4

4

作者 王倩 李俊平 +9 位作者 梁立滨 赵玉辉 温霞 孔凡迪 王广文 石文军 李奇兵 姜丽 陈化兰 李呈军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期1029-1033,共5页

PA蛋白是流感病毒聚合酶复合体的重要组成部分,在病毒基因组的转录和复制过程中发挥重要功能,而流感病毒在宿主细胞内的有效复制离不开大量宿主因子的协助。本研究团队前期利用酵母双杂交(Y2H)系统从人源cDNA文库中筛选到大量与流感病... PA蛋白是流感病毒聚合酶复合体的重要组成部分,在病毒基因组的转录和复制过程中发挥重要功能,而流感病毒在宿主细胞内的有效复制离不开大量宿主因子的协助。本研究团队前期利用酵母双杂交(Y2H)系统从人源cDNA文库中筛选到大量与流感病毒PA蛋白可能存在相互作用的宿主因子,其中之一为Signal sequence receptor subunit 4(SSR4)。为研究流感病毒PA蛋白与宿主蛋白SSR4的相互作用,本研究采用酵母回交试验验证二者之间是否存在相互作用,结果显示PA蛋白与SSR4之间存在相互作用;在真核细胞中利用免疫共沉淀(Co-IP)试验检测,结果进一步证实了PA蛋白与SSR4蛋白之间的相互作用。利用慢病毒包装系统构建SSR4蛋白的过表达细胞系,并感染病毒后进行噬斑滴定,结果显示SSR4过表达可以抑制流感病毒的复制。瞬时转染过表达SSR4后再转染流感病毒聚合酶复合体表达质粒及荧光素酶报告质粒,利用双荧光素酶报告系统检测SSR4蛋白对聚合酶活性的影响,结果显示SSR4过表达后可以显著抑制流感病毒的聚合酶活性。本研究首次证实SSR4可以抑制流感病毒复制,并可使流感病毒RNP聚合酶活性显著降低,上述结果进一步完善了PA蛋白与宿主因子的互作网络,丰富了对宿主因子参与流感病毒复制周期的认识。 展开更多

关键词 流感病毒 PA蛋白 SSR4蛋白 相互作用

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绵羊肺腺瘤病毒致瘤机制研究进展 被引量：5

5

作者 刘畅 敖威华 +4 位作者 李磊 于立新 么宏强 周建华 马学恩 《动物医学进展》 北大核心 2015年第1期79-82,共4页

绵羊肺腺瘤(OPA)是由绵羊肺腺瘤病毒(OPAV)引起的一种慢性、传染性绵羊肺脏肿瘤性疾病,该病对养羊业,特别是种羊的发展有重大影响,世界动物卫生组织将其列为必须通报的动物疫病。论文就近年来国内外关于OPAV致瘤机制的相关研究进行了综... 绵羊肺腺瘤(OPA)是由绵羊肺腺瘤病毒(OPAV)引起的一种慢性、传染性绵羊肺脏肿瘤性疾病,该病对养羊业,特别是种羊的发展有重大影响,世界动物卫生组织将其列为必须通报的动物疫病。论文就近年来国内外关于OPAV致瘤机制的相关研究进行了综述,包括OPAV的转录特异性和囊膜蛋白的致瘤作用和OPAV受体等。这对深入研究OPAV的致瘤机制及确定相应的防控靶点,具有重要的理论意义和潜在的应用价值。 展开更多

关键词 绵羊肺腺瘤病毒 绵羊肺腺瘤 致瘤机制 囊膜蛋白

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羊干扰素α和γ融合表达及抗病毒活性分析 被引量：2

6

作者 韩颖 李秀丽 +4 位作者 豆子航 郭笑然 雷白时 袁万哲 赵款 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期660-667,共8页

