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miR-182启动子甲基化特异性PCR快速鉴别急性髓细胞白血病的方法建立及应用
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作者 蔡悦 孟辰 +1 位作者 高申孟 邢冲云 《温州医科大学学报》 2026年第3期202-208,共7页
目的:探讨建立一种基于miR-182启动子的甲基化特异性PCR(MSP)方法,用于快速准确区别急性髓细胞白血病(AML)和正常对照细胞。方法:提取62例来自温州医科大学附属第一医院的AML患者骨髓细胞DNA作为AML组,同时提取20例健康捐献者骨髓细胞DN... 目的:探讨建立一种基于miR-182启动子的甲基化特异性PCR(MSP)方法,用于快速准确区别急性髓细胞白血病(AML)和正常对照细胞。方法:提取62例来自温州医科大学附属第一医院的AML患者骨髓细胞DNA作为AML组,同时提取20例健康捐献者骨髓细胞DNA作为正常对照细胞组。采用亚硫酸氢盐法对DNA进行转化。通过MethylTarget™方法初步检测AML组和正常对照组细胞miR-182启动子甲基化水平。进一步通过T-A克隆及测序方法分析AML患者和正常对照细胞miR-182启动子水平。通过以SYBR Green为基础的MSP检测AML和正常对照细胞miR-182启动子甲基化率,并分析该方法在鉴别诊断AML和正常对照细胞中的特异度和灵敏度。结果:通过MethylTarget™方法发现30例AML细胞平均甲基化率为30.5%,12例正常对照细胞平均甲基化率为9.1%,两者差异具有统计学意义(P<0.05)。对两例miR-182启动子高甲基化的AML和两例对照细胞进行T-A克隆后测序,发现两例AML细胞平均甲基化率为97.3%,正常对照细胞平均甲基化率为3.5%,两者差异具有统计学意义(P<0.05)。通过MSP方法检测62例AML和20例正常对照细胞miR-182启动子和内参基因(β-actin)的甲基化水平。以ΔCt(β-actin Ct值-miR-182启动子Ct值)为标准值区别AML和正常对照细胞。ROC曲线分析结果显示,MSP区别AML和正常对照细胞的灵敏度为96.8%,特异度为85.0%,AUC为0.966,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:以SYBR Green为基础的miR-182启动子MSP可用于AML细胞与正常对照细胞的快速、准确鉴别诊断。 展开更多
关键词 急性髓细胞白血病 DNA甲基化 甲基化特异PCR
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