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Monogenic gene therapy for glaucoma and optic nerve injury
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作者 Chikako Harada Xiaoli Guo Takayuki Harada 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS 2025年第3期815-816,共2页
The prevalence of glaucoma, the second leading cause of global blindness, is increasing due to aging populations. In glaucoma, degeneration of the optic nerve and retinal ganglion cells(RGCs) causes visual field defec... The prevalence of glaucoma, the second leading cause of global blindness, is increasing due to aging populations. In glaucoma, degeneration of the optic nerve and retinal ganglion cells(RGCs) causes visual field defects and eventual blindness. 展开更多
关键词 VISUAL GLAUCOMA DEGENERATION
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内标多重荧光RT-PCR同时检测肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型 被引量:20
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作者 肖性龙 何雅青 +8 位作者 余以刚 杨洪 李惠芳 杨晓泉 张经纬 陈谷 刘冬梅 李小凤 吴晖 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期98-104,共7页
[目的]为对当前爆发的手足口病进行快速准确的检测。[方法]本研究建立了含内标的同时检测EV71和CA16的多重荧光RT-PCR方法,对该方法的特异性、灵敏度等进行评估,并对400多份临床样品进行了检测。[结果]实验结果表明,该检测方法特异... [目的]为对当前爆发的手足口病进行快速准确的检测。[方法]本研究建立了含内标的同时检测EV71和CA16的多重荧光RT-PCR方法,对该方法的特异性、灵敏度等进行评估,并对400多份临床样品进行了检测。[结果]实验结果表明,该检测方法特异性强,对10株EV71病毒、8株CA16病毒和25株其他人类病毒进行了检测,特异性为100%;该检测方法对EV71和CA16的检测灵敏度分别达到0.1 TCID50和1 TCID50;将0.1-104TCID50/mL EV71和CA16样本进行重复性实验,其变异系数分别为0.9%-2.0%和0.9%-2.3%。对400多份临床样品分别进行荧光RT-PCR检测和传统方法检测,结果显示,荧光RT-PCR对EV71和CA16的阳性检出率平均为46.1%和14.2%,比传统方法(34.5%和12.8%)的阳性检测率高。另外,实验数据显示,在粪便、直肠拭子、咽喉拭子样本中,PCR抑制物存在的比例为1.8%-3.4%,表明内标对监控PCR抑制物的存在具有重要作用。[结论]本方法能同时对EV71和CA16进行快速检测,并且灵敏度高,特异性好,由于加入了内标,能有效地监控假阴性的出现,适合于手足口病的临床检测。 展开更多
关键词 内标 多重荧光RT-PCR EV71 柯萨奇病毒A16型 检测
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重庆汉族人群HPA1-7、15多态性分布 被引量:19
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作者 毛伟 王芳 +4 位作者 王跃华 黄霞 宋正利 张蕾 程磊 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1422-1424,1426,共4页
