目的建立一种利用菌液吸收法去除A、C、Y、W135群脑膜炎球菌抗血清交叉反应的纯化方法,并验证其在多糖结合疫苗检测中的适用性。方法将A、C、Y、W135群脑膜炎球菌分别经耳缘静脉注射免疫新西兰兔,每群2只(雌雄各半),首周隔天免疫1次,共...目的建立一种利用菌液吸收法去除A、C、Y、W135群脑膜炎球菌抗血清交叉反应的纯化方法,并验证其在多糖结合疫苗检测中的适用性。方法将A、C、Y、W135群脑膜炎球菌分别经耳缘静脉注射免疫新西兰兔,每群2只(雌雄各半),首周隔天免疫1次,共免疫3次,连续免疫4周,制备基础抗血清;采用异群菌液反复吸收法进行抗血清的去交叉纯化,ELISA法比较纯化前后抗血清与异群多糖的交叉反应率,火箭电泳和速率比浊法进一步佐证血清的特异性。对建立的方法进行特异性、专属性、重复性、耐用性及稳定性验证。结果未纯化抗血清存在明显交叉反应,最高交叉率达16.25%。经菌液吸收处理后,A、C、Y、W135群抗血清与异群多糖的交叉反应率均显著下降至2%以下,且保留了较高的特异性抗体几何平均滴度(geometric mean titer,GMT);火箭电泳与速率比浊法检测结果均证实纯化后血清无交叉沉淀产生。纯化后血清特异性良好,不与其他群结合物多糖抗原发生明显的交叉反应,且专属性较高;各群血清检测的组内CV为0.96%~6.10%,组间CV为3.21%~6.18%,均<15%;在不同抗原浓度(5~15μg/mL)下,测定结果的相对误差(relative error,RE)值均小于8%,耐用性良好;血清库在360 d观察期内效价稳定,无显著差异。结论建立的菌液吸收纯化方法能高效去除A、C、Y、W135群脑膜炎球菌抗血清间的交叉反应,制备的抗血清具有高特异性,良好的精密度和稳定性,可作为脑膜炎球菌多糖结合疫苗质量控制的关键检测试剂。展开更多
建立了超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)测定人体血清中52种全氟及多氟烷基化合物(PFASs)的方法。200μL血清样本经3 mL 0.6%甲酸-乙酸乙酯和正己烷混合溶液(体积比3∶2)进行3次液液萃取后,采用UHPLC-MS/MS检测分析。52种PFASs在...建立了超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)测定人体血清中52种全氟及多氟烷基化合物(PFASs)的方法。200μL血清样本经3 mL 0.6%甲酸-乙酸乙酯和正己烷混合溶液(体积比3∶2)进行3次液液萃取后,采用UHPLC-MS/MS检测分析。52种PFASs在线性范围内线性良好,相关系数(r2)为0.9955~0.9998,方法检出限(LOD)为0.0009~0.0150μg/L,定量下限(LOQ)为0.0029~0.0500μg/L,加标回收率为75.1%~115%,平均加标回收率为78.9%~107%,相对标准偏差(RSD)为1.6%~15%,基质效应为85.0%~115%。使用该方法对180份人体血清进行检测,共检出48种化合物,其中PFHpA、PFOA、PFNA、PFDA、PFUdA、PFDoA、PFTrDA、PFTeDA、PFHxS、PFHpS、PFOS和6∶2 Cl-PFAES等12个单体化合物的检出率为100%。该方法操作简便,检出限低、精密度好、准确度高且重复性好,符合血清中PFASs检测分析的要求。展开更多
文摘目的建立一种利用菌液吸收法去除A、C、Y、W135群脑膜炎球菌抗血清交叉反应的纯化方法,并验证其在多糖结合疫苗检测中的适用性。方法将A、C、Y、W135群脑膜炎球菌分别经耳缘静脉注射免疫新西兰兔,每群2只(雌雄各半),首周隔天免疫1次,共免疫3次,连续免疫4周,制备基础抗血清;采用异群菌液反复吸收法进行抗血清的去交叉纯化,ELISA法比较纯化前后抗血清与异群多糖的交叉反应率,火箭电泳和速率比浊法进一步佐证血清的特异性。对建立的方法进行特异性、专属性、重复性、耐用性及稳定性验证。结果未纯化抗血清存在明显交叉反应,最高交叉率达16.25%。经菌液吸收处理后,A、C、Y、W135群抗血清与异群多糖的交叉反应率均显著下降至2%以下,且保留了较高的特异性抗体几何平均滴度(geometric mean titer,GMT);火箭电泳与速率比浊法检测结果均证实纯化后血清无交叉沉淀产生。纯化后血清特异性良好,不与其他群结合物多糖抗原发生明显的交叉反应,且专属性较高;各群血清检测的组内CV为0.96%~6.10%,组间CV为3.21%~6.18%,均<15%;在不同抗原浓度(5~15μg/mL)下,测定结果的相对误差(relative error,RE)值均小于8%,耐用性良好;血清库在360 d观察期内效价稳定,无显著差异。结论建立的菌液吸收纯化方法能高效去除A、C、Y、W135群脑膜炎球菌抗血清间的交叉反应,制备的抗血清具有高特异性,良好的精密度和稳定性,可作为脑膜炎球菌多糖结合疫苗质量控制的关键检测试剂。
文摘建立了超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)测定人体血清中52种全氟及多氟烷基化合物(PFASs)的方法。200μL血清样本经3 mL 0.6%甲酸-乙酸乙酯和正己烷混合溶液(体积比3∶2)进行3次液液萃取后,采用UHPLC-MS/MS检测分析。52种PFASs在线性范围内线性良好,相关系数(r2)为0.9955~0.9998,方法检出限(LOD)为0.0009~0.0150μg/L,定量下限(LOQ)为0.0029~0.0500μg/L,加标回收率为75.1%~115%,平均加标回收率为78.9%~107%,相对标准偏差(RSD)为1.6%~15%,基质效应为85.0%~115%。使用该方法对180份人体血清进行检测,共检出48种化合物,其中PFHpA、PFOA、PFNA、PFDA、PFUdA、PFDoA、PFTrDA、PFTeDA、PFHxS、PFHpS、PFOS和6∶2 Cl-PFAES等12个单体化合物的检出率为100%。该方法操作简便,检出限低、精密度好、准确度高且重复性好,符合血清中PFASs检测分析的要求。
