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番茄斑驳花叶病毒RT-RAA-CRISPR/Cas12a的可视化检测方法的建立
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作者 董铮 赵振兴 +3 位作者 范奇璇 王思元 周涛 张永江 《植物病理学报》 北大核心 2025年第3期504-510,共7页
番茄斑驳花叶病毒(tomato mottle mosaic virus,ToMMV)是近年来发现的一种新的烟草花叶病毒属Tobamovirus病毒,主要侵染番茄、辣椒、茄子等茄科作物,严重影响果实的产量和品质。本研究根据ToMMV编码外壳蛋白的基因保守序列,设计重组酶... 番茄斑驳花叶病毒(tomato mottle mosaic virus,ToMMV)是近年来发现的一种新的烟草花叶病毒属Tobamovirus病毒,主要侵染番茄、辣椒、茄子等茄科作物,严重影响果实的产量和品质。本研究根据ToMMV编码外壳蛋白的基因保守序列,设计重组酶介导等温核酸扩增技术(recombinase-aided amplification,RAA)特异性引物和簇状规则间隔短链重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)及相关蛋白12a(CRISPR-associated 12a,Cas12a)的crRNA并挑选报告基因,通过优化反应体系及特异性和灵敏度的验证,建立了ToMMV快速灵敏的可视化检测方法。优化结果显示,当报告基因FQ终浓度为300 nmol·L^(-1)、Cas12a/crRNA比例为1∶5、终浓度为200 nmol·L^(-1)和1000 nmol·L^(-1)条件下检测效果最好,最终RT-RAA和CRISPR/Cas12a显色体系只需分别反应15 min,通过便携式蓝光照射设备可以直接观察到阳性信号。实际样品检测结果显示,本研究建立的检测技术可以在辣椒和番茄中检测到ToMMV。该方法可特异性检测ToMMV,对携带ToMMV样品的RNA检测灵敏度可达2.5 pg·μL^(-1),是RT-PCR检测灵敏度的100倍,可用于ToMMV快速灵敏的可视化检测。 展开更多
关键词 番茄斑驳花叶病毒 RT-RAA CRISPR/Cas12a 可视化检测
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