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彭波半细毛羊冷冻保存睾丸组织支持细胞分离、纯化及鉴定 被引量：1
1
作者 刘海霞 王健 +4 位作者 平措班旦 朱爱文 德庆卓嘎 王军 格桑加措 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第1期249-257,共9页
[目的]睾丸支持细胞(Sertoli cells, SCs)位于生精小管内上皮,为不同分化阶段雄性生殖细胞发育提供物理构架和能量物质支持,对精子发生过程产生至关重要的作用。试验旨在研究新鲜绵羊睾丸组织样品获取不便的情况下,从冷冻保存的彭波半... [目的]睾丸支持细胞(Sertoli cells, SCs)位于生精小管内上皮,为不同分化阶段雄性生殖细胞发育提供物理构架和能量物质支持,对精子发生过程产生至关重要的作用。试验旨在研究新鲜绵羊睾丸组织样品获取不便的情况下,从冷冻保存的彭波半细毛羊睾丸组织分离支持细胞的技术方法。[方法]将冷冻保存液预处理后冻存的彭波半细毛羊睾丸组织进行复苏,采用苏木精-伊红(HE)染色检测复苏后睾丸组织形态,利用组合酶消化法、差速贴壁法进行睾丸组织支持细胞分离纯化培养,观察细胞生长规律,绘制生长曲线,采用RT-PCR和免疫荧光染色(IF)技术进行睾丸支持细胞特异性基因鉴定。[结果]冻存复苏睾丸组织曲细精索及睾丸间质保存完好。组合酶消化后能获得满足试验需要的生精上皮细胞混悬液,分离培养2~4 h后支持细胞贴壁,形态呈梭形或不规则多边形,培养3~4 d后汇合,其中培养1~2 d生长速度缓慢,培养3~6 d进入对数期,增殖速度加快,培养7~8 d后增殖速度下降。RT-PCR检测显示,GNDF、WT1、ABP、SOX9基因均在彭波半细毛羊睾丸支持细胞中特异性表达;免疫荧光染色显示,特异性抗体GATA4、Vimentin免疫阳性。[结论]经冻存液预处理的冷冻保存睾丸组织复苏后,可分离出满足试验条件的原代支持细胞,应用于科学试验研究。 展开更多
关键词 彭波半细毛羊 冷冻保存 睾丸支持细胞 分离鉴定 细胞培养
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基于转录组数据筛选下丘脑-垂体轴中猪卵巢囊肿相关候选基因
2
作者 任巧玲 张家庆 +6 位作者 张世昌 刘维民 陈俊峰 马强 刘付玖 张华 邢宝松 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第12期5726-5739,共14页
【目的】挖掘下丘脑-垂体轴中猪卵巢囊肿相关候选基因,从神经内分泌系统揭示猪卵巢囊肿的遗传机制。【方法】利用Illumina高通量测序技术分别对3头卵巢囊肿和3头正常发情母猪的下丘脑和垂体进行转录组测序,筛选差异表达基因,并对差异表... 【目的】挖掘下丘脑-垂体轴中猪卵巢囊肿相关候选基因,从神经内分泌系统揭示猪卵巢囊肿的遗传机制。【方法】利用Illumina高通量测序技术分别对3头卵巢囊肿和3头正常发情母猪的下丘脑和垂体进行转录组测序,筛选差异表达基因,并对差异表达基因进行GO功能和KEGG通路富集分析。利用实时荧光定量PCR对下丘脑和垂体中12个差异表达基因表达量进行检测,以验证转录组测序数据的可靠性。【结果】与正常发情母猪相比,在卵巢囊肿母猪下丘脑中共有283个基因存在差异表达,其中173个基因表达下调,110个基因表达上调;在卵巢囊肿母猪垂体中共有1149个基因存在差异表达,其中563个基因表达下调,586个基因表达上调。基于差异表达基因的表达量、差异倍数及功能富集分析等结果,POMC、KISS 1、PMCH、PRLH、VIP、NTRK 1、TAC 3可能是下丘脑中与猪卵巢囊肿相关的重要候选基因;MC 3 R、SSTR 3、FSHB、OXT、PRL、TSHB、LHB、TAC 1可能是垂体中与猪卵巢囊肿相关的重要候选基因。G-蛋白偶联受体信号通路、激素活性、跨膜信号受体活性、神经活性配体-受体相互作用、甲状腺激素合成及ECM受体相互作用等信号通路可能对猪卵巢囊肿的发生起重要作用。实时荧光定量PCR验证的差异基因表达趋势与转录组测序结果基本一致。【结论】转录组测序结果表明,下丘脑中POMC、KISS 1、PMCH等基因及垂体中MC 3 R、SSTR 3、FSHB等基因可能是猪卵巢囊肿相关重要候选基因;G-蛋白偶联受体信号通路、激素活性、跨膜信号受体活性等通路可能在猪卵巢囊肿病理过程中起重要作用。研究结果为从神经内分泌系统解析猪卵巢囊肿的遗传机制提供了重要的数据支撑。 展开更多
关键词 母猪 卵巢囊肿 下丘脑-垂体轴 转录组 差异表达基因
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卵母细胞玻璃化冷冻保存中凋亡的机制及缓解策略
3
作者 陈丹丹 齐雅天 李俊杰 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第6期2729-2735,共7页
