激素因子对甘蔗愈伤组织诱导增殖与分化的效应 被引量：12

1

作者 岑秀芬 杨燕妮 +4 位作者 韦鹏霄 陈世民 彭芳 经东艳 严悦 《广西农业科学》 CAS CSCD 2010年第9期889-892,共4页

对巴西固氮甘蔗品种B8(RB86-7515)、新台糖22号(ROC22)嫩叶鞘进行离体培养,以MS为基本培养基,研究不同激素种类及组合对愈伤组织诱导、增殖和分化的效应。结果表明,以2,4-D3.0mg/L+NAA0.2mg/L+KT1.0mg/L激素组合的愈伤组织诱导率最高,RO... 对巴西固氮甘蔗品种B8(RB86-7515)、新台糖22号(ROC22)嫩叶鞘进行离体培养,以MS为基本培养基,研究不同激素种类及组合对愈伤组织诱导、增殖和分化的效应。结果表明,以2,4-D3.0mg/L+NAA0.2mg/L+KT1.0mg/L激素组合的愈伤组织诱导率最高,ROC22和B8的诱导率分别达92.67%、88.89%;以2,4-D3.0mg/L+NAA0.2mg/L+KT0.5mg/L激素组合的愈伤组织增殖效果最好,ROC22和B8的愈伤组织增殖倍数分别为3.5和2.5倍;以NAA0.1mg/L+6-BA1.5mg/L+TDZ0.04mg/L激素组合的甘蔗愈伤组织分化效果最好,ROC22和B8的芽分化率分别为82.22%和77.78%。 展开更多

关键词 甘蔗 离体培养 激素因子 愈伤组织

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桂果蔗1号不同级数健康种苗生长特征及性状变异 被引量：5

2

作者 刘红坚 梁文燊 +7 位作者 何为中 叶权 刘丽敏 何毅波 卢曼曼 刘俊仙 李松 林善海 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期288-296,共9页

【目的】评价桂果蔗1号不同级数健康种苗的生长特征和变异特性,为提高果蔗健康种苗生产用种质量及高产栽培提供科学依据。【方法】对桂果蔗1号组培苗、第一级种茎和第二级种茎苗期生长表型性状进行连续观测,分析3个不同级数果蔗幼苗的... 【目的】评价桂果蔗1号不同级数健康种苗的生长特征和变异特性,为提高果蔗健康种苗生产用种质量及高产栽培提供科学依据。【方法】对桂果蔗1号组培苗、第一级种茎和第二级种茎苗期生长表型性状进行连续观测,分析3个不同级数果蔗幼苗的苗数、株高、地径、叶片数及+1叶的叶长、叶宽和叶面积等7个表型性状的生长特征和变异稳定性。【结果】不同级数果蔗种苗生长特征差异明显。第一级种茎和第二级种茎各方面生长特征相近,且均显著优于组培苗(P<0.05),但第二级种茎各方面表现仍明显优于第一级种茎。桂果蔗1号健康种苗各性状平均变异系数为5.48%,变异幅度为3.01%~11.88%,变异幅度最大的是苗数,最小的是地径。除了第二级种茎+1叶叶宽变异幅度有所上升外,其余6项表型性状变异均伴随着级数的增加而趋向稳定。3个不同级数种源所有性状的平均变异系数为3.32%~8.25%,以组培苗的平均变异系数最大(8.25%),第一级种茎苗次之(4.88%),第二级种茎苗最小(3.32%)。说明组培苗性状分离最大,高级苗(第二级种茎)性状较稳定。【结论】桂果蔗1号健康种苗第二级种茎的生长特性综合表现显著优于第一级种茎和组培苗,遗传变异也较稳定,为生产栽培最佳用种。 展开更多

关键词 果蔗 健康种苗 生长特征 遗传变异

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根癌农杆菌介导的甘蔗遗传转化 被引量：3

3

作者 吴转娣 刘新龙 +3 位作者 姚丽 苏火生 张敏 吴才文 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期150-155,共6页

综述开展甘蔗基因工程育种工作20多年来,从最初的利用农杆菌介导法研究抗除草剂和抗虫转基因成功,到目前高转化效率的转基因方法应用过程中取得的成果,分析影响农杆菌转化甘蔗的关键因素,并对农杆菌介导的甘蔗遗传转化研究前景作了展望。

