目的研究成纤维细胞生长因子18(FGF18)是否能诱导体外分离培养的人牙龈成纤维细胞(HGFs)向成骨样细胞分化,并探究其成骨机制。方法组织块法分离培养HGFs并鉴定。取第3代HGFs,分为实验组和对照组。实验组加入FGF18和L-DMEM、对照组加入L-...目的研究成纤维细胞生长因子18(FGF18)是否能诱导体外分离培养的人牙龈成纤维细胞(HGFs)向成骨样细胞分化,并探究其成骨机制。方法组织块法分离培养HGFs并鉴定。取第3代HGFs,分为实验组和对照组。实验组加入FGF18和L-DMEM、对照组加入L-DMEM。噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度FGF18(0、0.01、0.02、0.04、0.06 mg/L)对HGFs增殖影响;碱性磷酸酶(ALP)和茜素红染色检测成骨能力和矿化能力;RT-PCR、免疫细胞化学染色及Western blot检测成骨相关基因、蛋白和BMP信号通路中BMP2基因和蛋白表达情况。结果与对照组比较,实验组培养3、5、7、9、11 d均可促进HGFs增殖(P<0.05);培养14、21 d ALP活性、矿物盐沉积均增高(P<0.05),ALP、OPN、OCN及BMP信号通路中BMP2 mRNA表达均明显增高(P<0.01)。培养21 d OPN、OCN及BMP2蛋白表达较培养14 d明显增高(P<0.01)。结论FGF18能促进HGFs增殖,诱导HGFs向功能性成骨样细胞分化,其成骨机制与上调BMP2有关。展开更多
目的探究具核梭杆菌(F.nucleatum)感染对体外肠道上皮屏障的影响及可能的机制。方法人结直肠腺癌细胞Caco-2细胞接种于Transwell小室构建体外肠道上皮屏障模型。采用葡聚糖硫酸钠(DSS)和F.nucleatum建立细胞损伤和感染模型,实验分为CON...目的探究具核梭杆菌(F.nucleatum)感染对体外肠道上皮屏障的影响及可能的机制。方法人结直肠腺癌细胞Caco-2细胞接种于Transwell小室构建体外肠道上皮屏障模型。采用葡聚糖硫酸钠(DSS)和F.nucleatum建立细胞损伤和感染模型,实验分为CON组、FN组、8%DSS组和FN+8%DSS组,检测F.nucleatum对有无DSS处理的上皮屏障的影响并评估铁死亡在其中的作用;随后引入铁死亡抑制剂铁抑素1(Fer-1)和去铁胺(DFO),探究抑制铁死亡对受损上皮屏障的作用。实验中,采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞增殖;乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞损伤;跨上皮电阻值(TEER)评估上皮完整性;异硫氰酸荧光素-葡聚糖(FD4)透过率评估上皮通透性;透射电镜观察细胞间连接及线粒体;蛋白免疫印迹和免疫荧光染色检测胞质紧密粘连蛋白ZO-1和紧密连接蛋白CLDN-1的表达;铁死亡检测包括免疫荧光染色检测细胞内亚铁离子(Fe2+)含量;免疫印迹法检测谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、铁蛋白重链1(FTH1)、乙酰辅酶A合成酶长链家族4(ACSL4)的表达,以及测量丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽比例(GSH%)评估脂质过氧化水平。结果与CON组相比,FN组、8%DSS组和FN+8%DSS组细胞增殖率降低,细胞损伤增加(P<0.05);与CON组相比,FN组TEER值和FD4透过率差异无统计学意义(P>0.05);与8%DSS组相比,FN+8%DSS组的6、12、24 h TEER值下降(P<0.05),FD4透过率增加(P<0.0001);与CON组相比,FN+8%DSS组ZO-1和CLDN-1蛋白下调(P<0.05);透射电镜观察到8%DSS组细胞间连接破坏,FN+8%DSS组除了细胞间连接破坏还观测到F.nucleatum入侵细胞内部,线粒体呈现铁死亡样改变;GPX4蛋白下调,FTH1和ACSL4蛋白上调,细胞内Fe2+积聚,MDA升高,GSH%降低。引入Fer-1和DFO后,细胞损伤降低,TEER值回升,FD4透过率降低,ZO-1和CLDN-1蛋白表达升高(P<0.05)。结论F.nucleatum感染可能通过铁死亡途径促进DSS诱导的体外肠道上皮屏障破坏。展开更多
