人脐带间充质干细胞恢复糖尿病勃起功能障碍大鼠海绵体神经功能的实验研究 被引量：2

1

作者 杨扬 刘芳 +8 位作者 李帅修 贺庆瑞 宋丹 蔡晓晓 胡海敏 南洁 李晓艳 魏岩 苑春慧 《组织工程与重建外科》 CAS 2024年第4期395-402,410,共9页

目的探索人脐带间充质干细胞通过再生修复海绵体神经对糖尿病大鼠勃起功能的改善作用。方法收集健康足月产新生儿脐带,提取分离人脐带间充质干细胞(hUCMSC)并鉴定表面标志物。通过高脂饮食联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的方法诱导大鼠糖... 目的探索人脐带间充质干细胞通过再生修复海绵体神经对糖尿病大鼠勃起功能的改善作用。方法收集健康足月产新生儿脐带,提取分离人脐带间充质干细胞(hUCMSC)并鉴定表面标志物。通过高脂饮食联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的方法诱导大鼠糖尿病,10周后选取高血糖大鼠进行阿扑吗啡(APO)试验,筛查、建立糖尿病引起的勃起功能障碍(DIED)大鼠模型。hUCMSC移植8周后,通过APO实验及最大海绵体内压/平均动脉压(ICP/MAP)评估大鼠勃起功能;通过免疫组化法分析大鼠海绵体组织中神经元型一氧化氮合酶(nNOS)水平;通过ELISA法检测各组大鼠阴茎组织中BDNF、NGF、VEGF和IGF-1神经营养生长因子的表达水平。结果第4代hUCMSC表面高表达CD73、CD90、CD105,低表达CD11b、CD19、CD34、CD45、HLA-DR。糖尿病引起的勃起功能障碍大鼠模型制备成功。海绵体内移植hUCMSC 8周后,APO实验表明hUCMSC可增加正常勃起的大鼠数量;中剂量和高剂量hUCMSC治疗后,相对于阴性对照组,ICP/MAP值升高,阴茎内血流灌注明显改善;免疫组化实验显示中剂量和高剂量hUCMSC治疗后,大鼠阴茎海绵体中nNOS水平明显增加,启动大鼠阴茎勃起;ELISA检测结果证实中剂量和高剂量hUCMSC治疗后,均能不同程度恢复DIED大鼠阴茎组织中BDNF、NGF、VEGF和IGF-1表达水平。结论hUCMSC是一种多功能的成体干细胞,经海绵体移植治疗高脂饮食联合STZ诱导的DIED大鼠是有效的,且有剂量依赖性。hUCMSC治疗DIED的机制与上调BDNF、NGF、VEGF和IGF-1表达水平提供的神经保护和再生修复作用有关。 展开更多

关键词 人脐带间充质干细胞 糖尿病 勃起功能障碍 神经元型一氧化氮合酶

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蕨麻正丁醇部位对大鼠海马神经元缺氧致钙超载的抑制作用 被引量：7

2

作者 卜婧 张永亮 +2 位作者 李灵芝 龚海英 李建宇 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2014年第2期133-137,共5页

目的细胞内钙超载被认为是诱发神经元变性和死亡的关键因素。文中研究蕨麻正丁醇部位(n-butanol extract of Potentilla anserina L,NP)对大鼠海马神经元急性缺氧所致钙超载的抑制作用。方法采用体外原代培养的海马神经元建立缺氧所致... 目的细胞内钙超载被认为是诱发神经元变性和死亡的关键因素。文中研究蕨麻正丁醇部位(n-butanol extract of Potentilla anserina L,NP)对大鼠海马神经元急性缺氧所致钙超载的抑制作用。方法采用体外原代培养的海马神经元建立缺氧所致钙超载的实验模型,分为正常对照组、缺氧模型组、尼莫地平干预组以及NP高、中、低剂量干预组。通过免疫荧光双染观察蕨麻正丁醇部位对海马神经元急性缺氧所致微管相关蛋白2(microtuble-associated protein2,MAP2)的保护作用。利用荧光分光光度计检测各组细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)。通过半定量RT-PCR、免疫细胞化学染色及Western blot技术检测各组钙依赖中性蛋白酶1(Calpain 1)在基因及蛋白质水平的表达差异。结果缺氧3 h模型组与正常组相比较,神经元特异性细胞骨架蛋白MAP2被水解,细胞骨架形态的被破坏,[Ca2+]i显著升高,Calpain 1在基因和蛋白水平的表达量明显增加,细胞骨架发生破坏。NP各剂量干预明显抑制神经元特异性细胞骨架蛋白MAP2水解,减轻细胞骨架形态的破坏,且显著降低缺氧神经元[Ca2+]i(P<0.05);并且下调了Calpain 1在基因和蛋白的表达水平(P<0.05)。结论急性缺氧3 h可使神经元细胞内发生钙超载,NP可有效抑制缺氧所致神经元细胞钙超载,而发挥神经元作用。 展开更多