为进一步探究羊干扰素α和γ的抗病毒活性效果,根据GenBank羊IFN-α和IFN-γ基因序列,使用Linker连接合成目的序列,成功构建了3种重组表达质粒pET28a-OviIFN-γ、pET28a-OviIFN-α、pET28a-OviIFN-γ/α并进行原核表达。用细胞病变抑制... 为进一步探究羊干扰素α和γ的抗病毒活性效果,根据GenBank羊IFN-α和IFN-γ基因序列,使用Linker连接合成目的序列,成功构建了3种重组表达质粒pET28a-OviIFN-γ、pET28a-OviIFN-α、pET28a-OviIFN-γ/α并进行原核表达。用细胞病变抑制法和RT-qPCR测定重组蛋白rOviIFN-α、rOviIFN-γ和rOviIFN-α/γ的抗病毒活性。结果表明,rOviIFN-α、rOviIFN-γ和rOviIFN-α/γ在牛肾细胞(MDBK)以及非洲绿猴肾细胞(Vero)细胞中有抗病毒活性,且rOviIFN-α/γ的抗病毒效果最优;rOviIFN-α、rOviIFN-γ和rOviIFN-α/γ能够显著上调MDBK以及Vero细胞中4种干扰素刺激基因(IFN stimulated genes,ISGs)的mRNA转录水平,且rOviIFN-α/γ对干扰素刺激基因的上调水平最显著。综上所述,本试验表达的重组蛋白都具有抗病毒作用,其中串联表达的重组蛋白抗病毒活性以及干扰素刺激基因转录水平较高。 展开更多

关键词 羊干扰素α和γ 细胞病变抑制 融合表达 抗病毒活性 干扰素刺激基因

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稳定表达绵羊肺腺瘤病毒表面蛋白A549细胞系的建立 被引量：1

7

作者 刘霄卉 罗军荣 +2 位作者 斯日古楞 周建华 马学恩 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期395-398,共4页

为研究绵羊肺腺瘤病病毒(JSRV)表面蛋白(SU)的致瘤机制,本研究构建稳定表达SU的羊肺细胞A549细胞系。采用PCR方法从含su基因的pGEX-4T-1-SU重组质粒中扩增SU编码序列,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,转染A549细胞。通过G418筛选,... 为研究绵羊肺腺瘤病病毒(JSRV)表面蛋白(SU)的致瘤机制,本研究构建稳定表达SU的羊肺细胞A549细胞系。采用PCR方法从含su基因的pGEX-4T-1-SU重组质粒中扩增SU编码序列,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,转染A549细胞。通过G418筛选,对转染阳性细胞进行纯化,获得稳定表达JSRVSU蛋白的A549细胞系。以间接免疫荧光及westernblot鉴定SU的表达状况,并运用共聚焦显微镜确认SU蛋白的亚细胞定位。结果表明,重组蛋白SU在A549细胞中有效表达,而且主要分布于细胞质中。该细胞系的建立为SU生物学功能的体外研究提供了平台。 展开更多

关键词 绵羊肺腺瘤病毒 表面蛋白 真核表达 细胞内定位

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佩兰挥发油治疗轮状病毒性仔猪腹泻的疗效观察研究 被引量：1

8

作者 张福寿 王鹤鸣 王利 《商丘职业技术学院学报》 2022年第3期92-96,共5页

为研究佩兰对轮状病毒引起的仔猪腹泻的治疗效果,将40头仔猪平均随机分为4个处理组,分别为轮状病毒对照组、佩兰挥发油低剂量组、中剂量组和高剂量组.于32日龄时,对佩兰挥发油低、中、高剂量组仔猪分别饲喂25 mg/kg/d、50 mg/kg/d、100 ... 为研究佩兰对轮状病毒引起的仔猪腹泻的治疗效果,将40头仔猪平均随机分为4个处理组,分别为轮状病毒对照组、佩兰挥发油低剂量组、中剂量组和高剂量组.于32日龄时,对佩兰挥发油低、中、高剂量组仔猪分别饲喂25 mg/kg/d、50 mg/kg/d、100 mg/kg/d剂量的佩兰挥发油饲料.试验结果表明:使用低、中、高剂量的佩兰挥发油对轮状病毒引起的仔猪腹泻具有明显的保护作用.低、中、高剂量组与病毒感染对照组相比,人工感染轮状病毒后,仔猪腹泻指数均表现差异显著,这说明佩兰挥发油对仔猪感染轮状病毒引起的腹泻有较好的疗效. 展开更多

关键词 佩兰 挥发油 猪轮状病毒 仔猪腹泻

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重组猪干扰素α的原核表达及抗病毒活性

9

作者 李秀丽 韩颖 +5 位作者 赵款 张武超 梁飞 杨欢 雷白时 袁万哲 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期245-252,共8页

