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ER-α36对乳腺癌细胞Herceptin敏感性的影响 被引量:1
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作者 邓婷婷 邹娇 +3 位作者 陈彬 王杨 姜晓梅 王继红 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1080-1085,共6页
目的探讨乳腺癌细胞中雌激素受体α36(estrogen receptorα36,ER-α36)对人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)人源化单克隆抗体赫赛汀(Herceptin)治疗敏感性的影响。方法 Western blot对G418筛选的BT47... 目的探讨乳腺癌细胞中雌激素受体α36(estrogen receptorα36,ER-α36)对人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)人源化单克隆抗体赫赛汀(Herceptin)治疗敏感性的影响。方法 Western blot对G418筛选的BT474/ER-α36细胞和对照细胞BT474/V进行表型鉴定;细胞增殖分析观察常规培养条件下和雌二醇(E2)存在与否的条件下配对细胞对Herceptin敏感性的差异;Western blot检测Herceptin处理前后配对细胞中E2诱导的Akt及MAPK磷酸化差异。结果筛选并鉴定了ER-α36过表达的BT474/ER-α36细胞及对照细胞BT474/V;常规培养下,Herceptin对BT474/ER-α36和BT474/V细胞的增殖抑制率分别为(22.00±0.06)%和(42.00±0.06)%,与对照细胞比较,BT474/ER-α36细胞对Herceptin的敏感性明显减弱(P<0.01);细胞经去类固醇处理后,在E2存在的情况下,Herceptin对BT474/ER-α36和BT474/V细胞的增殖抑制率分别为(34.00±0.06)%和(53.00±0.06)%,E2显著降低了BT474/ER-α36对Herceptin的敏感性(P<0.01);BT474/ER-α36细胞E2诱导的HER2下游信号分子Akt和MAPK磷酸化水平分别上调了3.08倍和2.63倍,而BT474/V细胞E2诱导的Akt和MAPK磷酸化水平仅分别上调了2.37倍和1.72倍,与对照细胞比较,BT474/ER-α36细胞具有更强的E2非基因组活性,并且该细胞中Herceptin抑制Akt及MAPK磷酸化的效应明显减弱(P<0.01)。结论 ER-α36可通过非基因组活性影响乳腺癌细胞Herceptin的敏感性。 展开更多
关键词 HERCEPTIN 乳腺癌 抵抗 ER-α36
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苦参碱对K562细胞端粒酶hTERT-mRNA表达及其酶活性影响作用的研究 被引量:37
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作者 李旭芬 张苏展 +1 位作者 郑树 张行 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第4期391-393,共3页
目的:观察苦参碱对 K562细胞 hTERT- mRNA表达及端粒酶活性的影响作用 ,并明确两者的相关性。方法:以 0.1~ 2 mg/ml苦参碱处理 K562细胞 48h后, RT- PCR检测其 hTERT- mRNA表达,同时行 TRAP- PCR- ELISA端粒酶活性检测。结果 :K56... 目的:观察苦参碱对 K562细胞 hTERT- mRNA表达及端粒酶活性的影响作用 ,并明确两者的相关性。方法:以 0.1~ 2 mg/ml苦参碱处理 K562细胞 48h后, RT- PCR检测其 hTERT- mRNA表达,同时行 TRAP- PCR- ELISA端粒酶活性检测。结果 :K562细胞为一强端粒酶活性细胞株,在浓度分别为 0.1、 0 5、 1 0、 2 0 mg/ml苦参碱作用后, K562细胞 hTERT- mRNA表达明显受抑,同时伴有端粒酶活性下降,抑制率分别为 0 3%、 13 0%、 91 7%和 98 6%。结论:苦参碱可降低 K562细胞 hTERT- mRNA表达 ,同时伴端粒酶活性下降;端粒酶活性强度与 hTERT- mRNA表达有关。 展开更多
关键词 苦参碱 端粒酶 肿瘤细胞系 聚合酶链反应 hTERT-mRNA
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替拉扎明调节乏氧诱导鼻咽癌细胞HIF-1α和OPN mRNA的表达及其对放射增敏的作用 被引量:14
3
作者 徐鹏 黄建鸣 +4 位作者 任源 查晓 邓碧芳 吴俊辉 郎锦义 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第2期132-136,共5页
