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人脐带Wharton胶中间充质干细胞的分离、培养与鉴定 被引量：15
1
作者 侯克东 卢世璧 +6 位作者 张莉 袁玫 孙明学 彭江 赵斌 眭翔 许文静 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期375-378,共4页
目的研究人脐带Wharton胶中间充质干细胞(MSCs)的生物学特性。方法去除新鲜人脐带动静脉和脐带外膜组织,获得Wharton胶,分别采用酶消化法和组织块培养法获得脐带Wharton胶中的干细胞,通过细胞传代培养、生长曲线测定、活细胞鉴定进行细... 目的研究人脐带Wharton胶中间充质干细胞(MSCs)的生物学特性。方法去除新鲜人脐带动静脉和脐带外膜组织,获得Wharton胶,分别采用酶消化法和组织块培养法获得脐带Wharton胶中的干细胞,通过细胞传代培养、生长曲线测定、活细胞鉴定进行细胞生长动力学研究,流式细胞仪分析细胞表面分子特点,组织化学和免疫组化染色鉴定软骨特征性标志物表达情况。RT-PCR检测Sox-9及Col-2A1mRNA表达情况。结果采用酶消化法可以快速分离Wharton胶中MSCs,且细胞迅速贴壁生长;组织块法培养获得种子细胞时间较长。流式细胞仪检测显示所获得的细胞表达CD44、CD105等MSCs标志物,HLA-ABC表达阳性,HLA-DPDQDR表达阴性。经过冻存复苏后免疫表型无显著变化。组织化学和免疫组化染色显示脐带Wharton胶MSCs弱表达软骨特征性标志。RT-PCR显示Wharton胶MSCs表达Sox-9和Col-2A1。结论人脐带Wharton胶MSCs不向造血系分化,且具有前软骨细胞的特性,有望作为软骨组织工程新型的种子细胞。 展开更多
关键词 脐带 间质干细胞 细胞培养
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微流控芯片上胰岛素样生长因子1和碱性成纤维细胞生长因子对兔关节软骨细胞增殖的影响 被引量：7
2
作者 李元城 张卫国 +1 位作者 秦建华 林炳承 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期476-480,共5页
目的在微流控芯片平台上探索三维培养环境下胰岛素样生长因子1(IGF-1)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对软骨细胞体外增殖的影响。方法微流控芯片上,分别在IGF-1、bFGF以及二者组合浓度梯度下三维培养兔关节软骨细胞,2周后计算软骨细胞... 目的在微流控芯片平台上探索三维培养环境下胰岛素样生长因子1(IGF-1)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对软骨细胞体外增殖的影响。方法微流控芯片上,分别在IGF-1、bFGF以及二者组合浓度梯度下三维培养兔关节软骨细胞,2周后计算软骨细胞增殖率并与传统的96孔板培养结果进行比较。结果 IGF-1在57.14ng/ml产生最大增殖效应,平均倍增2.38倍;bFGF在5.72ng/ml产生最大增殖效应,平均倍增3.85倍;85.71ng/ml IGF-1+1.43ng/ml bFGF的组合可使软骨细胞产生最大的增殖效应,平均倍增4.76倍。微流控芯片与96孔板传统培养的软骨细胞增殖率差异无统计学意义。结论一定浓度组合的IGF-1和bFGF可协同产生最大的增殖效应;微流控芯片技术可用于软骨组织工程领域,具有广阔的应用前景。 展开更多
关键词 软骨细胞 组织工程 微流控芯片 胰岛素样生长因子1 成纤维细胞生长因子2
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人脐血间充质细胞体外分离培养方法及培养基特性 被引量：9
3
作者 刘素芳 鄢文海 +2 位作者 韩雪飞 阎明 邢莹 《中国临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2005年第46期34-35,共2页