关键词 蕨麻正丁醇部位 海马神经元 缺氧 钙超载 钙依赖中性蛋白酶1

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新生鼠肺成纤维细胞原代培养方法的比较与体外肌成纤维细胞分化模型的建立 被引量：10

3

作者 孙月 徐洪 +6 位作者 徐丁洁 魏中秋 于婉莹 邓海静 薛新新 杜世璞 杨方 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2014年第2期129-132,共4页

目的肌成纤维细胞(fibroblasts,FB)是器官纤维化形成过程中关键的靶细胞,以特异表达α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和细胞基质沉积为特征。文中比较胰蛋白酶消化法和组织贴壁法原代培养乳鼠肺FB的优缺点,并报道体外... 目的肌成纤维细胞(fibroblasts,FB)是器官纤维化形成过程中关键的靶细胞,以特异表达α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和细胞基质沉积为特征。文中比较胰蛋白酶消化法和组织贴壁法原代培养乳鼠肺FB的优缺点,并报道体外肌FB分化模型的建立。方法分别采用胰蛋白酶消化法和组织贴壁法原代培养乳鼠肺FB,倒置相差显微镜观察原代培养,MTT法检测细胞增殖,免疫细胞化学染色法鉴定细胞来源,采用转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导FB向肌FB分化。结果采用胰蛋白酶消化法和组织块贴壁法均可以成功原代培养鼠胚肺FB,2种方法无论在形态、细胞增殖水平还是在细胞鉴定方面均无差异,但胰蛋白酶消化法在相同条件下能够快速获得较组织贴壁法更多的细胞,且2种方法获得的FB在4代之内均不表达α-SMA,需经TGF-β1诱导分化为肌FB。随TGF-β1诱导时间的延长,α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白表达上调。结论胰酶消化法较组织贴壁法能快速、大量获得纯度较高的FB,4代以内的乳鼠FB适合建立肌FB分化模型。 展开更多

关键词 成纤维细胞 原代培养 肌成纤维细胞

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毛囊无黑素性黑素细胞的分离和培养 被引量：4

4

作者 张汝芝 朱文元 +1 位作者 王大光 马慧军 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第9期509-511,共3页

目的:分离和培养毛囊无黑素性黑素细胞,探讨其生物学特性。方法:采用胶原酶V游离毛囊,0.5％分离酶消化婴幼儿包皮。0.05％,胰酶和0.53 mmol/L乙二胺四乙酸(EDTA)消化游离的毛囊和来自包皮的表皮,分别制备单细胞悬液进行培养。传至第3代... 目的:分离和培养毛囊无黑素性黑素细胞,探讨其生物学特性。方法:采用胶原酶V游离毛囊,0.5％分离酶消化婴幼儿包皮。0.05％,胰酶和0.53 mmol/L乙二胺四乙酸(EDTA)消化游离的毛囊和来自包皮的表皮,分别制备单细胞悬液进行培养。传至第3代,待细胞爬上盖玻片后,分别以NKI/beteb和HMB-45单抗染色。结果:毛囊的培养细胞,绝大多数为双极细胞,增殖较快,被NKI/beteb单抗识别,而HMB-45染色阴性。包皮的黑素细胞染色结果则与之相反。结论:毛囊的外根鞘中存在功能和形态上不成熟的无黑素性黑素细胞(AMMC)。AMMC长期培养的成功,有利于研究AMMC在毛囊生物学中所起的作用。 展开更多