目的了解重庆地区汉族人群人类血小板抗原(HPA)1-7、15抗原分布的多态性。方法采用PCR-SSO技术对重庆地区无血缘关系的血小板无偿捐献者进行HPA1-7、15 HPA基因分型。结果HPA各等位基因的频率分别为HPA-1a:0.995 3、HPA-1b:0.004 7;HPA-... 目的了解重庆地区汉族人群人类血小板抗原(HPA)1-7、15抗原分布的多态性。方法采用PCR-SSO技术对重庆地区无血缘关系的血小板无偿捐献者进行HPA1-7、15 HPA基因分型。结果HPA各等位基因的频率分别为HPA-1a:0.995 3、HPA-1b:0.004 7;HPA-2a:0.936 2、HPA-2b:0.063 8;HPA-3a:0.575 0、HPA-3b:0.425 0;HPA-4a:0.996 2、HPA-4b:0.003 8;HPA-5a:0.941 8、HPA-5b:0.058 2;HPA-6a:0.985 9、HPA-6b:0.014 1;HPA-7a:1.000 0、HPA-7b:0.000 0;HPA-15a:0.541 3、HPA-15b:0.458 7。结论重庆地区HPA基因频率呈现其自身的特点。应建立本地区的血小板供者分型数据库。 展开更多
关键词 人类血小板抗原 HPA 基因分型 基因频率 多态性
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中国弓形虫虫株529bp重复序列的PCR扩增、克隆及分析 被引量:15
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作者 宋慧群 张德林 +3 位作者 廖申权 翁亚彪 林瑞庆 朱兴全 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期2114-2118,共5页
【目的】首次对中国来源于不同宿主、不同地域的9个弓形虫虫株(ZS1人株、PY猪株、GY猪株、ZC猪株、NT猪株、ZS人株、SH人株、CN猪株、QHO绵羊株)以及国际标准强毒RH株之间在529bp重复序列的变异进行研究,从而为进一步的分子诊断和分子... 【目的】首次对中国来源于不同宿主、不同地域的9个弓形虫虫株(ZS1人株、PY猪株、GY猪株、ZC猪株、NT猪株、ZS人株、SH人株、CN猪株、QHO绵羊株)以及国际标准强毒RH株之间在529bp重复序列的变异进行研究,从而为进一步的分子诊断和分子遗传学研究以及弓形虫病的防制奠定基础。【方法】抽提基因组DNA后,用PCR方法对10个虫株的529bp重复序列进行扩增;扩增产物经纯化后克隆于pGEM-TEasy质粒载体,再经菌落PCR及酶切鉴定阳性克隆,然后对阳性克隆进行测序及序列分析。【结果】10个弓形虫虫株的529bp重复序列都不完全相同,它们之间的核苷酸序列变异范围为0.8%~2.9%。变异主要位于第32~55位碱基之间,这些碱基变异与虫株的宿主来源、地域来源及毒力之间没有相关性。【结论】529bp重复序列可作为遗传标记,用于弓形虫与其它寄生虫的种间鉴定,但不适合用于研究弓形虫的种内遗传变异。 展开更多
关键词 弓形虫 PCR 529bp重复序列 序列分析 遗传变异
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小麦根腐病菌索氏平脐蠕孢SYBR Green I实时荧光定量PCR检测技术研究 被引量:16
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作者 陈清清 孙炳剑 +2 位作者 袁虹霞 施艳 李洪连 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期690-696,共7页
由索氏平脐蠕孢Bipolaris sorokiniana引起的小麦根腐病,常和其他土传真菌病害混合发生,传统的症状鉴别方法很难区分,导致病害防控难度增加。为建立病菌实时荧光定量检测体系,根据ITS序列设计引物,筛选出1对特异性引物BS‐F/R,扩增片段... 由索氏平脐蠕孢Bipolaris sorokiniana引起的小麦根腐病,常和其他土传真菌病害混合发生,传统的症状鉴别方法很难区分,导致病害防控难度增加。为建立病菌实时荧光定量检测体系,根据ITS序列设计引物,筛选出1对特异性引物BS‐F/R,扩增片段大小为280bp。以菌丝DNA为标准品构建实时荧光定量标准曲线,并对其灵敏度、特异性、可重复性进行评价。结果表明,建立的实时荧光定量PCR检测方法速度快,灵敏度高,特异性强,重复性好。构建的荧光定量PCR标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,溶解曲线的吸收峰单一,扩增效率良好。利用该定量检测体系,可以检测出田间小麦样品中52.8fg/μL的病菌DNA。 展开更多