目的:采用不同的培养基分离培养融合状态的间充质细胞,以筛选一种较好的体外培养人脐血间充质细胞的方法。方法:实验于2003-11/2004-10在郑州大学医学院干细胞中心完成。选择郑州大学医学院第三附属医院产科足月妊娠健康产妇的脐血用于... 目的:采用不同的培养基分离培养融合状态的间充质细胞,以筛选一种较好的体外培养人脐血间充质细胞的方法。方法:实验于2003-11/2004-10在郑州大学医学院干细胞中心完成。选择郑州大学医学院第三附属医院产科足月妊娠健康产妇的脐血用于实验(产妇均签署知情同意书),随机分为4组:低糖DMEM(Dulbecco改良的Eagle培养基)组、高糖DMEM组、低糖DMEM+干细胞因子组、MsencultTM(一种特殊成分的液体培养基,与其添加物配合使用可促进间充质干细胞分化为脂肪细胞)组。待新生儿娩出后,立即断脐,消毒母侧脐带断端,60mL无菌注射针穿刺脐静脉取血,立即导入肝素抗凝的无菌采血袋内。取新鲜采集的脐带血,用1.077g/cm3的淋巴细胞分层液,密度梯度离心法分离脐血单个核细胞,将脐血单个核细胞接种于37℃、体积分数为0.05的CO2培养箱内培养,倒置显微镜观察细胞数量和形态的变化。结果:①各组间充质细胞培养24h后贴壁细胞数和细胞存活率的比较:MsencultTM组、低糖DMEM+干细胞因子组的贴壁细胞数明显多于高糖DMEM组、低糖DMEM组[(40.5±9.7),(31.5±4.2),(14.0±1.4),(7.5±1.6)个,P<0.05],细胞存活率亦明显高于高糖DMEM组、低糖DMEM组[(97.1±0.9),(95.3±2.6),(84.1±1.9),(81.2±1.1)%,P<0.05]。②各组间充质细胞在不同培养时间下生长状态的比较:培养第3,7,10,14天MsencultTM组、低糖DMEM+干细胞因子组细胞增殖的速度均快于高糖DMEM组、低糖DMEM组(P<0.05),且MsencultTM组细胞克隆数最多[(1±1.22),(0.83±0.75),(0.2±0.4),0个,P<0.05]。结论:采用低糖DMEM+干细胞因子与单纯MesencultTM培养基培养的细胞生长旺盛,但由于干细胞因子用量较大,价格昂贵,因此低糖DMEM联合应用干细胞因子的方法并不十分适用。而MesencultTM为酸性培养基,有利于脐血细胞的生长,并可形成克隆,为脐血间充质细胞的成功培养创造了条件,是一种适合脐血间充质细胞生长的培养基。 展开更多
关键词 干细胞 胎血/细胞学 细胞 培养的
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胚胎大鼠背根神经节神经元的培养与纯化 被引量：9
4
作者 张军 许百男 +1 位作者 李翀 孟祥辉 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1152-1154,共3页
目的建立一种简单可行的胚胎大鼠背根神经节神经元培养和纯化方法。方法取胚胎大鼠背根神经节,通过胰蛋白酶消化、抗有丝分裂药物纯化等方法获得背根神经节神经元。采用降钙素基因相关的缩氨酸和神经丝蛋白双重免疫细胞化学染色法鉴定... 目的建立一种简单可行的胚胎大鼠背根神经节神经元培养和纯化方法。方法取胚胎大鼠背根神经节,通过胰蛋白酶消化、抗有丝分裂药物纯化等方法获得背根神经节神经元。采用降钙素基因相关的缩氨酸和神经丝蛋白双重免疫细胞化学染色法鉴定并测定神经元的纯度。结果分离培养的背根神经节神经元在适宜的培养基中生长良好,纯度可达到93%左右。结论此培养方法简单、易行,能培养和纯化出大量背根神经节神经元。 展开更多
关键词 细胞培养 神经节 脊 神经元
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人脐带华通胶间充质干细胞的体外分离培养及鉴定 被引量：6
5
作者 胡晶琼 李慧玉 +4 位作者 欧阳为相 胡丽 卢聪 张兰男 陈莉莉 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期529-533,共5页
目的研究由脐带华通胶组织(Wharton’s jelly)在体外分离、培养、扩增获得脐带间充质干细胞(umbilical cord derived mesenchymal stem cells,以下简称UC-MSCs)的方法,并进行UC-MSCs的各项鉴定。方法脐带华通胶组织采用胶原酶以及胰酶... 目的研究由脐带华通胶组织(Wharton’s jelly)在体外分离、培养、扩增获得脐带间充质干细胞(umbilical cord derived mesenchymal stem cells,以下简称UC-MSCs)的方法,并进行UC-MSCs的各项鉴定。方法脐带华通胶组织采用胶原酶以及胰酶序贯消化法分离得到UC-MSCs,用流式细胞仪分析其表型特征,向成骨、成脂以及成神经元细胞诱导分化并鉴定。结果由人脐带华通胶可以有效获得间充质干细胞。原代细胞培养24～48h内细胞开始贴壁生长,5～7d左右可以传代培养,在2～3周时间内可以迅速扩增至107到108数量级。各项分化鉴定试验证实UC-MSCs具有多向分化潜能,能分化成骨、成脂细胞以及神经元细胞。UC-MSCs在体外培养传至20～30代仍保持稳定的细胞表面标记。结论由人脐带华通胶可以有效地获得间充质干细胞,这种UC-MSCs能在体外长期传代培养,生物学特性稳定,具有多向分化的潜能,是今后细胞治疗很有前景的种子细胞。 展开更多