背景与目的:乏氧细胞毒性药物联合肿瘤放化疗是肿瘤治疗的一种重要途径,替拉扎明(tirapazamine,TPZ)是最受瞩目的乏氧细胞毒性药物之一,研究证实替拉扎明联合放疗作用于肿瘤细胞具有协同效应,但在乏氧条件下是否能下调乏氧诱导相关基因... 背景与目的:乏氧细胞毒性药物联合肿瘤放化疗是肿瘤治疗的一种重要途径,替拉扎明(tirapazamine,TPZ)是最受瞩目的乏氧细胞毒性药物之一,研究证实替拉扎明联合放疗作用于肿瘤细胞具有协同效应,但在乏氧条件下是否能下调乏氧诱导相关基因未见报道,因此本实验研究人鼻咽癌细胞HNE-1EB+和CNE-1EB-乏氧相关基因乏氧诱导因子1α(HIF-1α)和骨桥蛋白(osteopontin,OPN)的表达差异以及TPZ的放射增敏作用。方法:在常氧和乏氧条件下,用MTT法测定TPZ对HNE-1和CNE-1细胞的生长抑制作用,计算出IC50;用RT-PCR测定TPZIC10作用24h后HNE-1和CNE-1细胞HIF-1α和OPN mRNAs的表达;以及用克隆形成法测定TPZ预作用6h和1~6Gy60Coγ射线照射后细胞的存活率,用单击多靶数学模型拟合剂量-生存曲线,计算出D0、Dq和放射增敏比(SER)。结果:TPZ对HNE-1和CNE-1细胞的IC50在常氧条件下分别为34.81μmol/L、35.02μmol/L,在乏氧条件下分别为30.20μmol/L和28.48μmol/L;TPZ能明显下调HNE-1细胞乏氧后HIF-1α和OPN的表达,对CNE-1HIF-1α和OPN的表达无明显作用;放射剂量-生存曲线符合单击多靶数学模型特征;HNE-1aero和HNE-1hypox的D0和Dq分别为0.89Gy、0.28Gy,1.47Gy和0.44Gy;HNE-1hypox/TPZ的D0和Dq分别为0.66Gy和0.21Gy;CNE-1aero和CNE-1hypox的D0和Dq分别为0.72Gy、0.68Gy,0.95Gy和0.56Gy;CNE-1hypox/TPZ的D0和Dq分别为0.85Gy和0.79Gy。结论:TPZ对HNE-1EB+细胞明显的放射增敏作用可能与其下调乏氧诱导的HIF-1α和OPN表达有关,以及具有乏氧修饰剂的作用。 展开更多
关键词 替拉扎明 鼻咽癌细胞 放射增敏 乏氧诱导因子1Α 骨桥蛋白
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白蛋白结合型紫杉醇对人骨肉瘤OS-732细胞的体外抑制作用观察 被引量:10
4
作者 杨勇昆 牛晓辉 +4 位作者 张清 郝林 丁易 徐海荣 袁润英 《山东医药》 CAS 北大核心 2010年第42期24-26,共3页
目的观察白蛋白结合型紫杉醇(Abraxane)对人骨肉瘤OS-732细胞的体外抑制作用。方法取传代第3天、处于指数增殖期的人骨肉瘤OS-732细胞,分别加入不同浓度的阿霉素、紫杉醇(泰素)和Abraxane培养,于培养24、72、144 h时用MTT法测定细胞的... 目的观察白蛋白结合型紫杉醇(Abraxane)对人骨肉瘤OS-732细胞的体外抑制作用。方法取传代第3天、处于指数增殖期的人骨肉瘤OS-732细胞,分别加入不同浓度的阿霉素、紫杉醇(泰素)和Abraxane培养,于培养24、72、144 h时用MTT法测定细胞的光密度值(OD值)并计算细胞毒性指数(CI),倒置相差显微镜观察细胞形态,流式细胞术检测细胞周期。结果骨肉瘤OS-732细胞加入Abraxane后,OD值下降,以加入100、1 000μg/ml的Abraxane组及培养72、144 h时下降明显,CI则相应升高,同时细胞变小、核碎裂,G2~M期细胞的比例逐渐增加;除100μg/ml浓度处理24 h和72 h后,泰素处理组的CI高于Abraxane组外,两组相同浓度、相同处理时间的CI相近;最高剂量Abraxane和最高剂量阿霉素组的CI也相近。结论 Abraxane在体外对骨肉瘤OS-732细胞有显著的抑制作用,能将骨肉瘤细胞阻滞于G2~M期。Abraxane与泰素和阿霉素的细胞毒性相似。 展开更多
关键词 紫杉醇 结核型紫杉醇 骨肿瘤 骨肉瘤细胞 化学疗法 细胞增殖 细胞毒性 细胞凋亡
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姜黄素逆转HL60/ADR及MCF-7/ADR的多药耐药研究 被引量:13
5
作者 靳胜 陈书恩 +4 位作者 张曼 张敏 张秀敏 郝林 许华林 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期21-23,共3页
目的观察姜黄素对HL60/ADR以及MCF-7/ADR多药耐药(MDR)的逆转。方法用MTT法观察细胞的生长抑制效应,流式细胞仪检测凋亡以及细胞内阿霉素浓度,RT-PCR以及Western Blot检测Mdr1、MRP基因和Bcl-2蛋白表达。结果加入姜黄素后耐药细胞系逆... 目的观察姜黄素对HL60/ADR以及MCF-7/ADR多药耐药(MDR)的逆转。方法用MTT法观察细胞的生长抑制效应,流式细胞仪检测凋亡以及细胞内阿霉素浓度,RT-PCR以及Western Blot检测Mdr1、MRP基因和Bcl-2蛋白表达。结果加入姜黄素后耐药细胞系逆转指数分别为4.18(HL60/ADR)和3.39(MCF-7/ADR),与单纯应用阿霉素相比差异有统计学意义;流式细胞仪检测显示有明显的促凋亡作用,耐药细胞系内的ADR浓度明显升高;RT-PCR以及Western Blot检测发现姜黄素对上述耐药细胞系的MRP以及Bcl-2表达有抑制作用。结论姜黄素可能作为多药耐药的逆转剂应用于MDR逆转。 展开更多
关键词 姜黄素 肿瘤多药耐药 MDR1基因 MRP基因 Bcl-2基因
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人参皂甙Rh_2逆转P-gp介导的MCF-7/ADM多药耐药性的基础研究 被引量:10
6
作者 张晖 王华庆 +2 位作者 张会来 孔棣 吴咸中 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期365-369,共5页
