组织块种植法体外培养奶牛乳腺上皮细胞 被引量：10

1

作者 丁月云 张莉莉 +1 位作者 陈莎莎 王恬 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期91-96,共6页

为建立成熟的奶牛乳腺上皮细胞体外培养体系,以组织块种植法培养荷斯坦泌乳期成年母牛乳腺组织,观测长出的上皮细胞在各生长时期的形态变化,绘制生长曲线并计算群体倍增时间,用免疫组化技术鉴定乳腺上皮细胞角蛋白18的表达,用SDS-PAGE... 为建立成熟的奶牛乳腺上皮细胞体外培养体系,以组织块种植法培养荷斯坦泌乳期成年母牛乳腺组织,观测长出的上皮细胞在各生长时期的形态变化,绘制生长曲线并计算群体倍增时间,用免疫组化技术鉴定乳腺上皮细胞角蛋白18的表达,用SDS-PAGE电泳和免疫印迹分析技术检测乳腺细胞的酪蛋白分泌情况。试验结果表明,此培养体系可获得良好的奶牛乳腺上皮细胞,原代以及传代培养,细胞增殖旺盛,长势良好;细胞骨架蛋白——角蛋白18表达为阳性,且培养的细胞具有分泌牛乳酪蛋白的功能。 展开更多

关键词 奶牛 乳腺上皮细胞 体外培养 细胞形态 酪蛋白

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应用MTT比色法评价不同牛血清促细胞生长作用 被引量：4

2

作者 张宝红 钟恒禄 +4 位作者 卢惠芳 张为宇 林莹 韩忠燕 黄海愉 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第5期84-86,共3页

细胞培养过程中血清的选择对细胞的促生长增殖具有重要作用。本试验分别以商品新生牛血清、自制新生牛血清、自制成年牛血清培养成纤维细胞、骨髓瘤细胞、杂交瘤细胞,通过MTT比色法来判断细胞的增殖能力,进而对血清质量作出评价。结果表... 细胞培养过程中血清的选择对细胞的促生长增殖具有重要作用。本试验分别以商品新生牛血清、自制新生牛血清、自制成年牛血清培养成纤维细胞、骨髓瘤细胞、杂交瘤细胞,通过MTT比色法来判断细胞的增殖能力,进而对血清质量作出评价。结果表明,自制新生牛血清具有良好的促细胞生长作用(相对生长率>0.96),并且3次试验结果比较差异不显著(P>0.05),具有较好的重复性;而成年牛血清和无血清空白对照组促细胞作用不明显。因此应用MTT比色法能够评价血清质量。 展开更多

关键词 新生牛血清 MTT比色法 相对生长率 血清质量

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哺乳动物精原干细胞体外培养研究进展 被引量：6

3

作者 成钢 冯书堂 +1 位作者 牟玉莲 岳文斌 《中国畜牧兽医》 CAS 2005年第10期20-22,共3页

作者综述了哺乳动物精原干细胞体外培养的研究现状、程序及方法,并从细胞化学、免疫组织化学等方面客观评定精原干细胞体外培养的形态、结构及特征,另外,还对其体外的纯化、鉴定、应用和未来的发展方向结合自己的试验体会作了逐一说明,... 作者综述了哺乳动物精原干细胞体外培养的研究现状、程序及方法,并从细胞化学、免疫组织化学等方面客观评定精原干细胞体外培养的形态、结构及特征,另外,还对其体外的纯化、鉴定、应用和未来的发展方向结合自己的试验体会作了逐一说明,旨在为其体外长期培养及建系提供条件。 展开更多

关键词 精原干细胞 体外培养 哺乳动物

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昆明小鼠胚胎成纤维细胞体外培养条件初步研究 被引量：4

4

作者 曹俊新 宋学雄 +1 位作者 孙旺吾 唐元凤 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第10期39-44,共6页