关键词 土传病害 菌丝DNA ITS序列 实时荧光定量PCR 小麦根腐病菌 定量检测
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改良多重聚合酶链反应检测Y染色体AZF微缺失 被引量:25
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作者 朱晓斌 郭安亮 +6 位作者 曹小蓉 刘勇 孙序序 姚见儿 王毅 王益鑫 李铮 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2006年第3期199-201,206,共4页
目的:对多重聚合酶链反应(PCR)优化改良,检测Y染色体无精子因子(AZF)区域微缺失。方法:实验组选择160例精子发生障碍患者,对照组90例为合格捐精者。按照欧洲男科协会和欧洲分子遗传实验质控网检测指南进行多重PCR,对Y染色体序列标签点... 目的:对多重聚合酶链反应(PCR)优化改良,检测Y染色体无精子因子(AZF)区域微缺失。方法:实验组选择160例精子发生障碍患者,对照组90例为合格捐精者。按照欧洲男科协会和欧洲分子遗传实验质控网检测指南进行多重PCR,对Y染色体序列标签点引物序列和PCR反应条件优化改良,筛查AZFa、b、c区域的微缺失。结果:采用改良多重PCR,160例生精障碍患者中发现AZF微缺失14例(8.75%),其中AZFc12例,AZFa+b+c1例,AZFb+c1例;对照组90例未发现微缺失;两组比较,差异有极显著性(P<0.001)。所有PCR产物电泳条带清晰,时间缩短至1h。结论:对欧洲男科协会和欧洲分子遗传实验质控网推荐的多重PCR技术优化改良,用于精子发生障碍患者的YqAZF区域筛查,结果可靠、快捷、重复性好。 展开更多
关键词 多重聚合酶链反应 无精子因子 Y染色体微缺失 质量控制
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多重实时PCR检测产毒素性霍乱弧菌和副溶血弧菌 被引量:20
7
作者 张蔚 潘劲草 +3 位作者 孟冬梅 于新芬 汪皓秋 郑伟 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期950-954,共5页
设计引物和探针,优化多重实时PCR条件,以同时检测霍乱弧菌霍乱毒素基因ctxA、副溶血弧菌种特异性基因gyrB和耐热肠毒素基因tdh。该多重实时PCR方法检测产毒素性的O1群(3株)和O139群(44株)霍乱弧菌菌株、不产毒素的O1群(12株)和O139群(6... 设计引物和探针,优化多重实时PCR条件,以同时检测霍乱弧菌霍乱毒素基因ctxA、副溶血弧菌种特异性基因gyrB和耐热肠毒素基因tdh。该多重实时PCR方法检测产毒素性的O1群(3株)和O139群(44株)霍乱弧菌菌株、不产毒素的O1群(12株)和O139群(6株)及非O1非O139群(7株)霍乱弧菌菌株的ctxA,阳性和阴性结果与普通PCR检测结果100%符合;检测副溶血弧菌种特异性gyrB,116株副溶血弧菌均阳性,而9株其它细菌和72株霍乱弧菌均阴性;检测tdh的阳性和阴性结果也与普通PCR结果完全一致。另外还建立了检测副溶血弧菌菌株trh1和trh2的单重实时PCR方法。 展开更多
关键词 多重实时PCR 毒力基因 霍乱弧菌 副溶血弧菌
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全国10所教学医院产ESBLs和质粒AmpC酶大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌的研究 被引量:31
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作者 孙宏莉 宁永忠 +2 位作者 廖康 王辉 朱任媛 《中国感染与化疗杂志》 CAS 2007年第5期323-329,共7页