目的:研究人参皂甙Rh2在逆转多药耐药(MDR)方面的作用及其机理。方法:Rh2和阿霉素单独或联合作用于MCF-7及MCF-7/ADM细胞,应用MTT法确定各组细胞的IC50。罗丹明123加入各组细胞,流式细胞仪分析Rh2和维拉帕米抑制罗丹明123外排的情况。RT... 目的:研究人参皂甙Rh2在逆转多药耐药(MDR)方面的作用及其机理。方法:Rh2和阿霉素单独或联合作用于MCF-7及MCF-7/ADM细胞,应用MTT法确定各组细胞的IC50。罗丹明123加入各组细胞,流式细胞仪分析Rh2和维拉帕米抑制罗丹明123外排的情况。RT-PCR检测各组mdr1 mRNA表达量及流式细胞仪检测各组P-gp的表达情况。结果:Rh2可以显著降低MCF-7/ADM的ADM IC50(P<0.05),对MCF-7细胞没有影响。Rh2和维拉帕米可以增加MCF-7/ADM细胞内罗丹明123荧光表达率(P<0.05),Rh2比维拉帕米抑制罗丹明123外排作用更强。在MCF-7细胞内Rh2和维拉帕米无此作用。Rh2对MCF-7/ADM细胞mdr1 mRNA表达及P-gp表达没有影响。结论:人参皂甙Rh2可以有效逆转P-gp介导的人乳腺癌细胞耐药细胞系MCF-7/ADM的耐药性。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 人参皂甙 P糖蛋白 MCF-7细胞系
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紫杉醇脂质体对乳腺癌细胞SK-BR-3的放疗增敏作用及其机制 被引量:10
7
作者 姚烜 赵玲 +2 位作者 李索妮 史婷婷 姚煜 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期628-632,共5页
目的探索紫杉醇脂质体(力扑素)对乳腺癌细胞株SK-BR-3是否具有放疗增敏作用及其放疗增敏机制。方法利用MTT法检测放疗组、单药紫杉醇脂质体(以下简称单药组)及紫杉醇脂质体联合放疗(以下简称联合组)在不同时间对乳腺癌细胞SK-BR-3的生... 目的探索紫杉醇脂质体(力扑素)对乳腺癌细胞株SK-BR-3是否具有放疗增敏作用及其放疗增敏机制。方法利用MTT法检测放疗组、单药紫杉醇脂质体(以下简称单药组)及紫杉醇脂质体联合放疗(以下简称联合组)在不同时间对乳腺癌细胞SK-BR-3的生长抑制作用。利用流式细胞仪检测放疗组、单药组及联合组对细胞周期及凋亡的影响。利用Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2及Bax在不同处理组中的表达,探索紫杉醇脂质体放疗增敏作用的机制。结果 MTT结果显示放疗组、单药组及联合组均具有细胞生长抑制作用,与细胞对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05),而且联合组较单药及放疗组具有更显著的细胞生长抑制作用,差异具有统计学意义(P<0.05);细胞凋亡结果显示放疗组、单药组及联合组凋亡细胞均明显增加,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05),并且联合组在细胞周期中均出现了明显的凋亡峰;Western blot结果显示,促凋亡蛋白Caspase-3和Bax的表达在放疗组、单药组和联合组中均升高,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05),并且联合组升高较放疗组及单药组更为显著,差异具有统计学意义(P<0.05),而抗凋亡蛋白Bcl-2的表达在放疗组、单药组及联合组均减低,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05),而联合组较放疗组及单药组降低更明显,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论紫杉醇脂质体具有明显的放疗增敏作用,并且可能通过调控凋亡相关蛋白的表达引起细胞凋亡来发挥其放疗增敏作用。 展开更多
关键词 乳腺癌 放疗增敏作用 紫杉醇脂质体 凋亡 细胞周期 CASPASE BCL-2 BAX
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人参皂甙Rg3诱导乳腺癌细胞系MCF-7凋亡的实验研究 被引量:25
8
作者 陈俊霞 夏俊 +1 位作者 刘基巍 崔秀云 《癌变·畸变·突变》 CAS CSCD 2005年第4期213-216,共4页
背景与目的:人参皂甙Rg3[20(R)-GinsenosideRg3]是从红参中提取的微量中药单体。近年研究表明人参皂甙Rg3尚具有抑制肿瘤细胞的增殖、抗肿瘤细胞浸润和转移等作用。肿瘤的发生和发展是一个极其复杂的过程,有多种转移相关的蛋白因子参与... 背景与目的:人参皂甙Rg3[20(R)-GinsenosideRg3]是从红参中提取的微量中药单体。近年研究表明人参皂甙Rg3尚具有抑制肿瘤细胞的增殖、抗肿瘤细胞浸润和转移等作用。肿瘤的发生和发展是一个极其复杂的过程,有多种转移相关的蛋白因子参与,并涉及多种转移途径和分子机制。人参皂甙Rg3抗肿瘤机制的研究为目前中药抗肿瘤研究热点之一。本研究的目的在于探讨Rg3抑制乳腺癌细胞的作用及其诱导凋亡的机制。材料与方法:四甲基偶氮唑蓝(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide,MTT)法检测人乳腺癌细胞MCF-7的细胞增殖活力;荧光染色观察凋亡细胞的形态学变化;流式细胞术分析细胞周期及细胞凋亡;琼脂糖凝胶电泳测定DNA梯状带。结果:Rg3与MCF-7细胞生长抑制率之间有浓度依赖关系,相关系数(r)=0.953,Rg3处理细胞48h的IC50为71.91μg/ml;荧光显微镜下观察到经Rg3作用后,MCF-7细胞出现染色质凝集、核片段化、凋亡小体等凋亡形态学特征;流式细胞术检测表明Rg3能诱导细胞凋亡及调节细胞周期,用150μg/ml的Rg3处理细胞48h后,S期和G2-M期的细胞比率增加,G0-G1的细胞比率下降。细胞凋亡率从对照组的(0.45±0.25)%上升到(34.86±4.65)%。DNA琼脂糖凝胶电泳结果显示,服150μg/ml的Rg3处理细胞24h和48h后,能够使细胞产生明显的梯形电泳图谱(DNAladder)。结论:Rg3可通过诱导MCF-7细胞凋亡而发挥其抑制细胞增殖的作用。 展开更多