关键词 间充质干细胞 脐带 华通胶 诱导分化
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小鼠骨骼肌卫星细胞的原代培养和鉴定 被引量：12
6
作者 汪茜 王明新 蒲传强 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期203-205,共3页
目的探讨小鼠骨骼肌卫星细胞的原代培养方法及鉴定技术。方法取新生小鼠后肢肌,采用混合酶消化法获得细胞悬液,经Percoll分离,结合差速贴壁法提纯骨骼肌卫星细胞。倒置显微镜观察细胞形态及增殖状况,绘制细胞生长曲线,采用结蛋白、α-... 目的探讨小鼠骨骼肌卫星细胞的原代培养方法及鉴定技术。方法取新生小鼠后肢肌,采用混合酶消化法获得细胞悬液,经Percoll分离,结合差速贴壁法提纯骨骼肌卫星细胞。倒置显微镜观察细胞形态及增殖状况,绘制细胞生长曲线,采用结蛋白、α-肌动蛋白免疫细胞化学方法鉴定骨骼肌卫星细胞。结果原代骨骼肌卫星细胞呈圆形,培养1d后逐渐贴壁生长,细胞分布均匀,多呈圆形,48h后开始增殖,此后细胞体积逐渐增大并开始分裂,镜下可见2～3个或多个细胞成串排列,3～4d后细胞进入对数生长期,此时圆形细胞占优势,可见多处局部细胞克隆呈簇样生长。培养7～10d细胞生长至单层且成片分布(50%～70%),梭形或纺锤形细胞增多,但仍有部分细胞呈圆形,12～14d后细胞增殖减缓。免疫细胞化学染色显示,分离得到的小鼠骨骼肌卫星细胞表达肌源性标志物结蛋白联合骨骼肌特异性蛋白α-肌动蛋白。结论采用混合酶消化、Percoll分离结合差速贴壁法可培养出高纯度的骨骼肌卫星细胞,结蛋白和骨骼肌肌动蛋白免疫细胞化学染色可更有效地鉴定骨骼肌卫星细胞。 展开更多
关键词 卫星细胞 骨骼肌 细胞分离 细胞培养技术
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大鼠脑皮质微血管内皮细胞的原代培养和鉴定 被引量：4
7
作者 李正伟 卞红强 +3 位作者 罗正利 王胜 王煜 陈劲草 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期585-588,共4页
目的分离、培养、鉴定大脑皮质微血管内皮细胞(brain microvaseular endothelial cells,BMECs),旨在建立一种可以有效获取较高纯度和产量的BMECs的方法。方法取出生3～5dSD大鼠,采用匀浆、二次酶消化、梯度离心获得较纯的脑微血管段后,... 目的分离、培养、鉴定大脑皮质微血管内皮细胞(brain microvaseular endothelial cells,BMECs),旨在建立一种可以有效获取较高纯度和产量的BMECs的方法。方法取出生3～5dSD大鼠,采用匀浆、二次酶消化、梯度离心获得较纯的脑微血管段后,接种于明胶包被的培养板中进行原代培养,倒置相差显微镜观察细胞的形态学特性,细胞免疫荧光化学染色检测血管内皮细胞特异性标志物Ⅷ因子相关抗原的表达,噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞生长曲线。结果培养6～7d细胞呈典型的短梭形、多角形和"鹅卵石"样。微血管内皮细胞特异性标志物Ⅷ因子相关抗原表达阳性,纯度达(96.70±1.53)%。细胞在6～8d达到生长高峰。结论成功地分离培养出了高纯度的BMECs,为进一步研究BMECs的生物学特性奠定了基础。 展开更多
关键词 大鼠 微血管内皮细胞 原代培养 细胞鉴定
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大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养与初步鉴定 被引量：6
