甜樱桃7个品种花粉数量及花粉萌芽率测定 被引量：28

1

作者 魏国芹 孙玉刚 +2 位作者 安淼 秦志华 李芳东 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2010年第B12期123-127,共5页

采用纤维素酶解法和离体培养法分别对甜樱桃7个品种单花药内花粉数量和不同培养基上花粉萌芽率进行了研究。结果表明:不同品种间花粉数量差异较大,萨米脱、拉宾斯、友谊、美早、早大果、布鲁克斯和红灯的平均花粉数分别为2 984,2 312,2 ... 采用纤维素酶解法和离体培养法分别对甜樱桃7个品种单花药内花粉数量和不同培养基上花粉萌芽率进行了研究。结果表明:不同品种间花粉数量差异较大,萨米脱、拉宾斯、友谊、美早、早大果、布鲁克斯和红灯的平均花粉数分别为2 984,2 312,2 168,1 950,1 913,1 513,1 133粒/花药;拉宾斯的花粉萌芽率最高,其次为友谊、萨米脱和布鲁克斯,美早和红灯的花粉萌芽率最低;MS基本培养基对花粉的萌发有明显促进作用;蔗糖比果糖和甘露醇更利于花粉萌发;适宜花粉萌发的蔗糖浓度为20%;低浓度硼酸促进花粉萌发,高浓度硼酸抑制花粉萌发;钼酸钠对樱桃花粉萌发无明显促进作用;适合花粉萌发的pH值为6.8。 展开更多

关键词 甜樱桃 花粉 花粉量 花粉萌芽率

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核果类基因组DNA提取和RAPD条件优选 被引量：30

2

作者 沈向 郑学勤 +1 位作者 任小林 李嘉瑞 《山东农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 1999年第2期154-160,共7页

采用３种方法分离杏、桃等核果类树种的基因组ＤＮＡ，比较了其分离效果。并以此为模板进行ＲＡＰＤ反应，调整ＲＡＰＤ反应体系组成和热循环条件，以进行该树种的系统分类研究。

关键词 核果类 基因组DNA RAPD

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早熟油桃紫金红1号亲本的SSR鉴定 被引量：9

3

作者 沈志军 马瑞娟 +2 位作者 俞明亮 宋宏峰 蔡志翔 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2009年第6期205-209,共5页

油桃新品种紫金红1号是从早熟油桃中实生选育的,果实经济性状优良。以23个疑似亲本的油桃品种为试材,利用SSR标记共显性的特点,进行了紫金红1号亲本鉴定。SSR-PCR扩增结果表明,163对SSR引物中有48对能在试材中扩增出多态性良好、谱带清... 油桃新品种紫金红1号是从早熟油桃中实生选育的,果实经济性状优良。以23个疑似亲本的油桃品种为试材,利用SSR标记共显性的特点,进行了紫金红1号亲本鉴定。SSR-PCR扩增结果表明,163对SSR引物中有48对能在试材中扩增出多态性良好、谱带清晰的产物,其中17对SSR引物扩增出的20个SSR位点呈现共显性带型。基于185个SSR等位基因信息的亲缘关系分析发现,紫金红1号与早红2号之间的亲缘关系最近,相似系数为0.881,在树状图上也聚为一类。经共显性SSR位点遗传规律分析,使用3个SSR引物(CPPCT15、BPPCT031、UDP96-018)的扩增位点,可排除早红2号以外的其他品种作为紫金红1号亲本的可能。认为早红2号自交获得紫金红1号可能性很大,或至少是其亲本之一。 展开更多

关键词 油桃 SSR 亲本鉴定

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棕色棉与绿色棉遗传多样性比较研究 被引量：3

4

作者 孙东磊 孙君灵 +1 位作者 杜雄明 马峙英 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2009年第5期96-101,共6页

