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FOXO3a调控线粒体自噬在肝脏缺血再灌注损伤中的作用 被引量：5
1
作者 宋虎 张建军 +3 位作者 王振 杜晨阳 郑虹 沈中阳 《天津医药》 CAS 2017年第12期1242-1247,I0008,共7页
目的探讨转录因子FOXO3a调控线粒体自噬对小鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响。方法雄性C57BL/6小鼠30只,随机分为Sham组(只模拟开腹手术不夹闭)和再灌注(IR)2、6、12、24 h组,每组6只,建立小鼠肝缺血再灌注损伤模型。血生化检测各组丙氨酸... 目的探讨转录因子FOXO3a调控线粒体自噬对小鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响。方法雄性C57BL/6小鼠30只,随机分为Sham组(只模拟开腹手术不夹闭)和再灌注(IR)2、6、12、24 h组,每组6只,建立小鼠肝缺血再灌注损伤模型。血生化检测各组丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)变化,HE染色及TUNEL法观察肝组织损伤及细胞凋亡情况,Western blot及q RT-PCR检测各组细胞中转录因子FOXO3a、线粒体自噬相关蛋白Nix蛋白及其mRNA表达水平。培养小鼠肝AML12细胞,用FOXO3a和Nix干扰RNA处理细胞建立缺氧1.5 h复氧6 h的模型,分为siRNA-NC组(加入10μL siRNA空载对照转染细胞)、FOXO3a siRNA组(加入10μL FOXO3a siRNA转染细胞)以及Nix siRNA组(加入10μL Nix siRNA转染细胞)。MTT法检测各组细胞活力,共聚焦显微镜观察各组细胞内自噬体的数量与分布,Western blot检测FOXO3a、Nix、微管相关蛋白LC3、凋亡蛋白P62及Caspase-3的表达情况。结果 IR各组ALT、AST均明显升高,且再灌注6 h时达到峰值(P<0.05)。HE及TUNEL结果示再灌注6 h时小鼠肝组织损伤以及细胞凋亡最严重。IR各组FOXO3a及Nix的mRNA相对表达量均高于Sham组,且再灌注12 h时FOXO3a的mRNA表达量最高,再灌注6 h时Nix的mRNA表达量最高(P<0.05)。Western blot示再灌注12 h时FOXO3a相对表达水平最高,再灌注6 h时Nix、Caspase-3、LC3Ⅱ相对表达水平最高。干扰FOXO3a的表达后,MTT显示FOXO3a siRNA组细胞存活率降低(P<0.05);Western blot检测显示siRNA-NC组FOXO3a表达水平高于FOXO3a siRNA组,Nix、Caspase-3、LC3Ⅱ表达水平明显低于FOXO3a siRNA组(P<0.05)。共聚焦显微镜观察示siRNA-NC组细胞内自噬体的数量低于FOXO3a siRNA组。干扰Nix的表达后,MTT显示Nix siRNA组细胞存活率升高(P<0.05);Western blot检测显示siRNA-NC组Nix、P62、LC3Ⅱ表达水平高于Nix siRNA组,而FOXO3a表达水平低于Nix siRNA组(P<0.05)。结论 FOXO3a可减轻小鼠肝缺血再灌注损伤,其机制可能与FOXO3a抑制肝细胞线粒体自噬且抑制细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 FOX03A 线粒体自噬 缺血再灌注损伤 凋亡
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转化生长因子β调控miR-200b-200a-429启动子活性 被引量：3
2
作者 韩敬明 白久旭 +3 位作者 张晓玲 崔汉民 李旭 曹宁 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期616-620,共5页