关键词 根癌农杆菌介导法 甘蔗 遗传转化

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防城港市木薯产业的现状和发展对策 被引量：5

4

作者 谭冠宁 韦本辉 +1 位作者 周晓 覃铭键 《广西农学报》 2008年第2期79-81,85,共4页

为了做好"万亩木薯良种繁殖基地建设"项目的准备工作,就防城港市农业经济、木薯生产的现状、存在问题作了一系列的调研和总结,以充分发挥防城港市优良的自然条件和地理区位优势,较好地发展防城港市木薯生产,为后续木薯能源加... 为了做好"万亩木薯良种繁殖基地建设"项目的准备工作,就防城港市农业经济、木薯生产的现状、存在问题作了一系列的调研和总结,以充分发挥防城港市优良的自然条件和地理区位优势,较好地发展防城港市木薯生产,为后续木薯能源加工企业的原料供应打下生产基础,形成防城港市良好的木薯产业链,服务三农,发展经济为目的,对防城港市木薯生产的发展对策提出4点建议。 展开更多

关键词 防城港 木薯 产业 现状 问题 对策

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甘蔗分子伴侣ShDnaJ基因克隆及在甘蔗线条花叶病毒胁迫下的表达分析

5

作者 冯小艳 王文治 +4 位作者 王俊刚 沈林波 赵婷婷 冯翠莲 张树珍 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期2310-2319,共10页

【目的】克隆甘蔗分子伴侣基因Sh DnaJ,并分析其在甘蔗线条花叶病毒(SCSMV)胁迫下的表达模式,为探究ShDnaJ基因在甘蔗应答SCSMV侵染过程中的功能和作用机制提供理论参考。【方法】通过同源克隆技术克隆ShDnaJ基因完整开放阅读框(ORF)序... 【目的】克隆甘蔗分子伴侣基因Sh DnaJ,并分析其在甘蔗线条花叶病毒(SCSMV)胁迫下的表达模式,为探究ShDnaJ基因在甘蔗应答SCSMV侵染过程中的功能和作用机制提供理论参考。【方法】通过同源克隆技术克隆ShDnaJ基因完整开放阅读框(ORF)序列,利用生物信息学软件对其进行分析,再利用绿色荧光蛋白(GFP)融合表达法分析ShDnaJ蛋白的亚细胞定位,采用实时荧光定量PCR检测ShDnaJ基因在甘蔗不同组织及在SCSMV胁迫下的表达水平。【结果】ShDnaJ基因ORF全长1260 bp,编码419个氨基酸残基,蛋白分子量为45682.47 Da,理论等电点(pI)为8.78,属于稳定的亲水蛋白,含有DnaJ结构域,属于DnaJ超家族成员,定位于内质网。ShDnaJ蛋白的二级结构由113个α-螺旋、31个β-转角、78个延伸链和197个无规则卷曲组成。ShDnaJ蛋白与高粱SbDnaJ蛋白的氨基酸序列相似性最高,为96.93%,说明两者亲缘关系最近。ShDnaJ基因在甘蔗根、茎和叶中均有表达,且根和茎中的相对表达量显著高于叶中(P<0.05,下同),但未成熟茎Sh DnaJ基因的相对表达量高于成熟茎;成熟叶ShDnaJ基因的相对表达量高于未成熟叶。随着处理时间的推移,SCSMV胁迫组和对照组(磷酸缓冲液处理)中ShDnaJ基因的相对表达量整体呈下降趋势,但SCSMV接种后不同时间点ShDnaJ基因的相对表达量均显著高于对照组。【结论】ShDnaJ基因具有组织表达特异性,且组织的成熟程度会影响其表达水平。SCSMV胁迫下该基因表达上调,推测该基因参与调控甘蔗植株对SCSMV的抗性。 展开更多

关键词 甘蔗 分子伴侣DnaJ 基因克隆 甘蔗线条花叶病毒(SCSMV) 表达分析

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甘蔗胚性细胞团诱导影响因子研究

6

作者 李松 杨荣仲 +7 位作者 廖江雄 刘丽敏 余坤兴 淡明 刘红坚 杨柳 谭芳 戴友铭 《广西农业科学》 CAS CSCD 2010年第6期519-522,共4页