为了探究重组猪干扰素(PoIFN-α)在体内外的抗病毒活性,利用pET-32a载体系统,构建了PoIFN-α的原核表达体系。在体外,MTT法在猪肾细胞(PK-15)和猪睾丸细胞(ST)上测定了其细胞毒性,并利用细胞病变抑制法测定其抗水泡性口炎病毒(VSV)、猪... 为了探究重组猪干扰素(PoIFN-α)在体内外的抗病毒活性,利用pET-32a载体系统,构建了PoIFN-α的原核表达体系。在体外,MTT法在猪肾细胞(PK-15)和猪睾丸细胞(ST)上测定了其细胞毒性,并利用细胞病变抑制法测定其抗水泡性口炎病毒(VSV)、猪脑心肌炎病毒(EMCV)和猪伪狂犬病病毒(PRV)的活性,同时测定了重组蛋白作用PK-15细胞后干扰素刺激基因(ISGs)的转录水平;之后通过小鼠攻毒保护试验,测定了rPoIFN-α治疗后各组织器官的病毒载量,ELISA测定了小鼠血清中细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-10和IL-6的动态变化,并对整个试验期间小鼠出现的临床症状进行打分。结果显示,成功获得了原核表达的特异性重组蛋白rPoIFN-α,在细胞上抗病毒比活性达到1.67×10^(6)IU,对细胞没有损害作用,且显著上调了Mx1、OAS等因子的转录水平;在小鼠体内能明显拮抗EMCV和PRV的增殖,减少促炎因子的产生,延缓临床症状的出现。结果表明,原核表达重组蛋白rPoIFN-α在体内外均具有抗病毒活性,为进一步推进蛋白药物在临床上的应用奠定了基础。 展开更多

关键词 重组猪干扰素α 大肠杆菌表达 干扰素刺激基因 细胞毒性 抗病毒活性

原文传递

H5亚型禽流感重组鸡痘病毒活载体疫苗的免疫效力 被引量：9

10

作者 贾立军 张艳梅 +6 位作者 李军伟 韦栋平 刘红旗 陈素娟 彭大新 张如宽 刘秀梵 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 2003年第2期11-13,共3页

利用表达H5亚型禽流感病毒血凝素基因的重组鸡痘病毒疫苗免疫SPF鸡和无母源抗体的商品鸡,通过比较免疫后血凝抑制(HI)抗体应答水平、攻毒后发病率和死亡率等指标评价其免疫保护作用。免疫后21d,重组鸡痘病毒免疫组仅有13%～20%鸡的HI抗... 利用表达H5亚型禽流感病毒血凝素基因的重组鸡痘病毒疫苗免疫SPF鸡和无母源抗体的商品鸡,通过比较免疫后血凝抑制(HI)抗体应答水平、攻毒后发病率和死亡率等指标评价其免疫保护作用。免疫后21d,重组鸡痘病毒免疫组仅有13%～20%鸡的HI抗体检测呈阳性。在同亚型禽流感病毒攻击后,重组鸡痘病毒疫苗免疫组产生了100%的保护率,而未免疫组全部死亡。结果表明:重组鸡痘病毒疫苗不能激发高滴度HI抗体应答,但可抵御同亚型禽流感病毒致死性攻击,保护效果达到或优于目前应用的灭活苗,显示出良好的应用前景。 展开更多

关键词 重组鸡痘病毒 禽流感 血凝素基因 免疫效力

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一株新城疫重组强毒的分离鉴定与分子特性分析 被引量：4

11

作者 谭雷涛 秦卓明 +2 位作者 马保臣 徐怀英 崔治中 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1217-1223,共7页