目的探讨转化生长因子β(TGF-β)对miR-200b-200a-429簇表达的影响,对其调控机制作初步研究。方法使用RT-PCR方法检测TGF-β对人肾小管上皮细胞HK-2miR-200a、miR-200b和miR-429表达的影响。PCR方法扩增出miR-200b-200a-429簇启动子序列... 目的探讨转化生长因子β(TGF-β)对miR-200b-200a-429簇表达的影响,对其调控机制作初步研究。方法使用RT-PCR方法检测TGF-β对人肾小管上皮细胞HK-2miR-200a、miR-200b和miR-429表达的影响。PCR方法扩增出miR-200b-200a-429簇启动子序列,构建miR-200b-200a-429启动子荧光素酶报告基因表达载体,转染至HK-2细胞,检测其荧光素酶活性。观察TGF-β对miR-200b-200a-429转录的表达调控。结果实时定量PCR检测结果显示TGF-β作用细胞24h后下调了miR-200a、miR-200b和miR-429的表达。成功构建miR-200b-200a-429启动子荧光素酶表达载体,测序正确,然后利用双荧光素酶报告基因系统证实构建的报告基因载体启动子具有活性,发现TGF-β可以抑制miR-200b-200a-429启动子活性(P<0.05)。结论 TGF-β可以调控miR-200b-200a-429启动子的活性。 展开更多
关键词 miR-200b-200a-429 转化生长因子G 转录调控 启动子
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丙型肝炎病毒F蛋白上调肝癌细胞HepG_2中Bcl-2和Bax表达 被引量：4
3
作者 韦娟 孔晶 +5 位作者 邓小昭 储春丽 余晓杰 岳明 张云 徐孝东 《中华疾病控制杂志》 CAS 北大核心 2012年第4期289-292,共4页
目的研究丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)基因1b型F蛋白对HepG2细胞中Bcl-2、Bax表达的影响。方法应用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术扩增HCV 1b型的F基因,构建pEGFP-C3-F、pEGFP-C3-C真核表达载体,分别将pEGF... 目的研究丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)基因1b型F蛋白对HepG2细胞中Bcl-2、Bax表达的影响。方法应用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术扩增HCV 1b型的F基因,构建pEGFP-C3-F、pEGFP-C3-C真核表达载体,分别将pEGFP-C3-F、pEGFP-C3-C、pEGFP-C3(阴性对照)瞬时转染HepG2细胞,48h后抽细胞总蛋白质,蛋白质印迹法(Western blot)检测Bcl-2、Bax表达的变化。结果转染F基因的HepG2中Bcl-2表达水平略高于未转染的细胞,但Bax表达水平显著高于未转染的细胞。结论 HCV F蛋白具有调节原癌基因Bcl-2和抑癌基因Bax的特性,可能与肝癌的形成有关。 展开更多
关键词 肝炎病毒属 F蛋白 BCL-2 BAX
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增强型绿色荧光蛋白原核表达载体的构建及表达
4
作者 段斯亮 于声 苏晓庆 《广西医学》 CAS 2008年第10期1475-1477,F0002,共4页
目的构建以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为标记的原核表达载体,并观察EGFP基因在大肠杆菌中的表达情况。方法据已知的EGFP基因序列,设计引物,并引入NdeⅠ和XhoⅠ酶切位点。采用PCR技术从含有EGFP的质粒pEGFP-C1中克隆EGFP编码序列;将其亚... 目的构建以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为标记的原核表达载体,并观察EGFP基因在大肠杆菌中的表达情况。方法据已知的EGFP基因序列,设计引物,并引入NdeⅠ和XhoⅠ酶切位点。采用PCR技术从含有EGFP的质粒pEGFP-C1中克隆EGFP编码序列;将其亚克隆入表达载体pTW IN1,得到以EGFP为标记的原核表达载体pTW IN-EGFP。转化大肠杆菌ER2566菌株,IPTG诱导EGFP基因表达。结果经过IPTG诱导后,细菌培养物在长波紫外线的照射下,发出明亮的绿色荧光。结论成功构建了原核表达载体pTW IN-EGFP,为应用EGFP作为报告基因和筛选标记奠定了实验基础。 展开更多
关键词 增强型绿色荧光蛋白 报告基因 表述载体 原核表达
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