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牦牛、犏牛睾丸组织中SYCP3基因mRNA表达水平研究 被引量:31
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作者 屈旭光 李齐发 +4 位作者 刘振山 董丽艳 李新福 郝称莉 谢庄 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期1132-1136,共5页
本文采用RT-PCR和荧光定量PCR对牦牛SYCP3基因的组织表达,以及SYCP3基因在牦牛和犏牛睾丸组织中的表达水平进行分析。结果表明,SYCP3基因在牦牛睾丸组织中特异表达,牦牛与犏牛睾丸组织中SYCP3基因的表达水平差异极显著(P<0.01)。睾... 本文采用RT-PCR和荧光定量PCR对牦牛SYCP3基因的组织表达,以及SYCP3基因在牦牛和犏牛睾丸组织中的表达水平进行分析。结果表明,SYCP3基因在牦牛睾丸组织中特异表达,牦牛与犏牛睾丸组织中SYCP3基因的表达水平差异极显著(P<0.01)。睾丸和附睾组织切片显示,牦牛睾丸组织中可见各级生精细胞,附睾内可见发育良好的精子,而犏牛睾丸组织中无次级精母细胞和更高级生精细胞、附睾内未观测到精子,与人和小鼠SY-CP3基因缺失或表达水平降低出现的表型一致,可以认为SYCP3基因的表达水平可能与犏牛的雄性不育有一定的关系。 展开更多
关键词 SYCP3 犏牛 牦牛 雄性不育 组织表达谱 荧光实时定量PCR 组织切片
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Oct 4在牦牛卵母细胞及早期胚胎发育过程中的表达 被引量:11
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作者 赵天 李谷月 +5 位作者 潘阳阳 李月琴 陈平 温泽星 崔燕 余四九 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期577-584,共8页
旨在通过检测转录因子Oct 4(Octamer-binding transcription factor 4)在牦牛(Bos grunneins)卵母细胞成熟及早期胚胎发育过程中的表达,分析Oct 4在卵母细胞与体外受精胚胎发育过程中的作用。本研究收集牦牛卵丘-卵母细胞复合体(Cumulus... 旨在通过检测转录因子Oct 4(Octamer-binding transcription factor 4)在牦牛(Bos grunneins)卵母细胞成熟及早期胚胎发育过程中的表达,分析Oct 4在卵母细胞与体外受精胚胎发育过程中的作用。本研究收集牦牛卵丘-卵母细胞复合体(Cumulus-oocyte complexes,COCs)对其进行体外成熟培养,生产体外受精(In vitro fertilization,IVF)胚胎,评估各时期胚胎发育能力。采用实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和间接免疫荧光染色方法从基因和蛋白水平检测COCs和胚胎各时期Oct 4的表达与分布。结果表明,1)2~4-细胞胚胎、5~8-细胞胚胎、9~16-细胞胚胎和囊胚的发育率分别为(64.66±1.76)%、(43.33±1.76)%、(24.66±2.40)%和(9.33±0.67)%。2)COCs和胚胎各发育时期均可检测到Oct 4基因,其中9~16-细胞胚胎表达最高,依次为囊胚、2~4-细胞胚胎和5~8-细胞胚胎,未成熟COCs和成熟COCs中表达最低。3)免疫荧光染色结果显示,OCT 4蛋白主要分布在COCs和体外受精胚胎的细胞质中,在细胞核中表达较弱。免疫荧光IOD值分析可得,9~16-细胞胚胎IOD值最高,依次为囊胚、2~4-细胞胚胎,5~8-细胞胚胎最低。综上表明,Oct 4在牦牛卵母细胞和早期胚胎发育过程中的各个时期均有表达,且不同时期该基因的表达量存在差异。由此说明Oct 4在9~16-细胞胚胎时期可能参与胚胎合子型基因转录激活的调控过程,在囊胚时期可能参与维持内细胞团全能性的过程。 展开更多
