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褪黑素对牦牛黄体细胞生长及功能影响的研究 被引量：3
1
作者 程华琴 袁钰洁 +4 位作者 罗文 高绍帅 叶林霞 李键 殷实 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期459-469,共11页
本试验旨在探究褪黑素(melatonin,MT)对牦牛黄体细胞生长、抗氧化性及功能的影响。本试验以健康牦牛二代黄体细胞为研究对象,比较了不同浓度MT(0(Control组)、25、125、250、500 pg·mL^(-1))对牦牛黄体细胞生长和功能的影响。通过C... 本试验旨在探究褪黑素(melatonin,MT)对牦牛黄体细胞生长、抗氧化性及功能的影响。本试验以健康牦牛二代黄体细胞为研究对象,比较了不同浓度MT(0(Control组)、25、125、250、500 pg·mL^(-1))对牦牛黄体细胞生长和功能的影响。通过CCK-8法检测黄体细胞的生长情况,并采用qRT-PCR检测增殖相关基因PCNA,凋亡相关基因BCL-2、BAX、FAS,抗氧化相关基因SOD1、SOD2、GPX1和CAT以及孕酮合成相关基因HSD3β、STAR和CYP11A1 mRNA的表达水平,应用ELISA检测黄体细胞ROS和孕酮水平。结果显示,添加不同浓度的MT培养能促进细胞增殖,加速黄体细胞进入平台期。MT能促进黄体细胞增殖基因PCNA和抑凋亡基因BCL-2 mRNA的表达并抑制促凋亡基因BAX、FAS的表达。同时,MT能显著降低黄体细胞中的ROS水平并促进黄体细胞分泌孕酮,且浓度在250 pg·mL^(-1)时上述作用最明显。在此浓度作用下,黄体细胞中抗氧化相关基因SOD2、GPX1及CAT和孕酮合成相关基因STAR、CYP11A1 mRNA的表达量明显上调。与仅添加MT相比,应用MT及MT受体抑制剂Luzindole联合处理黄体细胞可显著升高黄体细胞的ROS水平并抑制SOD2、GPX1及CAT的表达,孕酮水平及STAR和CYP11A1表达量均显著下调。综上表明,MT可能通过上调PCNA、BCL-2,下调BAX、FAS mRNA表达量进而促进黄体细胞增殖。MT可能通过受体介导调控了黄体细胞的ROS和孕酮水平。本研究为MT治疗黄体异常引发的生殖疾病以及其在提高牦牛繁殖性能上的应用提供了一定的理论基础。 展开更多
关键词 褪黑素 牦牛 黄体细胞 抗氧化性 孕酮
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牦牛EPF的原核表达及多克隆抗体制备 被引量：3
2
作者 曹艳桃 樊江峰 +5 位作者 余四九 周应聪 杜培岩 李一娟 马进彪 赵生贤 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期470-480,共11页
本试验旨在制备牦牛早孕因子(early pregnancy factor,EPF)多克隆抗体,为牦牛妊娠早期高效快速诊断技术研究奠定基础。采用RT-PCR方法,从牦牛胎盘和卵巢组织中提取RNA,反转录为模板后进行EPF基因扩增,并将其克隆到改造后的载体pET28-His... 本试验旨在制备牦牛早孕因子(early pregnancy factor,EPF)多克隆抗体,为牦牛妊娠早期高效快速诊断技术研究奠定基础。采用RT-PCR方法,从牦牛胎盘和卵巢组织中提取RNA,反转录为模板后进行EPF基因扩增,并将其克隆到改造后的载体pET28-His10-Sumo上,构建pET28-His10-Sumo-EPF重组质粒,经PCR和测序鉴定后将阳性重组质粒转化至感受态大肠杆菌BL21(DE3)中。用IPTG诱导表达并优化表达条件,使用His标签镍柱纯化重组EPF蛋白并免疫小鼠制备抗体。结果显示,经PCR扩增的牦牛EPF基因在300 bp左右,符合预期结果,并通过测序验证获得重组阳性质粒。pET28-His10-Sumo-EPF重组质粒转化后经IPTG的诱导,表达分子质量大小为29 ku的蛋白(其中包括早孕因子目标蛋白和SUMO标签蛋白),且在37℃、IPTG浓度为300 nmol·L^(-1)、诱导6 h时获得最高表达量。Western blot结果显示,蛋白在上清和包涵体中均有表达,免疫后的小鼠抗血清能够与纯化后的重组蛋白发生免疫反应。本试验通过原核表达系统成功表达了重组牦牛EPF蛋白,制备了免疫原性较好的鼠抗EPF多克隆抗体。 展开更多
关键词 牦牛 早孕因子(EPF) 原核表达 多克隆抗体
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甘肃省肃南牦牛遗传特性分析及品种改良策略研究
3
作者 巴向国 武庭斌 +3 位作者 李建国 马建荣 李海云 王才玛 《当代畜牧》 2025年第10期134-136,共3页
肃南裕固族自治县地处青藏高原东北板块高海拔放牧区。肃南牦牛作为当地特有畜种,是当地群众重要生产生活资料,对畜牧业发展意义重大。但近亲繁殖导致其原始品种退化,亟待杂交改良、提纯复壮。本文通过分析遗传特性,指出种质利用问题,... 肃南裕固族自治县地处青藏高原东北板块高海拔放牧区。肃南牦牛作为当地特有畜种,是当地群众重要生产生活资料,对畜牧业发展意义重大。但近亲繁殖导致其原始品种退化,亟待杂交改良、提纯复壮。本文通过分析遗传特性,指出种质利用问题,从生产实际出发探索选育技术新思路,创新选育路线,明确选育方向,旨在培育自主优良品种,推动肃南牦牛产业高效发展。 展开更多
关键词 肃南牦牛 杂交改良 生产性能 选育技术
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牦牛电刺激采精技术研究 被引量：2
4
作者 王燕文 李小伟 +5 位作者 何小强 赵晓东 董丽娟 周兴 张愈 申振花 《当代畜牧》 2023年第7期18-20,共3页
为了探究牦牛直肠电刺激采精技术,提高优质种公牛利用率,进一步开展牦牛种质资源的保护和利用,从2018年开始,四川省龙日种畜场专业技术团队采用直肠电刺激采精技术,对4~9岁优质种公牛进行直肠电刺激,并对采精时的射精电压、射精时间、... 为了探究牦牛直肠电刺激采精技术,提高优质种公牛利用率,进一步开展牦牛种质资源的保护和利用,从2018年开始,四川省龙日种畜场专业技术团队采用直肠电刺激采精技术,对4~9岁优质种公牛进行直肠电刺激,并对采精时的射精电压、射精时间、射精量、采精季节、精子活力进行分析。结果表明,电刺激采精方法对牦牛精液质量影响较小,采精后牦牛个体恢复良好。用此方法采集牦牛种公牛精液是可行的。 展开更多
关键词 牦牛 人工授精 电刺激采精
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