目的研究全国10所教学医院临床分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中同时产ESBLs及质粒型AmpC酶菌株的比率及其基因型特点,比较不同地区间的差别。方法收集来自中国不同地区的10所教学医院2003年度产ESBLs的大肠埃希菌90株和肺炎克雷伯菌61... 目的研究全国10所教学医院临床分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中同时产ESBLs及质粒型AmpC酶菌株的比率及其基因型特点,比较不同地区间的差别。方法收集来自中国不同地区的10所教学医院2003年度产ESBLs的大肠埃希菌90株和肺炎克雷伯菌61株,用等电聚焦电泳测定β内酰胺酶的等电点;接合试验证实酶基因有无可转移性;采用多重聚合酶链反应(MPCR)及序列分析确定质粒AmpC酶的基因型。结果武汉、南京、济南等地产ESBLs大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌所占比率相近,均在50%左右;北京产ESBLs大肠埃希菌所占比率低于肺炎克雷伯菌;其他各城市产ESBLs大肠埃希菌所占比率均略高于肺炎克雷伯菌。在产ESBLs菌株中24.4%大肠埃希菌和19.4%肺炎克雷伯菌对头孢西丁耐药。除沈阳无对头孢西丁耐药菌株外,其他医院均存在对头孢西丁耐药株。产ESBLs菌株基因型主要为CTX—M型,其中以CTX-M-9组最为常见,其次为CTX-M-1组。在同时产ESBLs和AmpC的菌株中,肺炎克雷伯菌多于大肠埃希菌,且均为CTX-M/ DHA-1型(多为CTX-M-9/DHA-1型)。3株同时产ESBLs和AmpC肺炎克雷伯菌的接合子PCR结果与其供体菌完全相同。结论参与本研究的各所教学医院产ESBLs菌株基因型主要为CTX-M-9组,在同时产ESBLs和AmpC酶的菌株中,肺炎克雷伯菌多于大肠埃希菌,多为CTX-M-9/DHA-1型,该酶可通过质粒传播。 展开更多
关键词 超广谱Β内酰胺酶 质粒型AMPC酶 CTX-M-9组酶 DHA-1型酶
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流感嗜血杆菌氨苄西林耐药基因研究 被引量:17
9
作者 张泓 吴文娟 +3 位作者 李万华 孔青 盖晶 陆权 《中国感染与化疗杂志》 CAS 2006年第6期377-379,共3页
目的明确我院分离的流感嗜血杆菌(HI)氨苄西林耐药的基因。方法用 E 试验测定我院上呼吸道感染患儿鼻咽部分离300株 HI 对氨苄西林耐药情况;以 Nitrocefin 纸片检测β内酰胺酶;PCR 扩增及序列分析确定产酶株的基因型。结果31株氨苄西林... 目的明确我院分离的流感嗜血杆菌(HI)氨苄西林耐药的基因。方法用 E 试验测定我院上呼吸道感染患儿鼻咽部分离300株 HI 对氨苄西林耐药情况;以 Nitrocefin 纸片检测β内酰胺酶;PCR 扩增及序列分析确定产酶株的基因型。结果31株氨苄西林耐药株均产β内酰胺酶,占总菌株数11%(32/300),PCR 检测出 TEM-1 31株,ROB-1 1株。结论产β内酰胺酶是 HI 对氨苄西林耐药的重要机制,TEM-1型是β内酰胺酶主要基因型,ROB-1型β内酰胺酶也首次被检出,值得关注和长期监测。 展开更多
关键词 流感嗜血杆菌 氨苄西林 耐药性 Β内酰胺酶 TEM-1基因 ROB-1基因
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应用基因芯片分析结核分枝杆菌常见耐药基因型的研究 被引量:29
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作者 吴雪琼 张琼 +9 位作者 张俊仙 梁建琴 鲁红丽 李洪敏 张洪恩 陆阳 荣利 吕翠环 张广宇 邢婉丽 《中国防痨杂志》 CAS 2006年第1期4-10,共7页
目的应用基因芯片快速检测结核分枝杆菌耐药基因型,建立一种新的分子药敏试验方法。方法以传统药敏试验和PCR-直接测序方法为对照,应用基因芯片快速检测157株结核分枝杆菌临床分离株异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)和乙胺丁醇(EMB... 目的应用基因芯片快速检测结核分枝杆菌耐药基因型,建立一种新的分子药敏试验方法。方法以传统药敏试验和PCR-直接测序方法为对照,应用基因芯片快速检测157株结核分枝杆菌临床分离株异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)和乙胺丁醇(EMB)耐药基因(katGr、poB、rp-sLr、rs和embB)的带荧光素标记的PCR产物。结果PCR-直接测序和基因芯片检测36株结核分枝杆菌药物敏感株的5种耐药基因均为野生型。121株结核分枝杆菌耐药分离株中,56株耐INH分离株,katG基因突变率为62.5%,其中katG缺失率为7.5%,315位密码子突变率为55.4%,279位密码子突变率为1.8%;104株耐RFP株,rpoB基因突变率为94.2%,最常见的突变位点为531位和526位密码子(突变率分别为60.6%、15.4%),双位点突变率为5.8%,还发现511、513、515、516、517、518和533位密码子突变;62株耐SM分离株,rpsL和rrs总突变率为88.7%(两者分别为82.3%、6.5%),rpsL突变位于43位和88位密码子(突变率分别为77.4%、4.8%),rrs突变位于513位和516位碱基(突变分别为4.8%、1.6%);57株为耐EMB株,embB基因突变率为61.4%,均为306位密码子突变,最常见的突变为ATG→GTG或ATA(突变率分别为35.1%、15.8%),还发现306位密码子ATG→ATC、ATT和CTG突变。通过基因芯片检出的突变与基因测序结果一致。结论应用基因芯片可分析大多数结核分枝杆菌耐药基因型,弥补传统药敏试验方法的不足,指导临床治疗。 展开更多