基于简单重复序列(SSRs)分子标记技术对40份棕色棉和21份绿色棉材料进行遗传多样性比较研究,结果表明:66对多态性SSR引物在棕色棉和绿色棉材料上分别扩增出268条和240条多态性等位变异,棕色棉和绿色棉多样性指数(H)分别为1.408和1.350,... 基于简单重复序列(SSRs)分子标记技术对40份棕色棉和21份绿色棉材料进行遗传多样性比较研究,结果表明:66对多态性SSR引物在棕色棉和绿色棉材料上分别扩增出268条和240条多态性等位变异,棕色棉和绿色棉多样性指数(H)分别为1.408和1.350,平均位点多样性(D)值分别为0.729和0.713,遗传相似系数(J)平均值分别为0.643和0.677;采用类平均法进行聚类分析,棕色棉被划分为8个类群,绿色棉被划分为4个类群,从中国农业科学院棉花研究所选育的品系来看,类型划分与系谱比较一致。综合分析表明,棕色棉遗传多样性显著高于绿色棉。 展开更多

关键词 棕色棉 绿色棉 SSR 遗传多样性

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影响野生樱桃李种子萌发相关因素研究初报 被引量：22

5

作者 李会芳 许正 +3 位作者 杨英 耿文娟 杨磊 廖康 《新疆农业科学》 CAS CSCD 2007年第1期27-30,共4页

试验以野生樱桃李种子为材料,通过用机械去壳、去种皮、低温及赤霉素对野生樱桃李种子进行不同处理,研究了不同处理对野生樱桃李休眠及萌发的影响。结果表明:野生樱桃李种子经过100d左右的低温层积,其萌发率可达到72%,随着野生樱桃李低... 试验以野生樱桃李种子为材料,通过用机械去壳、去种皮、低温及赤霉素对野生樱桃李种子进行不同处理,研究了不同处理对野生樱桃李休眠及萌发的影响。结果表明:野生樱桃李种子经过100d左右的低温层积,其萌发率可达到72%,随着野生樱桃李低温层积时间的延长,其种子萌发率逐渐提高;野生樱桃李的种壳和种皮不同程度抑制种子萌发,去除种壳可使萌发日提前,同时去除种壳和种皮,可立即解除种子休眠,使种子萌发率达到78%;GA3对带壳种子的萌发有一定作用,但解除休眠、促进萌发的效果并不明显。 展开更多

关键词 野生樱桃李 低温层积 种子 萌发 GA3

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李、杏及杂种间远缘杂交和亲和性研究 被引量：20

6

作者 李锋 张凤芬 +1 位作者 曹希俊 张冰玉 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 1995年第4期36-39,共4页

通过４年对李、杏种间、属间的杂交，分析了远缘杂交的亲和性及杂种的亲缘关系。试验结果指出；李、杏属间有较近的亲缘关系；自然界存在的杂种资源的亲缘关系，母本只能为李；杂种间的交配是可以结实的，回交杏可以结实．但结实率极低... 通过４年对李、杏种间、属间的杂交，分析了远缘杂交的亲和性及杂种的亲缘关系。试验结果指出；李、杏属间有较近的亲缘关系；自然界存在的杂种资源的亲缘关系，母本只能为李；杂种间的交配是可以结实的，回交杏可以结实．但结实率极低。这一研究结果将为李、杏果树的遗传育种、新物种的产生及进化、基础理论研究及资源的利用提供参考依据。 展开更多

关键词 李 杏 杂种 亲和性 远缘杂交

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核果类果树转基因研究进展 被引量：9

7

作者 阎国华 周宇 张开春 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期358-364,共7页

综述了近年来国内外核果类果树转基因的研究进展,涉及的内容有:用农杆菌转化核果类果树中难生根种类,获得易繁殖的转化植物;转移病毒外壳蛋白基因和杀菌毒性肽基因以提高抗病性;转移细胞分裂素基因和光敏素基因改良品种或砧木生长特性,... 综述了近年来国内外核果类果树转基因的研究进展,涉及的内容有:用农杆菌转化核果类果树中难生根种类,获得易繁殖的转化植物;转移病毒外壳蛋白基因和杀菌毒性肽基因以提高抗病性;转移细胞分裂素基因和光敏素基因改良品种或砧木生长特性,培育紧密型的、短枝的、矮化半矮化的新品种;转移抗冻基因提高抗霜冻性;通过反义转基因技术调节果实的成熟,获得耐贮运的新性状,以及核果类果树基因转化技术的发展等方面。 展开更多

