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食管腺癌早期多种标志物检测试剂的开发与验证
1
作者 赵刘诺贝 张晓梅 +4 位作者 许萌 贾岩 陈浩 杨靖 于晓波 《中国免疫学杂志》 北大核心 2025年第4期972-978,共7页
目的:鉴于食管腺癌(EAC)现有临床标志物在早期诊断能力上的不足,本研究采用液相芯片技术开发多种血清蛋白标志物检测试剂,并初步验证这些标志物对于EAC的检测能力。方法:收集48例EAC患者和同期33例健康对照(HC)血清样本,通过液相芯片技... 目的:鉴于食管腺癌(EAC)现有临床标志物在早期诊断能力上的不足,本研究采用液相芯片技术开发多种血清蛋白标志物检测试剂,并初步验证这些标志物对于EAC的检测能力。方法:收集48例EAC患者和同期33例健康对照(HC)血清样本,通过液相芯片技术分析患者血清中鳞状细胞癌抗原(SCCA)、人细胞角蛋白19片段(Cyfra21-1)、肝细胞生长因子(HGF)和IL-8水平差异,通过受试者工作特征(ROC)曲线评估单一指标和4个指标联合的诊断效能。结果:SCCA、Cyfra21-1、HGF和IL-8检测范围分别为0.24~1000 ng/ml、45.72~100000 pg/ml、21.95~16000 pg/ml和0.61~10000 pg/ml。液相芯片技术与临床化学发光免疫技术(r=0.9494,P<0.0001)和ELISA技术(r=0.9551,P<0.0001)均有强相关性。与HC组相比,EAC组血清中SCCA和HGF显著升高(P<0.01),IL-8显著降低(P<0.05),Cyfra21-1差异无统计学意义(P>0.05)。在早期EAC组血清中HGF显著高于HC组(P<0.01)。ROC曲线显示,单个指标中HGF对早期EAC的诊断效能最佳,曲线下面积(AUC)为0.761,4项标志物组合的AUC为0.857,均优于临床标志物SCCA(AUC=0.604)和Cyfra21-1(AUC=0.515)。结论:液相芯片技术被用于联合检测人血清中SCCA、Cyfra21-1、HGF和IL-8,在EAC早期诊断中,4种标志物联合使用的诊断效能优于临床常用的肿瘤标志物SCCA和Cyfra21-1,这得益于液相芯片技术的高通量和高灵敏度特点。因此,这种联合检测方法具有较高的临床应用推广价值,有望为EAC的早期诊断提供更为准确和可靠的工具。 展开更多
关键词 食管腺癌 液相芯片 早期蛋白标志物 体外诊断
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多组织碎片悬液作为免疫组化阳性对照在乳腺癌相关质控中的应用
2
作者 吉佳乐 姚馨悦 +2 位作者 赵庆宁 邱世进 何志承 《临床与实验病理学杂志》 北大核心 2025年第2期266-269,共4页
目的为简化免疫组化阳性对照制作流程,探究多组织碎片悬液作为阳性对照在乳腺癌相关指标染色的价值。方法收集2023年1~6月陆军军医大学第一附属医院存档的乳腺相关免疫组化阳性(HER2、GATA-3、E-cadherin、FOXC1、Ki67、Syn、ER和PR)标... 目的为简化免疫组化阳性对照制作流程,探究多组织碎片悬液作为阳性对照在乳腺癌相关指标染色的价值。方法收集2023年1~6月陆军军医大学第一附属医院存档的乳腺相关免疫组化阳性(HER2、GATA-3、E-cadherin、FOXC1、Ki67、Syn、ER和PR)标本各5例,4~5μm厚连续切片20张,分别置于1.5 mL离心管中,脱蜡搅碎后制成组织悬液,各取100μL混合制成多组织碎片悬液,再进行相应的免疫组化染色;分别存放1、3个月后再进行染色,观察染色强度及定位。结果大部分组织平铺、清晰可见异型性细胞,定位准确且与原组织染色无明显差异;多组织碎片悬液存放1、3个月后再染色,细胞定位准确,染色强度跟现做现染无明显改变。结论多组织碎片悬液染色后定位准确、染色强度稳定且不易掉片,可作为阳性质控物用于乳腺癌相关免疫组化染色,为临床诊断提供参考。 展开更多
关键词 多组织碎片悬液 阳性对照 室内质控 免疫组织化学
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选择性激动黑皮质素4型受体(MC4R)通过HMGB1/TLR4/NF-κB信号途径对抗大鼠脓毒症致急性肝损伤 被引量：21
3
