pres基因打靶载体同源臂的PCR引物设计

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作者 徐灵活 章建程 +1 位作者 丁猛 王晓花 《海军医学杂志》 2008年第4期289-291,共3页

目的:设计pres基因打靶载体同源臂的PCR引物。方法:在对pres基因结构和功能进行分析之后,选取目标扩增区域进行针对性的酶切位点分析,基于引物设计原则,在符合酶切位点要求的区域内设计同源臂PCR引物。结果:用于构建打靶载体同源长短臂... 目的:设计pres基因打靶载体同源臂的PCR引物。方法:在对pres基因结构和功能进行分析之后,选取目标扩增区域进行针对性的酶切位点分析,基于引物设计原则,在符合酶切位点要求的区域内设计同源臂PCR引物。结果:用于构建打靶载体同源长短臂的引物设计符合研究要求。结论:在考虑引物设计原则和酶切位点分析的基础上,可成功设计打靶载体同源臂PCR引物。 展开更多

关键词 pres基因 PCR引物 引物设计

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IL-23通过PI3K/AKT途径诱导甲状腺上皮细胞凋亡 被引量：4

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作者 郑婷婷 许铖铖 +5 位作者 毛朝明 卜玲 吴菲 罗璇 路庆艳 周月鹏 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期954-957,共4页

目的探讨白细胞介素23(IL-23)对人甲状腺上皮细胞增殖、凋亡的影响。方法用(10、50、100)ng/m L IL-23处理Nthy-ori 3-1甲状腺上皮细胞24 h后,用MTT法检测细胞增殖能力改变,藻红蛋白标记的膜联素Ⅴ/7-氨基放线菌素D(annexinⅤ-PE/7-AAD... 目的探讨白细胞介素23(IL-23)对人甲状腺上皮细胞增殖、凋亡的影响。方法用(10、50、100)ng/m L IL-23处理Nthy-ori 3-1甲状腺上皮细胞24 h后,用MTT法检测细胞增殖能力改变,藻红蛋白标记的膜联素Ⅴ/7-氨基放线菌素D(annexinⅤ-PE/7-AAD)双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡水平变化,Western blot法检测磷酸化的蛋白激酶B(p-AKT)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、Bcl-2、Bcl-x L、活化caspase-3蛋白的水平。结果与对照组相比,随着IL-23剂量增加,甲状腺上皮细胞的增殖能力逐渐下降;IL-23下调PI3K/AKT信号蛋白的磷酸化水平并促进甲状腺上皮细胞凋亡。结论 IL-23通过调节PI3K/AKT途径促进甲状腺上皮细胞凋亡。 展开更多

关键词 白细胞介素23(IL-23) 磷脂酰肌醇3激酶(PI3K) 蛋白激酶B 细胞凋亡

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离子色谱法测定脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗中的1,4-丁二胺含量 被引量：1

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作者 冯潇 马庆华 +2 位作者 傅元欣 魏然 高雪军 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第8期856-860,共5页

目的采用离子色谱法测定脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗中的1,4-丁二胺含量,并对方法进行验证。方法采用Ion Pac CS17(4 mm×250 mm)分析柱,上样量25μl,以10 mmol/L甲基磺酸淋洗液进行等度洗脱,流速1.0 ml/min,电导检测器检测,Chromel... 目的采用离子色谱法测定脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗中的1,4-丁二胺含量,并对方法进行验证。方法采用Ion Pac CS17(4 mm×250 mm)分析柱,上样量25μl,以10 mmol/L甲基磺酸淋洗液进行等度洗脱,流速1.0 ml/min,电导检测器检测,Chromeleon色谱工作站记录并分析数据。对该方法进行专属性、线性、准确性、重复性验证,并确定该方法的最低检出限和最小定量限。结果该方法检测1,4-丁二胺专属性较强;在40μg/L^1 mg/L范围内,1,4-丁二胺浓度与色谱峰面积呈良好的线性关系,r2均大于0.999;向A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖蛋白结合物原液中分别添加低、中、高浓度的1,4-丁二胺,重复测定5次的回收率在97.23%~104.94%之间,重复测定10次的相对标准偏差(RSD)在0.8%~1.8%之间;该方法的最低检出限为5μg/L(信噪比3∶1),最小定量限为40μg/L(信噪比10∶1)。结论离子色谱法简便、快速,灵敏度高,可用于检测脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗中1,4-丁二胺的含量。 展开更多