以不同基因型甘蔗品种新台糖22号、新台糖16号、桂糖21号及拔地拉为供试材料,以近生长点0～3 cm的嫩叶鞘组织为外植体、MS固体培养基为基本培养基,研究诱导初期不同分化刺激培养时间和不同激素组合(2,4-D 1.0～7.0 mg/L、ABA 0～2.0 mg... 以不同基因型甘蔗品种新台糖22号、新台糖16号、桂糖21号及拔地拉为供试材料,以近生长点0～3 cm的嫩叶鞘组织为外植体、MS固体培养基为基本培养基,研究诱导初期不同分化刺激培养时间和不同激素组合(2,4-D 1.0～7.0 mg/L、ABA 0～2.0 mg/L)对愈伤组织胚性细胞团诱导或分化的影响。结果表明,在MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.5mg/L培养基中对嫩叶鞘愈伤组织进行分化刺激培养24～72 h,可显著提高胚性细胞团的诱导率,以培养48 h的诱导率最高,平均诱导率为44.4%,比对照增加15.7个百分点;在不同激素组合培养基中,以在培养基MS+2,4-D 3.0 mg/L+ABA0.5 mg/L中培养的不同甘蔗品种胚性细胞团诱导率较高、生长较好,其次是MS+2,4-D 3.0 mg/L;在分化培养基MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L中对来自不同诱导培养基的胚性细胞团进行分化培养,结果发现在MS+2,4-D 3.0 mg/L+ABA 0.5 mg/L和MS+2,4-D 3.0 mg/L中诱导的胚性细胞团的绿苗分化率较高,不同甘蔗品种平均绿苗分化率分别为65.0%、64.9%,但绿苗生根率较低。 展开更多

关键词 甘蔗 胚性细胞团 诱导 激素 分化 绿苗

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利用转录组测序开发甘蔗SNP分子标记 被引量：6

7

作者 胡小文 孔冉 +2 位作者 刘洋 徐志军 苏俊波 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期2527-2536,共10页

【目的】利用转录组测序开发甘蔗SNP分子标记,为甘蔗建立一种高效和低成本的分子标记开发方法。【方法】以40个甘蔗栽培品种为试验材料,使用高通量测序平台获得其转录组数据,经质控后将其匹配到参考基因组,然后使用GATK软件检测和过滤SN... 【目的】利用转录组测序开发甘蔗SNP分子标记,为甘蔗建立一种高效和低成本的分子标记开发方法。【方法】以40个甘蔗栽培品种为试验材料,使用高通量测序平台获得其转录组数据,经质控后将其匹配到参考基因组,然后使用GATK软件检测和过滤SNP分子标记,并使用snpEff对SNP进行注释及统计分析。利用这些SNP分子标记进行系统发生分析、主成分分析和群体结构分析。最后,开发KASP标记并随机验证其有效性。【结果】转录组数据经质控后平均每个样本获得6.5 Gb的序列。通过变异分析和多重过滤筛选后,共获得220397个注释到染色体上的双等位基因SNP位点,平均密度为3 SNP/kb。SNP类型及分布特征分析结果表明,编码区错义突变与沉默突变的比值(N/S)为1.05,转换类型和颠换类型的比值(Ts/Tv)为1.89,杂合SNP占38.66%~49.91%,位于转录本的SNP比例为44.74%。系统发生分析、主成分分析和群体结构分析结果均表明,甘蔗栽培品种遗传来源较为单一,但群体分化较大。开发了11176个KASP分子标记,并随机合成25组KASP引物进行多态性验证,共有23组(92%)引物能检测到扩增产物,7组(28%)在40个甘蔗材料中呈现多态性,进一步验证了这些标记有效性。【结论】与传统SSR分子标记和基于GBS(Genotyping-by-sequencing)简化基因组测序的SNP分子标记开发方法相比,基于转录组测序的甘蔗SNP分子标记开发方法在保证质量和数量的情况下能获得更大比例的有效SNP,更有利于发掘功能SNP位点,为甘蔗分子SNP标记的开发提供了新的途径。 展开更多

