人生长激素-Fc融合蛋白注射液与不同种属生长激素受体及Fc受体结合力及同源性研究

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作者 尉建 李卓男 +4 位作者 徐晓明 高健 马媛媛 张宇 刘云南 《中国药物评价》 2025年第3期211-217,共7页

目的:旨在测定人生长激素-Fc融合蛋白注射液(recombinant human growth hormone-Fc fusion protein,rhGH-Fc)与不同种属(人、食蟹猴、犬、大鼠、小鼠)生长激素受体(growth hormone receptor,GHR)的结合力,并通过动力学参数分析,为非临... 目的:旨在测定人生长激素-Fc融合蛋白注射液(recombinant human growth hormone-Fc fusion protein,rhGH-Fc)与不同种属(人、食蟹猴、犬、大鼠、小鼠)生长激素受体(growth hormone receptor,GHR)的结合力,并通过动力学参数分析,为非临床研究中动物模型的选择提供科学依据。方法:采用表面等离子共振(surface plasmon resonance,SPR)技术,利用Biacore 1K分子互作仪进行多循环动力学检测。实验采用氨基偶联法将GHR以及Fc受体(neonatal Fc receptor,FcRn)固定至CM5芯片表面,经偶联优化后,检测rhGH-Fc与不同种属GHR及FcRn的结合动力学参数,包括结合速率常数(ka)、解离速率常数(kd)及平衡解离常数(KD),采用捕获法进行亲和力分析。数据分析使用BiacoreInsight Evaluation软件完成。并通过NCBI数据库及SnapGene等工具,进行氨基酸序列同源性及进化树分析。结果:实验结果显示,rhGH-Fc与人及食蟹猴GHR和FcRn的结合力较高,而与大鼠结合力较低。结合动力学参数表明,食蟹猴受体与人类最为相似,验证其作为非临床研究相关动物模型的合理性。氨基酸序列同源性分析显示,恒河猴和食蟹猴生长激素(growth hormone,GH)与人类的同源性均为96.31%,GHR分别为94.2%和94.67%;犬、大鼠、小鼠GH同源性较低,分别为67.47%、64.98%和66.82%。IgG4 Fc段及FcRn区域的分析表明,恒河猴和食蟹猴与人类IgG4 Fc的同源性较高,分别为89%和87%,而FcRn同源性,恒河猴和食蟹猴分别为88%和89%,犬较低(77%),大鼠和小鼠最低(68%)。进化树分析显示,食蟹猴和恒河猴与人类亲缘性最高,犬次之,大鼠和小鼠亲缘性最远。结论:rhGH-Fc在食蟹猴中的结合动力学特征与人类高度相似,支持其作为非临床研究相关种属的合理性。相比之下,大鼠因GHR和FcRn结合力较低,不适合作为模拟人类药效和药代动力学的理想模型。本研究为非临床研究中动物模型的选择提供了重要参考依据。 展开更多

关键词 生长激素受体(GHR) 结合力检测 氨基酸序列同源性

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丹参4-(5′-二磷酸胞苷)-2-C-甲基-D-赤藓醇激酶的cDNA全长克隆及其诱导表达分析 被引量：25

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作者 王学勇 崔光红 +2 位作者 黄璐琦 高伟 袁媛 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1251-1257,共7页