作者 李徽徽 仇大鹏 +2 位作者 高琴 汪华学 孙美群 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1055-1059,1064,共6页
目的观察选择性激动黑皮质素4型受体(MC4R)对脓毒症致急性肝损伤大鼠的影响。方法 64只雄性SD大鼠随机分假手术组(假手术后用PBS处理)、盲肠结扎穿孔(CLP)组(采用CLP建立脓毒症模型)、Ro27-3225处理组(CLP后用Ro27-3225处理)和Ro27-322... 目的观察选择性激动黑皮质素4型受体(MC4R)对脓毒症致急性肝损伤大鼠的影响。方法 64只雄性SD大鼠随机分假手术组(假手术后用PBS处理)、盲肠结扎穿孔(CLP)组(采用CLP建立脓毒症模型)、Ro27-3225处理组(CLP后用Ro27-3225处理)和Ro27-3225假手术对照组(假手术后用Ro27-3225处理),每组16只(10只大鼠观察术后一般状态和72 h生存率,另外6只大鼠于术后24 h采集血液及肝组织标本)。各组分别于术后30 min腹腔注射PBS或Ro27-3225(180μg/kg),术后24 h测定大鼠心率(HR)及平均动脉压(MAP)、大鼠血清中天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平。动物处死后,HE染色观察肝组织病变,反转录PCR检测肝组织中Toll样受体4(TLR4)、高迁移率族蛋白1(HMGB1)和caspase-3 mRNA水平,免疫组织化学染色检测肝细胞中核因子κB(NF-κB)p65的表达,并分析NF-κB p65核阳性率。结果与假手术组相比,CLP组大鼠72 h生存率和MAP降低,血清中AST和ALT水平明显升高,肝索排列紊乱,肝细胞水肿,有明显炎性细胞浸润,肝组织中TLR4、HMGB1和caspase-3 mRNA水平明显升高,肝细胞中NF-κB p65核阳性率明显升高。与CLP组相比,Ro27-3225处理组大鼠72 h生存率和MAP明显升高,血清中AST和ALT水平明显降低,肝组织结构损伤明显减轻,肝组织中TLR4、HMGB1和caspase-3 mRNA水平降低,肝细胞中NF-κB p65核阳性率明显降低。结论脓毒症能引起肝损伤,选择性激动MC4R可能通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号途径,减轻炎症反应,降低脓毒症引起的肝损伤。 展开更多
关键词 脓毒症 急性肝损伤 Toll样受体4 高迁移率族蛋白1 核因子ΚB 黑皮质素4型受体
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动物源性生物制品病毒灭活/去除工艺的验证 被引量：19
4
作者 巩薇 付瑞 +3 位作者 王吉 卫礼 肖镜 贺争鸣 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第12期920-923,共4页
目的对动物源性生物制品病毒灭活/去除工艺进行验证。方法针对不同动物源性制品,选择相关的指示病毒,对4个厂家不同的病毒灭活/去除工艺进行效果验证。结果各工艺均可灭活/去除指示病毒4Logs以上,均为有效的灭活/去除病毒工艺。结论4个... 目的对动物源性生物制品病毒灭活/去除工艺进行验证。方法针对不同动物源性制品,选择相关的指示病毒,对4个厂家不同的病毒灭活/去除工艺进行效果验证。结果各工艺均可灭活/去除指示病毒4Logs以上,均为有效的灭活/去除病毒工艺。结论4个厂家的灭活/去除病毒工艺均可保证制品的安全性。 展开更多
关键词 动物源性 生物制品 病毒灭活/去除 验证
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头孢地嗪增加老年细菌性肺炎患者外周血CD4/CD8和Th1/Th2细胞比例 被引量：24
5
作者 王滨 边瑞民 +2 位作者 魏传梅 孙绍伟 高培民 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期528-531,共4页