关键词 外毛根鞘 无黑素性黑素细胞 培养 分离

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大鼠牙乳头细胞体外培养和矿化的实验研究 被引量：5

5

作者 汪平 王宇 +1 位作者 何宇 袁渝萍 《口腔医学》 CAS 2003年第1期1-3,共3页

目的　观察体外培养的大鼠第一磨牙牙乳头细胞的生物学特征。方法　大鼠第一磨牙牙乳头细胞培养 ,免疫组织化学染色、钙盐染色。结果　培养的大鼠牙乳头细胞表达Ⅲ型胶原、纤维黏连蛋白、碱性磷酸酶 ,当细胞培养于含 5mmol/Lβ-磷酸甘... 目的　观察体外培养的大鼠第一磨牙牙乳头细胞的生物学特征。方法　大鼠第一磨牙牙乳头细胞培养 ,免疫组织化学染色、钙盐染色。结果　培养的大鼠牙乳头细胞表达Ⅲ型胶原、纤维黏连蛋白、碱性磷酸酶 ,当细胞培养于含 5mmol/Lβ-磷酸甘油钠和 5 0 μg/mlL -维生素C的培养液中时 ,细胞可形成矿化的胞外基质。结论　培养的大鼠牙乳头细胞保留体内的某些特征 。 展开更多

关键词 实验研究 细胞培养 乳头细胞 矿化 牙髓组织

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大鼠主动脉内皮细胞和平滑肌细胞的原代培养及生物学特性比较 被引量：4

6

作者 胡少勃 宋自芳 +1 位作者 郑启昌 聂君 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2009年第4期349-353,共5页

目的培养大鼠主动脉平滑肌细胞和内皮细胞,细胞纯化与鉴定,比较生物学特性的差异。方法采用血管环贴壁法培养动脉内皮细胞,组织块贴壁法培养动脉平滑肌细胞,并采用有限稀释法挑选内皮细胞单克隆,免疫细胞荧光鉴定二者的特异性标志,相差... 目的培养大鼠主动脉平滑肌细胞和内皮细胞,细胞纯化与鉴定,比较生物学特性的差异。方法采用血管环贴壁法培养动脉内皮细胞,组织块贴壁法培养动脉平滑肌细胞,并采用有限稀释法挑选内皮细胞单克隆,免疫细胞荧光鉴定二者的特异性标志,相差显微镜观察二者单个细胞及细胞群体在形态上的差异性,CCK-8试剂盒检测细胞的增殖,比较二者对胰酶消化,粘附,冻存后复苏的情况。结果血管环贴壁法成功培养血管内皮细胞,组织块培养法成功培养出血管平滑肌细胞,内皮细胞能够形成单克隆集落,培养的细胞均表达相应的特异性标志,内皮细胞增殖速度和平滑肌细胞有差异,内皮细胞对胰酶的耐受性较差,内皮细胞粘附所需时间短,对冻存后的耐受性较好。结论组织块贴壁法适合内皮细胞和平滑肌细胞的培养,有限稀释法能够纯化原代培养的内皮细胞,大鼠主动脉平滑肌细胞和内皮细胞在细胞形态、增殖、粘附、对胰酶的反应、冻存后复苏均存在差异。 展开更多

关键词 内皮细胞 平滑肌细胞 平滑肌样细胞 细胞培养

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染色体标本制备在骨髓MSCs核型鉴定中的研究 被引量：4

7

作者 李思源 慕晓玲 +2 位作者 曹旭东 姜玉峰 曹云 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2004年第3期215-217,共3页

选取对数生长期人骨髓间充质干细胞,用秋水仙素阻断细胞分裂中期,控制秋水仙素的终浓度和作用时间、低渗时间及胰酶消化显带时间,比较染色体标本制备效果。结果显示,秋水仙素的终浓度0.2μg/ml和作用时间6h,低渗时间35min及胰酶消化时间... 选取对数生长期人骨髓间充质干细胞,用秋水仙素阻断细胞分裂中期,控制秋水仙素的终浓度和作用时间、低渗时间及胰酶消化显带时间,比较染色体标本制备效果。结果显示,秋水仙素的终浓度0.2μg/ml和作用时间6h,低渗时间35min及胰酶消化时间20s时可制备适合的染色体标本,经核型鉴定为正常二倍体细胞。从而探索出骨髓间充质干细胞染色体制备的适合条件,为骨髓间充质干细胞的进一步研究提供了理论依据和实验基础。 展开更多