关键词 OCT 4 牦牛 体外受精 胚胎发育
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牦牛肌红蛋白的基因克隆测序、分离纯化、含量及其与乳酸脱氢酶和苹果酸脱氢酶活力的关系 被引量:8
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作者 郑玉才 苏永杰 +4 位作者 文勇立 金素钰 陈炜 周静 朴影 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期646-650,共5页
为探索牦牛适应高原缺氧环境的分子机制,测定了麦洼牦牛心肌和骨骼肌中肌红蛋白(Mb)含量及乳酸脱氢酶(LDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)活力,并对牦牛Mb进行了分离纯化和基因克隆测序。牦牛心肌和骨骼肌中Mb含量显著高于水牛和黄牛(P<0.01);... 为探索牦牛适应高原缺氧环境的分子机制,测定了麦洼牦牛心肌和骨骼肌中肌红蛋白(Mb)含量及乳酸脱氢酶(LDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)活力,并对牦牛Mb进行了分离纯化和基因克隆测序。牦牛心肌和骨骼肌中Mb含量显著高于水牛和黄牛(P<0.01);牦牛、黄牛和水牛心肌MDH/LDH活力比均显著高于骨骼肌;牦牛心肌MDH/LDH活力比显著高于水牛和黄牛,但在不同牛种骨骼肌之间无显著差异。各组织Mb含量与MDH/LDH活力比呈显著正相关。试验用RT-PCR方法从牦牛心肌中克隆了Mb基因,与普通牛相比,核苷酸序列同源性为99.5%,氨基酸序列完全相同;用盐析、CM-Sephadex阳离子交换层析、Sephadex G-50凝胶层析等方法分离纯化了牦牛Mb,SDS-PAGE显示其分子量约为17 ku。 展开更多
关键词 牦牛 肌红蛋白 克隆 乳酸脱氢酶 苹果酸脱氢酶
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天祝白牦牛三个功能基因部分序列的PCR-RFLP研究 被引量:4
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作者 白文林 郑玉才 +3 位作者 尹荣焕 朱建勇 颜卉 罗光彬 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2005年第4期84-86,共3页
采用PCR-RFLP技术,检测了天祝白牦牛αS1-酪蛋白(αS1-casein,αS1-CN)基因、κ-酪蛋白(κ-casein,κ-CN)基因和生长激素(growthhormone,GH)基因部分序列的遗传多态性。结果表明,天祝白牦牛群体中αS1-CN基因PCR-RFLP位点呈单态;κ-CN... 采用PCR-RFLP技术,检测了天祝白牦牛αS1-酪蛋白(αS1-casein,αS1-CN)基因、κ-酪蛋白(κ-casein,κ-CN)基因和生长激素(growthhormone,GH)基因部分序列的遗传多态性。结果表明,天祝白牦牛群体中αS1-CN基因PCR-RFLP位点呈单态;κ-CN基因和GH基因两个PCR-RFLP位点均呈多态性。κ-CN基因PCR-RFLP位点等位基因A和B的基因频率分别为0.0745和0.9255,GH基因PCR-RFLP位点等位基因A和B的基因频率分别为0.1277和0.8723;该3个位点平均基因一致度和基因多样度分别为0.8798和0.1202。 展开更多
关键词 天祝白牦牛 αS1-酪蛋白基因 Κ-酪蛋白基因 生长激素基因 多态性
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牦牛高原低氧适应研究进展 被引量:11
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作者 张思源 柴志欣 钟金城 《江苏农业科学》 北大核心 2016年第3期13-17,共5页