8
作者 秦贺 杨仕明 +4 位作者 赵立东 郑贵亮 郭维维 陈光涛 翟所强 《中华耳科学杂志》 CSCD 2009年第4期357-361,共5页
目的探讨体外分离、传代培养大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的方法,并对培养细胞进行初步鉴定,为利用大鼠骨髓MSCs进行感音神经性聋细胞移植治疗的研究奠定基础。方法用贴壁培养法分离大鼠骨髓细胞,第1组于24小时... 目的探讨体外分离、传代培养大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的方法,并对培养细胞进行初步鉴定,为利用大鼠骨髓MSCs进行感音神经性聋细胞移植治疗的研究奠定基础。方法用贴壁培养法分离大鼠骨髓细胞,第1组于24小时全量换液,第2组于24小时半量换液,第3组于3天全量换液,传代扩增。相差显微镜进行形态学观察;RT-PCR检测培养细胞表面分子表达;定向诱导培养细胞向成脂细胞、成骨细胞方向分化。结果24小时首次全量换液组培养7天后观察见少量细胞集落,细胞形态不规则;24小时首次半量换液组培养7天后观察见较多细胞集落,细胞规则,呈梭形、椭圆形;3天首次全量换液组培养7天后观察见较多悬浮细胞,与贴壁细胞混杂在一起。培养细胞表面分子SH2、CD31、CD44呈阳性表达,但不表达CD34。第2组培养细胞传代后加入不同诱导剂定向诱导分化一定阶段,分别经油红O及von Kossa法染色鉴定证实MSCs可分别向脂肪细胞及成骨方向分化。结论本实验分离培养的大鼠骨髓原代细胞24小时首次半量换液培养利于大鼠骨髓MSCs的分离和纯化,可稳定表达SH2、CD31、CD44。MSCs具有多项分化潜能。 展开更多
关键词 大鼠 骨髓间充质干细胞 分离培养 细胞分化 鉴定
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不同促细胞分裂因子对人神经干细胞定向分化的影响 被引量：11
9
作者 姬西团 章翔 +9 位作者 费舟 张剑宁 刘卫平 蒋晓帆 林绿标 王西玲 梁景文 宋蕾 曹锐峰 潘灏 《中华神经外科疾病研究杂志》 CAS 2006年第1期9-12,共4页
目的观察不同促细胞分裂因子对人神经干细胞(NSCs)增殖及定向分化的影响。方法对人NSCs用无血清DMEM培养基行原代培养的同时,分别加入表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维生长因子(bFGF)、神经生长因子(NGF)、维甲酸(RA)等因子,观察其对NSCs... 目的观察不同促细胞分裂因子对人神经干细胞(NSCs)增殖及定向分化的影响。方法对人NSCs用无血清DMEM培养基行原代培养的同时,分别加入表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维生长因子(bFGF)、神经生长因子(NGF)、维甲酸(RA)等因子,观察其对NSCs定向分化的作用。结果EGF培养的NSCs,克隆球形成慢且较松散,经血清诱导分化后,主要为星形胶质细胞,仅有少数神经元。而bFGF培养的NSCs则生长良好。在加血清诱导分化后,不同浓度bFGF培养的NSCs分化的细胞不同。bFGF与EGF共同培养的NSCs,其生长及神经球形成良好。在加血清诱导分化后,分化的神经细胞比例更接近脑内神经细胞的组分。NGF对神经球的形成无明显影响,但可促使其向神经元分化。RA使神经克隆球形成,可使NSCs直接分化为神经元细胞的比例明显增加。结论不同促细胞分裂因子对人NSCs的增殖及定向分化均有一定影响。 展开更多
关键词 神经干细胞 促细胞分裂因子 胎儿
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乳鼠心肌细胞和心脏成纤维细胞的原代培养 被引量：16
10
作者 张乃菊 陈天平 祝晓光 《蚌埠医学院学报》 CAS 2010年第6期558-561,共4页