本文首次从丹参毛状根中克隆得到了丹参4-(5′-二磷酸胞苷)-2-C-甲基-D-赤藓醇激酶(简称为SmCMK)的编码基因的全长cDNA序列,GenBank注册号:EF534309。KEGG软件分析表明:SmCMK位于二萜类化合物生物合成的上游途径——非甲羟戊酸途径(DXP)... 本文首次从丹参毛状根中克隆得到了丹参4-(5′-二磷酸胞苷)-2-C-甲基-D-赤藓醇激酶(简称为SmCMK)的编码基因的全长cDNA序列,GenBank注册号:EF534309。KEGG软件分析表明:SmCMK位于二萜类化合物生物合成的上游途径——非甲羟戊酸途径(DXP),是DXP途径上唯一的激酶。所克隆的SmCMK基因序列全长1 493 bp,包括完整的开放阅读框(open reading frame,ORF),推测编码396个氨基酸的多肽,分子质量为43.302 kDa,等电点(pI)值为6.78;含有71 bp的5′非转译区(5′UTR)和232 bp的3′非转译区(3′UTR)。末尾具有完整的AATAA加尾信号和PolyA结构,说明所克隆基因的序列较为完整。经序列比对分析表明,SmCMK与其他植物CMK激酶家族具有较高的同源性。实时荧光定量PCR结果显示该基因受茉莉酸甲酯(MJ)诱导后表达水平显著升高,与丹参酮类成分含量受MJ诱导后的增加趋势一致,初步证明了SmCMK基因表达量与丹参酮类成分的积累之间的关系,为进一步研究丹参酮类成分的次生代谢调控机制奠定了基础。 展开更多

关键词 丹参 SmCMK RACE 克隆 茉莉酸甲酯

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金铁锁鲨烯合酶cDNA的克隆和功能鉴定 被引量：23

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作者 戴住波 钱子刚 +1 位作者 胡运乾 黄璐琦 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1245-1250,共6页

濒危药用植物金铁锁(Psammosilene tunicoidesW.C.Wu et C.Y.Wu.)的有效成分三萜总皂苷有显著的药理活性。为克隆和鉴定金铁锁三萜皂苷生物合成途径中的关键酶基因——鲨烯合酶的全长cDNA,本研究采用同源兼并引物PCR和cDNA末端快速扩增(... 濒危药用植物金铁锁(Psammosilene tunicoidesW.C.Wu et C.Y.Wu.)的有效成分三萜总皂苷有显著的药理活性。为克隆和鉴定金铁锁三萜皂苷生物合成途径中的关键酶基因——鲨烯合酶的全长cDNA,本研究采用同源兼并引物PCR和cDNA末端快速扩增(RACE)等方法克隆了其全长cDNA;结合大肠杆菌异源表达、体外酶促反应及针对产物化学结构的GC和GC-MS分析等方法鉴定了其功能。研究结果表明:金铁锁鲨烯合酶cDNA全长为1 663bp,含有1 245 bp的开放阅读框(ORF),编码414个氨基酸(计算分子质量为47.69 kD),5′非编码区(UTR)和3′UTR分别为260 bp和158 bp,GenBank注册号为EF585250,与三七、人参和甘草的鲨烯合酶的氨基酸序列有较高的同源性,分别为83%、82%和82%,而与裂变酵母、白色念珠菌和人的氨基酸序列的同源性分别只有35%、39%和47%;表达产物具有催化两分子法呢烯焦磷酸连接成鲨烯的活性。本研究克隆和鉴定了金铁锁鲨烯合酶的全长cDNA,为金铁锁次生代谢工程研究提供了重要基础。 展开更多

关键词 金铁锁 三萜皂苷 RACE GC-MS 金铁锁鲨烯合酶

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利用基因转化提高虎杖毛状根中活性成分的含量 被引量：12

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作者 苗晓燕 于树宏 +1 位作者 沈银柱 黄占景 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期995-999,共5页

通过转白藜芦醇合酶（resveratrol synthase，RS）基因提高虎杖毛状根中主要活性成分——白藜芦醇（resveratrol，RE）和白藜芦醇苷（polydatin，PD）的含量。用改进的高盐低pH法提取葡萄基因组DNA，通过PCR扩增获得RS基因序列，构建表... 通过转白藜芦醇合酶（resveratrol synthase，RS）基因提高虎杖毛状根中主要活性成分——白藜芦醇（resveratrol，RE）和白藜芦醇苷（polydatin，PD）的含量。用改进的高盐低pH法提取葡萄基因组DNA，通过PCR扩增获得RS基因序列，构建表达载体pCAMBIA1300—35S—RS，然后采用冻融法转化发根农杆菌ATCC11325，继而浸染划伤的虎杖无菌幼苗叶片，PCR和RT—PCR法鉴定RS基因在虎杖毛状根中的整合与表达，高效液相色谱（highly effective liquid chromatography，HPLC）法测定转基因毛状根中RE及PD的含量。首次成功诱导获得转RS基因虎杖毛状根，经鉴定该基因已在虎杖毛状根中得到整合与表达，RE和PD的含量分别为17～187μg·g^-1DW和836～1970μg·g^-1 DW，而未转基因虎杖毛状根中RE和PD的含量分别为0～130μg·g^-1 DW和190～320μg·g^-1 DW。在所选取的不同根系中，转基因毛状根PD的含量均得到显著提高，最高含量是未转基因毛状根的5倍，而RE含量提高不显著。 展开更多