人们对不同海拔地区的动物进行解剖学比较并利用基因组学等现代生物技术进行系统分析,得到了低氧适应解剖学依据并挖掘出100多种与低氧适应相关的重要候选基因,初步揭示了一些高原动物低氧适应的遗传基础和分子机制。牦牛是生活在青藏... 人们对不同海拔地区的动物进行解剖学比较并利用基因组学等现代生物技术进行系统分析,得到了低氧适应解剖学依据并挖掘出100多种与低氧适应相关的重要候选基因,初步揭示了一些高原动物低氧适应的遗传基础和分子机制。牦牛是生活在青藏高原上的特有物种,是研究高原适应极好的模式动物,具有重要的研究价值。本文从牦牛的组织解剖、生理生化、低氧适应基因等方面综合分析了牦牛对低氧环境适应的研究进展,为揭示牦牛低氧适应的分子机制和牦牛遗传育种研究提供理论依据和参考资料。 展开更多
关键词 牦牛 低氧适应 分子机制 低氧适应基因 研究进展
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犏牛体外受精胚胎的发育转录组分析 被引量:2
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作者 字向东 刘霜 +8 位作者 夏威 熊显荣 黄林 张正帆 李志雄 李键 钟金城 王利 朱江江 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期92-101,共10页
本研究旨在探讨犏牛早期胚胎发育调控机制,为提高犏牛胚胎体外生产效率提供理论基础。以娟珊牛精子体外受精(IVF)牦牛卵母细胞获得的2-、4-、8-细胞、桑椹胚和囊胚5个阶段的杂种胚胎分别提取总RNA,采用Smart-Seq2扩增、构建测序文库,应... 本研究旨在探讨犏牛早期胚胎发育调控机制,为提高犏牛胚胎体外生产效率提供理论基础。以娟珊牛精子体外受精(IVF)牦牛卵母细胞获得的2-、4-、8-细胞、桑椹胚和囊胚5个阶段的杂种胚胎分别提取总RNA,采用Smart-Seq2扩增、构建测序文库,应用RNA-Seq技术进行高通量测序分析。对HiSeqTM2500测序所得的Raw Reads进行数据过滤后,得到5个发育阶段的犏牛早期胚胎的Clean Reads为47 791 850~63 332 216条,有80.00%~91.13%比对上参考基因的序列。4-细胞期表达的基因数最多(15 400),而桑椹胚表达的基因数最少(9 604)。以log2ratio≥1,Q-value<0.05为阈值,获得2-~4-细胞、4-~8-细胞、8-细胞~桑椹胚及桑椹胚~囊胚4个发育阶段的差异表达基因(DEGs)分别为3 690、6 332、8 965和10 298个。GO分析表明,4个发育阶段的DEGs归类注释都涉及生物过程(BP)、细胞组分(CC)和分子功能(MF)3大类67个二级条目。KEGG分析表明,牦牛早期胚胎发育过程中DEGs富集的主要通路有剪接体(Spliceosome)、神经活性配体-受体互作(Neuroactive ligand-receptor interaction)、细胞因子及其受体相互作用(Cytokine-cytokine receptor interactions)、泛素介导的蛋白水解(Ubiquitin mediated proteolysis)、RNA转运(RNA transport)等通路。本研究利用RNA-Seq技术对犏牛体外受精胚胎在发育不同阶段转录组进行了分析,获得了众多差异基因和有关通路的富集,为完善犏牛胚胎体外生产技术提供了理论基础。 展开更多
关键词 犏牛 体外受精 胚胎 转录组 RNA-SEQ
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基于高通量测序的犏牛囊胚玻璃化冷冻损伤机制研究 被引量:7
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作者 郑杰 蒲思颖 +3 位作者 杨远潇 王琴 杨绕芬 字向东 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1871-1881,共11页