关键词 基因芯片 耐药基因型 聚合酶链反应 分枝杆菌 结核
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多重RT-PCR用于临床检测三种胃肠炎病毒的研究 被引量:16
11
作者 寇晓霞 吴清平 +2 位作者 王大鹏 郭伟鹏 邓梅清 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期401-405,共5页
轮状病毒、诺瓦克病毒和星状病毒是引起病毒性胃肠炎的主要病原因子。研究采用JV12/JV13、P1/P2和Mon340/Mon348三对引物,建立了同时检测这3种病毒的多重RT-PCR技术,并应用于128份临床粪便样本的检测,检出轮状病毒62份(48.44%),诺瓦克病... 轮状病毒、诺瓦克病毒和星状病毒是引起病毒性胃肠炎的主要病原因子。研究采用JV12/JV13、P1/P2和Mon340/Mon348三对引物,建立了同时检测这3种病毒的多重RT-PCR技术,并应用于128份临床粪便样本的检测,检出轮状病毒62份(48.44%),诺瓦克病毒8份(6.25%),星状病毒11份(8.59%)。在灵敏度试验中,轮状病毒的检测灵敏度为5pg/mL、诺瓦克病毒和星状病毒的检测灵敏度均为50pg/mL。该研究所建立3种常见胃肠炎病毒的多重RT-PCR方法具有特异性强、灵敏度高的特点,可用于临床病原诊断和溯源。 展开更多
关键词 诺瓦克病毒 轮状病毒 星状病毒 多重RT-PCR
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实时荧光定量PCR检测肺炎支原体DNA在小儿肺炎诊断中的应用价值 被引量:25
12
作者 杨文青 吕晓丽 +3 位作者 李锐成 阎琳 邹菊贤 张惠中 《国际检验医学杂志》 CAS 2014年第4期416-418,共3页
目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测肺炎支原体(MP)DNA在小儿肺炎诊断中的应用价值。方法采用FQ-PCR对该院742例儿科住院患儿的血清、痰液、胸腔积液、支气管灌洗液、肺泡灌洗液临床标本进行MPDNA的定量检测。结果742例... 目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测肺炎支原体(MP)DNA在小儿肺炎诊断中的应用价值。方法采用FQ-PCR对该院742例儿科住院患儿的血清、痰液、胸腔积液、支气管灌洗液、肺泡灌洗液临床标本进行MPDNA的定量检测。结果742例患儿中MPDNA检测总阳性率为40.3%(299/742);男、女性患儿MPDNA阳性率的差异无统计学意义(P〉0.05);4~〈7岁、7~〈10岁、10~〈13岁、13~16岁组,MPDNA阳性率均高于0~〈4岁组(P〈O.05);不同种类标本的阳性率不同,由高到低依次为支气管灌洗液(96.5%)、肺泡灌洗液(83.7%)、痰液(71.7%)、胸腔积液(38.9%)、血清(6.1%)。结论4岁及4岁以上儿童易感染肺炎支原体,且随着年龄增长感染率逐渐增高;支气管灌洗液标本的MPDNA阳性率较高;FQ-PCR法检测MP DNA用于肺炎支原体感染的诊断有一定价值。 展开更多
关键词 支原体 肺炎 聚合酶链反应 儿童
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分子信标荧光定量PCR快速检测结核分枝杆菌方法的初步研究 被引量:11
13
作者 徐亚军 周子人 +2 位作者 林琳 刘渠 刘衡川 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期661-663,共3页