关键词 虎杖 毛状根 RESVERATROL synthase基因 白藜芦醇 白藜芦醇苷

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CYP3A5和MDR1基因多态性与肝移植病人他克莫司浓度／剂量比的关系 被引量：7

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作者 金昭 张伟霞 +4 位作者 陈冰 茅安炜 陈皓 顾志东 蔡卫民 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期649-653,共5页

目的研究肝移植术后患者的细胞色素P4503A5酶(CYP3A5)和多药耐药蛋白(MDR1)基因多态性对他克莫司浓度/剂量比的影响。方法记录患者的体重、他克莫司剂量和血药浓度等指标,采用聚合酶链式反应-限制性内切片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对... 目的研究肝移植术后患者的细胞色素P4503A5酶(CYP3A5)和多药耐药蛋白(MDR1)基因多态性对他克莫司浓度/剂量比的影响。方法记录患者的体重、他克莫司剂量和血药浓度等指标,采用聚合酶链式反应-限制性内切片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对肝移植患者进行基因分型,比较不同基因型患者之间他克莫司的浓度/剂量比。结果CYP3A5*1/*1和*1/*3型患者的他克莫司浓度/剂量比明显低于*3/*3型患者(P<0.01),MDR1的3435和2677位点各基因型分组之间无明显差异(P>0.05)。结论CYP3A5基因*3多态性与他克莫司血药浓度/剂量比具有显著相关性,*1/*1和*1/*3型的患者拟取得相似的血药浓度要比*3/*3型患者服用更高剂量的他克莫司,用药前检测基因型可以更有效地对他克莫司进行剂量调整。 展开更多

关键词 肝移植 他克莫司 细胞色素P450 3A5酶 多药耐药蛋白 基因多态性

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SARS冠状病毒未知功能小蛋白大肠杆菌表达及条件优化 被引量：5

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作者 孔建强 王伟 +2 位作者 杜冠华 朱平 程克棣 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期1000-1006,共7页

将人工合成的SARS-CoV三个未知功能小蛋白X4、X5和ORF10的编码基因克隆到载体pET32a中,构建其表达载体。再将这些表达载体转入大肠杆菌中进行表达,SDS-PAGE和Western blotting结果证明,X4、X5和ORF10三个基因在大肠杆菌中均获得表达。... 将人工合成的SARS-CoV三个未知功能小蛋白X4、X5和ORF10的编码基因克隆到载体pET32a中,构建其表达载体。再将这些表达载体转入大肠杆菌中进行表达,SDS-PAGE和Western blotting结果证明,X4、X5和ORF10三个基因在大肠杆菌中均获得表达。分别研究了温度、IPTG浓度、IPTG加入时间和诱导时间对重组蛋白表达的影响。通过正交分析,得到了上述三种重组蛋白的优化表达条件。根据最佳条件表达重组蛋白,获得重组蛋白占总蛋白的百分比分别是:X4,20%;X5,27.8%;ORF10,68.5%。 展开更多

关键词 SARS冠状病毒 未知功能小蛋白 大肠杆菌 表达条件 优化

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壳聚糖-hVEGF_(165)基因微粒的制备及体外转染的实验研究 被引量：5

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作者 王荣祺 张军 +7 位作者 王常勇 易甫 李保罗 江红 郭希民 董宝军 段翠密 董灵芝 《中国生物医学工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期14-18,24,共6页