本研究旨在利用RNA-seq技术从转录组学角度探讨犏牛囊胚玻璃化冷冻的损伤机制。采用体外受精(IVF)技术生产犏牛胚胎(奶牛精子×牦牛卵子),以新鲜犏牛囊胚和经玻璃化冷冻复苏后的冻融囊胚为研究对象,提取总RNA,使用Smart-seq2方法进... 本研究旨在利用RNA-seq技术从转录组学角度探讨犏牛囊胚玻璃化冷冻的损伤机制。采用体外受精(IVF)技术生产犏牛胚胎(奶牛精子×牦牛卵子),以新鲜犏牛囊胚和经玻璃化冷冻复苏后的冻融囊胚为研究对象,提取总RNA,使用Smart-seq2方法进行扩增并构建文库进行高通量测序。结果表明:新鲜囊胚和冻融囊胚样本经深度测序后,分别得到51 099 116和54 192 358条Clean Reads,其中80%以上Clean Reads被比对上参考基因组。冻融囊胚相对于新鲜囊胚共筛选出11 196个差异表达基因(DEGs),其中上调表达基因有7 570个,下调表达基因有3 626个。新鲜囊胚和冻融囊胚可变剪切数分别有49 016和64 352个;SNP位点数量分别为116 681和224 750个。差异基因GO功能分析主要富集于生物过程、细胞组成和分子功能3大类;KEGG注释结果表明,冻融囊胚与新鲜囊胚间共涉及318条通路,其中14条通路显著富集。推测犏牛囊胚冷冻损伤机制可能是通过剪接体、泛素介导蛋白水解和内质网蛋白加工等通路的相互协调以及Prp19、Prp4、CaM、PKA、Hsp70、CCL2等基因的差异表达来发挥生物学作用。综上表明,本研究利用RNA-seq技术首次从转录组学角度探讨了犏牛囊胚玻璃化冷冻的损伤机制,为完善胚胎的玻璃化冷冻提供新思路,同时也为进一步完善犏牛基因结构信息和胚胎玻璃化冷冻相关的新基因提供理论基础。 展开更多
关键词 犏牛 体外受精 囊胚 玻璃化冷冻 转录组测序
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天祝白牦牛Lfcin基因克隆及生物信息学分析 被引量:2
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作者 裴杰 阎萍 +4 位作者 姬国红 梁春年 郭宪 曾玉峰 包鹏甲 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期1-6,共6页
利用PCR技术从天祝白牦牛基因组DNA中获得乳铁蛋白素(Lactoferricin,Lfcin)基因序列,将Lfcin基因连接于pGEM-T easy载体进行测序后,与奶牛的Lfcin基因序列进行比对;对牦牛、奶牛、人、小鼠等物种的Lfcin蛋白序列进行比对和进化树分析.... 利用PCR技术从天祝白牦牛基因组DNA中获得乳铁蛋白素(Lactoferricin,Lfcin)基因序列,将Lfcin基因连接于pGEM-T easy载体进行测序后,与奶牛的Lfcin基因序列进行比对;对牦牛、奶牛、人、小鼠等物种的Lfcin蛋白序列进行比对和进化树分析.结果表明:克隆获得了含天祝白牦牛乳铁蛋白第二外显子的DNA序列,共778 bp,其中Lfcin基因编码区长75 bp,编码25个氨基酸;序列分析显示,克隆获得的牦牛DNA序列与奶牛该序列存在9个碱基的变异,其中Lfcin基因编码区内有1个变异,为同义突变;牦牛和奶牛的Lfcin蛋白质序列完全相同,各物种Lfcin蛋白具有较高的同源性. 展开更多
关键词 牦牛 L fcin基因 克隆 生物信息学
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牦牛葡萄糖转运蛋白和单羧酸转运蛋白基因的克隆测序及在肌肉中的表达 被引量:2
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作者 金素钰 王国生 +2 位作者 徐亚欧 林亚秋 郑玉才 《江苏农业科学》 北大核心 2014年第8期29-31,共3页