关键词 人参皂甙RG3 凋亡 肿瘤 MCF-7细胞
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Anti-tumor Effect and Protective Effect on Chemotherapeutic Damage of Water Soluble Extracts from Hedyotis diffusa 被引量:26
9
作者 李瑞 赵浩如 林以宁 《Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences》 CAS 2002年第2期54-58,共5页
Bai-Hua-She-She-Cao Hedyotis diffusa Willd. (Ru-biaceae) is a medicinal herbwidely distributed in northeast Asian countries. In traditional Chinese medicine, it has the effectof 'clearing away heat and toxic mater... Bai-Hua-She-She-Cao Hedyotis diffusa Willd. (Ru-biaceae) is a medicinal herbwidely distributed in northeast Asian countries. In traditional Chinese medicine, it has the effectof 'clearing away heat and toxic material, promoting blood circulation and removing blood stasis'.It is a well known Chinese folk-medicine used for the treatment of appendicitis, sore throat, mumps,acne, sebo-rheic dermatitis and various kinds of tumors, such as tumors of digestive tract,carcinoma of liver. It was reported that the MeOH extract of H. diffusa demonstrated a significantantitumor activity and ursolic acid succeeded in being isolated from the MeOH extract as an activecomponent . Shan BN, et al suggested that the direct aqueous extract of H. diffusa hadimmuno-modulating activity and antitumor activity in vitro through stimulating the immune system tokill or engulf tumor cells. But regarding anti-tumor activity in vivo of water soluble extracts fromH. diffusa, no detail was reported. Therefore, we prepared water soluble extracts (H_1 and H_2)from H. diffusa and evaluated their anti-tumor property in vivo experiments as well as protectiveeffect on chemo-therapeutic damage. 展开更多
关键词 hedyotis diffusa water soluble extracts ANTI-TUMOR CHEMOTHERAPY
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突变k-ras基因重组腺病毒的构建 被引量:7
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作者 赵峰 周清华 +2 位作者 覃扬 孙芝琳 孙泽芳 《中国肺癌杂志》 CAS 2002年第1期14-17,共4页