作为一种在超低温环境下长期保存卵母细胞的技术,卵母细胞玻璃化冷冻保存在优良种质资源保存方面具有重要意义。然而,玻璃化冷冻保存技术面临的核心挑战在于细胞凋亡信号的激活致使凋亡细胞比例升高,影响细胞功能、活力和发育潜能。细... 作为一种在超低温环境下长期保存卵母细胞的技术,卵母细胞玻璃化冷冻保存在优良种质资源保存方面具有重要意义。然而,玻璃化冷冻保存技术面临的核心挑战在于细胞凋亡信号的激活致使凋亡细胞比例升高,影响细胞功能、活力和发育潜能。细胞凋亡是指一种程序化的细胞死亡过程,通常被称为“细胞自杀”,这一机制在生物体内发挥着关键作用,有助于维持细胞的平衡和组织的稳态。然而,异常的细胞凋亡会导致细胞死亡等不利影响。因此,有效抑制或减缓细胞凋亡过程,成为提高冷冻卵母细胞存活率和发育潜能的关键所在。应用凋亡抑制剂和抗氧化剂可以减少玻璃化卵母细胞凋亡,提高其存活率和发育能力,从而改善解冻后的细胞质量。作者简述了玻璃化冷冻保存技术对卵母细胞的影响,以及冷冻引起的细胞内源性和外源性凋亡机制,并分析了相关凋亡抑制剂与抗氧化剂的应用,未来可深入探究新型抑制剂与抗氧化剂在玻璃化冷冻技术中的作用机理,以及探究细胞凋亡与坏死性凋亡等细胞死亡途径之间的交互影响,为卵母细胞玻璃化冷冻保存技术提供新的思路和方法。 展开更多
关键词 冷冻保存技术 卵母细胞 细胞凋亡 凋亡抑制剂 抗氧化剂
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小非编码RNA在雄性生殖发育和代际遗传中研究进展 被引量：1
4
作者 师愉倩 马剑峰 +5 位作者 陈思宇 周立新 薛佳 沈林園 朱砺 甘麦邻 《遗传》 北大核心 2025年第8期861-875,共15页
作为表观遗传的重要研究内容,小非编码RNA(small non-coding RNAs,sncRNAs)在雄性生殖正常发育和代际遗传中发挥着重要的调控作用。研究表明,哺乳动物雄性生殖细胞中高度表达的小非编码RNA包括miRNA、piRNA和tsRNA等,在维持雄性生殖细... 作为表观遗传的重要研究内容,小非编码RNA(small non-coding RNAs,sncRNAs)在雄性生殖正常发育和代际遗传中发挥着重要的调控作用。研究表明,哺乳动物雄性生殖细胞中高度表达的小非编码RNA包括miRNA、piRNA和tsRNA等,在维持雄性生殖细胞发育和精子发生等过程中发挥重要作用。sncRNAs通过调控基因表达、影响蛋白翻译、改变精子表观遗传修饰等方式参与维持不同阶段的雄性生殖发育过程,其表达异常与雄性不育密切相关。此外,越来越多的证据表明,环境暴露影响精子的表观遗传修饰,这种表观遗传修饰的变化常导致后代表型发生改变。本文系统总结了雄性生殖细胞中sncRNAs的种类及其发挥的功能,介绍了各种因素环境暴露引起的代际遗传中sncRNAs的作用,以期为雄性生殖健康的研究提供新的视角和理论依据,为预防和治疗雄性不育及相关生殖疾病提供潜在的靶点和策略。 展开更多
关键词 sncRNA 雄性生殖 精子发生 代际遗传
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骨形态发生蛋白对哺乳动物胚胎发育及繁殖的调控研究进展 被引量：1
5
作者 贾鸿羽 何翃闳 +6 位作者 王鹏 黄潇潇 蔡雯祎 王亚营 李键 兰道亮 张慧珠 《生物工程学报》 北大核心 2025年第7期2534-2544,共11页
骨形态发生蛋白(bone morphogenetic proteins,BMPs)是一种属于转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGF-β)超家族的多功能的生长因子,通过调节哺乳动物颗粒细胞的类固醇分泌,促进颗粒细胞存活和增殖,抑制卵泡闭锁和黄体化及... 骨形态发生蛋白(bone morphogenetic proteins,BMPs)是一种属于转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGF-β)超家族的多功能的生长因子,通过调节哺乳动物颗粒细胞的类固醇分泌,促进颗粒细胞存活和增殖,抑制卵泡闭锁和黄体化及颗粒细胞凋亡,从而促进哺乳动物卵泡发育成熟。同时,BMPs在诱导胚胎形态发育和诱导子宫容受性及囊胚附着过程中发挥重要作用。本文介绍了BMPs对哺乳动物卵泡及胚胎发育的影响和对雌性繁殖的作用,重点阐述了BMPs在哺乳动物卵母细胞成熟过程中通过调控颗粒细胞的类固醇分泌促进卵泡成熟的过程,为进一步研究哺乳动物卵母细胞成熟培养、提高母畜繁殖效率提供了参考。 展开更多
关键词 骨形态发生蛋白 卵母细胞 胚胎发育 雌性繁殖
原文传递
猪体细胞核移植效率的提高策略
6
作者 吴兴萍 张海琳 +4 位作者 刘雪芹 丁玉春 丁川翔 罗林 吴梦 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第12期5829-5838,共10页
猪体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)是将猪的体细胞核移植到去核卵母细胞中,通过激活重构胚胎使其发育为新个体的无性繁殖技术,在生产克隆猪及推动畜牧育种与生物医学研究方面起着重要作用,但猪体细胞核移植的供体细... 猪体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)是将猪的体细胞核移植到去核卵母细胞中,通过激活重构胚胎使其发育为新个体的无性繁殖技术,在生产克隆猪及推动畜牧育种与生物医学研究方面起着重要作用,但猪体细胞核移植的供体细胞和受体卵母细胞选择与培养的复杂性、克隆效率低等原因导致其移植效率低下(<5%)。作者系统综述了提高猪体细胞核移植效率的策略:①精准去核技术,如通过激光辅助、偏振光显微术等提高去核率;②供体细胞与卵母细胞优化,如低传代胎儿成纤维细胞、细胞周期同步化、动态激素组合培养等;③融合与激活方法创新,如电融合参数优化、锌离子调控等;④表观遗传挽救,如过表达重编程因子MBD3、抑制H3K9 me3修饰等。未来需要通过多技术协同(如代谢调控联合表观修饰)进一步突破发育效率瓶颈,推动猪克隆技术在畜牧生产与异种器官移植中的产业化应用。 展开更多