目的建立分子信标荧光定量PCR快速检测结核杆菌方法,为临床结核病的诊断提供特异性强、灵敏度高、可标准化、自动化的检测方法。方法根据GenBank数据库公布的结核分枝杆菌IS6110基因的保守序列,设计引物与分子信标探针,建立结核分枝杆... 目的建立分子信标荧光定量PCR快速检测结核杆菌方法,为临床结核病的诊断提供特异性强、灵敏度高、可标准化、自动化的检测方法。方法根据GenBank数据库公布的结核分枝杆菌IS6110基因的保守序列,设计引物与分子信标探针,建立结核分枝杆菌荧光定量PCR检测方法;以10种细菌作对照分析该方法的特异性与灵敏度;应用已建立的方法检测结核分枝杆菌,评价其应用价值。结果所建立的分子信标荧光定量PCR检测10种细菌,只有结核分枝杆菌有荧光信号,与其他细菌无交叉反应,4拷贝/PCR反应体系的结核分枝杆菌都能有效检出。对100株结核分枝杆菌的检测结果为阳性,单一检测时间仅需2h。结论分子信标荧光定量PCR检测方法快速、灵敏度高、特异性强,可用于快速诊断结核病,为结核病的诊断与治疗提供新的检测手段。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 分子信标 荧光定量PCR IS6110 快速检测
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多位点测序分型技术在病原微生物分型鉴定中的应用 被引量:19
14
作者 刘金华 贺丹 +2 位作者 杨艳秋 张波 王丽 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期1188-1191,共4页
多位点测序分型(Multilocus sequence typing,MLST)技术是一种以核苷酸序列为基础的病原菌分型方法,它是高通量测序技术与成熟的群体遗传学相结合的产物。该方法简单易行,重复性强,可以通过国际互联网对某一致病菌株在全球范围内的传播... 多位点测序分型(Multilocus sequence typing,MLST)技术是一种以核苷酸序列为基础的病原菌分型方法,它是高通量测序技术与成熟的群体遗传学相结合的产物。该方法简单易行,重复性强,可以通过国际互联网对某一致病菌株在全球范围内的传播分布情况进行追踪监控。目前,MLST技术已被广泛应用于原核病原菌及一些真核病原菌(如真菌)的分型鉴定中。主要对MLST技术的原理及其在一些常见病原菌分型鉴定中的应用进行了简要的阐述。 展开更多
关键词 多位点测序分型 病原菌 分型鉴定
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乙肝病毒核心抗原单链抗体细胞内免疫抗乙肝病毒基因治疗研究 被引量:19
15
作者 陆荫英 王琳 +5 位作者 刘妍 于敏 李克 王业东 张玲霞 成军 《世界华人消化杂志》 CAS 2002年第7期765-769,共5页
目的:研究乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)人源单链抗体(ScFv)细胞内免疫抗乙型肝炎病毒(HBV)基因治疗的作用。方法:用噬菌体表面展示技术筛选特异性的HBcAg人源可变区单链抗体,聚合酶链反应(PCR)法和基因重组技术体外扩增HBcAg单链抗体基... 目的:研究乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)人源单链抗体(ScFv)细胞内免疫抗乙型肝炎病毒(HBV)基因治疗的作用。方法:用噬菌体表面展示技术筛选特异性的HBcAg人源可变区单链抗体,聚合酶链反应(PCR)法和基因重组技术体外扩增HBcAg单链抗体基因,并构建表达HBcAgScFv基因的重组逆转录病毒载体pLXSN-HBcAg,转染PA317细胞,逆转录PCR(RT-PCR)方法验证细胞培养液上清分泌的假病毒颗粒中HBcAg ScFv的表达;将假病毒颗粒感染2.2.15细胞,酶联免疫吸附法(ELISA)检测其上清HBsAg和HBeAg,定量检测HBV DNA。结果:成功筛选出HBcAg ScFv,PCR扩增出750bp的全基因,构建HBcAg ScFv基因的逆转录病毒载体,转染PA317细胞,在上清中检测出含HBcAg ScFv假病毒颗粒的存在,上清感染2.2.15细胞后第3、5、7、14天,HBsAg、HBeAg逐渐下降,到14d时HBsAg已变为阴性,DNA定量检测无明显变化。结论:HBcAg ScFV能成功地在逆转录病毒载体中表达,并有抑制HBsAg、HBeAg表达的作用。 展开更多
关键词 乙肝病毒核心抗原 单链抗体 细胞内免疫 抗乙肝病毒 基因治疗
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多重PCR检测食源金黄色葡萄球菌nuc、blaZ和mecA基因方法的建立与应用 被引量:14
16
作者 刘书亮 刘冬香 +1 位作者 贾仁勇 韩新锋 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期475-480,共6页
