文摘丝氨酸乙酰基转移酶LsSAT2(serine acetyltransferase,SAT)是山黧豆中神经活性成分β-N-草酰-L-α,β-二氨基丙酸(β-N-oxalyl-L-α,β-diaminopropionic acid,β-ODAP)生物合成的关键酶。为进一步分析LsSAT2的功能及其活性调控,本研究构建了LsSAT2过表达山黧豆毛状根株系,利用免疫沉淀和质谱联用技术(immunoprecipitation mass spectrum,IP-MS)筛选到了LsSAT2的潜在互作蛋白草酰辅酶A合成酶LsAAE3,通过蛋白对接、酵母双杂交(yeast two-hybrid,Y2H)、蛋白质下拉试验(pull down assay)等进行蛋白互作验证及功能分析。结果表明,利用IP-MS从LsSAT2过表达山黧豆毛状根株系中筛选到其潜在的互作蛋白LsAAE3;Y2H和Pull down试验证实了LsAAE3与LsSAT2存在蛋白互作关系;蛋白对接分析表明,LsSAT2通过羧基末端与LsAAE3发生蛋白互作。LsSAT2在山黧豆毛状根株系中的过表达使得β-ODAP水平相比对照降低52.4%,LsAAE3在山黧豆毛状根株系中的过表达则使得β-ODAP水平升高55.9%。上述结果加深了对山黧豆β-ODAP生物合成调控的理解。