关键词 猪 体细胞核移植 供体细胞 卵母细胞 细胞周期 能量代谢
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后备母猪发情期和乏情期下丘脑-垂体-卵巢性腺轴miRNA-mRNA表达谱比较分析
7
作者 吕玲燕 孙如玉 +9 位作者 林昌华 张胜斌 覃秀珍 柏秀芳 吴永绍 陈钊 刘磊 张冰 蒋家霞 张家庆 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第7期2965-2980,共16页
【目的】探讨miRNA-mRNA互作网络在后备母猪发情调控中的关键作用,以期解释其在后备母猪发情活动中的遗传机制。【方法】以发情期和乏情期后备母猪的下丘脑、垂体、卵巢组织为研究对象,测定血清中促卵泡激素(FSH)、孕酮(P4)、雌二醇(E2... 【目的】探讨miRNA-mRNA互作网络在后备母猪发情调控中的关键作用,以期解释其在后备母猪发情活动中的遗传机制。【方法】以发情期和乏情期后备母猪的下丘脑、垂体、卵巢组织为研究对象,测定血清中促卵泡激素(FSH)、孕酮(P4)、雌二醇(E2)等生殖激素浓度,通过小RNA测序(sRNA-Seq)并利用生物信息学软件筛选出不同情期差异表达miRNA,通过R语言对差异表达miRNA靶基因进行GO功能及KEGG通路富集分析,并随机选取4个差异表达miRNAs进行实时荧光定量PCR验证。【结果】后备母猪血清中生殖激素浓度与母猪所处的生理周期相吻合;在发情期和乏情期母猪中共检测到742个已知的miRNAs和229个新的miRNAs。发情期和乏情期母猪下丘脑中有57个差异表达miRNAs,其中24个上调,33个下调;垂体中有71个差异表达miRNAs,其中44个上调,27个下调;卵巢中有140个差异表达miRNAs,其中63个上调,77个下调。KEGG通路富集分析发现,后备母猪下丘脑中差异表达miRNA靶基因主要参与癌症中的蛋白聚糖、NOD样受体信号通路、Toll样受体信号通路、细胞因子受体相互作用等;垂体中差异表达miRNA靶基因主要参与甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸代谢过程,促性腺激素释放激素分泌,细胞黏附分子,新陈代谢信号通路等;卵巢中差异表达miRNA靶基因主要参与趋化因子信号通路、溶酶体、卵巢类固醇生成、胆固醇代谢、PPAR信号通路、ECM受体交互作用等。在与生殖相关的靶基因调控网络中筛选出可能由下丘脑-垂体-卵巢性腺轴介导调控后备母猪情期活动的关键miRNAs:miR-6240Z、ssc-miR-34a、ssc-miR-143-3P、ssc-miR-127、ssc-miR-21-5P、ssc-miR-381-3p。对后备母猪卵巢组织中4个差异表达miRNAs进行实时荧光定量PCR验证,其表达趋势与测序结果一致。【结论】本研究成功构建了发情期和乏情期后备母猪下丘脑-垂体-卵巢性腺轴miRNA表达谱,并对差异表达miRNA进行验证,筛选到与后备母猪情期活动显著相关的miRNA,为解析后备母猪发情机制提供了理论依据。 展开更多
关键词 miRNA-mRNA 后备母猪 发情期 乏情期 下丘脑-垂体-卵巢性腺轴
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无创胚胎植入前遗传学检查研究进展
8
作者 宋浩然 冯肖艺 +8 位作者 张笑梦 杨柏高 李崇阳 董建华 刘阳 王子卓 王昆 崔凯 赵学明 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第11期5367-5378,共12页
胚胎植入前基因检查(preimplantation genetic testing, PGT)不仅在人类生殖医学上发挥着重要作用,还在畜牧业上有重要的应用。家畜良种繁育过程中,PGT可用于引入理想性状,增强遗传多样性,提高整体畜群质量。通过选择具有特定遗传特征... 胚胎植入前基因检查(preimplantation genetic testing, PGT)不仅在人类生殖医学上发挥着重要作用,还在畜牧业上有重要的应用。家畜良种繁育过程中,PGT可用于引入理想性状,增强遗传多样性,提高整体畜群质量。通过选择具有特定遗传特征的胚胎,可以提高诸如抗病性、生产力和寿命等性状,促进畜牧育种计划进步。基于基因组评估的胚胎选择通过增加选择强度,缩短世代间隔,从而增加遗传增益。然而,当前PGT主要采用有创检查,这会对胚胎结构完整性造成破坏。因此,最大程度地保存胚胎结构完整性能够更好地维持其活力,目前已开始探究采用无创检查(ni-PGT)来评估胚胎植入前的发育潜能,包括检测囊胚液和胚胎培养基中无细胞DNA(cell-free DNA,cfDNA)。本文概述了PGT和无创胚胎进行PGT方法,整理了现有PGT在畜牧业及人类辅助生殖方面的应用进展,以期为ni-PGT在畜牧领域广泛应用提供理论参考。 展开更多