关键词 离子色谱法 脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗 1 4-丁二胺

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慢性间歇性低氧激活NLRP1炎性小体引起小鼠肝损伤

4

作者 余孝海 孙敏琼 +1 位作者 汪金丽 张森 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期327-332,共6页

目的 探讨慢性间歇性低氧(CIH)是否能激活含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白1(NLRP1)炎性小体引起肝损伤。方法 将C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、 CIH组。CIH组小鼠放入CIH仓进行造模(每天8 h,连续4周)。造模后,采用H... 目的 探讨慢性间歇性低氧(CIH)是否能激活含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白1(NLRP1)炎性小体引起肝损伤。方法 将C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、 CIH组。CIH组小鼠放入CIH仓进行造模(每天8 h,连续4周)。造模后,采用HE染色观察肝组织细胞形态、试剂盒检测小鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平,二氢乙啶(DHE)标记检测肝组织活性氧(ROS)的水平,免疫组织化学染色法检测小鼠肝组织NLRP1、含胱天蛋白酶激活和募集结构域凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和胱天蛋白酶1(caspase-1)的表达和定位,Western blot法检测小鼠肝组织中NLRP1、 ASC、 caspase-1、白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的蛋白表达,ELISA检测小鼠血清IL-1β、 TNF-α水平。结果与对照组相比,CIH组肝细胞病变明显,细胞出现破裂、坏死、炎症细胞聚集,ALT、 AST、 ROS、 IL-1β和TNF-α水平显著升高;NLRP1、 ASC、caspase-1、IL-1β和TNF-α的蛋白表达升高。结论 CIH通过激活NLRP1炎性小体引起肝损伤。 展开更多

关键词 慢性间歇性低氧(CIH) 炎性小体(inflammasome) 肝损伤 活性氧(ROS)

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肠出血性大肠杆菌O157∶H7志贺毒素I型A亚基的表达与鉴定 被引量：2

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作者 黄明明 曾晓燕 +3 位作者 史凤娟 张黎 李祥瑞 焦永军 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期121-124,共4页

目的表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7志贺毒素1型A亚基(Stx1A)重组蛋白并鉴定。方法从EHEC O157∶H7基因组中扩增编码Stx1A的基因,经测序无误后,克隆入表达载体pET-22b(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),经诱导、纯化获得目的蛋白Stx1A,并... 目的表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7志贺毒素1型A亚基(Stx1A)重组蛋白并鉴定。方法从EHEC O157∶H7基因组中扩增编码Stx1A的基因,经测序无误后,克隆入表达载体pET-22b(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),经诱导、纯化获得目的蛋白Stx1A,并对纯化的目的蛋白进行质谱鉴定。重组的Stx1A蛋白免疫BALB/c小鼠,观察小鼠抗血清与EHEC O157∶H7毒株特异性反应。结果 PCR扩增的Stx1A基因为945 bp,成功构建重组质粒pET22b(+)-Stx1a,重组蛋白在原核细胞中获得高效表达,通过AKTATM-His亲和层析柱获得纯化。质谱分析表明目的蛋白为Stx1A。Western blot显示鼠抗Stx1A血清可与EHEC O157∶H7毒株产生的天然毒素蛋白结合。结论成功克隆了EHEC O157∶H7 Stx1A基因,并获得重组表达,为后续研究奠定基础。 展开更多

关键词 肠出血性大肠杆菌O157 H7 志贺毒素1型A亚基 鉴定

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基于下游实验的样本质量分析 被引量：1

6

作者 刘丽 林金嬉 +4 位作者 梁宪红 李上智 乔琳 佟玲 秦海强 《标记免疫分析与临床》 CAS 2022年第11期1942-1945,共4页

目的依据ISO 20387生物样本库通用要求,通过下游实验对现有的白细胞提取质量进行验证,探索适用于生物样本库认可的样本前处理方法。方法对2021年1月至2022年6月使用白细胞进行靶向捕获测序的样本进行DNA提取,通过OD260/280、OD260/230... 目的依据ISO 20387生物样本库通用要求,通过下游实验对现有的白细胞提取质量进行验证,探索适用于生物样本库认可的样本前处理方法。方法对2021年1月至2022年6月使用白细胞进行靶向捕获测序的样本进行DNA提取,通过OD260/280、OD260/230、测量浓度,计算得率对DNA质量进行评价。结果5850例白细胞提取DNA,纯度足够高的样本占比为86.24%,得率大于10μg满足实验需求的样本占比为92.51%。结论将红细胞裂解步骤提前,在新鲜样本时进行,使用纯度较高的白细胞进行DNA提取,通过验证,上述提取方法可行,高纯度样本有效减少了红细胞的干扰,为样本库探索未知研究提供更为可靠的生物样本。 展开更多