关键词 染色体 间充质干细胞 骨髓

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骨髓间充质干细胞体外培养分化为肌原性细胞的实验研究 被引量：3

8

作者 马国涛 任华 +1 位作者 张超纪 赵明 《新乡医学院学报》 CAS 2003年第2期89-90,93,共3页

目的　研究骨髓间充质干细胞在体外诱导分化为心肌细胞的可行性。方法　由新西兰大白兔胸骨获取骨髓间充质干细胞 ,培养传代后用 5 -氮杂胞苷诱导 2 4h ,免疫组化检测诱导后细胞的变化。结果　 5 -氮杂胞苷诱导后的细胞经免疫组化检测... 目的　研究骨髓间充质干细胞在体外诱导分化为心肌细胞的可行性。方法　由新西兰大白兔胸骨获取骨髓间充质干细胞 ,培养传代后用 5 -氮杂胞苷诱导 2 4h ,免疫组化检测诱导后细胞的变化。结果　 5 -氮杂胞苷诱导后的细胞经免疫组化检测可见细胞被抗肌红蛋白抗体着染显色。结论　骨髓间充质干细胞可在体外经 5 -氮杂胞苷诱导后转化为肌原性细胞。 展开更多

关键词 骨髓间充质于细胞 5-氮杂胞苷 肌原性细胞

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BMP12诱导恒河猴骨髓间充质干细胞定向分化为腱细胞 被引量：7

9

作者 王启伟 朴英杰 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2004年第3期278-281,共4页

目的:研究骨髓间充质干细胞定向分化为腱细胞的可能性。方法:通过电穿孔法将外源基因BMP12导入骨髓间充质干细胞中,诱导骨髓间充质干细胞定向分化为腱细胞;在形态学和分子生物学水平上对诱导后的细胞加以鉴定。结果:光镜下,诱导后的细... 目的:研究骨髓间充质干细胞定向分化为腱细胞的可能性。方法:通过电穿孔法将外源基因BMP12导入骨髓间充质干细胞中,诱导骨髓间充质干细胞定向分化为腱细胞;在形态学和分子生物学水平上对诱导后的细胞加以鉴定。结果:光镜下,诱导后的细胞形态发生明显改变;RT-PCR结果表明,诱导后的细胞有BMP12和CollagenⅠ的mRNA的表达,而没有CollagenⅢ的mRNA表达;诱导后细胞呈CD44+为98.39%,HLA-DR-。结论:BMP12能够诱导骨髓间充质干细胞定向分化为腱细胞,间充质干细胞有可能成为肌腱组织工程种子细胞来源之一。 展开更多

关键词 间充质干细胞 BMP12 定向分化 基因转染 腱细胞

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毛囊外根鞘NKI/beteb和HMB-45免疫组化及胰酶消化后细胞的电镜观察 被引量：2

10

作者 张汝芝 朱文元 +1 位作者 马慧军 王大光 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第10期570-572,共3页

目的:研究头皮毛囊外根鞘中无活性黑素细胞的存在部位以及毛囊经胰酶消化的细胞组成。方法:拔取正常头发,琼脂预先包埋后,切片行NKI/beteb和HMB-45单抗染色。另取毛囊用胰酶消化,收集细胞,在透射镜下进行观察。结果:拔取的正常毛囊外根... 目的:研究头皮毛囊外根鞘中无活性黑素细胞的存在部位以及毛囊经胰酶消化的细胞组成。方法:拔取正常头发,琼脂预先包埋后,切片行NKI/beteb和HMB-45单抗染色。另取毛囊用胰酶消化,收集细胞,在透射镜下进行观察。结果:拔取的正常毛囊外根鞘中存在NKI/beteb阳性细胞,而HMB-45染色阴性。在毛母质中有大量的HMB-45阳性细胞。毛囊经胰酶消化的细胞为有活性的黑素细胞(MC)、无色素性黑素细胞(AMMC)、毛皮质细胞和成纤维细胞。结论:毛囊外根鞘中存在功能和形态不成熟的AMMC。 展开更多