关键词 胚胎植入前基因检查(PGT) 囊胚液检查 胚胎培养基检查 胚胎
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猪卵母细胞形态及质量对体细胞核移植胚胎发育的影响
9
作者 李卓 王培 +8 位作者 郭建雄 张雄 赵红芳 角德灵 贾宝瑜 卿玉波 成文敏 奎华 魏红江 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第12期5785-5796,共12页
【目的】试验旨在建立一套基于猪MⅡ期卵母细胞胞质颜色及第一极体形态的分级和评价标准,系统分析不同等级卵母细胞的形态学特征及其对胚胎发育能力的影响,从而提高成熟优质卵母细胞的筛选效率,提升体细胞核移植(SCNT)胚胎的发育潜力,... 【目的】试验旨在建立一套基于猪MⅡ期卵母细胞胞质颜色及第一极体形态的分级和评价标准,系统分析不同等级卵母细胞的形态学特征及其对胚胎发育能力的影响,从而提高成熟优质卵母细胞的筛选效率,提升体细胞核移植(SCNT)胚胎的发育潜力,为畜牧业中SCNT技术的应用提供科学依据。【方法】采集体外成熟的猪MⅡ期卵母细胞,根据胞质颜色(黑色致密或白色颗粒感)及第一极体形态(完整圆形或碎裂长条形)将卵母细胞分为A、B、C、D 4个等级。利用显微镜测量卵母细胞胞质直径,采用phalloidin-FITC染色检测微丝分布与表达,通过BODIPY染色评估脂滴大小与数量,并采用α-tubulin-TRITC染色观察纺锤体形态及异常率。通过电激活进行孤雌激活(PA)培养,计算卵裂率、囊胚率及凋亡率。采用近交系猪胎儿成纤维细胞作为供体,构建SCNT胚胎,评价各等级卵母细胞发育能力。【结果】A级猪卵母细胞占比最高(28.60%),胞质直径(117.57μm)显著大于C、D级卵母细胞(P<0.05);微丝表达适中(85.85 A.U.),纺锤体异常率最低(24.56%);PA和SCNT胚胎的囊胚率(52.37%和30.80%)最高,且囊胚细胞数量最多(63.73个),均显著优于D级卵母细胞(P<0.05)。B级猪卵母细胞的胞质直径最大(117.67μm),显著优于C、D级卵母细胞(P<0.05);微丝表达和小脂滴占比最高(88.72 A.U.和44.07%),但囊胚凋亡率最低(87.12 A.U.);PA胚胎的卵裂率和囊胚率显著低于A级卵母细胞(P<0.05)。C、D级猪卵母细胞的胞质颜色较浅,脂滴较大,纺锤体异常率较高,PA及SCNT胚胎的囊胚率明显降低。【结论】通过对猪MⅡ期卵母细胞进行形态学分级,结合多种细胞质量指标和发育能力评价,证实胞质颜色致密、第一极体完整的A级卵母细胞具备较高的发育潜力。该形态学质量分级体系为猪卵母细胞的筛选提供了可靠、非侵袭性的评价标准,有助于优化SCNT克隆技术的应用效果,推动猪克隆技术在畜牧生产中的发展。 展开更多
关键词 猪卵母细胞 形态学 胚胎发育 体细胞核移植 孤雌胚胎
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夏南牛子宫外泌体miRNA在牛胚胎发育和着床中的作用研究
10
作者 张志浩 鲁立刚 +8 位作者 张子敬 王香南 闵佳 韩艺伟 彭晟坤 栾曼茹 刘奥兵 施巧婷 王二耀 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第6期2691-2704,共14页
【目的】探索超数排卵后获取不同胚胎数量的牛子宫冲胚液外泌体miRNA的表达差异,以明确子宫冲胚液外泌体miRNA在牛胚胎发育和着床中的调控机制。【方法】选取15头3~6岁、480~600 kg夏南牛进行超数排卵、同期发情和人工授精。在人工授精... 【目的】探索超数排卵后获取不同胚胎数量的牛子宫冲胚液外泌体miRNA的表达差异,以明确子宫冲胚液外泌体miRNA在牛胚胎发育和着床中的调控机制。【方法】选取15头3~6岁、480~600 kg夏南牛进行超数排卵、同期发情和人工授精。在人工授精后第7天,冲洗牛子宫以获取囊胚,根据国际胚胎生产的平均水平5.5枚作为标准,选取获取的囊胚数量多的3头夏南牛(试验组)和获取的囊胚数量少的2头夏南牛(对照组),收集子宫冲胚液进行外泌体分离与鉴定,并提取外泌体miRNA进行测序分析;对差异表达miRNA进行靶基因预测,并对靶基因进行GO功能和KEGG通路富集分析。随机选取4个miRNAs(bta-miR-2888、bta-miR-11987、bta-miR-2484、bta-miR-27a-3p)进行实时荧光定量PCR验证。【结果】5个样本的囊泡粒径为30~150 nm,符合外泌体的特征。共筛选到14个差异表达miRNAs,其中9个miRNAs表达上调,5个miRNAs表达下调。差异表达miRNAs共预测到8 703个靶基因。GO功能富集分析表明,靶基因主要富集在与发育过程调节、多细胞生物发育调控、调节运输、发育过程的正向调节、细胞连接等功能有关的条目。KEGG通路富集分析表明,显著富集的MAPK和Hedgehog信号通路等与胚胎发育和着床相关,提示子宫冲胚液外泌体可能参与调控胚胎发育和着床。4个miRNAs的实时荧光定量PCR结果与转录组测序结果相一致。【结论】本研究从夏南牛子宫冲胚液中分离得到了外泌体,丰富了外泌体研究的物种,为夏南牛后续外泌体研究提供了材料。共筛选出14个差异表达miRNAs,有8个miRNAs与胚胎发育和着床相关。子宫内外泌体中miRNA的变化可能影响牛胚胎发育和着床。 展开更多