本研究旨在探索影响小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast,MEF)分离培养的因素,建立有效的胚胎成纤维细胞培养体系,为构建饲养层细胞与体细胞核移植技术的细胞核供体建立平台。本研究用组织细胞培养液DMEM作为基础培养液,观... 本研究旨在探索影响小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast,MEF)分离培养的因素,建立有效的胚胎成纤维细胞培养体系,为构建饲养层细胞与体细胞核移植技术的细胞核供体建立平台。本研究用组织细胞培养液DMEM作为基础培养液,观察了不同胎龄、不同血清浓度及不同胰蛋白酶作用时间等因素对MEF分离培养的影响。结果显示,在所进行的4个胎龄8.5、10.5、12.5、14.5d的比较试验中,原代成纤维细胞分离培养的最适胎龄为12.5d,细胞贴壁迅速,12h已完全贴壁,增殖速度快;在所进行的不同时间5、10、15、30min的胰蛋白酶消化中,最佳时间为5～10min;在所进行的5个血清浓度7%、9%、10%、11%、13%的比较试验中,添加11%胎牛血清浓度培养效果最佳,从3～5代增殖倍数稳定在1.35左右,传代时间也相对较长。以上结果表明,采用12.5d胎鼠,胰蛋白酶消化5～10min,在含有11%血清的DMEM培养液中培养MEF细胞时,原代和传代效果最好,传代至第3～5代时细胞生长增殖最旺盛,处于对数分裂期,适宜作为饲养层细胞与体细胞核移植细胞核供体。 展开更多

关键词 小鼠 胚胎成纤维细胞 分离培养

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绒山羊毛囊干细胞的分离培养及诱导分化鉴定 被引量：2

5

作者 王宏 高峰 +1 位作者 刘迎春 周欢敏 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第10期139-144,共6页

试验旨在建立绒山羊毛囊干细胞体外分离培养方法,并对其生物学特性和多向分化潜能进行鉴定。利用两步酶消化法和差速贴壁法分离纯化毛囊干细胞,对其进行传代培养,测定生长曲线和克隆形成率,采用油红O和茜素红染色法对第5代毛囊干细胞向... 试验旨在建立绒山羊毛囊干细胞体外分离培养方法,并对其生物学特性和多向分化潜能进行鉴定。利用两步酶消化法和差速贴壁法分离纯化毛囊干细胞,对其进行传代培养,测定生长曲线和克隆形成率,采用油红O和茜素红染色法对第5代毛囊干细胞向成脂和成骨分化情况进行鉴定。结果显示,分离得到的毛囊干细胞形态均一,体积小,呈典型的铺路石状生长,生长曲线呈S型,克隆形成能力强。成脂诱导后,细胞体积增大,细胞质增多,胞内出现小脂滴,诱导12d后,脂滴逐渐增多,油红O染色呈阳性;成骨诱导后,细胞边缘模糊,出现颗粒状结节,经茜素红染色呈阳性。表明获得的绒山羊毛囊干细胞具有多向分化的潜能。 展开更多

关键词 绒山羊 毛囊干细胞 诱导分化

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绒山羊皮肤干细胞的初步分离及碱性磷酸酶鉴定 被引量：1

6

作者 苏小虎 高峰 +3 位作者 刘迎春 王宏 张焱如 周欢敏 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第10期154-159,共6页

以0.02%胰酶4℃过夜消化,分离表皮,37℃消化30min,打成单细胞悬液,经100μg/mLⅣ型胶原处理的培养皿黏附10min,除掉未黏附的细胞,加入培养基(80%DMEM-F12+20%FBS+氢化可的松(25μg/mL)+青霉素(100IU/mL)+链霉素(100μg/mL)+胰岛素(15μg... 以0.02%胰酶4℃过夜消化,分离表皮,37℃消化30min,打成单细胞悬液,经100μg/mLⅣ型胶原处理的培养皿黏附10min,除掉未黏附的细胞,加入培养基(80%DMEM-F12+20%FBS+氢化可的松(25μg/mL)+青霉素(100IU/mL)+链霉素(100μg/mL)+胰岛素(15μg/mL)+转铁蛋白+EGF(20μg/mL))培养24h,而后将此细胞消化接种到经20μg/mL丝裂霉素C处理4h的成年绒山羊成纤维细胞滋养层上,培养2周后有各种形态的克隆状细胞集落出现,用碱性磷酸酶(AKP)染色呈深黑紫色,初步判断细胞呈阳性。本研究旨在分离绒山羊皮肤干细胞,为研究干细胞分化机制,探索绒毛发育机理,培育高产高质绒毛性状奠定分子育种理论基础。 展开更多