关键词 毛囊外根鞘 无色素性黑素细胞 免疫组化法 透射电镜

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流式细胞仪专用鸡红细胞的制备方法 被引量：4

11

作者 刘江惠 左连富 +1 位作者 郭建文 刘亮 《河北医科大学学报》 CAS 2008年第6期873-875,共3页

目的制备流式细胞仪专用鸡红细胞。方法首先将采集的鸡红细胞制成纯净红细胞,然后用乙醇或甲醛保养液固定,观察各时间段鸡红细胞的DNA含量G0/G1峰X轴细胞半高峰的变易系数(chalf peak X-axis-coeffience of variation,HP X-CV)值的变化... 目的制备流式细胞仪专用鸡红细胞。方法首先将采集的鸡红细胞制成纯净红细胞,然后用乙醇或甲醛保养液固定,观察各时间段鸡红细胞的DNA含量G0/G1峰X轴细胞半高峰的变易系数(chalf peak X-axis-coeffience of variation,HP X-CV)值的变化。结果固定后的鸡红细胞与商售鸡红细胞DNA含量G0/G1峰HP X-CV值相比,完全符合仪器要求且有更多的优势。结论自制鸡红细胞完全可以替代进口鸡红细胞制品。 展开更多

关键词 流式细胞术 红细胞 细胞培养技术

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多聚次黄嘌呤胞嘧啶核苷酸诱导下人外周血树突细胞的体外培养和快速成熟 被引量：2

12

作者 李丽 刘宝瑞 +1 位作者 钱晓萍 俞立霞 《医学研究生学报》 CAS 2007年第4期353-356,I0003,共5页

目的:寻求一种快速稳定的方法从人外周血中诱导培养出成熟的树突细胞(DC)。方法:用密度梯度离心法从正常人外周血中分离出单个核细胞(PBMC),再用贴壁法获取单核细胞,在0 h加入粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-4(IL-4)... 目的:寻求一种快速稳定的方法从人外周血中诱导培养出成熟的树突细胞(DC)。方法:用密度梯度离心法从正常人外周血中分离出单个核细胞(PBMC),再用贴壁法获取单核细胞,在0 h加入粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-4(IL-4),随后分四组继续培养:第一组在24 h加入多聚次黄嘌呤胞嘧啶核苷酸[Poly(I∶C)],继续培养24 h,于48 h收集DC细胞,即48 h Poly(I∶C)组;第二组在24 h加入肿瘤坏死因子α(TNF-α),继续培养24 h,于48 h收集DC细胞,即48 h TNF-α组;第三组在36 h加入Poly(I∶C),继续培养36 h,在72 h时收获DC细胞,即72 h Poly(I∶C)组;第四组在36 h加入TNF-α,继续培养36 h,于72 h收集DC细胞,即72 hTNF-α组。同时设立对照组,仅加GM-CSF和IL-4。结果:经流式细胞仪检测72 h Poly(I∶C)组获得的成熟DC细胞的百分比含量最高;混合淋巴细胞培养(MLC)表明72 h Poly(I∶C)组获得的DC细胞具有较强的刺激淋巴细胞增殖的能力。结论:Poly(I∶C)诱导下人外周血DC的体外培养与成熟的方法是具有快速、稳定、经济、简便的特点,为DC的深入研究和临床应用奠定了基础。 展开更多

关键词 树突细胞 多聚次黄嘌呤胞嘧啶核苷酸 快速成熟

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小鼠颅底软骨联合细胞的体外原代培养 被引量：1

13

作者 高国杰 沈绍莹 胡江天 《昆明医科大学学报》 CAS 2017年第7期37-40,共4页

目的探讨小鼠颅底软骨联合细胞体外原代培养的方法并了解其基本生物学特征.方法显微手术采集小鼠颅底蝶枕软骨联合组织;用胰蛋白酶和胶原酶联合消化软骨基质,获取软骨细胞;用含血清的DMEM培养基进行原代和传代细胞培养;通过显微光学成... 目的探讨小鼠颅底软骨联合细胞体外原代培养的方法并了解其基本生物学特征.方法显微手术采集小鼠颅底蝶枕软骨联合组织;用胰蛋白酶和胶原酶联合消化软骨基质,获取软骨细胞;用含血清的DMEM培养基进行原代和传代细胞培养;通过显微光学成像、生长曲线描记及免疫组织化学染色观测细胞形态、活力及II型胶原合成能力.结果培养细胞在一定传代次数内稳定保持软骨细胞的典型形态和功能特征.结论手术分离配合酶联合消化是小鼠颅底软骨联合细胞体外原代培养实验的一条可靠途径. 展开更多

