目的探讨α吡喃酮类化合物Rasfonin对鸟苷酸交换因子SOS1表达的调控作用及其机制。方法(1)将MCF-7、Calu-1和UM-UC-3细胞分别分为溶剂对照组和Rasfonin组(1、5、10和15μmol·L^(-1)),处理24 h后CCK-8法检测MCF-7、Calu-1和UM-UC-3...目的探讨α吡喃酮类化合物Rasfonin对鸟苷酸交换因子SOS1表达的调控作用及其机制。方法(1)将MCF-7、Calu-1和UM-UC-3细胞分别分为溶剂对照组和Rasfonin组(1、5、10和15μmol·L^(-1)),处理24 h后CCK-8法检测MCF-7、Calu-1和UM-UC-3细胞存活率。将MCF-7、Calu-1和UM-UC-3细胞分别分为细胞对照组(培养基)、表皮生长因子组(EGF 50μg·L^(-1)处理5 min),EGF+Rasfonin组(Rasfonin分别以5和10μmol·L^(-1)预处理不同时间后,再EGF 50μg·L^(-1)处理5 min),实时荧光定量PCR和Western印迹法检测MCF-7、Calu-1和UM-UC-3细胞中SOS1 m RNA和蛋白表达水平。(2)将阴性对照(NC)质粒、KRASWT质粒和KRASG12C质粒分别与SOS1质粒共转染至293T细胞,转染后分为溶剂对照组和Rasfonin组(1、5和10μmol·L^(-1)),处理12 h后采用双荧光素酶报告基因实验检测SOS1启动子活性。将质粒KRAS^(WT)、KRAS^(G12C)、NC+SOS1、KRAS^(WT)+SOS1和KRAS^(G12C)+SOS1分别转染至293T细胞,分为EGF组和EGF+Rasfonin组(Rasfonin 10μmol·L^(-1)预处理12 h后,再EGF处理5 min),Western印迹法检测293T细胞中SOS1蛋白表达水平。结果(1)与溶剂对照组相比,Rasfonin 5、10和15μmol·L^(-1)显著抑制Calu-1和UM-UC-3细胞增殖,IC_(50)分别为8.22和4.94μmol·L^(-1),MCF-7细胞的IC50为45.15μmol·L^(-1)。Rasfonin处理3 h MCF-7细胞SOS1 m RNA水平升高;Rasfonin处理1 h Calu-1细胞SOS1 m RNA水平升高,3和6 h SOS1 m RNA水平降低;Rasfonin处理3 h UM-UC-3细胞SOS1 m RNA表达,6 h降低。与EGF组相比,EGF+Rasfonin组MCF-7细胞的SOS1蛋白表达水平无显著变化,Calu-1与UM-UC-3细胞的SOS1蛋白表达水平显著降低。(2)与溶剂对照组相比,Rasfonin对SOS1单表达组SOS1启动子活性无显著影响,但SOS1与KRAS^(WT)或KRAS^(G12C)蛋白共表达时,SOS1启动子活性被Rasfonin显著抑制。与EGF组相比,Rasfonin对SOS1单表达组及SOS1+KRAS^(WT)共表达组的SOS1蛋白表达水平无显著变化,SOS1+KRAS^(G12C)共表达组的SOS1蛋白表达水平显著降低。结论Rasfonin通过KRASG12C依赖性途径抑制SOS1表达,这可能是其抗肿瘤作用的机制之一。展开更多
文摘目的探讨α吡喃酮类化合物Rasfonin对鸟苷酸交换因子SOS1表达的调控作用及其机制。方法(1)将MCF-7、Calu-1和UM-UC-3细胞分别分为溶剂对照组和Rasfonin组(1、5、10和15μmol·L^(-1)),处理24 h后CCK-8法检测MCF-7、Calu-1和UM-UC-3细胞存活率。将MCF-7、Calu-1和UM-UC-3细胞分别分为细胞对照组(培养基)、表皮生长因子组(EGF 50μg·L^(-1)处理5 min),EGF+Rasfonin组(Rasfonin分别以5和10μmol·L^(-1)预处理不同时间后,再EGF 50μg·L^(-1)处理5 min),实时荧光定量PCR和Western印迹法检测MCF-7、Calu-1和UM-UC-3细胞中SOS1 m RNA和蛋白表达水平。(2)将阴性对照(NC)质粒、KRASWT质粒和KRASG12C质粒分别与SOS1质粒共转染至293T细胞,转染后分为溶剂对照组和Rasfonin组(1、5和10μmol·L^(-1)),处理12 h后采用双荧光素酶报告基因实验检测SOS1启动子活性。将质粒KRAS^(WT)、KRAS^(G12C)、NC+SOS1、KRAS^(WT)+SOS1和KRAS^(G12C)+SOS1分别转染至293T细胞,分为EGF组和EGF+Rasfonin组(Rasfonin 10μmol·L^(-1)预处理12 h后,再EGF处理5 min),Western印迹法检测293T细胞中SOS1蛋白表达水平。结果(1)与溶剂对照组相比,Rasfonin 5、10和15μmol·L^(-1)显著抑制Calu-1和UM-UC-3细胞增殖,IC_(50)分别为8.22和4.94μmol·L^(-1),MCF-7细胞的IC50为45.15μmol·L^(-1)。Rasfonin处理3 h MCF-7细胞SOS1 m RNA水平升高;Rasfonin处理1 h Calu-1细胞SOS1 m RNA水平升高,3和6 h SOS1 m RNA水平降低;Rasfonin处理3 h UM-UC-3细胞SOS1 m RNA表达,6 h降低。与EGF组相比,EGF+Rasfonin组MCF-7细胞的SOS1蛋白表达水平无显著变化,Calu-1与UM-UC-3细胞的SOS1蛋白表达水平显著降低。(2)与溶剂对照组相比,Rasfonin对SOS1单表达组SOS1启动子活性无显著影响,但SOS1与KRAS^(WT)或KRAS^(G12C)蛋白共表达时,SOS1启动子活性被Rasfonin显著抑制。与EGF组相比,Rasfonin对SOS1单表达组及SOS1+KRAS^(WT)共表达组的SOS1蛋白表达水平无显著变化,SOS1+KRAS^(G12C)共表达组的SOS1蛋白表达水平显著降低。结论Rasfonin通过KRASG12C依赖性途径抑制SOS1表达,这可能是其抗肿瘤作用的机制之一。