关键词 核果类果树 转基因 遗传转化 基因工程育种

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桃和杏杂交亲和性试验 被引量：17

8

作者 马锋旺 康俊生 《果树科学》 CSCD 北大核心 1996年第4期251-252,共2页

以桃为母本，杏为父本，进行了桃与杏的杂交亲和性观察。结果表明，桃与杏杂交有一定的亲和性，但亲和力较小。亲和力的大小主要取决于母本。混合花粉授粉降低杂交亲和性，重复授粉、衰老柱头及喷布赤霉素均可提高杂交亲和性。

关键词 桃 杏 杂交 亲和性

原文传递

外源GA_3和PBZ对桃枝条生长及其GA相关基因表达的影响 被引量：3

9

作者 谭彬 王婷 +4 位作者 郝鹏博 郑先波 程钧 王伟 冯建灿 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2019年第2期25-34,共10页

为探究外源GA_3和PBZ处理对黄水蜜桃新梢生长及赤霉素合成代谢和信号转导途径相关基因表达的影响。对1年生黄水蜜桃枝条进行外源GA_3和PBZ喷施处理,测定新梢生长量,并利用qRT-PCR对GA合成代谢和信号传导途径中8个相关基因的表达量进行... 为探究外源GA_3和PBZ处理对黄水蜜桃新梢生长及赤霉素合成代谢和信号转导途径相关基因表达的影响。对1年生黄水蜜桃枝条进行外源GA_3和PBZ喷施处理,测定新梢生长量,并利用qRT-PCR对GA合成代谢和信号传导途径中8个相关基因的表达量进行测定。结果表明:外源GA_3处理后新梢净生长量在处理8 d时显著高于对照,GA合成代谢相关基因KO和GA3-ox的表达量呈现出处理前期先升高后降低,处理后期逐渐升高的趋势,而GA信号转导相关基因DELLA、GID1c、SLY1的表达量呈现出在处理前期受抑制,后期迅速升高的趋势,且在处理后14 d时表达量达到峰值;外源PBZ处理后新梢净生长量在多个时期显著低于对照,并在处理后17 d时达极显著水平,GA合成代谢相关基因KO、GA20-ox、GA2-ox的表达量在整个处理过程中呈现出先逐渐升高随后降低的趋势,而GA3-ox基因在处理后整个时期近乎不表达,GA信号转导相关基因DELLA、GID1c、SLY1、ERF11的表达量在整个处理过程中均略低于对照,推测PBZ处理在转录水平上通过抑制活性GA的合成进而影响GA信号转导途径相关基因的表达来调节植物生长;外源GA_3逆转处理能显著解除PBZ对植物生长的抑制作用,且信号转导相关基因GID1c的表达量呈现出先升高后降低的趋势,DELLA基因的表达呈现出大多时期被抑制的情况。 展开更多

关键词 桃 赤霉素 多效唑 新梢长度 逆转处理 基因表达

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核果类病毒识别鉴定及脱毒技术 被引量：30

10

作者 覃兰英 李青 +6 位作者 邓世秀 黄宇 李明福 张成良 李桂芬 贺森林 牛长占 《北京农业科学》 1997年第5期23-28,共6页

本文论述了近７年来进行核果类病毒识别检测及脱毒技术的研究结果。病毒识别检测主要方法：①田间现有栽培苗病毒症状调查；②生物学指示法；③血清酶免疫法；④电镜及ｄｓ－ＲＮＡ检测法。脱毒技术用：小茎尖分生组织培养；微型嫁接法... 本文论述了近７年来进行核果类病毒识别检测及脱毒技术的研究结果。病毒识别检测主要方法：①田间现有栽培苗病毒症状调查；②生物学指示法；③血清酶免疫法；④电镜及ｄｓ－ＲＮＡ检测法。脱毒技术用：小茎尖分生组织培养；微型嫁接法；热气处理法。 展开更多