关键词 小鼠 颅底 软骨联合 软骨细胞 细胞培养

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人脐带血间充质干细胞的体外培养及影响因素 被引量：5

14

作者 黄伟 祝建中 +2 位作者 苗宗宁 王玲 王新 《中国交通医学杂志》 2005年第3期215-217,220,共4页

目的:建立人脐带血的间充质干细胞(MSCs)体外培养、扩增的方法。方法:无菌条件下取正常足月的脐带血,分离单个核细胞,以含5%胎牛血清的低糖DMEM作为培养基进行培养和纯化获得贴壁细胞,测定MSCs的生长曲线,用流式细胞技术分析细胞的表面... 目的:建立人脐带血的间充质干细胞(MSCs)体外培养、扩增的方法。方法:无菌条件下取正常足月的脐带血,分离单个核细胞,以含5%胎牛血清的低糖DMEM作为培养基进行培养和纯化获得贴壁细胞,测定MSCs的生长曲线,用流式细胞技术分析细胞的表面抗原。结果:脐血中的单个核细胞在适当的条件下分离、培养,获得的MSCs均一稳定地表达相关的抗原标记CD29、CD44、CD105,但不表达CD34、CD45、CD106和HLA-DR。结论:脐带血中含有的MSCs可在体外培养、扩增,能够作为间充质干细胞的一种有效来源。 展开更多

关键词 脐带血 间充质干细胞 细胞培养

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脊髓神经细胞的培养及鉴定 被引量：1

15

作者 林翔 王荣茂 +1 位作者 聂光瑞 张俐 《山西中医学院学报》 2014年第4期25-26,29,共3页

目的:探索体外培养原代脊髓神经细胞的方法,为研究脊髓损伤及修复的分子机制、药物作用机制提供前提条件。方法:将妊娠15 d的孕鼠处死后取出胎鼠脊髓,分离出神经细胞作为原代细胞进行培养,观察神经元细胞形态学特征,并采用DAPI和NSE双... 目的:探索体外培养原代脊髓神经细胞的方法,为研究脊髓损伤及修复的分子机制、药物作用机制提供前提条件。方法:将妊娠15 d的孕鼠处死后取出胎鼠脊髓,分离出神经细胞作为原代细胞进行培养,观察神经元细胞形态学特征,并采用DAPI和NSE双重染色对所培养细胞进行鉴定。结果:胎鼠脊髓神经细胞在体外培养生长好,纯度高,经免疫荧光鉴定,所培养细胞荧光染色符合神经细胞特点。结论:采用该实验方法进行脊髓神经细胞培养方法简便,纯度高,能满足各种神经科学研究的需要。 展开更多