采用复凝聚法制备壳聚糖-hVEGF165基因微粒,观察微粒形态,测定微粒的粒径、基因包封率和载药量,以LipofectamineTM2000转染试剂作为阳性对照,检测微粒对心肌细胞的转染活性及对心肌细胞存活率的影响。结果表明,微粒形态多呈球形,粒径小... 采用复凝聚法制备壳聚糖-hVEGF165基因微粒,观察微粒形态,测定微粒的粒径、基因包封率和载药量,以LipofectamineTM2000转染试剂作为阳性对照,检测微粒对心肌细胞的转染活性及对心肌细胞存活率的影响。结果表明,微粒形态多呈球形,粒径小,基因包封率和载药量均较高,转染活性略低于脂质体,但微粒对心肌细胞的毒性明显低于脂质体。 展开更多

关键词 壳聚糖 微粒 血管内皮生长因子 基因转染 心肌细胞

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芳香族抗癫痫药物不良反应与HLA-B~*1502相关性的研究进展 被引量：7

8

作者 汝继玲 何晓静 +1 位作者 邱枫 肇丽梅 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期1-3,共3页

目的综述近年来芳香族抗癫痫药物不良反应与HLA-B*1502相关性方面的研究进展。方法查阅整理国内外相关文献,从HLA-B*1502与卡马西平所致史蒂文斯-约翰综合征/中毒性表皮松解症(CBZ-SJS/TEN)的相关性、与其他芳香族抗癫痫药所致史蒂文斯... 目的综述近年来芳香族抗癫痫药物不良反应与HLA-B*1502相关性方面的研究进展。方法查阅整理国内外相关文献,从HLA-B*1502与卡马西平所致史蒂文斯-约翰综合征/中毒性表皮松解症(CBZ-SJS/TEN)的相关性、与其他芳香族抗癫痫药所致史蒂文斯-约翰综合征/中毒性表皮松解症(AAEDs-SJS/TEN)的相关性及其可能机制等方面,综述研究进展。结果与结论汉族人群中HLA-B*1502阳性与CBZ-SJS/TEN的相关性已基本确立,与AAEDs-SJS/TEN的发生也密切相关,研究建议在HLA-B*1502发生频率较高的地区,如中国裔、东南亚裔及印度裔的患者,在开始服用芳香族抗癫痫药之前,应接受HLA-B*1502等位基因检测。 展开更多

关键词 芳香族抗癫痫药物 卡马西平 HLA-B*1502 不良反应

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原花青素对脑缺血后抑凋亡基因蛋白Bcl-2和促凋亡基因蛋白Bax的影响 被引量：15

9

作者 贾玉洁 闵连秋 +1 位作者 季占胜 刘畅 《中国临床康复》 CSCD 北大核心 2006年第23期65-66,72,共3页

目的:观察原花青素对局灶性脑缺血大鼠大脑皮质抑凋亡基因蛋白Bcl-2和促凋亡基因蛋白Bax表达的影响,并分析该影响是否存在剂量依赖性。方法:实验于2004-11/2006-01在锦州医学院药理实验室和免疫组化实验室完成。①选用健康成年SD大鼠30... 目的:观察原花青素对局灶性脑缺血大鼠大脑皮质抑凋亡基因蛋白Bcl-2和促凋亡基因蛋白Bax表达的影响,并分析该影响是否存在剂量依赖性。方法:实验于2004-11/2006-01在锦州医学院药理实验室和免疫组化实验室完成。①选用健康成年SD大鼠30只,雌雄各半,体质量200～250g。②按随机抽签法将大鼠分为5组:假手术组,模型组,原花青素低、中、高剂量组,每组6只。除假手术组不插入线栓外,余下各组均以线栓法阻塞大鼠右侧大脑中动脉,制成局灶性脑缺血模型。以大鼠即刻出现右侧Horner征为造模成功。原花青素低、中、高剂量组:于术前2周分别按100,200,300mg/kg剂量灌胃原花青素混悬液(原花青素粉剂,由天津尖峰天然产物研究开发有限公司提供,批号:20040719),1次/d,共2周,并于术前1h再灌胃1次。假手术组和模型组:于术前2周灌胃等量生理盐水。③术后24h用免疫组化SABC法染色统计大脑皮质每高倍镜视野Bcl-2和Bax表达阳性细胞数。④多组间计量资料差异比较采用单因素方差分析检验,两组间比较采用LSD检验。结果:大鼠30只均进入结果分析。①大鼠大脑皮质Bcl-2阳性细胞数:原花青素低、中剂量组分别为(34.33±8.16)和(31.44±7.09)个,比模型组[(15.72±5.03)个]分别增加了118%,100%,差异明显(P<0.01);原花青素高剂量组与模型组相近[(16.33±5.48)个,P>0.05];原花青素低、中剂量组间差异不明显(P>0.05)。②大鼠大脑皮质Bax阳性细胞数:原花青素低、中剂量组分别为(11.83±4.57)和(12.56±4.31)个,明显少于模型组[(20.5±4.40)个,P<0.01];原花青素低、中剂量组间差异不明显(P>0.05);原花青素高剂量组与模型组相近(P>0.05)。结论:中、小剂量(100,200mg/kg)原花青素可对局灶缺血性脑损伤起到预防性保护作用,其保护作用发生可能与提高Bcl-2表达、抑止Bax表达有关。 展开更多