从患病蛋鸡中分离出1株新城疫病毒（NDV）SRZ/03,经蚀斑纯化后接种40日龄SPF鸡可诱发典型ND病变。蚀斑纯化前、后,MDT分别为55.2和51 h,ICPI为1.7和2.0,IVPI为1.91和2.79,表明属强毒。对其F和HN基因分别克隆测序,进行F基因分型。结果表... 从患病蛋鸡中分离出1株新城疫病毒（NDV）SRZ/03,经蚀斑纯化后接种40日龄SPF鸡可诱发典型ND病变。蚀斑纯化前、后,MDT分别为55.2和51 h,ICPI为1.7和2.0,IVPI为1.91和2.79,表明属强毒。对其F和HN基因分别克隆测序,进行F基因分型。结果表明SRZ/03属基因Ⅱ型,F蛋白氨基酸裂解位点的序列为^112R-R-Q-K-R-F^117,与强毒基序完全相同。结合GenBank中发表的其他NDV参考株序列,对F和HN基因推导氨基酸序列进行比较。SRZ/03株与基因Ⅱ型LaSota/46、B1/47、Bingham/87和Texas/48的同源性分别为93.1%、93.0%、94.4%和94.4%;与基因Ⅶ型Taiwan/95、SGM/01和SKY/03的同源性分别为92.2%、92.8%和92.8%;与基因Ⅲ型F48E9/48的同源性为91.2%。然而,SRZ/03株F蛋白前210个氨基酸与基因Ⅱ型LaSota/46和Texas/48的同源性较高,达96.7%和98.1%,后343个氨基酸则与Taiwan/95、SGM/01等毒株的同源性较高,达95.7%-97.4%,推测该株为重组株。此外,SRZ/03株与Taiwan/95、SGM/01等毒株的HN氨基酸同源性高达95.8%-97.6%,显著高于与LaSota/46、B1/47、Bingham/87、Texas/48和F48E9/48的87.2%-89.2%。 展开更多

关键词 新城疫病毒 毒力 F基因 HN基因 重组株

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猪肺泡巨噬细胞酵母双杂交cDNA文库的构建与鉴定 被引量：5

12

作者 杨达汉 邓守全 +5 位作者 王哲 王丰 薛江东 刘锴 霍晓伟 马德慧 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期632-636,642,共6页

为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)与猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAM)蛋白质间相互的作用,本研究使用SMART技术成功构建了猪肺泡巨噬细胞酵母双杂交cDNA文... 为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)与猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAM)蛋白质间相互的作用,本研究使用SMART技术成功构建了猪肺泡巨噬细胞酵母双杂交cDNA文库。首先提取PAM总RNA,使用SMART RACE法经LD PCR合成双链cDNA,运用SMART技术,通过同源重组的方法将双链cDNA与pGADT7-Rec质粒共转化进酵母Y187感受态,再利用营养缺陷的方法在SD/-Leu平板上筛选阳性克隆,最终构建的文库滴度达到了6.96×10~7 CFU/mL,重组率初步计算达到95%,插入片段范围在200~2 000bp。本研究为PRRSV致病蛋白的筛选以及相关疾病的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 猪肺泡巨噬细胞 PRRSV SMART技术 酵母双杂交cDNA文库 同源重组

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双乾肉羊全基因组SNP/InDel分析及毛色相关候选基因鉴定 被引量：4

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作者 刘正喜 武斌 +5 位作者 胡明月 白春艳 赵中利 曹阳 马惠海 闫守庆 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期2032-2037,2043,共7页

为获得双乾肉羊全基因组遗传变异信息,解析影响双乾肉羊毛色的相关候选基因及突变位点,本研究分别对6只红头和6只黑头双乾肉羊进行基因组重测序,系统分析了全基因组水平的单核苷酸多态性(SNP)和小片段插入/缺失(InDel)多态性,并通过群... 为获得双乾肉羊全基因组遗传变异信息,解析影响双乾肉羊毛色的相关候选基因及突变位点,本研究分别对6只红头和6只黑头双乾肉羊进行基因组重测序,系统分析了全基因组水平的单核苷酸多态性(SNP)和小片段插入/缺失(InDel)多态性,并通过群体分化指数(FST)方法进行选择信号检测,将FST值排在前1%的染色体区段作为受选择候选区域,对受选择区域包含的基因进行注释,筛选毛色相关候选基因及其多态性位点。结果显示:通过重测序,在12个样本中共检测到27877089个SNP和4461716个InDel;选择信号分析共检测到1124个候选区域,依据基因注释结果筛选MC1R作为红头和黑头双乾肉羊毛色相关候选基因;通过重测序数据分析在MC1R基因编码区中存在5个SNP,其中2个为错义突变(c.218T>A和c.361G>A),群体基因分型结果表明,黑头双乾肉羊在c.218 T>A位点基因型为AA或AT,在c.361 G>A位点基因型为AA或AG,而红头羊在2个位点的基因型分别为TT和GG合子,即2个错义突变与双乾肉羊黑毛色表型完全相关,且黑毛色对红毛色为显性。该研究为双乾肉羊种质特性的遗传基础研究以及分子标记辅助选择育种提供了科学依据。 展开更多