文摘目的研究成纤维细胞生长因子18(FGF18)是否能诱导体外分离培养的人牙龈成纤维细胞(HGFs)向成骨样细胞分化,并探究其成骨机制。方法组织块法分离培养HGFs并鉴定。取第3代HGFs,分为实验组和对照组。实验组加入FGF18和L-DMEM、对照组加入L-DMEM。噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度FGF18(0、0.01、0.02、0.04、0.06 mg/L)对HGFs增殖影响;碱性磷酸酶(ALP)和茜素红染色检测成骨能力和矿化能力;RT-PCR、免疫细胞化学染色及Western blot检测成骨相关基因、蛋白和BMP信号通路中BMP2基因和蛋白表达情况。结果与对照组比较,实验组培养3、5、7、9、11 d均可促进HGFs增殖(P<0.05);培养14、21 d ALP活性、矿物盐沉积均增高(P<0.05),ALP、OPN、OCN及BMP信号通路中BMP2 mRNA表达均明显增高(P<0.01)。培养21 d OPN、OCN及BMP2蛋白表达较培养14 d明显增高(P<0.01)。结论FGF18能促进HGFs增殖,诱导HGFs向功能性成骨样细胞分化,其成骨机制与上调BMP2有关。
文摘目的探究具核梭杆菌(F.nucleatum)感染对体外肠道上皮屏障的影响及可能的机制。方法人结直肠腺癌细胞Caco-2细胞接种于Transwell小室构建体外肠道上皮屏障模型。采用葡聚糖硫酸钠(DSS)和F.nucleatum建立细胞损伤和感染模型,实验分为CON组、FN组、8%DSS组和FN+8%DSS组,检测F.nucleatum对有无DSS处理的上皮屏障的影响并评估铁死亡在其中的作用;随后引入铁死亡抑制剂铁抑素1(Fer-1)和去铁胺(DFO),探究抑制铁死亡对受损上皮屏障的作用。实验中,采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞增殖;乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞损伤;跨上皮电阻值(TEER)评估上皮完整性;异硫氰酸荧光素-葡聚糖(FD4)透过率评估上皮通透性;透射电镜观察细胞间连接及线粒体;蛋白免疫印迹和免疫荧光染色检测胞质紧密粘连蛋白ZO-1和紧密连接蛋白CLDN-1的表达;铁死亡检测包括免疫荧光染色检测细胞内亚铁离子(Fe2+)含量;免疫印迹法检测谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、铁蛋白重链1(FTH1)、乙酰辅酶A合成酶长链家族4(ACSL4)的表达,以及测量丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽比例(GSH%)评估脂质过氧化水平。结果与CON组相比,FN组、8%DSS组和FN+8%DSS组细胞增殖率降低,细胞损伤增加(P<0.05);与CON组相比,FN组TEER值和FD4透过率差异无统计学意义(P>0.05);与8%DSS组相比,FN+8%DSS组的6、12、24 h TEER值下降(P<0.05),FD4透过率增加(P<0.0001);与CON组相比,FN+8%DSS组ZO-1和CLDN-1蛋白下调(P<0.05);透射电镜观察到8%DSS组细胞间连接破坏,FN+8%DSS组除了细胞间连接破坏还观测到F.nucleatum入侵细胞内部,线粒体呈现铁死亡样改变;GPX4蛋白下调,FTH1和ACSL4蛋白上调,细胞内Fe2+积聚,MDA升高,GSH%降低。引入Fer-1和DFO后,细胞损伤降低,TEER值回升,FD4透过率降低,ZO-1和CLDN-1蛋白表达升高(P<0.05)。结论F.nucleatum感染可能通过铁死亡途径促进DSS诱导的体外肠道上皮屏障破坏。