关键词 脑缺血/药物疗法 原花青素类/投药和剂量 原癌基因蛋白质 c-bcl-2

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重组人酸性成纤维细胞生长因子的稳定性研究 被引量：3

10

作者 姚成灿 郑青 +5 位作者 许华 赵文 吴晓萍 苏志坚 黄亚东 李校堃 《中国现代应用药学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期358-360,共3页

目的研究重组人酸性成纤维细胞生长因子(rhaFGF)在不同温度下的存放稳定性。方法rhaFGF冻干粉和溶媒在4,25和37℃分别保存30个月;rhaFGF液体在4℃保存56d,在25和37℃分别保存35d。采用MTT法测定rhaFGF的生物活性,同时进行外观性状、水... 目的研究重组人酸性成纤维细胞生长因子(rhaFGF)在不同温度下的存放稳定性。方法rhaFGF冻干粉和溶媒在4,25和37℃分别保存30个月;rhaFGF液体在4℃保存56d,在25和37℃分别保存35d。采用MTT法测定rhaFGF的生物活性,同时进行外观性状、水分含量、pH值的测量和无菌试验。结果4℃时,rhaFGF冻干粉、液体和溶媒的各项性质在观察期内都无变化。25℃时,rhaFGF冻干粉、液体的生物活性分别在存放18个月和35d有下降趋势。37℃时,rhaFGF冻干粉、液体的生物活性分别在存放12个月和35d有下降趋势。结论rhaFGF冻干粉在4℃时可有效保存2年;rhaFGF冻干粉溶解后于4℃时保存28d内使用有效;溶媒在4℃时保存2年质量稳定。 展开更多

关键词 重组人酸性成纤维细胞生长因子 生物活性 稳定性

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去唾液酸糖蛋白受体介导的肝靶向研究进展 被引量：4

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作者 梁美好 沈正荣 +1 位作者 马臻 王尊元 《中国现代应用药学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期109-114,共6页

目的介绍去唾液酸糖蛋白受体(asialoglycoprotein receptor,ASGPR)介导的药物和基因肝靶向作用和机制,及其在治疗肝癌和乙型肝炎实验研究方面的最新进展。方法查阅和选取针对性强、相关度高的文献,总结和归纳ASGPR介导的药物和基因肝靶... 目的介绍去唾液酸糖蛋白受体(asialoglycoprotein receptor,ASGPR)介导的药物和基因肝靶向作用和机制,及其在治疗肝癌和乙型肝炎实验研究方面的最新进展。方法查阅和选取针对性强、相关度高的文献,总结和归纳ASGPR介导的药物和基因肝靶向用于治疗肝癌和乙型肝炎的最新研究进展。结果ASGPR是肝细胞的一种重要且高效的内吞受体,可用于介导药物和基因的肝靶向递送。结论ASGPR介导的药物和基因肝靶向有望成为肝癌和乙型肝炎治疗的有效手段。 展开更多

