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人破骨细胞的体外培养及鉴定 被引量:4
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作者 刘水涛 雷鸣 +3 位作者 安佰京 杨军 张鹏礼 邢更彦 《武警医学》 CAS 2011年第5期381-384,共4页
目的探索人破骨细胞的体外培养及鉴定方法 ,为各类试验研究提供大量高活性破骨细胞。方法分离骨髓血得到单个核细胞,用不同培养液、诱导剂在不同浓度下培养破骨细胞,通过TRAP染色鉴定破骨细胞形态,ELISA法检测特异性蛋白表达水平,扫描... 目的探索人破骨细胞的体外培养及鉴定方法 ,为各类试验研究提供大量高活性破骨细胞。方法分离骨髓血得到单个核细胞,用不同培养液、诱导剂在不同浓度下培养破骨细胞,通过TRAP染色鉴定破骨细胞形态,ELISA法检测特异性蛋白表达水平,扫描电镜分析骨片骨陷窝面积。结果用α-MEM培养液,10^(-7)mmol/L浓度的1,25(OH)_2VD_3或50ng/ml浓度的RANKL和30ng/ml的M-CSF作为诱导剂,所培养的破骨细胞多核、特异性蛋白表达水平高、蚀骨能力强。结论 用DMEM培养液和α-MEM培养液培养均是一种能在体外诱导生成大量人破骨细胞的方法。同时,建议采用1,25(OH)_2VD_3作为诱导剂。 展开更多
关键词 人破骨细胞 细胞培养 TRAP染色
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Raw264.7细胞向破骨细胞分化诱导培养体系的改良 被引量:2
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作者 李新 张舒岩 +5 位作者 杨立彬 李冉 蒋然然 陈治光 李树蕾 李树红 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期1114-1118,I0006,共6页
目的:通过改良细胞培养方案建立体外诱导Raw264.7细胞分化形成成熟破骨细胞(OC)的高效培养体系。方法:向Raw264.7细胞培养液α-MEM中添加50μg·L-1 M-CSF、100μg·L-1 RANKL和1×10-8 mol·L-1 1α,25-(OH)2D3,于5%CO... 目的:通过改良细胞培养方案建立体外诱导Raw264.7细胞分化形成成熟破骨细胞(OC)的高效培养体系。方法:向Raw264.7细胞培养液α-MEM中添加50μg·L-1 M-CSF、100μg·L-1 RANKL和1×10-8 mol·L-1 1α,25-(OH)2D3,于5%CO2、37℃孵箱中培养12d,每3d换液1次,每次换液前对细胞进行短暂消化。倒置显微镜下观察细胞形态变化,并利用HE染色、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、FITCphalloidin染色和免疫荧光染色鉴定OC是否成熟并具有吞噬功能。结果:通过改良培养方法,在诱导过程中培养孔内的大部分区域始终保持单层细胞的生长状态。镜下观察和HE染色,诱导第12天时OC胞体覆盖培养面积的70%;FITC-phalloidin染色,伴随着OC成熟,伪足内出现的束状伪足小体逐渐变为环形,最终融合带状肌动蛋白环环绕在胞质周围;免疫荧光染色,诱导12d后OC表达的降钙素受体(CTR)较前体细胞显著增加,TRAP染色显示OC胞浆内呈现大量红色颗粒。提示获得的OC成熟并具有吞噬功能。结论:本实验通过改良培养方法,联合应用细胞因子50μg·L-1 M-CSF、100μg·L-1 RANKL和1×10-8 mol·L-1 1α,25-(OH)2D3建立了体外诱导Raw264.7细胞分化形成成熟OC的高效培养体系。 展开更多
关键词 Raw 264.7细胞 破骨细胞 巨噬细胞集落刺激因子 核因子ΚB受体活化因子配体 1.25二羟基 维生素D3
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