关键词 双乾肉羊 单核苷酸多态性 插入/缺失多态性 选择信号 毛色 MC1R基因

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鸡传染性法氏囊病病毒(ZJ2000)基因组B节段全长的克隆及其毒力位点的分析预测 被引量：2

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作者 魏永伟 郑江涛 +2 位作者 王连胜 李龙 于涟 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期252-256,共5页

将本实验室保存的ZJ2000株囊毒加生理盐水研磨后接种9～10日龄鸡胚增殖病毒,收集尿囊液透析纯化,用蛋白酶K法提取病毒基因组dsRNA。通过RT-PCR获得基因组B节段全长的cDNA,并将其克隆到PUC18-T载体中进行测序。同时,本研究对GenBank中登... 将本实验室保存的ZJ2000株囊毒加生理盐水研磨后接种9～10日龄鸡胚增殖病毒,收集尿囊液透析纯化,用蛋白酶K法提取病毒基因组dsRNA。通过RT-PCR获得基因组B节段全长的cDNA,并将其克隆到PUC18-T载体中进行测序。同时,本研究对GenBank中登录的IBDV基因组B节段进行了大量分析,发现B节段的5′-NCR存在1个基因高突变区,并且ZJ2000株的5′-NCR可形成独特的二级结构。经过对VP1一级结构的大量分析,筛选出B节段中17个可能对IBDV毒力产生影响的候选毒力位点,并在此基础上又对这些位点氨基酸的特性进行统计分析,进一步探讨了这些位点对VP1功能影响的可能性,为深入研究IBDV基因组B节段对其毒力的影响作了有益的探索。 展开更多

关键词 鸡传染性法氏囊病病毒 基因组B节段全长 克隆

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新疆策勒县喜马拉雅旱獭无形体和埃立克体病原的筛查与鉴定 被引量：4

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作者 董巧燕 桑春丽 +3 位作者 王宝菊 颜彬 王远志 吾热力哈孜·哈孜汗 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2021年第2期177-182,共6页

目的对新疆策勒县捕获的喜马拉雅旱獭进行无形体和埃立克体分子检测。方法用线粒体细胞色素氧化酶Cytb和形态学对捕获的52只旱獭进行鉴定;基于16S rDNA和MSP4基因片段分别对旱獭的心、肝、脾、肺、肾、小肠和大肠进行埃立克体和无形体... 目的对新疆策勒县捕获的喜马拉雅旱獭进行无形体和埃立克体分子检测。方法用线粒体细胞色素氧化酶Cytb和形态学对捕获的52只旱獭进行鉴定;基于16S rDNA和MSP4基因片段分别对旱獭的心、肝、脾、肺、肾、小肠和大肠进行埃立克体和无形体基因检测,PCR阳性产物进行测序和遗传进化分析。结果捕获的52只旱獭均为喜马拉雅旱獭;旱獭心脏无形体基因检测的阳性率最高,为7.69%(4/52),测序分析均为嗜吞噬细胞无形体,遗传进化发现该无形体与野生动物马鹿、棕熊、野猪和人来源的嗜吞噬细胞无形体聚为一支;从1只旱獭的肝、肺脏、小肠均检测到埃立克体,测序和遗传进化分析表明:该埃立克体为未定名种,与中国新疆亚洲璃眼蜱中的Ehrlichia sp.Hyalomma asiaticum(KJ410254)的同源性为100%,与其聚于同一支。结论喜马拉雅旱獭经分子检测得到嗜吞噬细胞无形体和未定名种埃立克体核酸,加强喜马拉雅旱獭虫媒传染性病原的检测对于实验模式动物的优化选择具有重要意义。 展开更多

关键词 新疆 喜马拉雅旱獭 16S rDNA 无形体 埃立克体

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猪瘟病毒E2蛋白重复多表位基因的融合表达及其兔体免疫保护研究 被引量：1

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作者 刘思国 涂长春 +3 位作者 余兴龙 张茂林 刘伯华 李作生 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期127-133,共7页