关键词 核果类 脱毒 病毒 分生组织培养

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蔷薇科若干种核果类果树植物的核型分析 被引量：6

11

作者 王然 王成荣 +1 位作者 潘季淑 郑开文 《莱阳农学院学报》 1992年第2期123-129,共7页

对蔷薇科核果类果树的4属16种进行了体细胞染色体观察,发现欧李为二倍体,黑刺李为六倍体。对二倍体种进行核型分析表明,全部核型均由中部着丝点染色体和近中部着丝点染色体组成。新疆桃和西伯利亚杏核型公式为2n=2x=16=10m+6sm;其余种... 对蔷薇科核果类果树的4属16种进行了体细胞染色体观察,发现欧李为二倍体,黑刺李为六倍体。对二倍体种进行核型分析表明,全部核型均由中部着丝点染色体和近中部着丝点染色体组成。新疆桃和西伯利亚杏核型公式为2n=2x=16=10m+6sm;其余种核型公式相同,为2n=2x=16=12m+4sm。核型类别均为B型,各种间核型不对称系数变化范围为57.19％～59.95％,属的特异性不明显。 展开更多

关键词 核果 染色体 核型

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李杏杂交亲和性研究初报 被引量：11

12

作者 王善广 邓继光 高俊满 《北方果树》 1991年第2期25-27,共3页

远缘杂交是植物遗传育种研究的重要内容之一,它不仅涉及物种起源与植物进化的基础理论问题,而且具有人工合成新种,新类型的重要实践价值,因此倍受重视。对于这方面的研究已取得了很多成绩:首先是布尔班克用中国李同杏杂交;其后又有很多... 远缘杂交是植物遗传育种研究的重要内容之一,它不仅涉及物种起源与植物进化的基础理论问题,而且具有人工合成新种,新类型的重要实践价值,因此倍受重视。对于这方面的研究已取得了很多成绩:首先是布尔班克用中国李同杏杂交;其后又有很多人做过中国李同杏、桃和樱桃等的杂交; 展开更多

关键词 李 杏 杂交育种 亲和性

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桃毛根转化体系的建立与优化 被引量：2

13

作者 张思佳 吴凡颖 +3 位作者 李小姗 常明明 刘悦萍 杨海清 《北京农学院学报》 2024年第3期63-68,共6页

【目的】为了解决桃遗传转化中易形成嵌合体、转化过程耗时和工作量大等问题,建立并优化了发根农杆菌介导的毛根转化体系。【方法】以三周龄无菌组培‘中桃24号’桃苗下胚轴、子叶和上部分植株为外植体,利用pCAMBIAsuper1300-GFP质粒转... 【目的】为了解决桃遗传转化中易形成嵌合体、转化过程耗时和工作量大等问题,建立并优化了发根农杆菌介导的毛根转化体系。【方法】以三周龄无菌组培‘中桃24号’桃苗下胚轴、子叶和上部分植株为外植体,利用pCAMBIAsuper1300-GFP质粒转化的发根农杆菌MSU440介导转化。将侵染后的外植体转移到含有抗菌素(头孢菌素)的培养基上培养7 d左右。观察到愈伤组织和毛状根的形成。对有毛状根发出的外植体进行体式荧光显微镜检测,观察绿色荧光信号。提取有荧光信号的毛状根总RNA,PCR检测阳性毛状根,并筛选最适转化品种、侵染浓度和侵染时间。【结果】利用发根农杆菌MSU440侵染桃下胚轴,诱导形成毛状根,并通过转化载体表达的GFP快速筛选到转基因毛状根,PCR扩增到了RolB和eGFP基因片段;条件优化结果表明,在OD值为0.8的发根农杆菌侵染液中浸泡30 min为最佳转化条件,最高转化率为63.6%。【结论】在桃上建立了发根农杆菌介导的毛根转化体系,优化了转化条件,为桃基因功能验证和获得稳定转基因桃植株提供技术基础。 展开更多