关键词 唾液酸糖蛋白受体 肝癌 乙型肝炎

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DNA疫苗的研究现状 被引量：9

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作者 聂建辉 王佑春 《中国药事》 CAS 2007年第2期114-118,共5页

DNA疫苗的概念提出已有十几年的时间,其间针对DNA疫苗的研究工作取得了很大进展,其有效性已在动物体内得到了验证,而且部分疫苗已进入临床试验阶段,但在取得进展的同时也遇到了许多制约其发展的难题。本文对DNA疫苗发展现状,遇到的问题... DNA疫苗的概念提出已有十几年的时间,其间针对DNA疫苗的研究工作取得了很大进展,其有效性已在动物体内得到了验证,而且部分疫苗已进入临床试验阶段,但在取得进展的同时也遇到了许多制约其发展的难题。本文对DNA疫苗发展现状,遇到的问题,采取的策略及可能引起的副反应加以综述。 展开更多

关键词 DNA疫苗 电穿孔技术 基因枪 聚丙交脂-乙交酯 纳米颗粒载体 基因佐剂 α病毒载体 初免-加强免疫策略

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TAT-NDPK-A蛋白的构建表达及穿膜初步研究 被引量：2

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作者 刘秋英 王一飞 +3 位作者 熊盛 张美英 钱垂文 何旭君 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期652-655,共4页

目的构建pET-TAT-nm23-H1质粒,表达TAT-核苷二磷酸激酶A(TAT-nucleoside diphosphate kinase A,TAT-NDPK-A)融合蛋白,并研究融合蛋白穿膜进入A549细胞。方法人工合成编码TAT蛋白转导区域的11个氨基酸序列于NDPK-A引物的上游,PCR扩增后... 目的构建pET-TAT-nm23-H1质粒,表达TAT-核苷二磷酸激酶A(TAT-nucleoside diphosphate kinase A,TAT-NDPK-A)融合蛋白,并研究融合蛋白穿膜进入A549细胞。方法人工合成编码TAT蛋白转导区域的11个氨基酸序列于NDPK-A引物的上游,PCR扩增后将融合基因克隆到pET28(a)原核表达载体上,经IPTG诱导表达、镍离子树脂色谱纯化TAT-NDPK-A蛋白,Westen-blot鉴定分析重组蛋白的抗原性,将TAT-NDPK-A蛋白加入到A549细胞中,荧光免疫组化检测蛋白穿膜进入细胞内。结果TAT序列与NDPK-A正确融合并插入pET28(a)载体上,经诱导表达纯化成功获得纯度为97%的TAT-NDPK-A蛋白,在培养的A549细胞中加入重组蛋白4 h后在细胞内检测到穿膜的蛋白。结论构建表达TAT-NDPK-A蛋白,TAT序列能够引导重组蛋白穿过细胞膜进入细胞内,为进一步研究基因的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 TAT 核苷二磷酸激酶A蛋白 融合蛋白

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cDNA文库在药用海洋生物研究中的应用 被引量：4

14

作者 朱利军 长孙东亭 罗素兰 《中国海洋药物》 CAS CSCD 2009年第1期53-58,共6页

cDNA文库技术在基因分离和克隆中具有重要作用并得到广泛应用。现概述cDNA文库技术及其在药用海洋生物中的应用,并对我国药用海洋生物开发前景作了展望。

关键词 药用海洋生物 CDNA文库 应用

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慢病毒载体包装与生产方法 被引量：2

15

作者 蔡晶晶 宋小平 +1 位作者 严继贵 王雅洁 《长江大学学报（自科版）（下旬）》 CAS 2014年第3期121-124,共4页

慢病毒在多种疾病的基因治疗中作为理想的基因转移载体,然而慢病毒滴度不高的问题严重影响慢病毒载体在基因治疗中的推广应用,本文从慢病毒质粒提取、病毒包装、细胞培养、病毒纯化等方面对提高慢病毒滴度的研究现状做一综述。

