目的观察吡非尼酮对大鼠心肌纤维化的作用,并探讨其机制。方法选取8周龄SPF级雄性SD大鼠24只,构建大鼠心房纤维化模型,随机分为假手术组、模型组、吡非尼酮低剂量组和吡非尼酮高剂量组,每组6只。假手术组和模型组分别经尾静脉注射生理...目的观察吡非尼酮对大鼠心肌纤维化的作用,并探讨其机制。方法选取8周龄SPF级雄性SD大鼠24只,构建大鼠心房纤维化模型,随机分为假手术组、模型组、吡非尼酮低剂量组和吡非尼酮高剂量组,每组6只。假手术组和模型组分别经尾静脉注射生理盐水和异丙肾上腺素,吡非尼酮低剂量组和吡非尼酮高剂量组在注射异丙肾上腺素的基础上分别灌胃不同剂量的吡非尼酮。Masson染色检测心肌纤维化程度,免疫组织化学染色检测胶原组织Ⅰ型(Collogen-1)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)炎性小体、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(cysteinyl aspartate-specific proteinase-1,Caspase-1)的表达,Western blot检测Collogen-1和心房消皮素D(gasdermin D,GSDMD)的表达。结果与假手术组比较,模型组心肌纤维化改变显著,Collogen-1、NLRP3、Caspase-1和GSDMD表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,吡非尼酮低剂量组和吡非尼酮高剂量组心肌纤维化程度显著减轻,Collogen-1、NLRP3、Caspase-1和GSDMD表达显著降低,差异有统计学意义[(8.14±1.40)%,(6.56±0.75)%vs(22.15±2.57)%,P<0.05;0.14±0.03 vs 0.33±0.05,0.42±0.13,P<0.05;(10.34±1.40)%,(10.33±3.40)%vs(23.22±1.99)%,P<0.05;(15.67±0.56)%,(17.33±0.78)%vs(22.87±1.92)%,P<0.05;0.43±0.06,0.46±0.11 vs 0.65±0.03,P<0.05]。结论吡非尼酮通过NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号轴抑制心肌细胞焦亡,减轻心肌纤维化。展开更多
目的:探讨转录因子腺病毒E4启动子结合蛋白(adenovirus E4 promoter-binding protein,E4BP4)通过腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)-转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1/SMAD...目的:探讨转录因子腺病毒E4启动子结合蛋白(adenovirus E4 promoter-binding protein,E4BP4)通过腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)-转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1/SMAD同源物3(Smad homolog 3,SMAD3)通路在调控病理性心肌纤维化的作用。方法:建立小鼠心脏纤维化模型,分别于模型组和假手术组中检测E4BP4的表达差异。分离和培养原代心脏成纤维细胞,血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)刺激增殖活化,分别转染E4BP4过表达质粒(Ang Ⅱ+E4BP4组)、E4BP4干扰质粒(Ang Ⅱ+siE4BP4组)、Ang Ⅱ组和未经Ang Ⅱ处理的对照组。免疫荧光检测α-肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)荧光强度,细胞增殖检测试剂盒测定细胞活力,聚合酶链式反应检测E4BP4、α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白(collagen type Ⅰ,Collagen Ⅰ)和Ⅲ型胶原蛋白(collagen type Ⅲ,Collagen Ⅲ)的表达,蛋白质印迹检测TGF-β1、AMPK和SMAD3的蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组心肌纤维化程度(38.46±1.21 vs. 3.39±0.39,t=-78.564,P=0.000)、E4BP4蛋白表达量(0.96±0.03 vs. 0.75±0.03,t=-11.480,P=0.000)均明显增加。体外实验发现,与Ang Ⅱ+E4BP4组比较,Ang Ⅱ+siE4BP4组在平均荧光强度(0.05±0.01 vs. 0.42±0.03,F=677.591,P=0.000)、细胞活力(91.30±2.39vs.123.74±2.60,F=132.696,P=0.000)、α-SMA(1.26±0.09vs.3.59±0.86,F=52.274,P=0.000)、Collagen Ⅰ(1.16±0.11vs.3.79±0.89,F=55.336,P=0.000)、Collagen Ⅲ(1.23±0.13 vs. 2.92±0.36,F=119.929,P=0.000)、TGF-β1(0.66±0.04 vs. 0.96±0.02,F=142.954,P=0.000)和p-SMAD3/SMAD3(0.81±0.03 vs. 1.37±0.02,F=739.609,P=0.000)的水平明显降低,而p-AMPK/AMPK的表达量在Ang Ⅱ+siE4BP4组明显高于Ang Ⅱ+E4BP4组(0.89±0.01 vs. 0.58±0.02,F=284.541,P=0.000)。结论:E4BP4是纤维化调控的关键因子,抑制其表达可通过激活AMPK进而抑制TGF-β1/SMAD3通路发挥抗纤维化作用。展开更多