关键词 质量 验证 DNA

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电镜半薄切片染色液的改良及应用 被引量：2

7

作者 韩琳 吴鹏 徐军 《沈阳医学院学报》 2008年第3期170-170,共1页

关键词 电镜 半薄切片 染色液

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流感pH1N1病毒血凝素基因进化特征及选择性 被引量：2

8

作者 黄钟洲 梁丽君 +2 位作者 邹丽容 黄平 宋颖超 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第17期1780-1784,共5页

目的 分析广东地区2012-2013年新型H1N1（pH1N1）病毒血凝素（HA）基因、表位和受体结合位点（receptor binding sites,RBS）进化特征和选择性。方法 检测广东地区2012-2013年分离的pH1N1毒株HA基因核苷酸序列,与GenBank中全球相应毒株... 目的 分析广东地区2012-2013年新型H1N1（pH1N1）病毒血凝素（HA）基因、表位和受体结合位点（receptor binding sites,RBS）进化特征和选择性。方法 检测广东地区2012-2013年分离的pH1N1毒株HA基因核苷酸序列,与GenBank中全球相应毒株序列比对,应用MEGA 6.05构建进化树,通过Chimera v1.8.1建模并标记,应用DATAMONKEY筛选HA选择性位点。结果 与疫苗株A/California/07/2009的HA基因比较,广东地区2012-2013年pH1N1毒株的HA基因同源性为98.1%~98.7%;变异位点H155Q、K180Q/N和S202T分别位于HA抗原的Ca2、Sa和Sb表位,S220T和R222K均位于HA抗原的Ca1表位区域;位点A151V位于RBS的140环上。正向选择位点为AA202位点。广东毒株A/Guangdong/64/2013与其他毒株相比,发生6个氨基酸位点变异,包括V6I、N55S、S101G、A151V、H155Q和V267A。结论 广东2012-2013年pH1N1毒株HA基因变异导致了HA抗原表位和RBS 140环位点变异将分别影响毒株的抗原性和受体功能;正向选择位点AA202位点承受着较大的免疫压力;毒株A/Guangdong/64/2013的抗原表位Ca2和RBS位点变异可能是下个流感流行季节优势毒株的分子基础。 展开更多

关键词 流感病毒 H1N1亚型 血凝素 表位 进化 变异 选择性

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b型流感嗜血杆菌多糖间接竞争ELISA检测方法的建立 被引量：2

9

作者 王明清 管娇琼 +2 位作者 龙艺 朱文勇 廖国阳 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第6期623-627,共5页

目的建立b型流感嗜血杆菌（Haemophilus influenzae type b,Hib）多糖间接竞争ELISA检测方法,并进行验证及初步应用。方法以Hib多糖—酪胺结合物（PRP-Ty）作为包被抗原,待测PRP作为竞争抗原,与Hib抗血清反应,建立间接竞争ELISA检测方... 目的建立b型流感嗜血杆菌（Haemophilus influenzae type b,Hib）多糖间接竞争ELISA检测方法,并进行验证及初步应用。方法以Hib多糖—酪胺结合物（PRP-Ty）作为包被抗原,待测PRP作为竞争抗原,与Hib抗血清反应,建立间接竞争ELISA检测方法。采用棋盘法确定最佳包被多糖抗原浓度及Hib抗血清稀释倍数,绘制标准曲线,并确定最低检测限;对建立的方法进行批内和批间精密性验证;取Hib发酵液,在培养温度、接种量等因素相同的情况下,分别将培养液初始p H调至6.0±0.02、7.0±0.02和8.0±0.02,培养不同时间取样,采用建立的方法检测培养液内PRP含量。结果 PRP-Ty的最佳包被浓度为1.25μg/ml,Hib抗血清的最佳稀释倍数为300倍。该方法检测的线性范围为6.25~200 ng/ml,最低检测限为6.25 ng/ml,回归方程为y=-23.12 x＋99.62,R2=0.996。采用该方法分别重复检测3次高浓度（200 ng/ml）和低浓度（20 ng/ml）PRP多糖的变异系数（CV）分别为1.608%和3.344%;采用该方法及传统化学检测法分别检测6次同一批Hib成品分装疫苗的多糖,该方法检测结果的CV值为5.75%,传统化学法检测结果的CV值为1.98%,均符合要求;该方法检测不同初始p H培养液培养的Hib发酵液,培养时间为8 h左右时,PRP产量最高;当初始p H为8.0±0.02时,培养液内PRP含量增长最快,所达到的浓度最高。结论建立了Hib多糖间接竞争ELISA检测方法,该方法灵敏度较高,精密性良好,可应用于Hib多糖含量的定量检测。 展开更多