目的：探讨一种简便、可靠的乳鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞培养方法。方法：以组织块酶消化法分离细胞,通过差速贴壁分离法收集、培养乳鼠心肌细胞和成纤维细胞。普通光学显微镜观察心肌细胞和成纤维细胞的基本特征及生长特性的变化。... 目的：探讨一种简便、可靠的乳鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞培养方法。方法：以组织块酶消化法分离细胞,通过差速贴壁分离法收集、培养乳鼠心肌细胞和成纤维细胞。普通光学显微镜观察心肌细胞和成纤维细胞的基本特征及生长特性的变化。结果：心肌细胞12 h基本贴壁、1－3天形成细胞簇并出现同步搏动,心肌细胞纯度为93%;心肌成纤维细胞第3－6代细胞生长良好,纯度达98%以上。结论：建立的乳鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞体外培养方法是成熟、可靠的。 展开更多
关键词 细胞人工培养 心肌细胞 心肌成纤维细胞 原代培养 乳鼠
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大鼠颌骨与髂骨来源骨髓基质干细胞的体外生物学特性比较 被引量：6
11
作者 许艳彬 江宏兵 +3 位作者 陈莉花 王显威 钱靓 陶震江 《口腔医学》 CAS 2008年第3期145-147,160,共4页
目的比较大鼠颌骨与髂骨来源的骨髓基质干细胞(bone marrowstromal cells,BMSCs)的体外生物学特性差异。方法采用贴壁法分离培养大鼠颌骨与髂骨来源的BMSCs,从细胞生长特点,诱导矿化及成脂能力等方面比较两者的体外生物学特性。结果颌... 目的比较大鼠颌骨与髂骨来源的骨髓基质干细胞(bone marrowstromal cells,BMSCs)的体外生物学特性差异。方法采用贴壁法分离培养大鼠颌骨与髂骨来源的BMSCs,从细胞生长特点,诱导矿化及成脂能力等方面比较两者的体外生物学特性。结果颌骨来源的BMSCs与髂骨来源的相比,具有更强的增殖能力,矿化诱导后形成更多的钙结节(P<0.05);而髂骨来源BMSCs在成脂诱导条件下形成更多脂质(P<0.05)。结论不同部位来源的BMSCs具有不同的生物学特点,颌骨来源的BMSCs具有更强的增殖和诱导后形成更多钙结节的能力,这为进一步研究颌骨病变与再生修复机制提供细胞学模型。 展开更多
关键词 骨髓基质细胞 颌骨 成骨作用 大鼠
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经鼓阶胚胎干细胞内耳导入的初步观察 被引量：8
12
作者 李利 杨仕明 +6 位作者 赵立东 徐金操 郭维维 李丽贤 孙建和 刘会占 邢光前 《中华耳科学杂志》 CSCD 2009年第4期362-366,共5页
目的观察未经体外诱导的胚胎干细胞(embyonic stem cells,ESC)导入听力正常大鼠内耳的可行性以及导入后的存活和分布情况,为ESC内耳移植治疗由毛细胞缺失导致的感音神经性耳聋提供实验基础和理论依据。方法5～6周龄Wistar大鼠,10只,右... 目的观察未经体外诱导的胚胎干细胞(embyonic stem cells,ESC)导入听力正常大鼠内耳的可行性以及导入后的存活和分布情况,为ESC内耳移植治疗由毛细胞缺失导致的感音神经性耳聋提供实验基础和理论依据。方法5～6周龄Wistar大鼠,10只,右耳为实验耳:经鼓阶打孔法植入带有绿色荧光蛋白(EGFP)的ESCs;左耳为对照组,不实施手术。术前1周与术后即刻行听性脑干反应(ABR)检查,取双侧耳蜗做冰冻切片,观察ESCs植入内耳后存活和分布情况。结果术后动物存活8只,麻醉效果好无干扰完整测完ABR动物5只。鼓阶打孔途径导入耳蜗的ESCs大部分于鼓阶聚集悬浮,少数可在鼓阶基底膜嵴和鼓阶外侧壁处贴壁;未在柯替器等中阶部位中发现有ESCs的分布。ABR检测结果显示鼓阶打孔途径导入方法对大鼠听力影响较小。结论胚胎干细胞可经耳蜗底转鼓阶打孔途径导入耳蜗,干细胞在内耳成功存活,并且对内耳损伤小,因此,它可以作为内耳细胞移植的重要方式。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 内耳植入 毛细胞
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人骨髓间充质干细胞诱导成软骨细胞过程中免疫原性改变的实验研究 被引量：3
13
作者 古彦铮 蔡燕 +4 位作者 倪莉 黄晨 杨惠林 张学光 施勤 《山东大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2010年第11期24-28,共5页