关键词 夏南牛 外泌体 MIRNA 胚胎发育 胚胎着床
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鸡节律相关基因家族生物信息学及表达分析
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作者 葛华梁 任敏鹏 +4 位作者 张夕霏 杨姣 耿立英 张传生 李祥龙 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第12期5749-5761,共13页
【目的】试验旨在系统分析鸡节律相关基因家族,探究鸡在持续黑暗条件下松果体内源性节律基因的表达规律,并分析鸡松果体部分节律基因在胚胎后期到育雏初期的表达模式。【方法】通过查询InterPro数据库,获取多种节律相关基因家族序列,构... 【目的】试验旨在系统分析鸡节律相关基因家族,探究鸡在持续黑暗条件下松果体内源性节律基因的表达规律,并分析鸡松果体部分节律基因在胚胎后期到育雏初期的表达模式。【方法】通过查询InterPro数据库,获取多种节律相关基因家族序列,构建系统进化树,分析其蛋白理化性质、保守结构域、顺式作用元件等。基于转录组数据,采用RAIN算法与PSEA分析内源性节律基因的表达特征,并采用实时荧光定量PCR分析不同阶段燕山红玉鸡与巴布考克B380鸡松果体中节律基因的表达模式。【结果】共鉴定到7个节律相关基因家族(PER、CRY、CLOCK、BMAL、ROR、TIMELESS、OPN4)。系统进化树显示,CLOCK与BMAL基因在进化中较为接近。染色体定位分析发现,各基因家族成员分散分布在不同染色体上,仅发现OPN 4与RRH基因存在串联重复。蛋白理化性质分析显示,PER3和TIMELESS蛋白分子质量>130 ku,其他家族成员蛋白分子质量<100 ku。OPN4及其亚型OPN4-1为疏水性且含7次跨膜结构域(7tm_GPCRs),而其他蛋白均为亲水性且无跨膜结构域。RAIN算法结果显示,CRY 1与CRY 2基因的表达相位存在明显差异,且二者启动子区转录因子结合位点及密度存在差异。PSEA分析结果发现,在持续黑暗的条件下,主观夜高表达基因CRY 2、PER 3参与昼夜节律调控及损伤DNA结合、能量代谢、脂质代谢等通路;主观日高表达基因CLOCK、ARNTL、CRY 1则参与节律基因转录激活、DNA修复及损伤响应等通路。实时荧光定量PCR结果显示,CRY 2、PER 2和CLOCK基因表达水平在出雏第1天主观日2 h较孵化第19天显著上调(P<0.05),随后在出雏第10天较出雏第1天显著下调(P<0.05);而TIMELESS和OPN 4基因表达水平均较前一阶段持续显著上调(P<0.05)。【结论】鸡节律相关基因家族在染色体上分布较为分散,OPN 4与RRH基因存在串联重复,CRY基因表达相位差异可能受启动区调控元件影响。出雏第1天,光照刺激可能显著上调雏鸡松果体CRY 2、PER 2等核心节律基因表达;至出雏第10天,生物钟调控网络趋于成熟。 展开更多
关键词 鸡 节律相关基因家族 生物信息学 表达
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卵泡直径对牛卵母细胞早期胚胎发育和氧化应激的影响
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作者 何世贤 崔宇新 +1 位作者 金庆国 方南洙 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2025年第1期41-46,51,共7页
为了探究卵泡直径对牛卵母细胞早期胚胎发育及氧化应激的影响,试验从新鲜健康牛卵巢分离卵泡,按照卵泡直径大小将卵泡分为较大卵泡组(L组,5 mm≤卵泡直径<10 mm)和较小卵泡组(S组,1.8 mm≤卵泡直径<5 mm),分别从不同组卵泡中分离... 为了探究卵泡直径对牛卵母细胞早期胚胎发育及氧化应激的影响,试验从新鲜健康牛卵巢分离卵泡,按照卵泡直径大小将卵泡分为较大卵泡组(L组,5 mm≤卵泡直径<10 mm)和较小卵泡组(S组,1.8 mm≤卵泡直径<5 mm),分别从不同组卵泡中分离卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes,COCs)并进行分级,分析不同卵泡直径对卵母细胞成熟率、卵裂率及GV期和MⅡ期卵母细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平及抗氧化基因(SOD1、SOD3、SRIT2和GPX1)表达量的影响。结果表明:COCs分为A、B、C、D、E 5级,各级占比在L组和S组间差异不显著(P>0.05)。L组卵母细胞成熟率与S组差异不显著(P<0.05),但卵裂率显著高于S组(P>0.05),其中L组和S组卵裂率分别为62.67%和50.67%。在卵母细胞GV期时,L组卵母细胞的ROS水平显著低于S组(P<0.05),GSH水平显著高于S组(P<0.05);在MⅡ期时,L组卵母细胞的ROS水平显著高于S组(P<0.05),GSH水平显著低于S组(P<0.05)。在卵母细胞GV期和MⅡ期时,L组卵母细胞的SOD1、SOD3、SIRT2、GPX1基因mRNA相对表达量均显著高于S组(P<0.05)。说明较大卵泡中的卵母细胞具有较好的抗氧化性能和发育潜能。 展开更多
