目的:建立一种高效液相色谱法(high-performance liquid chromatography,HPLC),用于同时检测结核病患者血浆中异烟肼(INH)、吡嗪酰胺(PZA)、利福喷丁(RFT)或利福平(RFP)等3种抗结核药物的浓度。方法:采用StarCore Amide色谱柱(4.6 mm...目的:建立一种高效液相色谱法(high-performance liquid chromatography,HPLC),用于同时检测结核病患者血浆中异烟肼(INH)、吡嗪酰胺(PZA)、利福喷丁(RFT)或利福平(RFP)等3种抗结核药物的浓度。方法:采用StarCore Amide色谱柱(4.6 mm×100 mm,2.6μm),柱温20℃,以三元梯度洗脱(A:20 mmol/L乙酸铵,pH 4.7;B:乙腈;C:超纯水;0~3 min 97%B、3%C;3~4 min 30%A、70%B;4~7 min 50%A、50%B;7~9 min 50%B、50%C;9~15 min 97%B、3%C),流速1.2 ml/min,检测波长260 nm,进样量30μl,并以RFT或RFP为内标。方法学验证后,连续纳入147例接受治疗药物监测(therapeutic drug monitoring,TDM)的结核病患者血浆样本,与液相色谱-串联质谱法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)平行检测,以评价本方法的临床适用性。结果:在上述条件下,INH、PZA与RFT(或RFP)于15 min内实现基线分离,空白血清无干扰峰。以RFP为内标时,INH、PZA、RFT的线性范围分别为0.6~15 mg/L(R^(2)=0.999)、2~100 mg/L(R^(2)=0.999)、0.8~40 mg/L(R^(2)=0.999),日内和日间精密度相对标准偏差均≤12.14%,提取回收率为95.85%~107.22%,室温或冷藏条件下稳定性误差均在±15%以内。以RFT为内标时,各分析物线性范围与保留时间匹配(RFP 3.39 min),特异性良好。临床样本验证显示,本方法与LC-MS/MS结果具有良好一致性(Bland-Altman偏倚<5%),表明该方法可靠性高。结论:本研究建立了一种操作简便、特异度强、敏感度高的HPLC方法,能够同时检测3种一线抗结核药物的血药浓度,可用于结核病患者6个月标准疗程或4个月短程化疗方案中核心药物的治疗药物监测及个体化用药指导。展开更多
文摘目的:建立一种高效液相色谱法(high-performance liquid chromatography,HPLC),用于同时检测结核病患者血浆中异烟肼(INH)、吡嗪酰胺(PZA)、利福喷丁(RFT)或利福平(RFP)等3种抗结核药物的浓度。方法:采用StarCore Amide色谱柱(4.6 mm×100 mm,2.6μm),柱温20℃,以三元梯度洗脱(A:20 mmol/L乙酸铵,pH 4.7;B:乙腈;C:超纯水;0~3 min 97%B、3%C;3~4 min 30%A、70%B;4~7 min 50%A、50%B;7~9 min 50%B、50%C;9~15 min 97%B、3%C),流速1.2 ml/min,检测波长260 nm,进样量30μl,并以RFT或RFP为内标。方法学验证后,连续纳入147例接受治疗药物监测(therapeutic drug monitoring,TDM)的结核病患者血浆样本,与液相色谱-串联质谱法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)平行检测,以评价本方法的临床适用性。结果:在上述条件下,INH、PZA与RFT(或RFP)于15 min内实现基线分离,空白血清无干扰峰。以RFP为内标时,INH、PZA、RFT的线性范围分别为0.6~15 mg/L(R^(2)=0.999)、2~100 mg/L(R^(2)=0.999)、0.8~40 mg/L(R^(2)=0.999),日内和日间精密度相对标准偏差均≤12.14%,提取回收率为95.85%~107.22%,室温或冷藏条件下稳定性误差均在±15%以内。以RFT为内标时,各分析物线性范围与保留时间匹配(RFP 3.39 min),特异性良好。临床样本验证显示,本方法与LC-MS/MS结果具有良好一致性(Bland-Altman偏倚<5%),表明该方法可靠性高。结论:本研究建立了一种操作简便、特异度强、敏感度高的HPLC方法,能够同时检测3种一线抗结核药物的血药浓度,可用于结核病患者6个月标准疗程或4个月短程化疗方案中核心药物的治疗药物监测及个体化用药指导。