目的建立快速检测食源金黄色葡萄球菌(Sa)耐热核酸酶基因(nuc)、β-内酰胺酶基因(blaZ)和甲氧西林耐药基因(mecA)的多重PCR方法。方法根据GenBankSa的nuc、blaZ和mecA基因序列,设计3对特异性引物,建立鉴定Sa及分析Sa耐β-内酰胺类抗生... 目的建立快速检测食源金黄色葡萄球菌(Sa)耐热核酸酶基因(nuc)、β-内酰胺酶基因(blaZ)和甲氧西林耐药基因(mecA)的多重PCR方法。方法根据GenBankSa的nuc、blaZ和mecA基因序列,设计3对特异性引物,建立鉴定Sa及分析Sa耐β-内酰胺类抗生素三重PCR方法 ,并对79株食源Sa进行基因检测与表型比较。结果显示供试Sa中检出nuc、blaZ基因阳性率分别为97.47%、73.42%,mecA基因检出为阴性;nuc基因检出与其表型符合率达97.47%;而blaZ扩增结果与β-内酰胺酶试验、青霉素类敏感试验同时符合率为49.37%,前者与后两者符合率分别为60.76%和75.95%;mecA与耐甲氧西林表型符合率为100%;此次79株食源Sa中无耐甲氧西林Sa。结论该方法简便、快捷、准确,为食源Sa鉴定和耐药性分子分析提供了参考依据。 展开更多
关键词 多重PCR 金黄色葡萄球菌 动物性食品 鉴定 耐药性
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多重实时荧光PCR相对定量法快速诊断唐氏综合征 被引量:9
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作者 高斌 肖白 +10 位作者 邹起练 黄尚志 王立荣 钮淑兰 闫梅 雷箴 贾兴元 王战勇 袁海昕 吴燕 刘敬忠 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期934-938,共5页
为了建立一种基于多重实时荧光相对定量PCR技术并应用之于唐氏综合征分子诊断,选择21号染色体上唐氏综合征特异区域基因片段(DSCR3)为目的基因,以12号染色体上的磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)为参照基因,设计合成两对引物以及分别以不同... 为了建立一种基于多重实时荧光相对定量PCR技术并应用之于唐氏综合征分子诊断,选择21号染色体上唐氏综合征特异区域基因片段(DSCR3)为目的基因,以12号染色体上的磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)为参照基因,设计合成两对引物以及分别以不同荧光标记的TaqMan探针,在同一个反应管中进行扩增。以相对定量指标△CT值区分唐氏综合征患者与正常人。采用EB病毒转化技术,把唐氏综合征患者外周血B淋巴细胞转化成永生淋巴母细胞系作为标准品。通过优化反应条件,使得目的基因和参照基因的扩增效率基本一致,接近100%,模板浓度在3~300ng/μL范围内,△CT值的变异系数小于15%,浓度在30ng/μL时,变异系数最小(<10%),以该浓度的DNA作为模板进行批内和批间实验的△CT值重复性好,变异系数分别为9.8%和13.3%。运用建立的方法检测20例唐氏综合征患者的血标本和30例正常人的血标本,正常人△CT值范围是-1.90~-1.30,患者的△CT值范围是-2.95~-2.15,两组之间无交叉重叠,有明显差异(P<0.001)。唐氏综合征患者永生细胞系建系成功,染色体核型和DNA分析表明建系前后遗传是稳定的。因此,实时荧光定量PCR比较△CT值的相对定量法快速诊断唐氏综合征是可行的。 展开更多
关键词 唐氏综合征 荧光定量PCR 相对定量 △CT值 永生细胞系
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实时荧光定量PCR技术在乳酸菌定量检测中的应用 被引量:26
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作者 赵文静 李妍 +1 位作者 高鹏飞 张和平 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期433-437,共5页
与传统的菌落计数、杂交技术及PCR技术等相比,实时荧光定量PCR技术作为一种检测和定量微生物的方法,具有较高的灵敏度及可重复性,而且反应过程快速,污染较小。作者综述了实时荧光定量PCR技术的定量原理,荧光检测物质,目的基因序列以及... 与传统的菌落计数、杂交技术及PCR技术等相比,实时荧光定量PCR技术作为一种检测和定量微生物的方法,具有较高的灵敏度及可重复性,而且反应过程快速,污染较小。作者综述了实时荧光定量PCR技术的定量原理,荧光检测物质,目的基因序列以及其特点,并且列举了在乳酸菌定量检测中的应用,同时对其应用前景进行了展望。 展开更多