采用RT-PCR方法克隆九龙牦牛(Bos grunniens)肌肉中葡萄糖转运蛋白(GLUT)和单羧酸转运蛋白(MCT)基因GlUT4、MCT1和MCT4的cDNA序列,并与普通牛(Bos taraus)进行基因序列和肌肉中mRNA水平的比较,以探索牦牛适应高原低氧的分子基础。结果表... 采用RT-PCR方法克隆九龙牦牛(Bos grunniens)肌肉中葡萄糖转运蛋白(GLUT)和单羧酸转运蛋白(MCT)基因GlUT4、MCT1和MCT4的cDNA序列,并与普通牛(Bos taraus)进行基因序列和肌肉中mRNA水平的比较,以探索牦牛适应高原低氧的分子基础。结果表明,GlUT4、MCT1和MCT4的核苷酸序列和推导的氨基酸序列与普通牛的相似性均在99.5%以上。实时荧光定量PCR分析显示,成年九龙牦牛与黄牛背最长肌中GLUT4、MCT4基因mRNA水平无差别,而牦牛PMCT1基因mRNA水平显著低于黄牛(P<0.05)。乳酸脱氢酶(LDH)总活力和同工酶谱测定结果表明,牦牛背最长肌中LDH总活力、LDH5比例显著高于黄牛,显示出更强的无氧酵解能力。结合MCT1基因mRNA水平的差异发现,牦牛背最长肌对乳酸的氧化代谢能力低于黄牛,更倾向于无氧酵解,与其适应高原低氧有关。 展开更多
关键词 九龙牦牛 葡萄糖转运蛋白 单羧酸转运蛋白 肌肉 低氧适应 基因表达
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牦牛分子育种研究进展 被引量:5
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作者 宋乔乔 柴志欣 钟金城 《江苏农业科学》 北大核心 2013年第10期5-9,共5页
系统阐述了开展牦牛分子育种的必要性、研究内容与特点,牦牛生长发育、繁殖、肉质、泌乳、抗病、毛色等性状的相关候选功能基因的研究进展,以及DNA分子多态性及其与生产性状的相关性,分析了牦牛分子育种研究和应用中存在的问题,提出了... 系统阐述了开展牦牛分子育种的必要性、研究内容与特点,牦牛生长发育、繁殖、肉质、泌乳、抗病、毛色等性状的相关候选功能基因的研究进展,以及DNA分子多态性及其与生产性状的相关性,分析了牦牛分子育种研究和应用中存在的问题,提出了今后开展牦牛分子育种的思路。 展开更多
关键词 牦牛 分子育种 分子遗传标记
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肉乳兼用牦牛新品种的培育——幼龄生长牦牛冷季失重规律与补饲效果分析 被引量:3
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作者 王敏强 陆仲磷 +2 位作者 杨尕旦 李吉叶 田永强 《中国草食动物》 2000年第4期9-11,共3页
:对约半岁的牦犊牛于 1月 2 6日提前断奶 ,进行为期 4个月的简单补饲。前 2月由于适应新环境 ,补饲组牛比未补饲组牛每月多失重 2 4 3kg ,但后 2月补饲组牛比未补饲组牛每月多增重7 0 1kg ,补饲效果十分明显。在停止补饲后的 2月内 ,... :对约半岁的牦犊牛于 1月 2 6日提前断奶 ,进行为期 4个月的简单补饲。前 2月由于适应新环境 ,补饲组牛比未补饲组牛每月多失重 2 4 3kg ,但后 2月补饲组牛比未补饲组牛每月多增重7 0 1kg ,补饲效果十分明显。在停止补饲后的 2月内 ,原补饲组牛日增重为 4 2 9 0 2 g ,比未补饲组牛日增重高 4 2 6 3g。补饲组牛在补饲期的体高平均增长 3 54cm ,而未补饲组牛则下降 2 6 4cm。未补饲的牦牛犊从 1月 2 6日~ 7月 2 6日 ,每两个月体重变化情况分别为 - 0 95kg、- 0 82kg和2 3 96kg。而补饲组相应为 - 5 80kg、14 4 8kg和 2 6 17kg ,表明补饲效果较为显著。 展开更多
关键词 生长规律 补饲效应 牦牛 冷季失重规律 育种
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牦牛异种核移植显微操作针的制备 被引量:3
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作者 王中乾 李键 +2 位作者 毕琳 田甜 罗添添 《畜牧与饲料科学》 2010年第2期5-6,共2页
结合制备用于牦牛异种核移植显微操作针的经验,介绍了制备显微操作用针的具体方法,并对一些在显微操作针制作过程中可能出现的影响因素及其注意事项加以总结。