目的 利用细菌内同源重组法构建含 1 2密码子点突变的k ras基因重组腺病毒。方法 用限制性内切酶kpnⅠ +xhoⅠ从载体pcDNA3 k ras1 2 (Val)中切出 1 2密码子点突变的k ras基因片断 ,亚克隆至经同样酶切的腺病毒穿梭质粒pAdTrack CMV... 目的 利用细菌内同源重组法构建含 1 2密码子点突变的k ras基因重组腺病毒。方法 用限制性内切酶kpnⅠ +xhoⅠ从载体pcDNA3 k ras1 2 (Val)中切出 1 2密码子点突变的k ras基因片断 ,亚克隆至经同样酶切的腺病毒穿梭质粒pAdTrack CMV中 ,形成转移质粒pAdTrack CMV/k ras 1 2 (Val) ,将之PmeⅠ酶切线性化后与腺病毒基因重组质粒pAdEasy 1共转化大肠杆菌BJ51 83 ,抽提经鉴定含目的基因的重组体质粒 ,PacⅠ酶切后用脂质体转染 2 93细胞 ,包装成重组体腺病毒Ad k ras1 2 (Val)。采用PCR方法对重组体腺病毒进行鉴定 ,利用穿梭质粒pAdTrack CMV中带有GFP报告基因 ,对病毒滴度和感染效率进行监测。结果 利用CaCl2 法由pAdTrack CMV/k ras 1 2 (Val)和pAdEasy 1共转化大肠杆菌BJ51 83 ,可获得 2 5%左右的阳性重组体细菌克隆。PCR检测表明重组腺病毒已含有目的基因 ,滴度为 1 .2× 1 0 1 2 pfu/ml。结论 细菌内同源重组法构建腺病毒相比于传统的细胞内同源重组法 ,具有成功率高、方法简便、快捷、实验周期短的优点 。 展开更多
关键词 腺病毒 突变ras基因 同源重组 肿瘤免疫治疗
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一个新的靶向HER-2 mRNA的反义寡核苷酸,HA824,对HER-2表达的影响(英文) 被引量:5
11
作者 杨栓平 宋三泰 +2 位作者 宋海峰 郑晓玲 汤仲明 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期87-92,共6页
目的 观察HA82 4 ,这种新合成的靶向HER 2mRNA的反义寡核苷酸对SK BR 3乳癌细胞株mRNA和蛋白表达的特异性作用。方法 以HA4为阳性对照 ,随机序列为随机对照检测了HA82 4对SK BR 3细胞生长的抑制作用与IC50 值 ;采用逆转录聚合酶链反应... 目的 观察HA82 4 ,这种新合成的靶向HER 2mRNA的反义寡核苷酸对SK BR 3乳癌细胞株mRNA和蛋白表达的特异性作用。方法 以HA4为阳性对照 ,随机序列为随机对照检测了HA82 4对SK BR 3细胞生长的抑制作用与IC50 值 ;采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)、流式细胞技术、免疫组织化学法检测了对SK BR 3细胞mRNA与蛋白表达的影响。结果 结果表明HA82 4对SK BR 3乳癌细胞的生长有剂量依赖性的抑制作用〔IC50 (nmol·L- 1) :HA82 4 ,(47± 2 6 ) ;HA4 ,(97± 4 1) ;随机序列 ,(2 5 1± 86 )。HA82 4vsHA4 ,P <0 .0 5〕。HA82 4还显著抑制了HER 2mRNA与蛋白的表达 (免疫组化结果 :HA82 4 ,1+染色 ;HA4 ,2 +染色 ;随机序列 ,3+染色 ;流式细胞技术检测结果 ,荧光强度分别为 :HA82 4 ,338.6 ;HA4 ,35 5 .5 ;随机序列 ,5 32 .4 )。结论HA82 4对SK BR 3乳癌细胞生长的抑制作用与特异性的抑制HER 展开更多
关键词 乳腺癌 SK-BR-3细胞 HA824 HER-2 反义寡核苷酸 蛋白表达 逆转录聚合酶链反应
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RARE介导的视黄酸可调控的IFN-α表达载体的构建与鉴定 被引量:5
12
作者 张乾勇 糜漫天 +2 位作者 程天民 韦娜 朱晓霞 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期277-280,共4页
目的构建一个含视黄酸反应元件 ( RARE)的 IFN- α表达载体 ,使其在真核细胞内的表达受视黄酸 ( RA)的诱导。方法运用 DNA重组技术构建含有 4个 RARE重复序列的 IFN- α真核表达载体 ( p RARE4 - IFN- α) ,经酶切、PCR鉴定和测序确认... 目的构建一个含视黄酸反应元件 ( RARE)的 IFN- α表达载体 ,使其在真核细胞内的表达受视黄酸 ( RA)的诱导。方法运用 DNA重组技术构建含有 4个 RARE重复序列的 IFN- α真核表达载体 ( p RARE4 - IFN- α) ,经酶切、PCR鉴定和测序确认后 ,用脂质体转染法使其转染 HL- 60细胞 (人早幼粒白血病细胞系 )、Bcap- 3 7和 MCF- 7细胞 (人乳腺癌细胞系 ) ,RA处理后 ,RT- PCR分析 IFN- α m RNA水平 ,EL ISA检测培养细胞上清中 IFN- α含量。结果 p RARE4 - IFN- α转染的 HL- 60、Bcap- 3 7和 MCF- 7细胞 ,IFN- α分泌量为 16~ 2 4 ng/ ( m L· 10 6 )细胞 ,而经 RA处理 2 4 h,IFN- α表达水平可增加 8~ 13倍 ,但经 RA处理 2 4 h的细胞 ,换无 RA的新鲜培养基继续培养 2 4 h后 ,IFN- α表达水平又下降到 2 5~ 3 4 ng/ ( m L· 10 6 )细胞。结论带有 RARE的 IFN- α表达载体转染细胞后 ,外源性 IFN- α基因的表达受 RA的诱导。 展开更多
关键词 视黄酸 干扰素 高黄酸反应元件 表达载体 IFNΑ 药物治疗 肿瘤
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川芎嗪联合氟尿嘧啶对胃癌细胞SGC-7901/ADR的杀伤作用 被引量:13
13
作者 杨叶 侯培珍 张娟 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期624-626,共3页
