目的观察环状RNA 0006750(circ_0006750)是否通过靶向调控微小RNA-876-3p(miR-876-3p)影响脓毒性相关急性肾损伤(SAKI)的发展。方法取人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK2),分别加入0、2.5、5、10μg/mL的LPS培养24 h,构建SAKI模型,采用实时...目的观察环状RNA 0006750(circ_0006750)是否通过靶向调控微小RNA-876-3p(miR-876-3p)影响脓毒性相关急性肾损伤(SAKI)的发展。方法取人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK2),分别加入0、2.5、5、10μg/mL的LPS培养24 h,构建SAKI模型,采用实时荧光定量PCR法测算各浓度干预细胞circ_0006750、miR-876-3p,采用Spearman相关性分析circ_0006750与miR-876-3p相关性。另取10μg/mL LPS诱导的SAKI模型细胞分为6组,分别转染sh-NC载体(干扰对照组)、sh-circ_0006750载体(circ_0006750干扰组)、sh-circ_0006750载体+miR-876-3p抑制物(circ_0006750和miR-876-3p联合干扰组)、NC-OE载体(过表达对照组)、circ_0006750-OE载体(circ_0006750过表达组)、circ_0006750-OE载体+miR-876-3p模拟物(circ_0006750和miR-876-3p联合过表达组),于培养24、48和72 h时采用CCK-8法观察各组细胞增殖情况,采用流式细胞仪观察各组细胞凋亡情况,检测各组细胞检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、活性氧(ROS)及丙二醛(MDA)。分别采用荧光素酶报告基因试验和RNA pull-down试验,验证HK2细胞circ_0006750与miR-876-3p的靶向关系。结果随着LPS浓度增加,HK2细胞circ_0006750相对表达量下调、miR-876-3p相对表达量增加(P均<0.05);SAKI模型中circ_0006750与miR-876-3p的表达呈负相关(r=-0.795,P=0.015)。与干扰对照组相比,circ_0006750干扰组培养24、48、72 h OD值降低,细胞凋亡率增加,细胞TNF-α、IL-1β、IL-6、ROS及MDA的含量升高(P均<0.05);与circ_0006750干扰组相比,circ_0006750和miR-876-3p联合干扰组培养24、48、72 h OD值升高,细胞凋亡率下降,细胞TNF-α、IL-1β、IL-6、ROS及MDA的含量降低(P均<0.05);与过表达对照组相比,circ_0006750过表达组培养24、48、72 h OD值升高,细胞凋亡率下降,细胞TNF-α、IL-1β、IL-6、ROS及MDA的含量降低(P均<0.05);与circ_0006750过表达组相比,circ_0006750和miR-876-3p联合过表达组培养24、48、72 h OD值下降,细胞凋亡率增加,细胞TNF-α、IL-1β、IL-6、ROS及MDA的含量升高(P均<0.05)。circ_0006750通过海绵吸附作用直接结合并抑制miR-876-3p表达。结论circ_0006750可能通过靶向miR-876-3p促进HK-2细胞增殖,抑制细胞凋亡、炎症反应和氧化应激,从而延缓SAKI的进展。展开更多
目的探讨脓毒症患儿肠道菌群多样性变化特征及其与病情程度的相关性。方法选取本院重症医学一科收治的符合脓毒症诊断的患儿15例为研究对象,选择同期入住儿童重症监护病房(pediatric intensive care unit,PICU)的感染但非脓毒症患儿28...目的探讨脓毒症患儿肠道菌群多样性变化特征及其与病情程度的相关性。方法选取本院重症医学一科收治的符合脓毒症诊断的患儿15例为研究对象,选择同期入住儿童重症监护病房(pediatric intensive care unit,PICU)的感染但非脓毒症患儿28例为对照组。收集患儿入院第1天的粪便,提取大便中菌群DNA,通过16S rDNA基因进行扩增,经Illumina平台测序,对测序结果进行物种注释、多样性及物种差异分析。