关键词 B型流感嗜血杆菌 多糖 间接竞争ELISA

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特异性人免疫球蛋白及其临床应用 被引量：4

10

作者 张战 鲍洁 杨海峰 《中国输血杂志》 CAS CSCD 2005年第4期345-348,共4页

关键词 人免疫球蛋白 特异性 临床应用

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不同病毒灭活工艺对静注免疫球蛋白质量和收率的影响 被引量：5

11

作者 张战 郑庭均 骆远艺 《中国输血杂志》 CAS CSCD 2006年第5期377-378,共2页

目的比较不同病毒灭活工艺对静注免疫球蛋白质量和收率的影响。方法以相同品质的FⅡ沉淀溶解液为原料,分别经低pH孵放、纳米膜过滤、巴氏消毒和S/D病毒灭活工艺处理后来制备原液,比较原液质量及蛋白收率。结果4种工艺所制备原液的主要... 目的比较不同病毒灭活工艺对静注免疫球蛋白质量和收率的影响。方法以相同品质的FⅡ沉淀溶解液为原料,分别经低pH孵放、纳米膜过滤、巴氏消毒和S/D病毒灭活工艺处理后来制备原液,比较原液质量及蛋白收率。结果4种工艺所制备原液的主要质量指标相互间均符合《中国药典》标准,蛋白纯度、IgG单体+二聚体、PKA、抗体以及热稳定等质量指标相互间无显著差异(P>0.05)。采用巴氏消毒工艺制品的抗补体活性明显低于其它3种产品(P<0.01)。4种工艺的蛋白收率差异较大,采用巴氏消毒工艺制备的制品最低,仅为(72.7±5.6)%。结论不同病毒灭活工艺对静注免疫球蛋白的质量有一定影响,而对蛋白收率的影响较大。 展开更多

关键词 收率 IVIG病毒灭活 组分Ⅲ沉淀 低pH孵放 纳米膜过滤 巴氏消毒S/D处理

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运用外部质量评估数据评价实验室血糖、糖化血红蛋白检测结果的质量策略

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作者 孔丽蕊 刘燕群 +4 位作者 吴风 何大海 黄英 周朝琼 张艳 《标记免疫分析与临床》 CAS 2024年第11期2110-2113,2172,共5页

目的利用外部质量评估(EQA)数据,建立适合血糖(GLU)、糖化血红蛋白(HbA1c)大数据研究的质量评价策略,保证大数据研究成果的有效性。方法对参加国家卫健委临检中心EQA活动的GLU和HbA1c数据进行回顾性分析,与基于生物学变异(BV)的不同等... 目的利用外部质量评估(EQA)数据,建立适合血糖(GLU)、糖化血红蛋白(HbA1c)大数据研究的质量评价策略,保证大数据研究成果的有效性。方法对参加国家卫健委临检中心EQA活动的GLU和HbA1c数据进行回顾性分析,与基于生物学变异(BV)的不同等级质量标准进行比较,计算实验室GLU和HbA1c EQAs的接受率和绝对百分比偏倚,建立适合GLU和HbA1c的质量策略。结果GLU和HbA1c EQAs接受率差异较大,0.00%~100.00%不等。满足GLU和HbA1c最佳、适当和最低标准的平均绝对百分比偏移分别为0.61%、1.00%、1.21%和0.29%、0.60%、0.76%。结论GLU和HbA1c EQAs接受率和不同质量等级的EQAs结果差异有统计学意义。EQA是最低质量标准,即使通过了EQA评价,也不能保证实验室测试结果适合大数据研究的质量要求。EQA可以作为构建大数据研究的参考指南。 展开更多

关键词 血糖 糖化血红蛋白 外部质量评估 偏移 生物学变异 质量标准

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外源质粒pcDNA3s疫苗在小鼠体内组织代谢动力学研究 被引量：2

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作者 刘建文 乐国伟 施用晖 《生命科学研究》 CAS CSCD 2004年第2期164-168,共5页