关键词 牛 卵泡直径 卵母细胞 氧化应激 早期胚胎 成熟率 卵裂率
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基因编辑猪的遗传改良与生物医学应用:技术潜力与现实挑战 被引量：1
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作者 王文娜 齐世宏 +1 位作者 余大为 黄永业 《中国猪业》 2025年第2期15-22,4,共9页
基因编辑技术在猪的遗传改良与生物医学研究中展现出巨大潜力。基因编辑猪具有良好的生产性状与抗病性能,可提升养殖收入。由于猪在解剖结构、代谢、生理生化等特征方面比啮齿类动物更接近人类,是理想的疾病模型和异种器官供体。然而,... 基因编辑技术在猪的遗传改良与生物医学研究中展现出巨大潜力。基因编辑猪具有良好的生产性状与抗病性能,可提升养殖收入。由于猪在解剖结构、代谢、生理生化等特征方面比啮齿类动物更接近人类,是理想的疾病模型和异种器官供体。然而,基因编辑猪也面临诸多挑战,如基因编辑效率与准确性有待提高,脱靶效应可能引起无关基因改变。此外,不同地区的监管政策差异也给基因编辑猪的产业化推广带来阻碍。深入了解基因编辑猪的现状与挑战,有助于推动其在科学研究与实际应用中的合理发展。 展开更多
关键词 猪 基因编辑 异种器官移植 CRISPR/Cas9 遗传改良 代谢 生理
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Mito-Tempo对双酚A诱导猪卵母细胞线粒体功能障碍的缓解作用
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作者 金君学 张善龙 +5 位作者 高乐鹏 王坤 任钧 辛海丰 宋军 孙婧陶 《东北农业大学学报》 北大核心 2025年第4期56-63,共8页
研究建立双酚A(BPA)诱导的猪卵母细胞线粒体损伤模型,评估线粒体靶向抗氧化剂Mito-Tempo对BPA引起线粒体损伤的修复作用及其对卵母细胞成熟的影响。在猪卵母细胞体外成熟过程中,分别添加100μmol·L^(-1)BPA或BPA+0.1μmol·L^(... 研究建立双酚A(BPA)诱导的猪卵母细胞线粒体损伤模型,评估线粒体靶向抗氧化剂Mito-Tempo对BPA引起线粒体损伤的修复作用及其对卵母细胞成熟的影响。在猪卵母细胞体外成熟过程中,分别添加100μmol·L^(-1)BPA或BPA+0.1μmol·L^(-1)Mito-Tempo(BPA+MT),检测卵丘细胞扩散指数、卵母细胞成熟及线粒体功能相关指标变化水平,并评估后续孤雌胚胎发育潜能。结果表明:与对照组相比,BPA阻碍卵丘细胞扩展、降低线粒体膜电位,增加卵母细胞线粒体应激水平,显著抑制卵母细胞成熟率[对照组为(83.9±1.3)%,BPA组为(62.1±1.7)%]及其后续孤雌胚胎的囊胚形成率[对照组为(41.9±1.0)%,BPA组为(31.5±0.2)%,P<0.05]。补充Mito-Tempo可降低MitoSOX水平,提高膜电位及线粒体功能相关基因表达,增加猪卵丘细胞扩散指数,改善卵母细胞体外成熟率[BPA组为(62.1±1.7)%,BPA+MT组为(79.4±0.2)%]及其后续孤雌胚胎发育能力[BPA组为(31.5±0.2)%,BPA+MT组为(39.4%±0.1)%,P<0.05]。综上,在猪卵母细胞体外成熟阶段添加Mito-Tempo,可有效缓解BPA诱导的线粒体损伤,提升卵母细胞成熟率及其后续孤雌胚胎发育能力。 展开更多
关键词 猪 卵母细胞 线粒体 双酚A Mito-Tempo
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和牛OPU卵母细胞体外受精后胚胎发育潜能研究
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作者 徐光勇 刘振田 +6 位作者 陈祥飞 张美洁 杜涛 张俊波 刘智辉 邢雪松 杜福良 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第2期730-739,共10页