目的探讨人骨髓来源间充质干细胞(BMSCs)诱导分化成软骨细胞过程中协同刺激分子的表达及其对细胞免疫原性改变的影响。方法用密度梯度离心法分离骨髓,体外培养BMSCs,经形态学观察、流式细胞仪鉴定后诱导成软骨样细胞,用流式检测细胞表... 目的探讨人骨髓来源间充质干细胞(BMSCs)诱导分化成软骨细胞过程中协同刺激分子的表达及其对细胞免疫原性改变的影响。方法用密度梯度离心法分离骨髓,体外培养BMSCs,经形态学观察、流式细胞仪鉴定后诱导成软骨样细胞,用流式检测细胞表面协同刺激分子的表达情况;将未分化的BMSCs及诱导后的成软骨样细胞分别与T细胞共培养,采用3H-TdR法检测T细胞的增殖情况。结果人BMSCs不表达或低表达协同刺激分子CD28、CD80、CD83、CD86,抑制T细胞增殖;而诱导后的成软骨细胞上调表达CD28、CD80、CD83、CD86,并促进T细胞增殖。结论人BMSCs对T细胞增殖有抑制作用;而诱导后的成软骨细胞免疫原性增强,促进T细胞增殖。 展开更多
关键词 间充质干细胞 协同刺激分子 成软骨细胞 免疫原性
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不同代次成人正常髓核细胞的形态及生长动力学比较 被引量：11
14
作者 张荣峰 阮狄克 +3 位作者 张超 孙海燕 易红蕾 王爱兰 《脊柱外科杂志》 2008年第3期137-140,共4页
目的比较不同代次成人正常髓核细胞体外培养的形态及生长动力学差异。方法从成人正常髓核组织分离培养髓核细胞,传代后对细胞形态、生长曲线、噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)摄取等进行比较研究。结果体外培养条件下,传3代... 目的比较不同代次成人正常髓核细胞体外培养的形态及生长动力学差异。方法从成人正常髓核组织分离培养髓核细胞,传代后对细胞形态、生长曲线、噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)摄取等进行比较研究。结果体外培养条件下,传3代之前的细胞形态正常,胞浆丰富;传4代起,部分细胞的形态逐渐向长梭形演化。生长曲线提示传3代之前的髓核细胞持续增殖能力强。MTT测定吸光度值,传1、3代时差异无统计学意义(P>0.05),传5、7代与传1代相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论体外培养条件下,前3代成人正常髓核细胞形态良好,活性高,增殖能力强,适合作为组织工程椎间盘的种子细胞。 展开更多
关键词 椎间盘 细胞培养技术 组织工程
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转Nurr1基因联合全反式维甲酸及银杏提取物诱导的神经干细胞治疗帕金森病大鼠模型 被引量：2
15
作者 李小元 陈先文 +2 位作者 徐仿成 胡慧敏 王烈成 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2007年第5期520-524,共5页
目的探讨核受体相关因子(Nurr1)基因修饰联合全反式维甲酸(ATRA)及银杏提取物(Egb)诱导的神经干细胞(NSCs)移植治疗帕金森病动物模型的疗效及作用机制。方法将建模成功的帕金森病SD大鼠模型分为4组,将溴尿嘧啶(Brdu)标记的单纯胚胎NSCs(... 目的探讨核受体相关因子(Nurr1)基因修饰联合全反式维甲酸(ATRA)及银杏提取物(Egb)诱导的神经干细胞(NSCs)移植治疗帕金森病动物模型的疗效及作用机制。方法将建模成功的帕金森病SD大鼠模型分为4组,将溴尿嘧啶(Brdu)标记的单纯胚胎NSCs(NSCs组)、RA/Egb诱导分化的NSCs(RA/Egb组)、单纯转Nurr1基因的NSCs(Nurr1组)和转Nurr1基因联合RA/Egb诱导分化的NSCs(Nurr1+RA/Egb组)分别注入模型鼠右侧纹状体。观察其病理性旋转行为的改善,采用免疫组化染色方法检测酪氨酸羟化酶(TH)、Nurr1、神经丝巢蛋白(nestin)表达及Brdu标记情况,观察移植的NSCs在体内的存活、迁移与分化,并进行TH阳性细胞计数研究脑内多巴胺含量的变化。结果各组动物脑内移植后动物旋转行为较前均有改善,尤以Nurr1+RA/Egb组改善最明显,RA/Egb组次之。免疫组化可见各组移植区均有TH阳性细胞表达,其中Nurr1+RA/Egb组TH染色细胞数更密集,形态更成熟,病理学改善最明显。在Nurr1组和Nurr1+RA/Egb组移植区可见有Nurr1散在表达,在NSCs组和RA/Egb组移植区未见Nurr1明显表达。nestin检测未见有明显阳性表达。结论转Nurr1基因联合全反式维甲酸及银杏提取物诱导的神经干细胞脑内移植后可以存活、迁移、分化并表达TH和Nurr1,部分地改善PD模型旋转行为,增加脑内TH表达。 展开更多
