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人破骨细胞的体外培养及鉴定
被引量:
4
1
作者
刘水涛
雷鸣
+3 位作者
安佰京
杨军
张鹏礼
邢更彦
《武警医学》
CAS
2011年第5期381-384,共4页
目的探索人破骨细胞的体外培养及鉴定方法 ,为各类试验研究提供大量高活性破骨细胞。方法分离骨髓血得到单个核细胞,用不同培养液、诱导剂在不同浓度下培养破骨细胞,通过TRAP染色鉴定破骨细胞形态,ELISA法检测特异性蛋白表达水平,扫描...
目的探索人破骨细胞的体外培养及鉴定方法 ,为各类试验研究提供大量高活性破骨细胞。方法分离骨髓血得到单个核细胞,用不同培养液、诱导剂在不同浓度下培养破骨细胞,通过TRAP染色鉴定破骨细胞形态,ELISA法检测特异性蛋白表达水平,扫描电镜分析骨片骨陷窝面积。结果用α-MEM培养液,10^(-7)mmol/L浓度的1,25(OH)_2VD_3或50ng/ml浓度的RANKL和30ng/ml的M-CSF作为诱导剂,所培养的破骨细胞多核、特异性蛋白表达水平高、蚀骨能力强。结论 用DMEM培养液和α-MEM培养液培养均是一种能在体外诱导生成大量人破骨细胞的方法。同时,建议采用1,25(OH)_2VD_3作为诱导剂。
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关键词
人破骨细胞
细胞培养
TRAP染色
暂未订购
Raw264.7细胞向破骨细胞分化诱导培养体系的改良
被引量:
2
2
作者
李新
张舒岩
+5 位作者
杨立彬
李冉
蒋然然
陈治光
李树蕾
李树红
《吉林大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第5期1114-1118,I0006,共6页
目的:通过改良细胞培养方案建立体外诱导Raw264.7细胞分化形成成熟破骨细胞(OC)的高效培养体系。方法:向Raw264.7细胞培养液α-MEM中添加50μg·L-1 M-CSF、100μg·L-1 RANKL和1×10-8 mol·L-1 1α,25-(OH)2D3,于5%CO...
目的:通过改良细胞培养方案建立体外诱导Raw264.7细胞分化形成成熟破骨细胞(OC)的高效培养体系。方法:向Raw264.7细胞培养液α-MEM中添加50μg·L-1 M-CSF、100μg·L-1 RANKL和1×10-8 mol·L-1 1α,25-(OH)2D3,于5%CO2、37℃孵箱中培养12d,每3d换液1次,每次换液前对细胞进行短暂消化。倒置显微镜下观察细胞形态变化,并利用HE染色、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、FITCphalloidin染色和免疫荧光染色鉴定OC是否成熟并具有吞噬功能。结果:通过改良培养方法,在诱导过程中培养孔内的大部分区域始终保持单层细胞的生长状态。镜下观察和HE染色,诱导第12天时OC胞体覆盖培养面积的70%;FITC-phalloidin染色,伴随着OC成熟,伪足内出现的束状伪足小体逐渐变为环形,最终融合带状肌动蛋白环环绕在胞质周围;免疫荧光染色,诱导12d后OC表达的降钙素受体(CTR)较前体细胞显著增加,TRAP染色显示OC胞浆内呈现大量红色颗粒。提示获得的OC成熟并具有吞噬功能。结论:本实验通过改良培养方法,联合应用细胞因子50μg·L-1 M-CSF、100μg·L-1 RANKL和1×10-8 mol·L-1 1α,25-(OH)2D3建立了体外诱导Raw264.7细胞分化形成成熟OC的高效培养体系。
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关键词
Raw
264.7细胞
破骨细胞
巨噬细胞集落刺激因子
核因子ΚB受体活化因子配体
1.25二羟基
维生素D3
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职称材料
题名
人破骨细胞的体外培养及鉴定
被引量:
4
1
作者
刘水涛
雷鸣
安佰京
杨军
张鹏礼
邢更彦
机构
武警总医院骨科
河北大学附属医院
出处
《武警医学》
CAS
2011年第5期381-384,共4页