记录患儿死亡风险评分(pediatric risk of mortality scoreⅢ,PRISMⅢ)和危重症评分(pediatric critical illness score,PCIS)。将2组肠道菌群构成进行对比,并与病情评分进行相关性分析。结果脓毒症组PCIS评分[78(8)分]低于非脓毒症组[90(12)分],PRISMⅢ评分[16(16)分]高于非脓毒症组[12(9)分](P<0.05)。2组大便样本测序共测得1489022条有效序列。脓毒症组患儿肠道菌群丰度指数[Ace指数(99.458±38.948)、Chao指数(99.400±38.943)]、肠道菌群多样性指数[Shannon指数(3.647±1.411)]均低于非脓毒症组[Ace指数(107.879±25.242)、Chao指数(107.893±25.238)、Shannon指数(4.125±1.160)]。主成分分析显示脓毒症组和非脓毒症组2组菌群分布呈现组内相对集中,组间相对分离,2组大便样本菌群结构差异有统计学意义(P<0.05)。2组肠道优势菌群结构在门、纲、属水平相比差异均有统计学意义(P<0.05)。在门、纲水平上,酸杆菌,嗜盐杆菌与PRISMⅢ评分呈正相关,与PCIS评分呈负相关(P<0.05)。结论脓毒症患儿肠道菌群多样性和丰度均较非脓毒症患儿降低。脓毒症组肠球菌比例明显高于非脓毒症组,致病菌比例明显增加。肠道菌群失衡与病情严重程度具有相关性。展开更多
文摘目的观察环状RNA 0006750(circ_0006750)是否通过靶向调控微小RNA-876-3p(miR-876-3p)影响脓毒性相关急性肾损伤(SAKI)的发展。方法取人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK2),分别加入0、2.5、5、10μg/mL的LPS培养24 h,构建SAKI模型,采用实时荧光定量PCR法测算各浓度干预细胞circ_0006750、miR-876-3p,采用Spearman相关性分析circ_0006750与miR-876-3p相关性。另取10μg/mL LPS诱导的SAKI模型细胞分为6组,分别转染sh-NC载体(干扰对照组)、sh-circ_0006750载体(circ_0006750干扰组)、sh-circ_0006750载体+miR-876-3p抑制物(circ_0006750和miR-876-3p联合干扰组)、NC-OE载体(过表达对照组)、circ_0006750-OE载体(circ_0006750过表达组)、circ_0006750-OE载体+miR-876-3p模拟物(circ_0006750和miR-876-3p联合过表达组),于培养24、48和72 h时采用CCK-8法观察各组细胞增殖情况,采用流式细胞仪观察各组细胞凋亡情况,检测各组细胞检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、活性氧(ROS)及丙二醛(MDA)。分别采用荧光素酶报告基因试验和RNA pull-down试验,验证HK2细胞circ_0006750与miR-876-3p的靶向关系。结果随着LPS浓度增加,HK2细胞circ_0006750相对表达量下调、miR-876-3p相对表达量增加(P均<0.05);SAKI模型中circ_0006750与miR-876-3p的表达呈负相关(r=-0.795,P=0.015)。与干扰对照组相比,circ_0006750干扰组培养24、48、72 h OD值降低,细胞凋亡率增加,细胞TNF-α、IL-1β、IL-6、ROS及MDA的含量升高(P均<0.05);与circ_0006750干扰组相比,circ_0006750和miR-876-3p联合干扰组培养24、48、72 h OD值升高,细胞凋亡率下降,细胞TNF-α、IL-1β、IL-6、ROS及MDA的含量降低(P均<0.05);与过表达对照组相比,circ_0006750过表达组培养24、48、72 h OD值升高,细胞凋亡率下降,细胞TNF-α、IL-1β、IL-6、ROS及MDA的含量降低(P均<0.05);与circ_0006750过表达组相比,circ_0006750和miR-876-3p联合过表达组培养24、48、72 h OD值下降,细胞凋亡率增加,细胞TNF-α、IL-1β、IL-6、ROS及MDA的含量升高(P均<0.05)。circ_0006750通过海绵吸附作用直接结合并抑制miR-876-3p表达。结论circ_0006750可能通过靶向miR-876-3p促进HK-2细胞增殖,抑制细胞凋亡、炎症反应和氧化应激,从而延缓SAKI的进展。