关键词 绒山羊 干细胞 分离 鉴定

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鲤鱼鳍条细胞的原代培养 被引量：1

7

作者 吴东明 李月红 +1 位作者 付云红 苗富春 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第6期52-54,共3页

通过对鲤鱼鳍条细胞进行原代培养,摸索出最佳的培养条件。采用组织块培养法,取一小块鳍条组织在不同培养基、温度、pH、CO2等培养条件下进行培养,对其生长状况进行观察。培养48 h可见组织块周围有细胞迁出,并形成生长晕,培养1周可形成... 通过对鲤鱼鳍条细胞进行原代培养,摸索出最佳的培养条件。采用组织块培养法,取一小块鳍条组织在不同培养基、温度、pH、CO2等培养条件下进行培养,对其生长状况进行观察。培养48 h可见组织块周围有细胞迁出,并形成生长晕,培养1周可形成单层细胞,主要由上皮样细胞和少量成纤维样细胞组成。本研究初步确立了鲤鱼的鳍条细胞培养条件为：培养基为M199,培养温度为25~27℃,pH为7.2~7.6,CO2浓度为5%,原代培养血清浓度为15%~20%,连续培养12 d后可得到纯化的鳍条细胞。 展开更多

关键词 鲤鱼 鳍条细胞 原代培养

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精原干细胞的分选、培养及转基因应用探讨 被引量：1

8

作者 刘鹏 敖红 潘杰 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第10期84-87,共4页

精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)是成年哺乳动物精子发生的基础,具有自我更新和定向分化潜能,能够向后代传递遗传信息。利用SSCs的特点,可以建立转基因动物制作的技术,即分离SSCs、体外培养增殖、基因转染、移植、交配获得... 精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)是成年哺乳动物精子发生的基础,具有自我更新和定向分化潜能,能够向后代传递遗传信息。利用SSCs的特点,可以建立转基因动物制作的技术,即分离SSCs、体外培养增殖、基因转染、移植、交配获得转基因动物后代的技术路线,有望应用于家畜经济性状的基因改良。 展开更多

关键词 精原干细胞 分子特征 免疫分选 转基因

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猪肺泡巨噬细胞的分离与原代培养 被引量：8

9

作者 杨克礼 田永祥 +5 位作者 梁望旺 段正赢 刘泽文 郭锐 周丹娜 袁芳艳 《国外畜牧学（猪与禽）》 2011年第4期52-53,共2页

从仔猪肺泡中分离巨噬细胞,对分离的细胞进行计数,接种6孔培养板进行原代培养,利用倒置显微镜对原代培养的巨噬细胞进行形态学观察。结果表明,本试验采用的方法可获得足够数量的细胞,可用于分离培养猪肺泡巨噬细胞,能为开展相关病毒的... 从仔猪肺泡中分离巨噬细胞,对分离的细胞进行计数,接种6孔培养板进行原代培养,利用倒置显微镜对原代培养的巨噬细胞进行形态学观察。结果表明,本试验采用的方法可获得足够数量的细胞,可用于分离培养猪肺泡巨噬细胞,能为开展相关病毒的细胞培养特性研究提供良好的试验材料。 展开更多

关键词 藉 肺葩巨噬细胞 芬离培养

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羊膜对山羊角膜缘上皮细胞培养影响的研究

10

作者 赵清梅 王建礼 窦忠英 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第11期116-121,共6页