关键词 桃 遗传 转化 农杆菌 毛状根

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杏作李砧木不适宜

14

作者 孙凤兰 张连喜 林淑芳 《吉林农业科学》 CSCD 北大核心 1991年第3期66-67,共2页

为使李树能正常生长、发育和结果以至达到丰产之目的,在进行嫁接繁殖时,采用什么作砧木是一个很重要问题,由于受砧木资源材料的限制,各地生产上所采用的砧木各异。一般作过李子砧木的有: 山桃 Amygdlus davidiana(Carr)Yu. 毛桃 A.Kansu... 为使李树能正常生长、发育和结果以至达到丰产之目的,在进行嫁接繁殖时,采用什么作砧木是一个很重要问题,由于受砧木资源材料的限制,各地生产上所采用的砧木各异。一般作过李子砧木的有: 山桃 Amygdlus davidiana(Carr)Yu. 毛桃 A.Kansuensis skeels 毛樱桃 C.tomentosa(Thunb.)wall 榆叶梅 A.triloba(lindl)Ricker 山樱桃 Cerasus Serrulata(lindl.)G.Don 小黄李 Prunus ussuriensis Kov.et kost 山杏 A.mandshurica(Maxim)skvortz 目前,我省多采用野生性较强的小黄李和山杏作为嫁接繁殖李苗的砧木。多年来生产实践证明,用山杏砧木的李树,生长、发育及丰产性等方面均有些不良表现。 展开更多

关键词 杏 李 砧木 嫁接

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杏扁PaCBF1基因的克隆及其生物信息学分析

15

作者 王连荣 薛拥志 王宝地 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期58-64,共7页

CBF转录因子在多种植物的非生物逆境环境中起着重要的作用,可提高植物的抗逆性。为研究CBF基因在杏扁非生物逆境中的作用与功能,以杏扁品种围选1号为试验材料,利用RT-PCR技术克隆了1个CBF/DREB1转录因子基因CBF,命名为PaCBF1,Gen Bank... CBF转录因子在多种植物的非生物逆境环境中起着重要的作用,可提高植物的抗逆性。为研究CBF基因在杏扁非生物逆境中的作用与功能,以杏扁品种围选1号为试验材料,利用RT-PCR技术克隆了1个CBF/DREB1转录因子基因CBF,命名为PaCBF1,Gen Bank登录号为MF491392。对其进行生物信息学分析,结果显示:该基因开放阅读框长度为723 bp,编码240个氨基酸,分子量为26.928 ku,等电点为6.35,亲水性平均值为-0.555;PaCBF1蛋白含有一个高度保守的AP2结构域,以及植物CBF蛋白的保守结构域PKKRAGRRVFKETRHP和DSAWR;二级结构预测显示该蛋白主要由38.75%的无规则卷曲、29.58%的α-螺旋、22.92%的延伸链和8.75%的β-转角组成;三级结构的预测结果显示含有α-螺旋、β-折叠和β-转角;该蛋白定位在细胞核,不存在信号肽序列,为非分泌性亲水蛋白,共含有13个磷酸化位点。结果为今后进一步深入研究杏扁CBF转录因子的功能以及对逆境环境的抵抗机制提供了理论基础。 展开更多

关键词 杏扁 PaCBF1 基因克隆 生物信息学

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EBR处理对甜樱桃果实褐变及相关酶基因表达的影响 被引量：8

16

作者 周慧 王云香 +4 位作者 王愈 李文生 常虹 周家华 王宝刚 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2020年第S01期24-30,共7页

为了研究不同浓度2,4-表油菜素内酯(EBR)处理下多酚氧化酶(Polyphenoloxidase,PPO)、过氧化物酶(Phenylalanine ammonia,POD)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)基因与甜樱桃果实褐变的关系,以甜樱... 为了研究不同浓度2,4-表油菜素内酯(EBR)处理下多酚氧化酶(Polyphenoloxidase,PPO)、过氧化物酶(Phenylalanine ammonia,POD)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)基因与甜樱桃果实褐变的关系,以甜樱桃为试材,测定了果实贮藏期间的褐变指数、相关酶活性以及其基因相对表达量的变化。结果表明,贮藏30 d后对照组的甜樱桃果实褐变指数显著高于EBR处理组,对照组果实褐变情况比较严重。对照组的PPO、POD活性在整个贮藏过程中一直高于EBR处理组;EBR处理组的CAT、SOD活性在贮藏15 d后一直高于对照组。对照组的PPO、POD基因相对表达量在贮藏过程中显著高于EBR处理组;EBR处理组的CAT、SOD基因相对表达量在贮藏30天后显著高于对照组。PPO、POD、CAT、SOD基因表达量的变化趋势基本与PPO、POD、CAT、SOD的活性及果实褐变指数一致。上述结果表明,EBR处理组可以抑制PPO、POD基因的相对表达,降低PPO、POD活性;促进CAT、SOD基因的相对表达,提高CAT、SOD活性,尤以5μmol/L处理效果显著,可以较好地保持甜樱桃果实的品质及风味。 展开更多