关键词 实时定量PCR 乳酸菌 定量检测
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梅毒螺旋体TpN17与TpN47表位肽融合抗原的重组表达及其酶联免疫吸附试验的建立和应用 被引量:8
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作者 孙爱华 范兴丽 +2 位作者 沈香娣 汤仁仙 严杰 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1187-1194,共8页
以重组TpNs为抗原的ELISAs已被证明是具有较高敏感性和特异性的梅毒血清学检测方法,若ELISAs使用多种TpNs抗原,可进一步提高检测敏感性和特异性。根据抗原表位分析结果,本研究首先采用连接引物PCR获得了TpN17和TpN47抗原表位序列融合成... 以重组TpNs为抗原的ELISAs已被证明是具有较高敏感性和特异性的梅毒血清学检测方法,若ELISAs使用多种TpNs抗原,可进一步提高检测敏感性和特异性。根据抗原表位分析结果,本研究首先采用连接引物PCR获得了TpN17和TpN47抗原表位序列融合成的人工基因片段tpE17-47,然后构建了全长tpN17、tpN47基因以及tpE17-47融合基因的原核表达系统。SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统检查结果显示,所构建的原核表达系统能稳定表达目的重组蛋白rTpN17、rTpN47和rTpE17-47,其产量分别约占细菌总蛋白的36%、20%和28%。采用Ni-NTA亲和层析法提纯的rTpN17、rTpN47和rTpE17-47蛋白经SDS-PAGE分析,均显示为单一的蛋白条带。Western blotting结果表明,rTpN17、rTpN47和rTpE17-47蛋白均可被梅毒抗体阳性的病人血清所识别。以rTpE17-47为包被抗原的rTpE17-47-ELISA检测630例临床确诊梅毒患者血清标本的阳性率为98.6%,仅略高于TPPA(97.9%)(P>0.05),但明显高于rTpN17-ELISA(83.8%)、rTpN47-ELISA(83.3%)和RPR(72.1%)(P<0.01)。上述ELISAs和TPPA对25例SLE、36例RA患者和250例健康体检者的血清标本检测结果均为阴性,但RPR分别有1、2和2例标本检测结果为阳性。本试验成功地构建了rTpE17-47抗原表位融合基因及其高效原核表达系统,所建立的rTpE17-47-ELISA可作为一种快速、简便、安全、敏感和特异的梅毒血清学筛查或诊断新方法。 展开更多
关键词 梅毒螺旋体 抗原表位 融合基因 重组表达 酶联免疫吸附试验
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结核分枝杆菌耐利福平rpoB基因突变的序列分析 被引量:17
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作者 甘辛 陈玲 +4 位作者 王建华 李娜娜 陈杨 张建勇 张泓 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2010年第3期268-271,共4页
目的探讨结核分枝杆菌耐药基因rpoB突变与利福平耐药性的关系。方法采集81例临床标本,分离结核分枝杆菌菌株,PCR扩增rpoB基因及测序,并与利福平药物敏感试验结果比较。结果27例耐利福平菌株中,20株发生rpoB基因突变(74.1%),突变位点包括... 目的探讨结核分枝杆菌耐药基因rpoB突变与利福平耐药性的关系。方法采集81例临床标本,分离结核分枝杆菌菌株,PCR扩增rpoB基因及测序,并与利福平药物敏感试验结果比较。结果27例耐利福平菌株中,20株发生rpoB基因突变(74.1%),突变位点包括531和526在内的7个位点10种突变类型,并发现新的突变位点和突变形式;54株敏感株中,1株发生突变(1.9%)。结论利福平耐药rpoB基因突变有一定区域性,为发展快速的基因诊断技术检测耐多药结核病奠定了基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 利福平 RPOB基因 突变 药物敏感试验
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