目的 :研究猪瘟病毒 (CSFV)E2蛋白重复多抗原表位基因的融合表达及其免疫攻毒保护作用。方法 :应用PCR方法扩增猪瘟病毒E2蛋白重复多抗原表位基因 ,构建重复多表位基因的原核重组表达质粒PGEX-3E ,进行融合蛋白的表达和纯化。ELISA和Wes... 目的 :研究猪瘟病毒 (CSFV)E2蛋白重复多抗原表位基因的融合表达及其免疫攻毒保护作用。方法 :应用PCR方法扩增猪瘟病毒E2蛋白重复多抗原表位基因 ,构建重复多表位基因的原核重组表达质粒PGEX-3E ,进行融合蛋白的表达和纯化。ELISA和Westernblot方法测定单表位融合蛋白GST-E和多表位融合蛋白GST-3E与猪抗CSFV的阳性血清和兔抗E2阳性血清的反应性 ,并进行融合蛋白的兔体免疫及免疫攻毒保护的比较研究。结果 :分子克隆和构建了原核重组表达质粒pGEX-3E ,表达和纯化了融合蛋白GST-3E ;单表位融合蛋白与重复多表位融合蛋白均能够与猪抗CSFV的阳性血清反应和兔抗E2的阳性血清产生免疫反应。在刺激兔体产生抗体方面 ,单表位融合蛋白刺激兔体产生抗体的能力较弱 ,而多表位融合蛋白则能够使兔体产生高效价的抗体。接种 10 0MID50 剂量猪瘟兔化弱毒 (HCLV)进行的兔体免疫攻毒保护试验表明 ,空白对照组和载体蛋白GST免疫组无保护作用 ,单表位融合蛋白免疫组具有一定的免疫保护作用 ,而重复多表位融合蛋白免疫组则完全能够抵抗猪瘟病毒的攻击。结论 :猪瘟病毒E2蛋白重复多表位的融合表达具有免疫保护作用 。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 E2蛋白 蛋白质的融合表达

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宿主细胞干扰素刺激基因15蛋白的真核表达及初步应用

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作者 王改丽 王建科 +4 位作者 孙娜 王超 易立 张淑琴 程世鹏 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第5期30-33,149,共5页

为了探究由干扰素刺激基因15(ISG15)编码产生的ISG15蛋白的表达特性,及其对犬瘟热病毒(CDV)感染过程的影响,以及在CDV致宿主免疫抑制过程中的作用,试验设计并合成了针对ISG15基因的特异性引物,提取宿主细胞总RNA,反转录成cDNA后利用RT-... 为了探究由干扰素刺激基因15(ISG15)编码产生的ISG15蛋白的表达特性,及其对犬瘟热病毒(CDV)感染过程的影响,以及在CDV致宿主免疫抑制过程中的作用,试验设计并合成了针对ISG15基因的特异性引物,提取宿主细胞总RNA,反转录成cDNA后利用RT-PCR方法扩增ISG15全基因序列,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测、回收纯化目的片段后将其插入到pEGFP-N1真核表达载体中,构建pEGFP-ISG15重组质粒。PCR和双酶切鉴定重组质粒后测序,将阳性重组质粒转染至HEK293T细胞中进行荧光显微镜观察和Western-blot分析。结果表明:经PCR扩增和双酶切鉴定得到与目的片段大小相符的片段,且测序结果证实重组质粒pEGFP-ISG15构建成功,转染HEK293T细胞24 h后可在荧光显微镜下观察到绿色荧光信号,Western-blot可检测到与目的蛋白大小一致的融合蛋白。说明试验构建的重组质粒pEGFP-ISG15可在体外成功表达ISG15蛋白。 展开更多

关键词 犬瘟热病毒 ISG15 真核表达 转染 蛋白表达

原文传递

Ⅱ型犬腺病毒C株E1、E3区克隆测序及E3区标记载体瞬时表达

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作者 王凤雪 罗国良 +5 位作者 柴秀丽 张海玲 易立 邵西群 赵建军 闫喜军 《特产研究》 2008年第3期13-15,24,共4页