关键词 甜樱桃 2 4-表油菜素内酯 褐变 酶活性 基因表达

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桃叶片低温响应转录组分析 被引量：1

17

作者 时梦 冀晓昊 +3 位作者 杨兴旺 王莹莹 王海波 王孝娣 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2023年第S01期49-57,共9页

抗寒是桃育种工作重要的目标性状,受多个基因的调控,转录组测序是对特定生理条件下的转录本进行测序分析,用以深入探究桃叶片低温响应的分子机制。以熊岳巨桃的叶片为试验材料对4℃低温(LT)处理下和正常叶片(RT)进行转录组测序分析。利... 抗寒是桃育种工作重要的目标性状,受多个基因的调控,转录组测序是对特定生理条件下的转录本进行测序分析,用以深入探究桃叶片低温响应的分子机制。以熊岳巨桃的叶片为试验材料对4℃低温(LT)处理下和正常叶片(RT)进行转录组测序分析。利用DESeq2进行差异表达分析,获得72个上调差异表达基因和3个下调表达基因。KEGG代谢通路分析差异表达基因的代谢通路,并进行蛋白的互作预测。结果显示,低温处理的叶片呈现卷曲、变黄和失水的生理状态,差异代谢基因主要富集在植物病原体互作、MAPK信号通路和次生物质代谢积累等途径。MYC2、SPCH和Pti4~6转录因子可能在响应冷胁迫中调节低温带来的伤害中起到重要作用,MYC2和CBF蛋白预测相互作用,且分别与多个蛋白互作。本研究表明,有多个代谢途径共同响应桃叶片的低温胁迫,还预测到了可能在冷反应调节途径中起到关键作用的相关转录因子,为探究桃响应冷胁迫的分子机制打下基础。 展开更多

关键词 桃 叶片 低温 转录组分析

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核桃内果皮4-香豆酸辅酶A连接酶基因克隆及表达分析 被引量：3

18

作者 郭永翠 秦江南 +1 位作者 朱玲 张锐 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2019年第2期79-86,共8页

为研究新疆核桃露仁机制,以露仁核桃种质温138为研究对象,其突变纸皮核桃为对照,采用RT-PCR技术克隆4CL基因并进行生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR方法研究核桃硬化过程中4CL基因相对表达量,找到4CL基因在露仁核桃内果皮中硬核发育... 为研究新疆核桃露仁机制,以露仁核桃种质温138为研究对象,其突变纸皮核桃为对照,采用RT-PCR技术克隆4CL基因并进行生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR方法研究核桃硬化过程中4CL基因相对表达量,找到4CL基因在露仁核桃内果皮中硬核发育过程中的表达特性。结果表明,WJ-4CL基因cDNA序列包括552 bp ORF,编码184个氨基酸,分子质量20.10 ku,理论等电点5.83;ZJ-4CL基因包含453 bp ORF,编码151个氨基酸,分子质量16.52 ku,理论等电点9.35;系统进化树表明,温138与纸皮核桃聚为同一支,其亲缘关系较近。实时荧光定量PCR分析表明,露仁核桃4CL基因在花后100 d的相对表达量为花后51 d相对表达量的117倍,硬壳完整核桃4CL基因在花后86 d相对表达量为花后51 d相对表达量的205倍,初步证明4CL基因在硬壳完整和露仁核桃的不同发育时期表达量存在明显差异。表明4CL基因参与核桃内果皮(硬壳)硬化过程且影响内果皮木质素的合成,从而造成核桃内果皮发育不全,出现露仁现象。 展开更多

关键词 核桃 木质素 4-香豆酸辅酶A连接酶 基因克隆 表达分析

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肥城桃果实己糖激酶Ⅱ基因克隆、生物信息学分析及原核表达 被引量：3

19

作者 张凯 高珊 朱树华 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2017年第6期85-91,共7页