[目的]在体外成熟液(IVM)中添加不同来源的卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)对日本黑牛(和牛)活体采卵(OPU)卵母细胞进行成熟培养,研究其体外受精(IVF)的胚胎在体外培养(IVC)与体内发育的潜能。[方法]按照3×2试验设计,OPU卵母细胞... [目的]在体外成熟液(IVM)中添加不同来源的卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)对日本黑牛(和牛)活体采卵(OPU)卵母细胞进行成熟培养,研究其体外受精(IVF)的胚胎在体外培养(IVC)与体内发育的潜能。[方法]按照3×2试验设计,OPU卵母细胞在3种FSH(NIH-FSH、NB-FSH和CA-FSH,0.13 IU/mL)和2种LH(NIH-LH和NB-LH,23 IU/mL)匹配的6组IVM液中培养22~24 h, IVF和IVC后检查囊胚发育率。将胚胎移植(ET)至同步化受体后40 d,采用超声波检查妊娠率。[结果]最佳匹配组是在IVM培养液中添加0.13 IU/mL NIH-FSH与23 IU/mL NIH-LH,囊胚发育率最高达47.3%。OPU卵母细胞经IVM和IVF后,在体外培养6 d的胚胎(IVC 6D)妊娠率(62.6%~64.0%)与体内胚胎相比无显著差异(P>0.05),但显著高于体外培养7 d的胚胎(IVC 7D)(44.2%~47.1%)(P<0.05)。囊胚移植到青年牛受体的妊娠率高达67.1%,移植后未孕的受体可继续ET,但ET重复4次时妊娠率显著低于0、1次(P<0.05)。[结论]不同来源的FSH与LH的IVM匹配对OPU-IVF的胚胎发育潜能有明显的影响。移植IVC 6D的囊胚比IVC 7D的妊娠率显著升高。本研究优化的OPU-IVF-ET体系可有效培育优良的和牛品系,并快速扩繁其生产群体。 展开更多
关键词 和牛 活体采卵 体外受精 胚胎移植 妊娠
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褪黑素改善绵羊冷冻卵母细胞损伤与发育潜能的研究
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作者 闫嘉欣 刘炳男 +6 位作者 高子浩 张琳惠 李嘉 张慈 陶晨雨 李俊杰 夏威 《畜牧与兽医》 北大核心 2025年第4期8-13,共6页
为研究褪黑素(MLT)对绵羊GV期卵母细胞玻璃化冷冻效果的影响,选取具有3层以上致密完整卵丘细胞且胞质均匀的卵丘-卵母细胞复合体,在玻璃化冷冻解冻液中添加不同浓度(0、10^(-11)、10^(-9)、10^(-7)、10^(-5)mol/L)MLT,解冻后检测体外成... 为研究褪黑素(MLT)对绵羊GV期卵母细胞玻璃化冷冻效果的影响,选取具有3层以上致密完整卵丘细胞且胞质均匀的卵丘-卵母细胞复合体,在玻璃化冷冻解冻液中添加不同浓度(0、10^(-11)、10^(-9)、10^(-7)、10^(-5)mol/L)MLT,解冻后检测体外成熟液培养24 h后卵母细胞以及新鲜组卵母细胞活性氧(ROS)、Ca^(2+)、线粒体膜电位(MMP)水平。结果:与新鲜组相比,0 mol/L MLT组ROS、Ca^(2+)水平显著升高(P<0.05),MMP水平显著降低(P<0.05);相较于0 mol/L MLT组,在玻璃化冷冻解冻液中添加MLT可显著降低绵羊玻璃化卵母细胞ROS和Ca^(2+)水平(P<0.05),并显著提升卵母细胞MMP水平(P<0.05),其中绵羊GV期卵母细胞玻璃化冷冻过程中MLT的最适添加浓度为10-9mol/L;与0 mol/L MLT组相比,10^(-9)mol/L组可显著提高卵母细胞体外受精后卵裂率(68.64%vs 58.03%,P<0.05)与囊胚率(18.97%vs 5.96%,P<0.05)。本研究证实在玻璃化冷冻解冻液中补充MLT可缓解绵羊GV期卵母细胞冷冻损伤并提高其发育潜能。 展开更多
关键词 绵羊 卵母细胞 褪黑素 玻璃化
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miR-26a-5p通过靶向PTEN基因调控山羊卵巢颗粒细胞的增殖
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作者 王尧悦 史倩倩 +4 位作者 罗琪 高林娜 吴浩 张建丽 丁强 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第8期3715-3725,共11页
[目的]颗粒细胞的增殖受miRNA等多种因素的调控,其中,miR-26a-5p在山羊生长卵泡中显著富集,或与卵泡生长发育相关。试验旨在研究miR-26a-5p在山羊颗粒细胞增殖作用机制,以期丰富卵泡发育中分子调控网络。[方法]采用实时荧光定量PCR分析m... [目的]颗粒细胞的增殖受miRNA等多种因素的调控,其中,miR-26a-5p在山羊生长卵泡中显著富集,或与卵泡生长发育相关。试验旨在研究miR-26a-5p在山羊颗粒细胞增殖作用机制,以期丰富卵泡发育中分子调控网络。[方法]采用实时荧光定量PCR分析miR-26a-5p在不同大小山羊卵泡中的表达情况;体外培养鉴定卵巢颗粒细胞,并在颗粒细胞中分别过表达和抑制miR-26a-5p。利用EdU增殖和MTT试验检测颗粒细胞转染后的增殖情况;利用双荧光素酶报告系统和Western blotting验证miR-26a-5p与靶基因PTEN间的互作关系。通过Western blotting分析颗粒细胞过表达或干扰miR-26a-5p表达后PI3K/Akt信号通路中相关蛋白的表达情况。[结果]在不同大小的山羊卵泡中均检测到miR-26a-5p的表达,miR-26a-5p在卵母细胞中也有表达,其中,与其他直径卵泡(<2、4~5和>5 mm)的颗粒细胞相比,miR-26a-5p在中小卵泡(直径2~3 mm)颗粒细胞中显著富集(P<0.05)。