关键词 慢病毒载体 质粒提取 病毒包装 细胞培养 病毒纯化

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透明质酸/聚酰胺-胺三元纳米基因复合物的构建及其体外评价 被引量：1

16

作者 王晓宇 孙李平 +5 位作者 朱全刚 张玮 张敏 张丽娟 戴子渊 高申 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1288-1292,共5页

目的在聚酰胺-胺(polyamidoamine,PAMAM)树状大分子与DNA形成复合物的基础上添加透明质酸(hy-aluronic acid,HA)形成三元纳米复合物,研究其基因递送性能的改变。方法配制不同电荷比的三元纳米复合物,测定其粒径和电位;选择MCF-7和MDA-MB... 目的在聚酰胺-胺(polyamidoamine,PAMAM)树状大分子与DNA形成复合物的基础上添加透明质酸(hy-aluronic acid,HA)形成三元纳米复合物,研究其基因递送性能的改变。方法配制不同电荷比的三元纳米复合物,测定其粒径和电位;选择MCF-7和MDA-MB-231细胞进行转染效率的测定,选择B16和MCF-7细胞进行细胞毒性的测定。结果和结论形成的三元纳米复合物大小均一,结构稳定。与单纯的PAMAM载体相比,增加HA提高了转染效率,降低了细胞毒性,适合用于基因的递送和转染。 展开更多

关键词 聚酰胺-胺 透明质酸 三元纳米复合物 转染效率

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利用增强型绿色荧光蛋白基因作筛选标记克隆载体的构建及鉴定 被引量：1

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作者 唐金宝 陈永 +2 位作者 梁淑娟 王焕芹 李青春 《中国海洋药物》 CAS CSCD 2009年第2期28-31,共4页

目的构建以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为筛选标记的新型pUC18筛选载体。方法将EGFP基因克隆至pUC18载体的PstI/HindⅢ位点,构建筛选载体pUC18-EGFP,并验证pUC18-EGFP能否利用EG-FP的荧光特性筛选出含基因重组体的阳性克隆。结果经酶切和... 目的构建以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为筛选标记的新型pUC18筛选载体。方法将EGFP基因克隆至pUC18载体的PstI/HindⅢ位点,构建筛选载体pUC18-EGFP,并验证pUC18-EGFP能否利用EG-FP的荧光特性筛选出含基因重组体的阳性克隆。结果经酶切和基因测序鉴定pUC18-EGFP载体构建正确;在外源基因插入该载体后,对LB氨苄平板上的绿色菌落进行酶切和基因测序鉴定,结果证明LB平板上的绿色菌落即为含有重组质粒的克隆。结论成功构建pUC18-EGFP筛选载体,利用EGFP的绿色荧光可筛选出阳性克隆。 展开更多

关键词 增强型绿色荧光蛋白 大肠杆菌 阳性克隆 筛选载体

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乳酸钠对大鼠的亚慢性经口毒性试验 被引量：2

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作者 单纯 任秀 林飞 《中国药事》 CAS 2013年第5期512-516,共5页

目的观察大鼠连续经口给予乳酸钠后的毒性靶器官及其损害的可逆性。方法60只SD种大白鼠随机分为3个组,每组10只雌性和10只雄性大鼠,3组大鼠经口灌胃分别给予0、800、2000mg.kg-1乳酸钠,给药体积1mL/100g,连续经口染毒90天。于第7周、第1... 目的观察大鼠连续经口给予乳酸钠后的毒性靶器官及其损害的可逆性。方法60只SD种大白鼠随机分为3个组,每组10只雌性和10只雄性大鼠,3组大鼠经口灌胃分别给予0、800、2000mg.kg-1乳酸钠,给药体积1mL/100g,连续经口染毒90天。于第7周、第13周和恢复4周,每组剖杀部分大鼠做血液学、生化学、眼科、尿液检查,脏器湿重值、脏器系数值和解剖病理学观察。结果染毒各期高剂量组的血清生化学检查显示钠离子、钙离子数值升高,钾离子、氯离子数值降低;尿液检查发现尿比重(SG)数值降低,尿蛋白质(Pro)和尿胆红素(Bil)数值升高;解剖病理学发现7只大鼠膀胱腔内存在轻度蛋白样物质聚集;血清生化学检查低剂量组的钠离子和钙离子数值升高、恢复期高剂量组的钠离子数值仍然较高。结论乳酸钠能引起大鼠各期血液的无机离子和尿液蛋白出现明显的变化,对大鼠有一定毒性作用。 展开更多