为分析外源质粒pcDNA3s肌肉注射后在小鼠体内的组织分布及评价整合到宿主基因组上的可能性.通过PCR方法检测质粒pcDNA3s经肌肉注射在各组织中的分布及随时间变化的情况.检测外源质粒在基因组DNA上的整合情况.注射后3h所有的组织均能检... 为分析外源质粒pcDNA3s肌肉注射后在小鼠体内的组织分布及评价整合到宿主基因组上的可能性.通过PCR方法检测质粒pcDNA3s经肌肉注射在各组织中的分布及随时间变化的情况.检测外源质粒在基因组DNA上的整合情况.注射后3h所有的组织均能检测到质粒,至第3周时只有胸腺和生殖器官能检测到质粒的存在,至第6周后各组织均为阴性.各组织基因组DNA经PCR扩增均为阴性.肌注外源质粒后,外源质粒在小鼠细胞内逐渐被清除,外源质粒不会整合到宿主染色体上. 展开更多

关键词 外源质粒 代谢动力学 整合 染色体

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丙酮二胺和甲醛及硝基烷的Mannich反应

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作者 胡运全 王广聚 《兵工学报》 EI CAS 1984年第4期27-33,共7页

二胺基丙酮盐酸盐能用甲醛羟甲基化得到醛胺缩合液(Ⅰ)。(Ⅰ)和硝基烷及其衍生物(硝仿、二硝基乙醇钾、氟二硝基甲烷)进行Mannich反应相应地给出直链的Mannich碱和环状缩合物,并通过硝化得到了它们的硝化产物。(Ⅰ)也可同甲撑二硝胺进... 二胺基丙酮盐酸盐能用甲醛羟甲基化得到醛胺缩合液(Ⅰ)。(Ⅰ)和硝基烷及其衍生物(硝仿、二硝基乙醇钾、氟二硝基甲烷)进行Mannich反应相应地给出直链的Mannich碱和环状缩合物,并通过硝化得到了它们的硝化产物。(Ⅰ)也可同甲撑二硝胺进行关环缩合,虽成环产物的硝化没有成功,但在稀硝酸中和硝基烷反应,再通过亚硝化、硝化,所得产物与硝基烷同(Ⅰ)反应所得Mannich碱的硝化产物相同。本文还对丙酮二胺的成环产物的结构与反应性能的关系进行了讨论。 展开更多

关键词 MANNICH反应 亚硝化 醛胺缩合 乙醇钾 稀硝酸 羟甲基化 盐酸盐 反应性能 二胺 环状化合物

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LXR-α基因的突变对冠心病有诊断价值

15

作者 张润峰（摘译） 《中华医学信息导报》 2009年第6期11-11,共1页

目前，直接探讨冠心病患者血液单核细胞肝脏X受体-α（LXR-α）基因功能组学的研究，揭示了血细胞LXR-α mRNA表达与冠状动脉闭塞严重程度之间的矛盾关系。印度昌迪加尔的Dave等为解决这一矛盾，对LXR—α基因配体结合区域进行了分析，... 目前，直接探讨冠心病患者血液单核细胞肝脏X受体-α（LXR-α）基因功能组学的研究，揭示了血细胞LXR-α mRNA表达与冠状动脉闭塞严重程度之间的矛盾关系。印度昌迪加尔的Dave等为解决这一矛盾，对LXR—α基因配体结合区域进行了分析，研究论文刊登在J Mol Cell Cardiol上。 展开更多

关键词 冠心病患者 Α基因 诊断价值 突变 冠状动脉闭塞 MRNA表达 配体结合区 基因功能

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HPRT缺陷细胞株的诱变和分离

16

作者 郭建辉 章扬培 夏寿萱 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 1989年第2期88-91,共4页

用单功能烷化剂N-甲基-N-硝基-N-亚硝胍(MNNG)作为化学诱变剂处理中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1),使其基因发生点突变,通过含有6-巯基鸟嘌呤(6-TG)的培养基选择,获得次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HPRT,E、C、2、4、2、8)缺陷细胞的克隆.诱发突变... 用单功能烷化剂N-甲基-N-硝基-N-亚硝胍(MNNG)作为化学诱变剂处理中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1),使其基因发生点突变,通过含有6-巯基鸟嘌呤(6-TG)的培养基选择,获得次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HPRT,E、C、2、4、2、8)缺陷细胞的克隆.诱发突变频率为1.3×10^(-5).经含次黄嘌呤-氨基喋呤-胸腺嘧啶核苷(HAT)的选择培养基鉴定及大剂量6-TG选择培养基验证,确认选出的克隆为HPRT缺陷型.经6周连续传代,缺陷株表型仍稳定. 展开更多

关键词 HPRT 缺陷细胞株 诱变 分离

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