关键词 干细胞 神经系统 基因疗法 银杏/药物作用 维甲酸/药理学 帕金森病/中药疗法 植物提取物/治疗应用 大鼠
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大鼠肝卵圆细胞体外分离培养和诱导分化为肝细胞的初步研究 被引量：2
16
作者 周高速 张振书 +5 位作者 刘思德 苏磊 王亚东 何敬东 张明军 李旭 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期467-469,共3页
目的探索体外诱导成年Wistar大鼠肝卵圆细胞(HOCs)分化为肝细胞的可行性。方法雄性Wistar大鼠36只,建立肝卵圆细胞增殖模型,采用两步法灌注和Percoll密度梯度离心法分离纯化HOCs,行体外培养并添加HGF、OSM和FGF4诱导其分化。结果每只模... 目的探索体外诱导成年Wistar大鼠肝卵圆细胞(HOCs)分化为肝细胞的可行性。方法雄性Wistar大鼠36只,建立肝卵圆细胞增殖模型,采用两步法灌注和Percoll密度梯度离心法分离纯化HOCs,行体外培养并添加HGF、OSM和FGF4诱导其分化。结果每只模型大鼠肝脏体外分离可获得约1.34×105/mlHOCs,细胞为圆形、椭圆形或多角形,大小为正常肝细胞1/6～1/3,核质比例大,2周后可呈克隆样增殖生长。所获HOCs胞浆和胞膜表达干细胞标志Thy-1及C-kit,其原始细胞标志AFP呈阳性表达;能稳定传代,在HGF、OSM和FGF4刺激下形态逐渐发生改变,细胞伸展且体积渐增大,贴壁能力减弱,诱导14天后分化细胞Alb表达明显阳性,且随着诱导时间延长阳性率逐渐升高;诱导分化的细胞胞浆G-6-P及PAS染色均呈阳性。结论HOCs在体外一定条件刺激下可诱导分化为肝细胞。 展开更多
关键词 肝卵圆细胞 细胞分离 细胞培养 细胞分化
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脐血间充质干细胞无血清培养的实验研究 被引量：2
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作者 涂怀军 李剑 +3 位作者 石庆芝 李洁 吴琼 戴育成 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期573-575,共3页
目的建立一种体外无血清培养扩增脐血间充质干细胞(MSC)的方法。方法从脐血中分离制备单个核细胞悬液,分别接种于有血清培养基及自制的无血清培养基中,比较两种培养条件下细胞生长情况,并进行瑞氏、过碘酸雪夫(PAS)、非特异性酯酶(NAE)... 目的建立一种体外无血清培养扩增脐血间充质干细胞(MSC)的方法。方法从脐血中分离制备单个核细胞悬液,分别接种于有血清培养基及自制的无血清培养基中,比较两种培养条件下细胞生长情况,并进行瑞氏、过碘酸雪夫(PAS)、非特异性酯酶(NAE)和碱性磷酸酶(ALP)染色观察,流式细胞仪分析两种培养条件下MSC表面CD分子表达情况及细胞周期。结果有血清培养第3天出现较多贴壁细胞,8天有细胞丛生长,12～18天细胞融合成片,呈典型的成纤维细胞样外观。无血清培养第5天出现较多贴壁细胞,8天有细胞丛生长,14～20天细胞融合成片。单层融合的脐血MSC消化传代培养1周左右达融合,可继续传代扩增。最终有血清培养获得(3.45±0.28)×108个细胞,无血清培养获得(2.97±0.26)×108个细胞,两者比较差异显著(P<0.05)。无血清与有血清培养21天,贴壁细胞PAS和ALP染色阳性,以成纤维细胞、巨噬细胞、内皮细胞为主。流式细胞仪检测显示,两种培养条件下扩增后的脐血MSC均不表达CD34、CD13和CD45,而强表达CD166、CD29、CD105,较强表达CD54;无血清培养组G0/G1期细胞比例明显高于有血清培养组(P<0.05)。结论利用自行研制的无血清培养基添加一些辅助因子能较好地培养扩增间充质干细胞。 展开更多
关键词 间质干细胞 细胞培养 培养基 无血清 脐血
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直接贴壁法体外分离培养大鼠骨髓内皮祖细胞 被引量：2