基金
武警总医院Ⅰ类课题(WZ 2009052)
文摘
目的探索人破骨细胞的体外培养及鉴定方法 ,为各类试验研究提供大量高活性破骨细胞。方法分离骨髓血得到单个核细胞,用不同培养液、诱导剂在不同浓度下培养破骨细胞,通过TRAP染色鉴定破骨细胞形态,ELISA法检测特异性蛋白表达水平,扫描电镜分析骨片骨陷窝面积。结果用α-MEM培养液,10^(-7)mmol/L浓度的1,25(OH)_2VD_3或50ng/ml浓度的RANKL和30ng/ml的M-CSF作为诱导剂,所培养的破骨细胞多核、特异性蛋白表达水平高、蚀骨能力强。结论 用DMEM培养液和α-MEM培养液培养均是一种能在体外诱导生成大量人破骨细胞的方法。同时,建议采用1,25(OH)_2VD_3作为诱导剂。
关键词
人破骨细胞
细胞培养
TRAP染色
Keywords
osteoclasts
cell cuhure
TRAP staining
分类号
R494.26 [医药卫生—康复医学]
暂未订购
题名
Raw264.7细胞向破骨细胞分化诱导培养体系的改良
被引量:
2
2
作者
李新
张舒岩
杨立彬
李冉
蒋然然
陈治光
李树蕾
李树红
机构
四川农业大学食品学院农产品加工及贮藏工程学系
吉林大学第一医院神经外科
吉林大学第一医院儿科
吉林大学基础医学院组织学与胚胎学系
出处
《吉林大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第5期1114-1118,I0006,共6页
基金
国家自然科学基金资助课题(31101249)
文摘
目的:通过改良细胞培养方案建立体外诱导Raw264.7细胞分化形成成熟破骨细胞(OC)的高效培养体系。方法:向Raw264.7细胞培养液α-MEM中添加50μg·L-1 M-CSF、100μg·L-1 RANKL和1×10-8 mol·L-1 1α,25-(OH)2D3,于5%CO2、37℃孵箱中培养12d,每3d换液1次,每次换液前对细胞进行短暂消化。倒置显微镜下观察细胞形态变化,并利用HE染色、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、FITCphalloidin染色和免疫荧光染色鉴定OC是否成熟并具有吞噬功能。结果:通过改良培养方法,在诱导过程中培养孔内的大部分区域始终保持单层细胞的生长状态。镜下观察和HE染色,诱导第12天时OC胞体覆盖培养面积的70%;FITC-phalloidin染色,伴随着OC成熟,伪足内出现的束状伪足小体逐渐变为环形,最终融合带状肌动蛋白环环绕在胞质周围;免疫荧光染色,诱导12d后OC表达的降钙素受体(CTR)较前体细胞显著增加,TRAP染色显示OC胞浆内呈现大量红色颗粒。提示获得的OC成熟并具有吞噬功能。结论:本实验通过改良培养方法,联合应用细胞因子50μg·L-1 M-CSF、100μg·L-1 RANKL和1×10-8 mol·L-1 1α,25-(OH)2D3建立了体外诱导Raw264.7细胞分化形成成熟OC的高效培养体系。
关键词
Raw
264.7细胞
破骨细胞
巨噬细胞集落刺激因子
核因子ΚB受体活化因子配体
1.25二羟基
维生素D3
Keywords
Raw264.7 cell
osteoelast
macrophage colony-stimulating factor
receptor activator for nuclearfactor-κB ligand
1α, 25-dihydroxyvitamin D3
分类号
R494.26 [医药卫生—康复医学]
Q813.1 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人破骨细胞的体外培养及鉴定
刘水涛
雷鸣
安佰京
杨军
张鹏礼
邢更彦
《武警医学》
CAS
2011
4
暂未订购
2
Raw264.7细胞向破骨细胞分化诱导培养体系的改良
李新
张舒岩
杨立彬
李冉
蒋然然
陈治光
李树蕾
李树红
《吉林大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2014
2
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