关键词 显微操作用针 核移植 胚胎
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九龙牦牛C带和银染核仁组织区(Ag-NORs)的研究 被引量:6
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作者 钟金城 钟光辉 +4 位作者 字向东 文勇立 蔡立 刘成烈 倪银安 《西南民族学院学报(自然科学版)》 1994年第1期38-41,共4页
对九龙耗牛染色体的核型、C带及Ag-NORs的研究表明:九龙耗牛的常染色体为近端着丝粒染色体,X、Y染色体为亚中部着丝染色体,C带具有多态性,Ag-NORs分布于2、3、4、5、28对染色体上,其频率为5.04;并对... 对九龙耗牛染色体的核型、C带及Ag-NORs的研究表明:九龙耗牛的常染色体为近端着丝粒染色体,X、Y染色体为亚中部着丝染色体,C带具有多态性,Ag-NORs分布于2、3、4、5、28对染色体上,其频率为5.04;并对耗牛常染色体的形态和犏牛雄性不育的机理进行了讨论,为九龙耗牛的研究提供了细胞遗传学方面的资料。 展开更多
关键词 九龙牦牛 C带 染色体 银染法 牦牛
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西藏牦牛血清乳酸脱氢酶H亚基的遗传变异体 被引量:12
14
作者 郑玉才 陈智华 《青海畜牧兽医杂志》 1997年第1期14-16,共3页
采用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析西藏嘉黎和亚东地区85头牦牛血清乳酸脱氢酶(LDH)同工酶。结果显示,牦牛血清LDH同工酶具有LDH1~LDH5五种形式,LDH的H亚基存在A、B、C三种遗传变异体,C型遗传变异体平均占82... 采用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析西藏嘉黎和亚东地区85头牦牛血清乳酸脱氢酶(LDH)同工酶。结果显示,牦牛血清LDH同工酶具有LDH1~LDH5五种形式,LDH的H亚基存在A、B、C三种遗传变异体,C型遗传变异体平均占82.35%。值得注意的是,嘉黎地区具有A或B型H亚基的牦牛血清中LDH2的相对活力显著低于具有C型H亚基的牦牛,其机制和意义有待进一步研究。 展开更多
关键词 牦牛 乳酸脱氢酶 遗传变异体
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牦牛群体血清运铁蛋白位点遗传分化的探讨 被引量:1
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作者 钟金城 字向东 +1 位作者 张成忠 蔡立 《西南民族学院学报(自然科学版)》 1995年第4期418-422,共5页
根据中国、蒙古、前苏联等3国9个牦牛地方品种(类群)血清运铁蛋白位点的基因频率,探讨了各牦牛群体的遗传分化程度,结果表明:血清运铁蛋白各等位基因频率在不同的牦牛群体中,具有明显的种群特异性;中国牦牛品种(类群)间遗传... 根据中国、蒙古、前苏联等3国9个牦牛地方品种(类群)血清运铁蛋白位点的基因频率,探讨了各牦牛群体的遗传分化程度,结果表明:血清运铁蛋白各等位基因频率在不同的牦牛群体中,具有明显的种群特异性;中国牦牛品种(类群)间遗传分化程度大,而蒙古牦牛品种(类群)间遗传分化程度较低。这反映了牦牛起源进化上的差异。 展开更多
关键词 牦牛 血清 运铁蛋白 遗传分化
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犏牛雄性不育的多基因遗传不平衡假说 被引量:6
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作者 钟金城 《西南民族学院学报(自然科学版)》 1997年第1期90-92,共3页
根据犏牛雄性不育的研究结果,提出了犏牛雄性不育的多基因遗传不平衡假说.假说认为,不育性是受多基因控制的,牦牛和普通牛由于在多个基因位点上的遗传差异而使犏牛的基因平衡失调,导致不育.