关键词 甘蔗 SNP分子标记 转录组 开发 主成分分析 群体结构分析

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斑茅ACO基因(aco)的克隆及其在水分胁迫下的表达(英文) 被引量：5

8

作者 张积森 李伟 +3 位作者 阮妙鸿 阙友雄 陈如凯 张木清 《热带作物学报》 CSCD 2007年第2期60-68,共9页

利用RT-PCR技术,首次克隆了斑茅1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶基因序列.该片段长度为1123bp的片段,包括1个编码322个氨基酸的完整开放读码框,包括具有与异青霉素合成酶功能区类似的氧化功能PcbC区,和1个Fe2+和CO2活性中心。应用实时荧光PC... 利用RT-PCR技术,首次克隆了斑茅1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶基因序列.该片段长度为1123bp的片段,包括1个编码322个氨基酸的完整开放读码框,包括具有与异青霉素合成酶功能区类似的氧化功能PcbC区,和1个Fe2+和CO2活性中心。应用实时荧光PCR技术分析了1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶基因在聚乙二醇胁迫下4个时段的表达。结果表明,聚乙二醇胁迫2h时,该基因在叶片明显上调表达,4h后的表达趋向平缓。本研究为1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶基因进一步用于基因工程研究奠定基础,同时也初步揭示1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶基因的表达与水分胁迫相互关系,为探讨乙烯对水分胁迫响应的分子机制提供了初步依据。 展开更多

关键词 斑茅 1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶基因(ACO基因 aco) RT-PCR 实时荧光定量PCR 聚乙二醇胁迫

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甘蔗嫩叶鞘外植体褐变相关因子研究 被引量：8

9

作者 戴友铭 岑秀芬 +3 位作者 韦鹏霄 陈引芝 覃嘉明 苏树权 《广西农业科学》 CAS CSCD 2008年第2期127-131,共5页

对6个甘蔗品种嫩叶鞘进行离体培养,研究不同基本培养基、蔗糖浓度、甘蔗品种、取样季节和光照培养条件对外植体褐变的影响。试验结果表明:3种基本培养基中,以N6培养基的外植体褐化率最高(35.44%);当蔗糖浓度为40g/L时,外植体褐变程度最... 对6个甘蔗品种嫩叶鞘进行离体培养,研究不同基本培养基、蔗糖浓度、甘蔗品种、取样季节和光照培养条件对外植体褐变的影响。试验结果表明:3种基本培养基中,以N6培养基的外植体褐化率最高(35.44%);当蔗糖浓度为40g/L时,外植体褐变程度最大,而当蔗糖浓度为30g/L时,愈伤组织平均诱导率最高;不同甘蔗品种之间的外植体褐化率差异均达极显著水平,以Badila的最高,福农81-745的最低;在冬季取样,6个品种外植体褐化率极显著增加,而愈伤组织平均诱导率则极显著降低;与全暗培养相比,光照培养(12h/d)的外植体平均褐化率(35.44%)显著增加。因此,在春季取样、采用适当的基本培养基和蔗糖浓度,在暗条件下对甘蔗嫩叶鞘进行离体培养,可显著减少外植体褐化率,并有利于提高愈伤组织诱导率。 展开更多

关键词 甘蔗 离体培养.夕p植体 褐变 因子

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河八王转录组SSR和SNP序列特征及系统发育分析 被引量：3

10

作者 李海碧 吴杨 +7 位作者 祝开 桂意云 韦金菊 周会 张荣华 唐利球 覃天贤 刘昔辉 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期849-858,共10页