比较完整羊膜和去上皮羊膜、不同冻存时间的羊膜对山羊角膜缘上皮细胞体外培养的影响,筛选出羊膜最适处理方法。将山羊角膜缘组织块分别接种于完整羊膜、去上皮羊膜、新鲜去上皮羊膜、冻存30d去上皮羊膜、冻存90d去上皮羊膜、冻存180d... 比较完整羊膜和去上皮羊膜、不同冻存时间的羊膜对山羊角膜缘上皮细胞体外培养的影响,筛选出羊膜最适处理方法。将山羊角膜缘组织块分别接种于完整羊膜、去上皮羊膜、新鲜去上皮羊膜、冻存30d去上皮羊膜、冻存90d去上皮羊膜、冻存180d去上皮羊膜上,比较在完整羊膜和去上皮羊膜及不同冻存时间羊膜上角膜缘上皮细胞的生长特性和组织结构。试验结果显示,在去上皮羊膜上角膜缘组织块贴壁和细胞增殖能力较完整羊膜强,角膜缘上皮细胞在2组羊膜上均能形成多层结构,但完整羊膜上形成的组织表层角质化较严重;在冻存30d羊膜上角膜缘组织块贴壁和细胞增殖能力较新鲜羊膜、冻存90d羊膜、冻存180d羊膜强,角膜缘上皮细胞在各组羊膜上均形成多层结构,其结构无明显差异。结果表明,冻存30d去上皮羊膜是构建组织工程人工角膜最适的羊膜载体材料。 展开更多

关键词 羊膜 角膜缘上皮细胞 体外培养

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哺乳动物乳腺上皮细胞体外培养研究进展 被引量：6

11

作者 张燕 杜卫华 +5 位作者 郝海生 赵学明 王栋 秦彤 刘岩 朱化彬 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第10期34-38,共5页

由于具有合成和分泌乳汁的特殊生理功能,哺乳动物乳腺上皮细胞是进行乳腺生物反应器研究的重要细胞模型。用乳腺上皮细胞建立的模型,能真实反映哺乳动物乳腺生长发育及泌乳的各项生物学机制,验证乳腺特异性表达载体的构建是否合理有效,... 由于具有合成和分泌乳汁的特殊生理功能,哺乳动物乳腺上皮细胞是进行乳腺生物反应器研究的重要细胞模型。用乳腺上皮细胞建立的模型,能真实反映哺乳动物乳腺生长发育及泌乳的各项生物学机制,验证乳腺特异性表达载体的构建是否合理有效,涉及到细胞生物学、发育生物学、内分泌学、生物化学与分子生物学等多个领域,对于乳腺生物反应器、乳蛋白基因表达的研究有重要意义。作者主要从培养方法方面介绍了近年来哺乳动物乳腺上皮细胞体外培养方法。 展开更多

关键词 乳腺上皮细胞 体外培养 培养方法

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猪滋养层干细胞样细胞的分离培养 被引量：2

12

作者 宋志强 刘畅 +4 位作者 冯冲 龙川 赵勤丽 刘忠华 潘登科 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第5期156-160,共5页

滋养层干细胞(TSc)是形成胎盘组织细胞的前体细胞,与胚胎着床和胎盘形成密切相关。体外分离滋养层干细胞为研究滋养层的发育与功能提供了研究工具和基础。滋养层干细胞已经成功从小鼠附植前囊胚中获得,在猪上也有相关报道,但并没有关于6... 滋养层干细胞(TSc)是形成胎盘组织细胞的前体细胞,与胚胎着床和胎盘形成密切相关。体外分离滋养层干细胞为研究滋养层的发育与功能提供了研究工具和基础。滋养层干细胞已经成功从小鼠附植前囊胚中获得,在猪上也有相关报道,但并没有关于6d囊胚中分离到猪滋养层干细胞(pTSc)的报道。本试验通过对6d孤雌囊胚透明带进行划口处理,饲养层和基础培养液中附加碱性成纤维生长因子(bFGF)和人白血病抑制因子(hLIF)分离猪滋养层干细胞样细胞。同时,通过采用形态学和基因表达分析的方法对获得的猪滋养层干细胞样细胞进行了初步鉴定。结果显示,本试验分离得到的细胞呈现上皮样细胞形态,细胞间结合紧密,边缘光滑,核质比较大,RT-PCR结果显示表达滋养层干细胞标记基因Cdx2,体现了滋养层干细胞特征。结果表明,本试验成功在6d孤雌囊胚分离得到猪滋养层干细胞样细胞,为后续研究猪滋养层发育提供了试验基础。 展开更多