关键词 体外培养 原代脊髓神经细胞 脊髓损伤及修复

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大鼠肾上腺细胞体外培养观察及鉴定

16

作者 江波 伍耿青 +5 位作者 王晓宁 宋涛 杨军 薛义军 钟辛 邹晓峰 《赣南医学院学报》 2010年第6期866-868,共3页

目的:探讨大鼠肾上腺细胞体外培养时的生长特征及分泌功能,从而为寻找到肾上腺细胞最佳细胞移植时限提供实验依据。方法:通过肾上腺细胞的体外分组原代培养,取不同培养时间(0、2、4、6、7、10 d)的肾上腺细胞,倒置相差显微镜下定性观察... 目的:探讨大鼠肾上腺细胞体外培养时的生长特征及分泌功能,从而为寻找到肾上腺细胞最佳细胞移植时限提供实验依据。方法:通过肾上腺细胞的体外分组原代培养,取不同培养时间(0、2、4、6、7、10 d)的肾上腺细胞,倒置相差显微镜下定性观察肾上腺细胞的形态,细胞贴壁生长及其分布情况;定量检测肾上腺细胞增殖情况及其存活率;酶联免疫分析法测定培养液中皮质酮的浓度,放射免疫分析法测定培养液中皮质醇和醛固酮的浓度。比较分析肾上腺细胞分泌功能的动态变化。结果:正常大鼠肾上腺细胞体外原代培养48 h后,在显微镜下见肾上腺细胞贴壁,细胞增大,胞体呈圆形或多角形,胞体大,胞浆透亮,4 d后生长旺盛,数量增多,细胞成活率达95.94%,2周后细胞出现皱缩和破碎,开始衰老。体外培养的肾上腺细胞培养液中,皮质醇浓度随时间的延长而增加,但第4天以后增加速度缓慢,进入一个平台期。皮质酮、醛固酮浓度在第2、4、6、7 d逐渐上升,第7 d达峰值.随后第10 d浓度开始下降,与高峰值相比,有显著差异(P<0.01),而皮质醇略升高。结论:体外培养的大鼠肾上腺细胞具有分泌皮质激素的功能;大鼠体内所含糖皮质激素主要为皮质酮,皮质醇虽然有变化,但其含量非常低。 展开更多

关键词 肾上腺细胞 细胞培养

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JNK信号通路对亚急性帕金森病MPTP模型小鼠黑质iNOS表达的影响 被引量：2

17

作者 王永生 张宇新 +4 位作者 李会 王素娟 周洪霞 司道文 张作凤 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期348-351,共4页

目的：研究JNK在1-甲基4-苯基-1，2，3，6-四氢毗啶（MPTP）所致小鼠帕金森病（PD）模型中对诱导型一氧化氮合酶（iNOs）表达的调控作用，探讨PD黑质多巴胺（DA）能神经元变性失活的可能机制。方法：采用神经毒素MPTP制备亚急性PD小鼠... 目的：研究JNK在1-甲基4-苯基-1，2，3，6-四氢毗啶（MPTP）所致小鼠帕金森病（PD）模型中对诱导型一氧化氮合酶（iNOs）表达的调控作用，探讨PD黑质多巴胺（DA）能神经元变性失活的可能机制。方法：采用神经毒素MPTP制备亚急性PD小鼠模型，健康雄性C57BL／6N小鼠随机分为模型组、JNK抑制剂组和对照组，采用行为学观察、免疫组织化学和免疫印迹法，观察模型小鼠行为学变化及中脑黑质酪氨酸羟化酶（TH）、iNOS和磷酸化cJun（p-c-Jun）的表达变化；观察给予JNK通路特异性抑制剂SP600125对上述变化的影响。结果：与对照组相比，模型小鼠出现典型PD样症状。中脑黑质区TH阳性神经元下降约65％，中脑黑质TH表达水平显著降低约75％；黑质区iNOS和p-c-Jun阳性细胞明显增加，且矿pJun特异性表达于细胞核，中脑黑质iNOS与p-c-Jun表达水平明显升高。经SP600125处理后，模型小鼠PD样症状减轻，与对照组比较，TH阳性细胞数和TH表达水平仅下降约15％和25％，与模型组比较，黑质区iNOS与p-c-Jun阳性细胞减少，且p-c-Jun仅表达于胞质，中脑黑质iNOS与p-c-Jun表达水平明显下降。结论：JNK通路在MPTP诱导的亚急性PD小鼠黑质iNOS表达中可能起重要的调控作用；JNK通路特异性抑制剂SP600125可能对帕金森病小鼠具有一定的神经保护作用。 展开更多

关键词 帕金森病 诱导型一氧化氮合酶 JNK通路 酪氨酸羟化酶 C57BL/6N小鼠 1-甲基-4-苯基-1 2 3 6-四氢 吡啶

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JNK抑制剂对H_2O_2诱导心肌细胞凋亡的保护作用 被引量：1

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作者 胡永波 卢方浩 +1 位作者 张伟华 徐长庆 《哈尔滨医科大学学报》 CAS 北大核心 2005年第5期393-395,F0004,共4页