文摘目的观察吡非尼酮对大鼠心肌纤维化的作用,并探讨其机制。方法选取8周龄SPF级雄性SD大鼠24只,构建大鼠心房纤维化模型,随机分为假手术组、模型组、吡非尼酮低剂量组和吡非尼酮高剂量组,每组6只。假手术组和模型组分别经尾静脉注射生理盐水和异丙肾上腺素,吡非尼酮低剂量组和吡非尼酮高剂量组在注射异丙肾上腺素的基础上分别灌胃不同剂量的吡非尼酮。Masson染色检测心肌纤维化程度,免疫组织化学染色检测胶原组织Ⅰ型(Collogen-1)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)炎性小体、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(cysteinyl aspartate-specific proteinase-1,Caspase-1)的表达,Western blot检测Collogen-1和心房消皮素D(gasdermin D,GSDMD)的表达。结果与假手术组比较,模型组心肌纤维化改变显著,Collogen-1、NLRP3、Caspase-1和GSDMD表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,吡非尼酮低剂量组和吡非尼酮高剂量组心肌纤维化程度显著减轻,Collogen-1、NLRP3、Caspase-1和GSDMD表达显著降低,差异有统计学意义[(8.14±1.40)%,(6.56±0.75)%vs(22.15±2.57)%,P<0.05;0.14±0.03 vs 0.33±0.05,0.42±0.13,P<0.05;(10.34±1.40)%,(10.33±3.40)%vs(23.22±1.99)%,P<0.05;(15.67±0.56)%,(17.33±0.78)%vs(22.87±1.92)%,P<0.05;0.43±0.06,0.46±0.11 vs 0.65±0.03,P<0.05]。结论吡非尼酮通过NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号轴抑制心肌细胞焦亡,减轻心肌纤维化。
文摘目的:探讨转录因子腺病毒E4启动子结合蛋白(adenovirus E4 promoter-binding protein,E4BP4)通过腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)-转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1/SMAD同源物3(Smad homolog 3,SMAD3)通路在调控病理性心肌纤维化的作用。方法:建立小鼠心脏纤维化模型,分别于模型组和假手术组中检测E4BP4的表达差异。分离和培养原代心脏成纤维细胞,血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)刺激增殖活化,分别转染E4BP4过表达质粒(Ang Ⅱ+E4BP4组)、E4BP4干扰质粒(Ang Ⅱ+siE4BP4组)、Ang Ⅱ组和未经Ang Ⅱ处理的对照组。免疫荧光检测α-肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)荧光强度,细胞增殖检测试剂盒测定细胞活力,聚合酶链式反应检测E4BP4、α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白(collagen type Ⅰ,Collagen Ⅰ)和Ⅲ型胶原蛋白(collagen type Ⅲ,Collagen Ⅲ)的表达,蛋白质印迹检测TGF-β1、AMPK和SMAD3的蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组心肌纤维化程度(38.46±1.21 vs. 3.39±0.39,t=-78.564,P=0.000)、E4BP4蛋白表达量(0.96±0.03 vs. 0.75±0.03,t=-11.480,P=0.000)均明显增加。体外实验发现,与Ang Ⅱ+E4BP4组比较,Ang Ⅱ+siE4BP4组在平均荧光强度(0.05±0.01 vs. 0.42±0.03,F=677.591,P=0.000)、细胞活力(91.30±2.39vs.123.74±2.60,F=132.696,P=0.000)、α-SMA(1.26±0.09vs.3.59±0.86,F=52.274,P=0.000)、Collagen Ⅰ(1.16±0.11vs.3.79±0.89,F=55.336,P=0.000)、Collagen Ⅲ(1.23±0.13 vs. 2.92±0.36,F=119.929,P=0.000)、TGF-β1(0.66±0.04 vs. 0.96±0.02,F=142.954,P=0.000)和p-SMAD3/SMAD3(0.81±0.03 vs. 1.37±0.02,F=739.609,P=0.000)的水平明显降低,而p-AMPK/AMPK的表达量在Ang Ⅱ+siE4BP4组明显高于Ang Ⅱ+E4BP4组(0.89±0.01 vs. 0.58±0.02,F=284.541,P=0.000)。结论:E4BP4是纤维化调控的关键因子,抑制其表达可通过激活AMPK进而抑制TGF-β1/SMAD3通路发挥抗纤维化作用。