关键词 猪 滋养层干细胞 体外囊胚 分离培养

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奶牛乳腺上皮细胞培养体系中疑似干/祖细胞的鉴定 被引量：2

13

作者 郝雨蒙 赵锋 +2 位作者 张娜 陈丹 李庆章 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第8期2095-2103,共9页

为了揭示奶牛乳腺干细胞在体外泌乳调控中的潜在作用,本研究根据成体干细胞具有BrdU标记滞留的特点检测了奶牛乳腺上皮细胞(DCMECs)中疑似乳腺干/祖细胞,同时分析了两种新发现的乳腺干细胞分子标志(FNDC3B和PROCR)的表达定位,验证了它... 为了揭示奶牛乳腺干细胞在体外泌乳调控中的潜在作用,本研究根据成体干细胞具有BrdU标记滞留的特点检测了奶牛乳腺上皮细胞(DCMECs)中疑似乳腺干/祖细胞,同时分析了两种新发现的乳腺干细胞分子标志(FNDC3B和PROCR)的表达定位,验证了它们指示DCMECs的可行性。通过实时荧光定量PCR方法检测分析DCMECs体外培养过程中催乳素、生长激素、胰岛素样生长因子Ⅰ及其受体的基因表达变化。结果显示,连续培养25d后BrdU标记滞留细胞比例接近0.4%,极少数细胞呈FNDC3B或PROCR阳性,可以观察到不对称分裂细胞,原代和传代后DCMECs在激素、胰岛素样生长因子及其受体mRNA水平上差异极显著(P<0.01)。总之,在非诱导泌乳分化培养条件下,脱离泌乳生理环境的DCMECs自身具有的泌乳调控基因表达迅速受到抑制,但在一定培养时间内,DCMECs群体中能够保留一定比例疑似乳腺干/祖细胞,提示这些多能奶牛乳腺干/祖细胞在体外泌乳调控和乳腺腺泡重塑过程中可能发挥重要作用。 展开更多

关键词 奶牛 乳腺干/祖细胞 标记滞留 泌乳

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冷冻保存技术在动物遗传资源保护策略中的潜力 被引量：2

14

作者 侯磊 《山东畜牧兽医》 2016年第8期84-86,共3页

通过冷冻保存技术对家畜的遗传物质进行异位保护是对这些物种遗传多样性保护的一种重要策略。冷冻保存技术的发展有助于保护策略的完善,不同物种遗传物质类型的选择取决于保护目标、技术可行性（如收集、冷冻保存）、成本和实际环境。目... 通过冷冻保存技术对家畜的遗传物质进行异位保护是对这些物种遗传多样性保护的一种重要策略。冷冻保存技术的发展有助于保护策略的完善,不同物种遗传物质类型的选择取决于保护目标、技术可行性（如收集、冷冻保存）、成本和实际环境。目前,家畜全球多样性正日益受到威胁。在世界范围内,大量家畜品种处于极危状态,有的品种已经灭绝。在6379个家畜品种中,处于极危状态的占9%,处于濒危状态的则占到了39%。 展开更多

关键词 遗传资源保护 冷冻保存技术 家畜品种 遗传多样性 物种遗传 胚胎冷冻保存 冷冻精液 卵母细胞 遗传材料 黑白花奶牛

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