关键词 亚慢性毒性 乳酸钠 大鼠 无机离子 尿蛋白

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bFGF生物蛋白海绵体外生物学活性检测方法的建立及其稳定性评价 被引量：1

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作者 焦悦 王晓杰 +6 位作者 张睿 蔡敏倩 李婷婷 高丽昌 王珊珊 李海燕 李校堃 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期171-174,共4页

目的:建立碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)生物蛋白海绵体外生物学活性测定方法,观察bFGF生物蛋白海绵常温放置的稳定性。方法:bFGF生物蛋白海绵供试品融于稀释液中,离心后获得浸提液,以bFGF标准品为对照,与NIH3T3细胞共培养,MTT法检测bFG... 目的:建立碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)生物蛋白海绵体外生物学活性测定方法,观察bFGF生物蛋白海绵常温放置的稳定性。方法:bFGF生物蛋白海绵供试品融于稀释液中,离心后获得浸提液,以bFGF标准品为对照,与NIH3T3细胞共培养,MTT法检测bFGF生物蛋白海绵浸提液对NIH3T3细胞的促增值作用,用bFGF标准品计算bFGF生物蛋白海绵的相对百分效价,对该方法进行验证;以常温储存2、3和4年的bFGF生物蛋白海绵为供试品,以低温储存30d的bFGF生物蛋白海绵为标准对照,以不含bFGF生物蛋白海绵和bFGF的培养液为空白对照,测定各组生物学活性效价,比较不同储存时间bFGF生物蛋白海绵的体外生物学活性效价的稳定性。结果:bFGF生物蛋白海绵供试品浸提液随浓度增加其吸光度(A值)增高,即NIH3T3细胞增殖作用增加,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.01),与bFGF标准品比较差异无统计学意义(P>0.05);bFGF标准品和bFGF生物蛋白海绵在该方法中均存在量效关系,且符合四参数方程式:y=(A-D)∕[1+(X/C)B]+D;常温条件下储存2、3和4年生物蛋白海绵体与低温储存30d比较,其生物学活性效价(U.mL-1)下降率分别为0.5%、0.6%和0.8%,均低于15%的国家标准。结论:bFGF生物蛋白海绵在体外能够促进NIH3T3细胞增殖,具有良好生物学活性;应用NIH3T3细胞检测bFGF生物蛋白海绵体外生物学活性可作为常规检测方法;bFGF生物蛋白海绵常温储存2～4年稳定性良好。 展开更多

关键词 碱性成纤维细胞生长因子 生物蛋白海绵 生物学活性

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抗菌肽protegrin的开发现状与作用机制研究 被引量：2

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作者 孙艳华 张楠 《中国现代应用药学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期366-369,共4页

目的针对抗菌肽protegrin的开发现状、作用机制及研究方法等方面的文献进行了检索及总结,希望有助于同行在现有工作的基础上开发新型的抗菌肽。方法对国内外最新发表的抗菌肽protegrin的相关研究结果进行分析、整理和综合。结果抗菌肽pr... 目的针对抗菌肽protegrin的开发现状、作用机制及研究方法等方面的文献进行了检索及总结,希望有助于同行在现有工作的基础上开发新型的抗菌肽。方法对国内外最新发表的抗菌肽protegrin的相关研究结果进行分析、整理和综合。结果抗菌肽protegrin是目前国际上研究比较深入的抗菌肽之一,而国内还没有相关的开发报道。结论抗菌肽protegrin是一种非常有应用价值和开发前途的新型抗菌物质。 展开更多

关键词 抗生物质 多肽 PROTEGRIN 抗菌肽

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