目的观察川芎嗪(TMP)联合氟尿嘧啶(5-Fu)对胃癌多药耐药细胞SGC7901/ADR细胞的体外杀伤作用。方法采用MTT法观察TMP联合5-Fu对SGC7901/ADR细胞的杀伤作用,光镜下观察并采用流式细胞仪(FCM)测定各药物组细胞周期的分布。结果5-Fu对SGC-79... 目的观察川芎嗪(TMP)联合氟尿嘧啶(5-Fu)对胃癌多药耐药细胞SGC7901/ADR细胞的体外杀伤作用。方法采用MTT法观察TMP联合5-Fu对SGC7901/ADR细胞的杀伤作用,光镜下观察并采用流式细胞仪(FCM)测定各药物组细胞周期的分布。结果5-Fu对SGC-7901/ADR细胞的半数抑制率(IC50)为13.001mg/L,与300mg/LTMP联合后,使其的IC50降至1.542mg/L,逆转倍数是8.43倍,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.01)。光镜下可见5-Fu+TMP(终浓度300mg/L)组较5-Fu组癌细胞皱缩变小变圆,出现凋亡改变。FCM分析:TMP联合5-Fu与对照组相比将细胞阻滞在DNA合成前期和静息期-G0/G1期(P<0.05)。结论TMP与5-Fu联合对胃癌多药耐药细胞SGC7901/ADR有较强的杀伤作用,为当前胃癌治疗提供了新思路。 展开更多
关键词 胃癌 多药耐药性 SGC7901/ADR细胞 5-Fu 川芎嗪
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重组细小病毒H-1(rhH1△/p21)对胃癌细胞HGC27生长抑制作用的研究 被引量:5
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作者 冉志华 冯缨 +1 位作者 邱德凯 萧树东 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期251-255,共5页
目的:了解重组细小病毒H-1(rhH1△/p21)对胃癌细胞株HGC27的作用,为进一步研究p21wif1的生物学作用以及肿瘤的基因治疗奠定基础。方法:采用RT-PCR技术,构建表达p21蛋白的重组细小病毒H-1(rhH1△/p21),并将其转染胃癌细胞HGC27,观察细胞... 目的:了解重组细小病毒H-1(rhH1△/p21)对胃癌细胞株HGC27的作用,为进一步研究p21wif1的生物学作用以及肿瘤的基因治疗奠定基础。方法:采用RT-PCR技术,构建表达p21蛋白的重组细小病毒H-1(rhH1△/p21),并将其转染胃癌细胞HGC27,观察细胞形态学改变,用Western blot检测转移基因蛋白在胃癌细胞中的表达,用MTT法检测其对HGC27细胞生长的抑制作用,用流式细胞仪分析其对细胞周期的影响。结果:成功构建重组细小病毒H-1(rhH1△/p21),所得病毒滴度达到3.5×107PFU/mL,在胃癌HGC27细胞中成功过表达转移基因蛋白p21,使胃癌细胞株细胞周期比例改变,G1期含量明显增加,并抑制其增殖。结论:重组细小病毒H-1(rhH1△/p21)可诱导胃癌细胞株HGC27细胞G1期阻滞,抑制细胞增殖,该基因疗法可有效抑制体外胃癌细胞的生长。。 展开更多
关键词 胃肿瘤 DNA 重组 细小病毒科感染 癌基因蛋白p21 基因表达 细胞周期
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新型雌激素受体GPER在乳腺癌MCF-7细胞他莫昔芬耐药中的作用及机制 被引量:6
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作者 朱庆 伍俊仪 +3 位作者 袁杰 杨海兵 陈茂山 杨光伦 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第22期2249-2254,共6页
目的研究乳腺癌他莫昔芬耐药细胞MCF-7R中新型雌激素受体(G protein-coupled estrogen receptor,GPER)对促凋亡蛋白Bim的影响及其机制。方法倒置显微镜下观察MCF-7和MCF-7R经过浓度为1μmol/L的他莫昔芬(tamoxifen,TAM)处理后细胞形态... 目的研究乳腺癌他莫昔芬耐药细胞MCF-7R中新型雌激素受体(G protein-coupled estrogen receptor,GPER)对促凋亡蛋白Bim的影响及其机制。方法倒置显微镜下观察MCF-7和MCF-7R经过浓度为1μmol/L的他莫昔芬(tamoxifen,TAM)处理后细胞形态的变化;qRT-PCR检测人乳腺癌细胞MCF-7及其他莫昔芬耐药株MCF-7R中促凋亡蛋白Bim(Bcl-2L11)的mRNA表达水平,Western blot检测两种细胞株Bim蛋白表达水平和两种细胞中总的GPER和膜上GPER的表达水平;两种细胞中分别以(无水乙醇、TAM、GPER特异性抑制剂G15+TAM、GPER特异性激动剂G1)处理后,检测Bim的蛋白表达水平;MCF-7R细胞中分别抑制PI3K-Akt及MAPK/Erk两条信号通路后,再加入TAM,检测Bim的蛋白水平;流式细胞术检测细胞凋亡。结果倒置显微镜下发现MCF-7细胞经TAM处理后细胞大部分变透亮且悬浮,而MCF-7R无明显变化;MCF-7R细胞中促凋亡蛋白Bim的mRNA水平及蛋白水平较MCF-7都降低(P<0.05);耐药细胞中总GPER的蛋白表达量较MCF-7无明显变化而膜上的表达量升高(P<0.05);MCF-7经TAM处理后,Bim蛋白表达量增加(P<0.05),而MCF-7R中却无明显变化,但在MCF-7R中加入GPER特异性抑制剂G15后再用TAM处理,Bim蛋白水平增加(P<0.05);耐药细胞中PI3K/AKT及MAPK/Erk信号通路处于活化状态,抑制MAPK/Erk信号通路后再加入TAM,耐药细胞中促凋亡蛋白Bim的表达量增加(P<0.05);在MCF-7中加入TAM后细胞凋亡率明显升高(P<0.05),MCF-7R经TAM处理后无明显差异,但抑制GPER或Erk信号通路后,再加入TAM处理,细胞凋亡率明显增高(P<0.05)。结论乳腺癌TAM耐药细胞MCF-7R中TAM作为GPER的激动剂,活化信号通路MAPK/Erk抑制Bim表达。抑制GPER或MAPK/Erk信号通路,可使耐药细胞对TAM恢复敏感性。 展开更多