为了深入研究己糖激酶(HK)的同工酶HKⅡ调控线粒体通透性转换孔(MPTP)的开放机理,通过RT-PCR技术和RACE技术,以克隆得到的肥城桃果实c DNA为模板,成功克隆得到HKⅡ基因全长,经原核表达和SDS-PAGE检测,体外构建原核表达载体pET-30a-HKⅡ... 为了深入研究己糖激酶(HK)的同工酶HKⅡ调控线粒体通透性转换孔(MPTP)的开放机理,通过RT-PCR技术和RACE技术,以克隆得到的肥城桃果实c DNA为模板,成功克隆得到HKⅡ基因全长,经原核表达和SDS-PAGE检测,体外构建原核表达载体pET-30a-HKⅡ,成功地在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达;使用镍柱纯化法,得到纯化的重组蛋白。克隆得到HKⅡ基因共1 835 bp,其中编码区1 496 bp,共编码497个氨基酸。HKⅡ蛋白预测分子式为C2379H3846N652O717S17,原子总数为7 611个,分子量为53.6 kDa,理论等电点为6.17,总平均疏水指数为0.023,表明HKⅡ蛋白为疏水性蛋白。TMHMM跨膜结构预测HKⅡ为跨膜蛋白,有1次跨膜,绝大部分在膜外。从二级结构预测结果来看,HKⅡ蛋白由15段α螺旋和11段β折叠和无规则卷曲构成。肥城桃HKⅡ蛋白预测的三级结构呈V字型,折叠结构较多。系统进化树和氨基酸相似性分析发现,桃果实HKⅡ与枇杷的相似度最高,达到了96.98%,桃果实HKⅡ与其他植物HK的氨基酸的同源性较高,说明HKⅡ具有较高的保守性。为进一步解析HKⅡ蛋白的结构和功能从而探讨HKⅡ调控线粒体MPTP的机理奠定了基础。 展开更多

关键词 肥城桃 己糖激酶 基因克隆 生物信息学分析 原核表达

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肥城桃果实2-Cys Prx基因克隆、生物信息学分析及原核表达

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作者 张永淋 高彬 +1 位作者 周杰 朱树华 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2018年第3期50-55,共6页

为了深入研究2-Cys Prx基因调控桃果实氧化还原信号分子作用机制,结合了PCR技术和RT-PCR技术通过体外克隆的方法得到桃果实2-Cys Prx基因,通过对序列分析表明,2-Cys Prx基因全长1 424 bp,其中,编码区813 bp,共编码270个氨基酸。对其分... 为了深入研究2-Cys Prx基因调控桃果实氧化还原信号分子作用机制,结合了PCR技术和RT-PCR技术通过体外克隆的方法得到桃果实2-Cys Prx基因,通过对序列分析表明,2-Cys Prx基因全长1 424 bp,其中,编码区813 bp,共编码270个氨基酸。对其分子结构进行分析,2-Cys Prx蛋白分子量为29.7 ku,为疏水型蛋白,且是膜外蛋白。在线软件预测2-Cys Prx蛋白分子式为C1342H2110N348O403S4,分子量29.696 ku,由4 207个原子组成,理论等电点为6.23。使用Prot Scale分析该蛋白疏水性平均值为-0.126,说明2-Cys Prx为亲水性蛋白。TMHMM对跨膜结构进行预测,发现,2-Cys Prx氨基酸序列中不存在跨膜结构域,为膜外蛋白。此外,对该蛋白二级结构进行预测,发现2-Cys Prx有4个α螺旋结构、9个β折叠结构及无规则卷曲构成。系统进化树分析表明,肥城桃果实2-Cys Prx与其他植物氨基酸序列有较高同源性,其中与樱桃的亲缘关系最近,相似度达到了98.15%,表明植物体内2-Cys Prx具有较高的保守性。体外构建重组蛋白p ET-30a-2-Cys Prx成功在大肠杆菌BL21中表达,为下一步研究其功能与结构,从而探讨2-Cys Prx基因调控桃果实氧化还原信号作用机理奠定了基础。 展开更多

关键词 桃果实 2-Cys Prx 基因克隆 蛋白诱导表达

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