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作者 方晓 王康康 +2 位作者 高维陆 张辉 尹宗生 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2016年第11期1696-1699,共4页
取90gSPF级SD大鼠的双后肢骨髓,分别使用直接贴壁法和密度梯度离心法获得大鼠骨髓单个核细胞,用内皮培养体系EGM-2培养基进行定向诱导分化7~14d获得大鼠内皮祖细胞。免疫荧光染色和细胞功能学鉴定内皮祖细胞,观察内皮祖细胞出现的时间... 取90gSPF级SD大鼠的双后肢骨髓,分别使用直接贴壁法和密度梯度离心法获得大鼠骨髓单个核细胞,用内皮培养体系EGM-2培养基进行定向诱导分化7~14d获得大鼠内皮祖细胞。免疫荧光染色和细胞功能学鉴定内皮祖细胞,观察内皮祖细胞出现的时间和数量,CCK-8法鉴定细胞的增殖能力。与密度梯度离心法相比,直接贴壁法在内皮祖细胞出现的时间、数量和增殖能力差异有统计学意义（P〈0.01）。因此,相对于密度梯度离心法,直接贴壁法培养出的内皮祖细胞分化时间更短、数量更多且增殖能力更强。 展开更多
关键词 内皮祖细胞 骨髓 直接贴壁法 密度梯度离心法
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人骨髓间充质干细胞分离培养的细胞周期及表面抗原研究 被引量：2
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作者 朱慧勇 赵军 +3 位作者 吴求亮 王慧明 徐陈槐 刘建华 《口腔医学》 CAS 2004年第5期257-260,共4页
目的 探讨人骨髓间充质干细胞(BMSC)分离培养的细胞周期及细胞表面抗原特性。方法 应用离心法分离培养人BMSC;应用流式细胞学技术测定细胞周期及细胞表面抗原特征。结果 培养的BMSC呈多种形态。细胞周期分析显示G0+G1的比例为88.4％,S+G... 目的 探讨人骨髓间充质干细胞(BMSC)分离培养的细胞周期及细胞表面抗原特性。方法 应用离心法分离培养人BMSC;应用流式细胞学技术测定细胞周期及细胞表面抗原特征。结果 培养的BMSC呈多种形态。细胞周期分析显示G0+G1的比例为88.4％,S+G2+M的比例为11.6％。CD分子阳性细胞百分率结果显示CD29、CD44、HLA-ABC、CD45、CD80、CD34、CD38、HLA-DR分别为86.00％、71.52%、80.45％、71.45％、2.27％、2.83％、5.86％、1.88％。结论 BMSC具有独特的细胞遗传学和免疫学特征。 展开更多
关键词 间充质干细胞 骨髓 培养 细胞周期 表面抗原
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高效疏水色谱分离不同龋敏感者唾液α-淀粉酶 被引量：2
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作者 景娟 侯铁舟 +2 位作者 赵东方 王英 阮梅生 《口腔医学》 CAS 2004年第5期264-266,共3页
目的 采用疏水色谱技术分离提纯高龋者和无龋者腮腺液α-淀粉酶的方法,研究人唾液α-淀粉酶与龋病的关系。方法 样品为刺激性唾液,冻干样品配成20 g/L的浓度。以2.0 mol/L(NH4)2SO4和0.02 mol/L KH2PO4溶液分别为A、B流动相,过XDF-SGM... 目的 采用疏水色谱技术分离提纯高龋者和无龋者腮腺液α-淀粉酶的方法,研究人唾液α-淀粉酶与龋病的关系。方法 样品为刺激性唾液,冻干样品配成20 g/L的浓度。以2.0 mol/L(NH4)2SO4和0.02 mol/L KH2PO4溶液分别为A、B流动相,过XDF-SGM型疏水柱,25 min梯度,A:100％-0％、B:0％-100％,于230 nm检测,收集所得6个组分峰,对硝基麦芽糖庚酰(PNPG7)限定底物法测定酶活性,SDS-PAGE电泳测定其分子质量对样品进行定性。结果 经酶活性检测,6号峰被证实为有高的淀粉酶活性,α-淀粉酶的平均出峰时间标准差小,个体间重复性好;高龋和无龋者峰面积百分比差异有显著性(P<0.05)。结论 α-淀粉酶与龋病有一定的相关性。 展开更多
关键词 龋敏感 高效疏水色谱 分离纯化 腮腺液 Α-淀粉酶
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