关键词 犏牛 雄性不育 多基因遗传 不平衡假说
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肉乳兼用牦牛新品群的培育——18月龄F_2代牦牛产肉性能研究(Ⅱ报)
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作者 陆仲璘 王敏强 +6 位作者 柏家林 贾永红 芦志刚 阎萍 杨宗涛 赵龙泉 殷满才 《草与畜杂志》 1996年第1期11-14,共4页
将现代动物育种方法和经典选育方法相结合,在获得大量 F_1代(野♂×家♀)牦牛的基础上,组织 F_1代横交育种群,繁育 F_2代牦牛。于1994.11.10~15对 F_2代18月龄牦牛进行了比较屠宰实验。结果表明.F_2牦牛宰前重较同等饲管条件下的... 将现代动物育种方法和经典选育方法相结合,在获得大量 F_1代(野♂×家♀)牦牛的基础上,组织 F_1代横交育种群,繁育 F_2代牦牛。于1994.11.10~15对 F_2代18月龄牦牛进行了比较屠宰实验。结果表明.F_2牦牛宰前重较同等饲管条件下的同龄非育种群托牛重32.77kg,胴体重,净肉重和优质肉切块重前者较后者分别重16.89、13.86和4.36kg,差异达显著或极显著水准,屠宰率为47.30%,表明托牛育种工作取得了较大的进展。 展开更多
关键词 牦牛 育种 屠宰实验 产肉性能
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KDM2B基因克隆及其在牦牛组织和卵母细胞减数分裂过程中的表达研究 被引量:5
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作者 蔡雯祎 熊显荣 +4 位作者 陈通 杨显英 韩杰 阿果约达 李键 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期534-541,共8页
本研究旨在克隆牦牛组蛋白去甲基化酶2B(Lysine-specific histone demethylase 2B,KDM2B)基因,检测其在牦牛不同组织及其在卵母细胞减数分裂过程中的表达水平,从而为研究KDM2B基因在牦牛减数分裂中的作用机制提供试验依据。牦牛屠宰后,... 本研究旨在克隆牦牛组蛋白去甲基化酶2B(Lysine-specific histone demethylase 2B,KDM2B)基因,检测其在牦牛不同组织及其在卵母细胞减数分裂过程中的表达水平,从而为研究KDM2B基因在牦牛减数分裂中的作用机制提供试验依据。牦牛屠宰后,采集心、肝、脾、肺、肾、脑、小肠、胃、肌肉、卵巢、睾丸和子宫组织样品,分别提取各个样本的总RNA。另选择3~5周岁的健康牦牛,采集卵巢后,抽取卵丘-卵母细胞复合体(Cumulus-oocyte complex,COCs),透明质酸酶作用后,获得卵母细胞和颗粒细胞,利用RT-PCR扩增得到KDM2B基因CDS区序列,实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测KDM2B基因在不同组织中的表达水平。体外培养获得GV、MI、MII 3个时期COCs,用qRT-PCR法检测KDM2B基因在卵母细胞减数分裂过程中的表达规律。结果表明,KDM2B基因CDS区长为3 930bp,编码1 309个氨基酸,与牦牛已有预测序列相比,属于长型转录本。与牛、绵羊、山羊的同源性较高,与斑马鱼和鸡的同源性较低。KDM2B基因在牦牛的各个组织中均有表达,其中脾、子宫、睾丸和卵巢的表达量较高。在MI期卵母细胞中,KDM2B基因的表达水平显著高于GV期和MII期(P<0.01)。在卵丘颗粒细胞中,KDM2B基因的表达水平随减数分裂的进行而显著增加(P<0.01)。本研究为进一步研究牦牛卵母细胞减数分裂机制及改善牦牛繁殖效率提供基础资料。 展开更多
关键词 牦牛 KDM2B基因 组织表达 卵母细胞 减数分裂
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牦牛Cyclin D1基因的克隆及IGF-I对其在睾丸支持细胞表达的影响 被引量:4
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作者 王亚营 潘阳阳 +6 位作者 叶小琳 李谷月 何翃闳 王萌 樊江峰 崔燕 余四九 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期310-317,共8页