设计4对引物,对犬Ⅱ型腺病毒2C(CAV-2C)株E1、E3区进行了扩增,将片段进行T克隆、测序,并构建了E3区缺失、标记EGFP的转移载体,在MDCK和293-T细胞上成功表达,但在MDCK细胞中的转染效率较低。本研究为犬腺病毒活病毒载体构建的研究提供基础。

关键词 犬Ⅱ型腺病毒 E3区 转移载体

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禽腺病毒血清4型河南株的分离鉴定及对鸡胚致病性的研究 被引量：5

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作者 李京帅 李银聚 +6 位作者 张春杰 程相朝 吴庭才 余祖华 贾艳艳 李静 廖成水 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期479-483,共5页

为探明河南省某鸡场疑似禽腺病毒血清4型发病鸡群的感染情况和病毒特征，本试验对发病鸡群进行了病毒分离鉴定，并研究所分离到的病毒对鸡胚的致病性。采集发病鸡群鸡肝，处理后经尿囊腔接种SPF鸡胚．尿囊液禽腺病毒血清4型PCR鉴定和he... 为探明河南省某鸡场疑似禽腺病毒血清4型发病鸡群的感染情况和病毒特征，本试验对发病鸡群进行了病毒分离鉴定，并研究所分离到的病毒对鸡胚的致病性。采集发病鸡群鸡肝，处理后经尿囊腔接种SPF鸡胚．尿囊液禽腺病毒血清4型PCR鉴定和hexon基因序列分析，尿囊液经过浓缩定量和梯度稀释，接种SPF鸡胚，观察鸡胚病变，计算ELD50，同时荧光定量PCR测定病毒在鸡胚肝和尿囊液中的载量。结果显示，在鸡胚尿囊液中扩增出大小934bp的基因片段，序列分析表明，该序列与禽腺病毒血清4型同源性为98．2％～99．8％。感染病毒的鸡胚的胚体矮小、发育不良，肝肿大、质脆，呈黄色或棕黄色，胸肌、腿肌明显出血，病毒裁量和鸡胚病变与接种剂量有关。该毒株的ELD50为1．36×10^7 copies／μL，相同时间内病毒在肝中的载量高于尿囊液。本试验为进一步开展禽腺病毒血清4型的研究和防控提供了必要的参考依据。 展开更多

关键词 禽腺病毒4型 分离鉴定 鸡胚 ELD50

原文传递

BVDV 1型和2型TaqMan双重实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：6

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作者 麻宝艺 盛陈艳 +6 位作者 刘宏莹 马青霞 汪婷婷 李健明 时坤 杜锐 冷雪 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第6期2326-2335,共10页

【目的】建立一种快速检测牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV1)和2型(BVDV2)的TaqMan双重实时荧光定量PCR方法。【方法】根据GenBank上收录的95株BVDV1和BVDV25′-非编码区设计特异性引物,构建含有BVDV1和BVDV2目的片段的阳性质粒,优化反应条件... 【目的】建立一种快速检测牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV1)和2型(BVDV2)的TaqMan双重实时荧光定量PCR方法。【方法】根据GenBank上收录的95株BVDV1和BVDV25′-非编码区设计特异性引物,构建含有BVDV1和BVDV2目的片段的阳性质粒,优化反应条件,构建标准曲线,进行双重实时荧光定量PCR方法的特异性、敏感性和重复性检测,并利用建立的实时荧光定量PCR检测方法对采自吉林省的临床样品进行检测。【结果】建立的双重实时荧光定量PCR方法最适退火温度为57.0℃,最适引物浓度为0.5μmol/L,最适探针浓度为0.3μmol/L,BVDV1和BVDV2型的标准曲线分别为:Y=-3.54X+37.36(R^(2)=0.990)和Y=-3.18X+35.95(R^(2)=0.997)。对牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)和牛副流感病毒3型(BPIV3)均无特异性扩增,批内和批间变异系数均<3%,检测下限为10拷贝/μL。临床样品检测结果显示,总体阳性率为23.1%(36/156),其中BVDV1阳性率为17.9%(28/156),BVDV2阳性率为5.1%(8/156)。【结论】本研究建立了可同时快速、准确鉴别BVDV1和BVDV2的TaqMan双重实时荧光定量PCR方法,为BVDV的防控与净化提供技术支撑。 展开更多

关键词 牛病毒性腹泻病毒(BVDV) TaqMan实时荧光定量PCR方法 探针

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