【目的】对甘蔗野生种河八王转录组SSR和SNP序列特征及系统发育进行分析,为深入研究甘蔗属植物分子标记开发、种质资源利用、种群遗传结构和分化历史动态提供参考。【方法】基于河八王转录组数据,利用MISA和SOAPsnp软件对获得的Unigene... 【目的】对甘蔗野生种河八王转录组SSR和SNP序列特征及系统发育进行分析,为深入研究甘蔗属植物分子标记开发、种质资源利用、种群遗传结构和分化历史动态提供参考。【方法】基于河八王转录组数据,利用MISA和SOAPsnp软件对获得的Unigenes进行SSR和SNP位点发掘及序列特征分析,并从JGI数据库下载二穗短柄草、水稻、谷子、高粱、玉米物和拟南芥转录组数据,采用最大似然(ML)方法构建系统发育进化树,并估算物种分歧时间。【结果】通过河八王转录组测序共获得171000000条Raw reads,经过数据过滤获得156800000条Clean reads,经进一步组装后获得130393条Unigenes,其中有14233条Unigenes含有16372个SSR位点,发生频率为12.56%。含有1个以上SSR位点的Unigenes有1839条,复合型SSR位点有656个。SSR重复基元类型丰富,从单核苷酸到六核苷酸重复均有分布,共有612种SSR重复基元种类,数量最多的类型为三核苷酸重复类型(49.16%),其次是二核苷酸重复(25.54%)和单核苷酸重复(18.30%)。在所有的核苷酸重复类型中,重复基元占SSR位点总数比例<0.50%的类型有14种,出现频率较高的3种重复基元分别为CCG/CGG、A/T和AG/CT。SSR序列长度为12~191 bp,其中长度≤25 bp的SSR位点共有15123个,占SSR位点总数的96.23%,其中长度为15 bp的数量最多,占SSR位点总数的32.16%。SSR重复基元的重复次数为4~24次,且以5、6和7次重复为主。河八王转录组序列共有222106个SNP位点,平均每条Unigenes上有1.70个SNP位点,核苷酸转换类型的比例(65.92%)明显高于颠换类型(34.08%),6种单核苷酸变异类型中,A/G发生频率最高(33.07%),其次是C/T(32.84%)。系统发育分析和物种分化时间估算结果显示,河八王与高粱的亲缘关系最近,分化时间为14.6百万年(Ma)。【结论】河八王转录组中SSR和SNP位点非常丰富,具有较高的遗传多态性,说明利用转录组测序开发甘蔗SSR和SNP分子标记是一种切实可行的方法。利用转录组数据构建系统发育进行树的方法可用于其他缺乏基因组数据的物种系统发育研究。 展开更多

关键词 河八王 SSR SNP 转录组 系统发育分析

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甘蔗蔗糖转运蛋白SoSUT5基因克隆、表达及功能鉴定 被引量：2

11

作者 牛俊奇 苗小荣 +2 位作者 王道波 杨丽涛 李杨瑞 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1917-1923,共7页

【目的】克隆甘蔗蔗糖转运蛋白基因SoSUT5,分析其表达特性,并通过转化酵母突变体验证其功能,为研究SUT5基因的功能提供理论依据。【方法】以甘蔗品种桂糖28(GT28)未成熟茎cDNA为模板,采用RT-PCR从甘蔗中克隆SoSUT5基因,并进行生物信息... 【目的】克隆甘蔗蔗糖转运蛋白基因SoSUT5,分析其表达特性,并通过转化酵母突变体验证其功能,为研究SUT5基因的功能提供理论依据。【方法】以甘蔗品种桂糖28(GT28)未成熟茎cDNA为模板,采用RT-PCR从甘蔗中克隆SoSUT5基因,并进行生物信息学分析及构建系统发育进化树。采用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测SoSUT5基因在甘蔗不同组织的表达情况,同时构建酵母表达载体并转化酵母突变体SUSY7/ura3进行基因功能验证。【结果】克隆获得的SoSUT5基因为1605 bp,编码534个氨基酸,GenBank登录号KF808328。SoSUT5蛋白的分子量和理论等电点(pI)分别为56.40 kD和8.36,具有12个跨膜结构,属于易化扩散载体(MFS)家族成员,也属于蔗糖/H+共转运体家族(GPH)成员。该蛋白具有保守的SUT蛋白功能域,是SUT5亚家族成员。在甘蔗生理成熟期,从成熟茎、花序、成熟芽和根中均能检测到SoSUT5基因表达,以在花序中的表达量最高,根次之,但在+1叶中检测不到。转pDR196空载体的酵母突变体SUSY7/ura3在以蔗糖为唯一碳源的MD培养基上不能生长,但转pDR-SoSUT5重组质粒的酵母突变体SUSY7/ura3能正常生长,说明SoSUT5蛋白具有蔗糖转运活性。【结论】SoSUT5基因编码蛋白具有转运蔗糖的生物学功能,在甘蔗蔗糖运输和积累过程中发挥调控作用。 展开更多