目的探讨头孢地嗪对老年细菌性肺炎患者外周血T淋巴细胞CD4/CD8和Th1/Th2细胞比例的影响。方法选取老年细菌性肺炎患者63例,以随机数字表分为两组;对照组31例采用头孢三嗪静脉滴注疗法,观察组32例采用头孢地嗪静脉滴注疗法治疗。分别于... 目的探讨头孢地嗪对老年细菌性肺炎患者外周血T淋巴细胞CD4/CD8和Th1/Th2细胞比例的影响。方法选取老年细菌性肺炎患者63例,以随机数字表分为两组;对照组31例采用头孢三嗪静脉滴注疗法,观察组32例采用头孢地嗪静脉滴注疗法治疗。分别于治疗前后抽取患者空腹静脉血,以流式细胞仪测定CD4/CD8和Th1/Th2的细胞计数比;以ELISA试剂盒测定Th1细胞分泌因子白细胞介素2(IL-2)、γ干扰素(IFN-γ)与Th2细胞分泌因子IL-4、IL-10的血清浓度。结果治疗前,两组患者的各项指标均无明显差异。治疗后,观察组患者CD4+细胞、Th1细胞比例增加,Th2细胞比例降低,CD4/CD8和Th1/Th2比值均显著高于对照组;同时,观察组患者血清IL-2、IFN-γ浓度显著高于对照组,IL-4、IL-10浓度显著低于对照组。结论头孢地嗪能够提高老年细菌性肺炎患者细胞免疫功能,纠正外周血T淋巴细胞CD4/CD8和Th1/Th2比例失调。 展开更多
关键词 头孢地嗪 老年 细菌性肺炎 CD4+/CD8+ TH1/TH2
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免疫学技术实验教学改革初探 被引量：11
6
作者 杜冰 任华 +2 位作者 祁灵 江文正 钱旻 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期404-405,共2页
免疫学技术的应用最早可以追溯到我国北宋时期。人们尝试采用人痘苗接种的方式预防天花。随着生物学技术的发展，免疫学技术早已脱离了经验时期转入到现代免疫学时期，与疾病的诊断、预防和治疗密切相关，成为生命科学研究中最为重的实... 免疫学技术的应用最早可以追溯到我国北宋时期。人们尝试采用人痘苗接种的方式预防天花。随着生物学技术的发展，免疫学技术早已脱离了经验时期转入到现代免疫学时期，与疾病的诊断、预防和治疗密切相关，成为生命科学研究中最为重的实验技术涉及到生物学研究的各个方面，与实际应用联系紧密。免疫学作为生命科学发展的前沿学科，以其研究的深度和应用的广度成为沟通生物学基础和临床研究的重桥梁。 展开更多
关键词 免疫学技术 实验教学改革 生物学技术 生命科学 生物学基础 北宋时期 实验技术 科学研究
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大黄素-BSA不同表位构型的免疫原性和特异性研究 被引量：14
7
作者 李丽华 刘文泰 +4 位作者 戴军 窦玉红 王茹 刘艳臣 彭洋 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期419-422,共4页
目的:研究不同偶联法制备大黄素-BSA的大黄素表位构型及其免疫原性和特异性。方法:用重氮化对氨基苯甲酸偶联法和琥珀酸酐偶联法制备两种不同表位构型的大黄素-BSA1和大黄素-BSA2抗原,免疫小鼠制备抗血清,用醋酸纤维素膜双向免疫扩散法... 目的:研究不同偶联法制备大黄素-BSA的大黄素表位构型及其免疫原性和特异性。方法:用重氮化对氨基苯甲酸偶联法和琥珀酸酐偶联法制备两种不同表位构型的大黄素-BSA1和大黄素-BSA2抗原,免疫小鼠制备抗血清,用醋酸纤维素膜双向免疫扩散法检测免疫原性及其抗体特异性。结果:大黄素-BSA1和大黄素-BSA2抗血清与大黄素反应的抗体效价分别为1∶144 0±357.771和1∶440±219.089,二者有极显著性差异(P=0.006)。分别与大黄素等五种蒽醌类化合物反应,前者对大黄素有较高特异性,抗原结合效价可达1∶1 843.2±457.947。后者对大黄素的特异性较低,结合效价仅为1∶8.8±4.382。结论:两种偶联法制备大黄素-BSA的表位构型不同,其免疫原性和特异性存在着显著差异。重氮化对氨基苯甲酸偶联法制备大黄素-BSA的免疫原性较高、大黄素特异性较强。 展开更多
关键词 抗原抗体反应 双向免疫扩散法 大黄素 半抗原-载体偶联法 表位
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体外扩增高纯度的人外周血来源的NK细胞的研究 被引量：15
8
作者 李晓红 马健 +3 位作者 汪菲菲 窦立萍 李猛 高春记 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2007年第2期373-377,共5页