本研究旨在克隆牦牛(Bos grunniens)Cyclin D1基因的CDS序列,分析其生物学特性,研究胰岛素样生长因子-I(Insulin-like growth factor-I,IGF-I)对Cyclin D1mRNA和蛋白在睾丸支持细胞(Sertoli cell,SC)中表达的影响。采集5~8月龄健康牦牛... 本研究旨在克隆牦牛(Bos grunniens)Cyclin D1基因的CDS序列,分析其生物学特性,研究胰岛素样生长因子-I(Insulin-like growth factor-I,IGF-I)对Cyclin D1mRNA和蛋白在睾丸支持细胞(Sertoli cell,SC)中表达的影响。采集5~8月龄健康牦牛的睾丸样品进行SC的分离培养,用RT-PCR技术克隆牦牛Cyclin D1基因,用ORF Finder、MEGA7.0和DNAMAN对其进行生物信息学分析,并采用免疫荧光染色技术对Cyclin D1蛋白在SC中的表达进行定位分析。向体外培养的SC中加入不同浓度(0(对照组)、25、50、100、150ng·mL^(-1))的IGF-I,采用实时定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法检测Cyclin D1基因和蛋白的表达。结果表明:1)牦牛Cyclin D1基因(GenBank登录号:KY 420723)与其他物种的同源性均较高。2)Cyclin D1蛋白在SC胞核中高表达,为核蛋白。3)浓度为25和150ng·mL^(-1)IGF-I,Cyclin D1mRNA表达量与对照组差异不显著(P>0.05),浓度为50和100ng·mL^(-1)IGF-I时,Cyclin D1mRNA表达量显著高于其他各组(P<0.05);IGF-I浓度为100ng·mL^(-1),Cyclin D1蛋白表达量与对照组差异不显著(P>0.05),25、50和150ng·mL^(-1) IGF-I组Cyclin D1蛋白表达量显著高于对照组(P<0.05);IGF-I浓度为50ng·mL^(-1)时,Cyclin D1mRNA和蛋白表达量均为最高,分别为对照组的1.65和1.20倍。综上表明,Cyclin D1基因在进化过程中高度保守;IGF-I可调控SC中Cyclin D1的表达,其最佳作用浓度为50ng·mL^(-1)。 展开更多
关键词 牦牛 睾丸支持细胞 细胞周期蛋白D1 胰岛素样生长因子-I
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牦牛KDM4A基因克隆、组织表达谱及其在卵母细胞和颗粒细胞中的表达 被引量:6
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作者 韩杰 熊显荣 +4 位作者 蔡雯祎 杨显英 阿果约达 张燕红 李键 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期291-299,共9页
本研究旨在阐明牦牛KDM4A基因的表达特性及其在牦牛卵母细胞和颗粒细胞中的作用。采集牦牛心、肝、脾、卵巢、肺、肾、睾丸、小肠、子宫、胃、大脑组织,以GenBank上已发布的黄牛KDM4A基因序列设计引物,利用RT-PCR方法扩增克隆牦牛KDM4A... 本研究旨在阐明牦牛KDM4A基因的表达特性及其在牦牛卵母细胞和颗粒细胞中的作用。采集牦牛心、肝、脾、卵巢、肺、肾、睾丸、小肠、子宫、胃、大脑组织,以GenBank上已发布的黄牛KDM4A基因序列设计引物,利用RT-PCR方法扩增克隆牦牛KDM4A基因及检测其在牦牛各组织中的表达谱,并使用在线软件ExPASY分析KDM4A基因的结构和功能。采用实时荧光定量PCR法检测牦牛不同时期卵母细胞和颗粒细胞中KDM4A基因的表达水平。结果表明,本研究克隆得到牦牛KDM4A基因3 289bp的cDNA序列。牦牛KDM4A核苷酸序列与其它哺乳动物的遗传距离较近,表明KDM4A基因在进化中较为保守。牦牛KDM4A基因CDs区为3 201bp,编码1 066个氨基酸残基,相对分子质量122.48ku。KDM4A蛋白为亲水不稳定的酸性蛋白,无跨膜区和信号肽,二级结构主要包含α-螺旋和无规卷曲,与三级结构分析结果一致。KDM4A基因在所选牦牛组织样本中均有表达,其中在卵巢、脾和睾丸中表达量最高。牦牛KDM4A mRNA在MII期颗粒细胞中表达量显著高于在MI期和GV期颗粒细胞中的表达量(P<0.05),GV期卵母细胞中,KDM4A mRNA的表达水平显著高于在MI期和MII期卵母细胞中的表达量(P<0.05)。综上表明,本研究成功克隆了KDM4A基因及其在牦牛卵母细胞和颗粒细胞成熟过程中mRNA表达水平的差异,表明KDM4A基因在卵母细胞及颗粒细胞成熟过程中发挥一定作用。 展开更多
关键词 牦牛 KDM4A 生物信息学 卵母细胞 颗粒细胞
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