关键词 甘蔗 蔗糖转运蛋白(SUT) 基因克隆 表达分析 生物信息学分析

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不同浓度嘧菌酯处理对丛栽甘蔗组培苗的影响 被引量：2

12

作者 吕耀宁 张荣华 +4 位作者 李松 卢曼曼 何毅波 刘红坚 刘俊仙 《广西糖业》 2020年第1期8-11,共4页

为了提高每年1~3月份低温寡照期及病原菌繁殖厉害的季节丛栽甘蔗组培苗的成活率,用1000倍(高)、1500倍(中)和2000倍(低)浓度的25%嘧菌酯悬浮剂对桂糖42号、桂果蔗1号和桂糖55号丛栽组培苗进行处理。结果表明,三种不同浓度处理丛栽组培苗... 为了提高每年1~3月份低温寡照期及病原菌繁殖厉害的季节丛栽甘蔗组培苗的成活率,用1000倍(高)、1500倍(中)和2000倍(低)浓度的25%嘧菌酯悬浮剂对桂糖42号、桂果蔗1号和桂糖55号丛栽组培苗进行处理。结果表明,三种不同浓度处理丛栽组培苗,鲜重、根系鲜重、株高、根系长度、每丛苗的成活数等生长指标均明显优于对照,其中高浓度处理桂果蔗1号的鲜重和根系鲜重比对照重115.8%和185.8%;高浓度处理的桂果蔗1号株高比对照高1.8cm;高浓度处理桂糖42和桂果蔗1号每丛苗数都达到4.0株以上,与对照相差最大是高浓度处理的桂果蔗1号,差异达1.2株,而桂糖55号三种浓度处理每丛获得的苗数差异不大。因此,在冬春季低温阴雨天气条件下用25%的嘧菌酯悬浮剂处理甘蔗生根瓶苗进行丛栽,明显提高丛栽组培苗的质量和成活率。 展开更多

关键词 嘧菌酯 丛栽组培苗 质量 成活率

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采用分生组织培养生产脱甘蔗黄叶病毒苗(英文) 被引量：4

13

作者 Mishra S Rao G P 《南方农业学报》 CAS CSCD 2011年第1期1-5,共5页

【目的】尝试使用茎尖分生组织培养技术生产UP 01235和UP 0097 2个甘蔗品种的脱甘蔗黄叶病毒(SCYLV)脱毒组培苗。【方法】以大田染病和健康甘蔗植株的不同大小茎尖分生组织为外植体,经培养获得组培幼苗。采用1对甘蔗黄叶病毒特异性引物(... 【目的】尝试使用茎尖分生组织培养技术生产UP 01235和UP 0097 2个甘蔗品种的脱甘蔗黄叶病毒(SCYLV)脱毒组培苗。【方法】以大田染病和健康甘蔗植株的不同大小茎尖分生组织为外植体,经培养获得组培幼苗。采用1对甘蔗黄叶病毒特异性引物(SCYLV-615F:5′-ATGAATACGGGCGCTAACCGYYCAC-3′和 SCYLV-615R:5′-GT-GTTGGGGRAGCGTCGCYTACC-3′)进行RT-PCR分析,在6个月内每隔1个月检查1次组培苗是否存在病毒。【结果】当以1.5 mm茎尖进行培养时,获得的2个甘蔗品种的组培苗在温室种植,在生长期间未发现存在黄叶病毒,说明黄叶病毒已被消除;而以超过1.5 mm的茎尖为外植体时,PCR分析表明结果,所获得的组培苗存在黄叶病毒。【结论】对以1.0～1.5 mm茎尖培养获得的200多株组培苗进行温室繁殖,在生长期间均未发现黄叶病毒。 展开更多

关键词 RT-PCR 分生组织培养 甘蔗 甘蔗黄叶病毒 脱毒苗

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