目的观察特异性JNK抑制剂对H2O2诱导凋亡的培养乳鼠心肌细胞的保护作用,探讨热休克蛋白70(HSP70)对H2O2诱导心肌细胞凋亡的保护作用机制。方法培养大鼠乳鼠心肌细胞,随机分为4组,即正常对照组、H2O2损伤组、热休克组和JNK抑制剂组。应... 目的观察特异性JNK抑制剂对H2O2诱导凋亡的培养乳鼠心肌细胞的保护作用,探讨热休克蛋白70(HSP70)对H2O2诱导心肌细胞凋亡的保护作用机制。方法培养大鼠乳鼠心肌细胞,随机分为4组,即正常对照组、H2O2损伤组、热休克组和JNK抑制剂组。应用免疫组化技术检测HSP70的表达;用透射电镜观察心肌细胞超微结构变化;用流式细胞仪分析心肌细胞凋亡百分率。结果热休克预处理后HSP70在细胞浆内大量表达。JNK抑制剂明显抑制心肌细胞的凋亡率。结论热应激预适应和JNK抑制剂对心肌细胞都具有保护作用,其保护机制可能与热应激时HSP70在心肌细胞内大量表达从而抑制了JNK的信号转导有关。 展开更多

关键词 热休克 JNK抑制剂 心肌细胞 凋亡

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牛视网膜毛细血管周细胞的原代培养

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作者 王心蕊 倪劲松 +2 位作者 王医术 王越晖 李玉林 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期554-556,F0002,共4页

目的:建立牛视网膜毛细血管周细胞原代培养的方法。方法:以酶消化法原代培养牛视网膜毛细血管周细胞,用透射电镜和免疫细胞化学法对细胞进行鉴定。结果:培养的周细胞贴壁生长,胞体肥大,呈不规则状、有较多突起。细胞生长缓慢,呈现非接... 目的:建立牛视网膜毛细血管周细胞原代培养的方法。方法:以酶消化法原代培养牛视网膜毛细血管周细胞,用透射电镜和免疫细胞化学法对细胞进行鉴定。结果:培养的周细胞贴壁生长,胞体肥大,呈不规则状、有较多突起。细胞生长缓慢,呈现非接触抑制的重叠状生长。电镜下周细胞核大、不规则、有切迹,可见多个核仁。细胞表面有微绒毛,胞质内有丰富的细胞器,无Ⅷ因子小体;免疫细胞化学显示细胞呈平滑肌肌动蛋白(-αSMA)阳性,Ⅷ因子相关抗原阴性。结论:酶消化法原代培养牛视网膜周细胞是一种稳定、可靠的方法。 展开更多

关键词 视网膜/细胞学 周细胞 细胞培养 免疫组织化学

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人毛囊无色素性黑素细胞及其治疗白癜风的研究进展 被引量：1

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作者 朱洪智 陈俊荣 卢涛 《中国美容医学》 CAS 2007年第12期1758-1761,共4页

毛囊无色素性黑素细胞可以作为皮肤黑素细胞的储库，给白癜风的治疗提供黑素细胞来源。人黑素细胞（melanocyte，MC）起源于胚胎神经嵴，在胚胎发育2～5周开始向表皮和毛囊移行。向表皮移行的黑素细胞最终定居在基底膜上，形成连续产生... 毛囊无色素性黑素细胞可以作为皮肤黑素细胞的储库，给白癜风的治疗提供黑素细胞来源。人黑素细胞（melanocyte，MC）起源于胚胎神经嵴，在胚胎发育2～5周开始向表皮和毛囊移行。向表皮移行的黑素细胞最终定居在基底膜上，形成连续产生黑素的成熟黑素细胞；而向毛囊移行的黑素细胞则分为两种类型：一种是位于生长期毛囊毛母质和漏斗部具有黑素合成活性的黑素细胞；另一种是分布于生长期毛发外毛根鞘（Outer Root Sheath，ORS）中，无黑素合成活性、未活化的无色素性黑素细胞（amelanotic melanocyte，AMMC）。 展开更多

关键词 无色素性黑素细胞 人毛囊 白癜风 治疗 MELANOCYTE 皮肤黑素细胞 胚胎发育 黑素合成

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