关键词 乳腺癌 他莫昔芬耐受 BIM GPER/GPR30 细胞凋亡
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CD147 siRNA对乳腺癌细胞HIF-1α、MMP-2与VEGF表达及细胞凋亡的影响 被引量:10
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作者 张聚良 姚青 +6 位作者 陈江浩 王廷 王辉 樊菁 凌瑞 易军 王岭 《现代肿瘤医学》 CAS 2013年第2期247-249,共3页
目的:探讨CD147 siRNA对乳腺癌细胞VEGF、MMP-2和HIF-1αmRNA表达及细胞凋亡的影响。方法:对乳腺癌细胞株MDA-MB-435转染CD147 siRNA真核表达载体,实时定量PCR法及Western blot检测VEGF、MMP-2和HIF-1αmRNA与蛋白表达的变化,流式细胞... 目的:探讨CD147 siRNA对乳腺癌细胞VEGF、MMP-2和HIF-1αmRNA表达及细胞凋亡的影响。方法:对乳腺癌细胞株MDA-MB-435转染CD147 siRNA真核表达载体,实时定量PCR法及Western blot检测VEGF、MMP-2和HIF-1αmRNA与蛋白表达的变化,流式细胞仪检测细胞的早期凋亡率。结果:转染CD147 siRNA沉默CD147基因后,乳腺癌细胞VEGF、MMP-2和HIF-1α蛋白与mRNA表达均明显下降(P<0.05),而细胞的早期凋亡率则显著增高(3.32%vs 15.21%,P<0.05)。结论:CD147作为一种重要的调控分子,可以下调乳腺癌细胞HIF-1α、MMP-2及VEGF的表达,从而参与了乳腺癌的增殖、转移等过程。 展开更多
关键词 CD147 缺氧诱导因子 基质金属蛋白酶-2 血管内皮生长因子 乳腺癌
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光激活金丝桃素对大鼠C6胶质瘤抑制作用及其对bFGF和bFGF-R及MVD的影响 被引量:5
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作者 郄福忠 刘兴吉 +2 位作者 鞠砚 李毅平 李蕴潜 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 2006年第6期442-444,共3页
目的:研究金丝桃素被光激活后对C6胶质瘤的抑制作用及其对bFGF、bFGF-R和微血管密度(microvesseldensity,MVD)的影响。方法:将接种C6胶质瘤细胞后的40只Wistar大鼠随机分为5组,空白对照组、高和低剂量金丝桃素作用组、高和低剂量金丝桃... 目的:研究金丝桃素被光激活后对C6胶质瘤的抑制作用及其对bFGF、bFGF-R和微血管密度(microvesseldensity,MVD)的影响。方法:将接种C6胶质瘤细胞后的40只Wistar大鼠随机分为5组,空白对照组、高和低剂量金丝桃素作用组、高和低剂量金丝桃素+光照组,16d后切取肿瘤组织,称质量计算抑瘤率,标本用SP法免疫组化染色,检测瘤组织中bFGF、bFGF-R和MVD。结果:1)光照下,当金丝桃素为0·8μg/mL时,抑瘤率为67·2%,金丝桃素为2·0μg/mL时抑瘤率为82·4%,非光照金丝桃素组对肿瘤无抑制作用。2)bFGF在各组大鼠C6胶质瘤组织中均有表达,表达值较高,各组间差异无统计学意义。空白对照组中bFGF-R表达较高,且微血管计数最多。金丝桃素+光照组中bFGF-R蛋白表达和MVD明显低于非光照组及对照组,P=0·019,P=0·007,呈剂量依赖关系。bFGF-R与肿瘤MVD呈正相关,rbFGF-R=0·85。结论:光激活金丝桃素对bFGF-R有抑制作用,对bFGF表达没有影响。光激活的金丝桃素能抑制大鼠C6胶质瘤生长的机制,可能是抑制肿瘤组织中bFGF-R后,阻止了bFGF发挥效应,抑制了肿瘤间质血管生成,而抑制肿瘤的生长。 展开更多
关键词 金丝桃素 BFGF bFGF-R 胶质瘤 动物模型
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[H^+]对LAK细胞、rIL-2、IFN-α2b或联合ADM抗恶性肿瘤的影响 被引量:6
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作者 范平生 朱德发 +2 位作者 胡冰 陈飞虎 何丽娜 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第S1期21-24,共4页