在体外培养的颗粒细胞中,过表达miR-26a-5p组增殖细胞比例显著高于NC mimics组(P<0.05);转染miR-26a-5p inhibitor的颗粒细胞与转染NC inhibitor相比增殖比例显著减少(P<0.05)。双荧光素酶报告试验结果显示,与突变组相比,miR-26a-5p靶向PTEN基因3'-UTR的种子序列显著降低了荧光素酶活性(P<0.05)。Western blotting结果显示,与转染NC mimics组相比,颗粒细胞中过表达miR-26a-5p可显著降低PTEN蛋白的表达(P<0.05),过表达miR-26a-5p 96 h仍可检测到磷酸化蛋白p-AKT的表达上调及p-AKT/AKT比例增加(P<0.05)。[结论]卵巢颗粒细胞中miR-26a-5p通过直接靶向抑制PTEN基因的表达来活化AKT蛋白,激活PI3K/Akt信号通路,促进颗粒细胞增殖。 展开更多
关键词 miR-26a-5p PTEN基因 颗粒细胞增殖 PI3K/Λkt信号通路
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动物精子lncRNA生物标志物的研究进展
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作者 王娟红 张谊 +3 位作者 王雯 饶磊 赵彪 常卫华 《中国草食动物科学》 北大核心 2025年第5期93-97,共5页
长链非编码RNA(lncRNA)是转录本长度超出200 nt、自身不编码蛋白的一类长链非编码RNA分子,在转录调控、转录后调控及表观遗传调控等层面发挥调控作用。越来越多的研究表明,lncRNA在哺乳动物精原细胞增殖、精子获能、精子低温冷冻及受精... 长链非编码RNA(lncRNA)是转录本长度超出200 nt、自身不编码蛋白的一类长链非编码RNA分子,在转录调控、转录后调控及表观遗传调控等层面发挥调控作用。越来越多的研究表明,lncRNA在哺乳动物精原细胞增殖、精子获能、精子低温冷冻及受精等过程中表达差异显著,具有作为筛选异常精子降低繁殖疾病的潜在价值。本文对lncRNA的调控机制及作为动物精子损伤生物标志物的研究进展等进行了综述,为lncRNA在动物生殖生理调控和育种工作中的应用提供理论基础。 展开更多
关键词 长链非编码RNA 生物标志物 精子
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基因编辑猪的应用进展
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作者 段晓翠 白文娟 +2 位作者 史潇靖 周荣 王子帅 《中国猪业》 2025年第2期23-34,共12页
基因编辑技术能够精确靶向修饰生物体基因组特定位点,在农业生物的遗传改良和生物医学研究领域得到了广泛应用,特别是在猪的基因编辑技术和新材料创制工作中取得了显著进展。本文旨在讨论基因编辑猪的技术和应用进展,探讨其在农业生产... 基因编辑技术能够精确靶向修饰生物体基因组特定位点,在农业生物的遗传改良和生物医学研究领域得到了广泛应用,特别是在猪的基因编辑技术和新材料创制工作中取得了显著进展。本文旨在讨论基因编辑猪的技术和应用进展,探讨其在农业生产、生物医学研究和伦理监管方面的现状与挑战,以期为猪遗传改良和医学研究提供参考。 展开更多
关键词 猪 养猪业 基因编辑 基因修饰 遗传改良 农业生产 医学研究 新材料
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MSTN基因敲除对猪产肉性状与脂肪沉积的影响及其分子机制
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作者 菅传辉 李亚林 +3 位作者 王琦涵 王讯 金龙 龙科任 《中国猪业》 2025年第6期12-24,共13页
肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)作为转化生长因子β(TGF-β)超家族的一员,在骨骼肌发育的脂肪沉积过程中发挥着重要的调控作用。随着基因编辑技术的快速发展及实际生产中对高生产性能的需求,在不同猪种中进行MSTN基因敲除的研究越来越... 肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)作为转化生长因子β(TGF-β)超家族的一员,在骨骼肌发育的脂肪沉积过程中发挥着重要的调控作用。随着基因编辑技术的快速发展及实际生产中对高生产性能的需求,在不同猪种中进行MSTN基因敲除的研究越来越多。本文综述了MSTN基因在育种中的重要作用,并系统分析了MSTN基因敲除猪在肌肉发育、胴体性状、脂肪沉积和肉质品质等方面的表现。总体上讲,MSTN基因敲除猪普遍具有更高的瘦肉率、更低的脂肪比例,肉质更嫩,部分营养成分得到改善,尤其在多不饱和脂肪酸和氨基酸含量方面表现突出。在分子机制上,MSTN敲除可激活PI3K/AKT/mTOR通路促进蛋白质合成,同时通过ERK1/2信号调节脂肪代谢,显著改善肉品质与代谢特性。综上,对MSTN基因敲除后起到的作用及其机制的了解在动物育种领域具有重要意义,可用于改善牲畜的生产性能及品质。 展开更多
关键词 猪 MSTN 基因敲除 肉质性状 脂肪沉积 分子调控
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