目的 调节细胞培养液pH值,观察不同pH值对LAK细胞的增值和rIL-2、IFN-α2b、LAK细胞杀伤恶性细胞的影响。方法 采用淋巴细胞分离液梯度离心法从正常人外周血分离单个核细胞并用rIL-2激活,于96孔细胞培养板或培养管中培养。应用细胞计数... 目的 调节细胞培养液pH值,观察不同pH值对LAK细胞的增值和rIL-2、IFN-α2b、LAK细胞杀伤恶性细胞的影响。方法 采用淋巴细胞分离液梯度离心法从正常人外周血分离单个核细胞并用rIL-2激活,于96孔细胞培养板或培养管中培养。应用细胞计数方法观察pH值分别为6.8、7.3、7.6的培养液,对rIL-2激活单个核细胞的影响。用7404细胞作为靶细胞、MTT法测定培养液pH值分别为6.8、7.3、7.6状态下rIL-2、IFN-α2b的杀伤作用,以及IFN--α2b对ADM(阿霉素)的增效作用和LAK细胞的细胞毒性作用。结果 pH值为7.3、7.6状态下,有利于LAK细胞增殖,pH值为7.6状态下rIL-2、IFN-α2b、LAK细胞杀伤效果最佳;pH值为6.8状态下几乎无杀伤作用。pH值为6.8、7.6都不利于7404细胞生长,pH值为7.6有利于LAK细胞生长。pH值为6.8、7.3、7.6时,IFN-α2b都能增加ADM抗肿瘤作用,但pH值为7.6时,IFN-α2b+ADM杀伤效果最佳。结论 在偏碱性环境下,有利于LAK细胞增殖,并且在此状态下LAK细胞和rIL-2、IFN-α2b、IFN-α2b+ADM对肿瘤细胞杀伤效果最佳。 展开更多
关键词 酸碱平衡 LAK细胞 干扰素 白介素-2 肿瘤细胞
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腺病毒介导VEGF-siRNA对荷人骨肉瘤裸鼠移植瘤生长的影响 被引量:5
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作者 钱光 梅炯 +1 位作者 董有海 蔡宣松 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期948-952,共5页
目的:观察腺病毒介导的VEGF-siRNA对荷人骨肉瘤细胞株MG63裸鼠移植瘤生长的影响。方法:将Ad-VEGF-siRNA感染MG63,用噻唑蓝(thiazolyl blue,MTT)法检测细胞体外增殖活力,反转录-聚合酶链反应(reverse transeription-poly-merase chain re... 目的:观察腺病毒介导的VEGF-siRNA对荷人骨肉瘤细胞株MG63裸鼠移植瘤生长的影响。方法:将Ad-VEGF-siRNA感染MG63,用噻唑蓝(thiazolyl blue,MTT)法检测细胞体外增殖活力,反转录-聚合酶链反应(reverse transeription-poly-merase chain reaction,RT-PCR)法检测VEGF抑制效果。建立裸鼠移植瘤模型,定期瘤内注射Ad-VEGF-siRNA,观察裸鼠致瘤率、肿瘤体积、抑瘤率及免疫组化法检测肿瘤组织中bcl-2的表达。结果:感染Ad-VEGF-siRNA能明显抑制MG63细胞的生长,瘤灶内注射Ad-VEGF-siRNA后裸鼠移植瘤的质量和体积均显著低于对照组(P<0.01)。TUNEL染色显示肿瘤细胞凋亡增加,免疫组化结果提示肿瘤组织中bcl-2表达明显减少(P<0.01)。结论:Ad-VEGF-siRNA可有效而特异地阻断VEGF基因表达,抑制裸鼠移植瘤生长,促进肿瘤细胞的凋亡。 展开更多
关键词 骨肉瘤 基因疗法 血管内皮生长因子类 RNA 小分子干扰 小鼠
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miR-181c靶向己糖激酶2抑制癌相关成纤维细胞的糖酵解 被引量:4
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作者 蓝海兵 罗亮 +2 位作者 齐协飞 龚园其 陈玉 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1619-1623,共5页
目的探讨mi R-181c在癌相关成纤维细胞(CAFs)糖酵解中的作用和机制。方法用组织贴壁法分离原代肺腺癌病人肺组织CAF及肺正常成纤维细胞(NFs)。用LipofectamineTM2000转染mi R-181c mimics,mi R-181c inhibitor,si RNA-HK2和HK2-vecto等;... 目的探讨mi R-181c在癌相关成纤维细胞(CAFs)糖酵解中的作用和机制。方法用组织贴壁法分离原代肺腺癌病人肺组织CAF及肺正常成纤维细胞(NFs)。用LipofectamineTM2000转染mi R-181c mimics,mi R-181c inhibitor,si RNA-HK2和HK2-vecto等;Q-PCR检测mi R-181家族表达水平;Western blotting检测己糖激酶2(HK2)蛋白表达;2-NBDG法检测细胞葡萄糖摄取率;DRY-CHEM FCD3500仪器检测细胞上清中乳酸生成;双荧光素酶报告基因系统检测HK2 m RNA表达。结果在细胞形态上CAFs与NFs无明显区别。与NFs组相比,CAFs组葡萄糖摄取、乳酸生成和HK2蛋白表达明显增加,而mi R-181家族表达明显减少(P<0.05)。在NFs转染inhibitor-181c后,其HK2蛋白表达、葡萄糖摄取和乳酸生成明显增加(P<0.05);相反,CAFs转染了mimics-181c后,其HK2蛋白表达、葡萄糖摄取和乳酸生成明显减少(P<0.05)。并且在敲低HK2细胞的CAFs中,mimics-181c不能减少葡萄糖摄取和乳酸生成;而mimics-181c可以减少过表达HK2对NFs葡萄糖摄取和乳酸生成的增强作用。结论 mir-181c可以通过抑制HK2的蛋白表达来抑制CAFs的糖酵解。 展开更多
关键词 癌相关成纤维细胞 miR-181 己糖激酶2 糖酵解
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