本研究探讨从人外周血中分选及扩增高纯度NK细胞的优化技术。先用miniMACS及阴性免疫磁珠分选方法,从外周血单个核细胞(PBMNC)得到纯化的NK细胞,随后在干细胞培液基条件下,通过IL-2、IL-12和IL-15等细胞因子的不同组合将培养体系分为IL-... 本研究探讨从人外周血中分选及扩增高纯度NK细胞的优化技术。先用miniMACS及阴性免疫磁珠分选方法,从外周血单个核细胞(PBMNC)得到纯化的NK细胞,随后在干细胞培液基条件下,通过IL-2、IL-12和IL-15等细胞因子的不同组合将培养体系分为IL-2组、IL2+IL12组、IL2+IL15组、IL2+IL15+IL12组和对照组(不加任何细胞因子),分别培养15天,每3天半量换液并补充细胞因子;检测分选及扩增前后(CD3-CD56+)NK细胞含量、扩增倍数及扩增前后各组在不同效靶比下的杀伤率。结果显示经:miniMACS阴性免疫磁珠分选后(CD3-CD56+)NK细胞含量由分选前的11.19±5.25%提高到94.23±3.50%。培养15天后除对照组(CD3-CD56+)NK细胞纯度略下降外,其余4组与扩增前无显著性差异(P>0.05)。在IL-2、IL2+IL12、IL2+IL15、IL2+IL15+IL12培养体系中,NK细胞扩增倍数分别为15.43±1.08,19.87±3.87,50.46±4.31和52.35±6.72,均显著高于对照组6.14±1.0(P<0.01),但IL2+IL15与IL2+IL15+IL12组间未见显著差异(P>0.05)。各组扩增的NK细胞对K562细胞的杀伤率均较扩增前增强,在不同效靶比下IL2+IL15、IL2+IL15+IL12组对K562细胞的杀伤率显著高于其他组,但两组间无显著性差异(P>0.05)。结论:经miniMACS免疫磁珠阴性分选得少量NK细胞后,应用IL2+IL15培养条件是获得高纯度NK细胞的简单有效方法。 展开更多
关键词 NK细胞 miniMACS 白介素2 白介素12 白介素15
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抗原激活系统血液免疫反应实验研究 被引量：12
9
作者 郭峰 花美仙 +5 位作者 张乐之 蔡志扬 徐玉莲 查占山 张军 钱宝华 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期732-737,742,共7页
目的:用系统免疫学研究体系探讨在系统血液免疫反应中不同抗原物质激活红细胞调控白细胞免疫反应的实验观察。方法:将卡介苗(1 mg/ml)、瘤苗(S180 5×106ml-1)或酵母菌(5×108ml-1)0.2 ml,以生理盐水(代替抗原物质)0.2 ml为各... 目的:用系统免疫学研究体系探讨在系统血液免疫反应中不同抗原物质激活红细胞调控白细胞免疫反应的实验观察。方法:将卡介苗(1 mg/ml)、瘤苗(S180 5×106ml-1)或酵母菌(5×108ml-1)0.2 ml,以生理盐水(代替抗原物质)0.2 ml为各自对照组加入枸橼酸抗凝全血细胞或白细胞0.2 ml和血浆(或生理盐水0.3 ml)中,37℃水浴1小时,用免疫酶联法测定IL-8和IL-6,用流式细胞仪测定Fy6和CD35分子平均荧光强度。结果:各种抗原物质加入血细胞和血浆组其IL-8激活率为(2.71±0.37)显著高于血细胞和生理盐水组(-0.33±0.05)(P<0.01)。前组IL-6激活率(1.01±0.37)也高于后组,其IL-6激活值为(-0.25±1.06)。各种抗原加入全血细胞和血浆组的IL-8激活率为(2.71±0.37)显著高于各种抗原加入白细胞和血浆组IL-8激活率(0±0.20)(P<0.01)。在各种抗原加入血液组红细胞Fy6平均荧光强度表达水平(28.85和25.35)低于生理盐水加入血液组红细胞Fy6平均荧光强度表达水平(45.80),各种抗原加入全血细胞和血浆组粒细胞CD35平均荧光强度表达量(860.4±115.63)明显高于各种抗原加入白细胞血浆组粒细胞CD35平均荧光强度表达量(565.07±96.35)(P<0.01)。在无血浆组,红细胞对白细胞分泌的IL-8和IL-6有吸附作用。结论:在本实验体系中,各种抗原可激活红细胞调控系统血液免疫反应中的各种白细胞被活化所分泌的IL-8和IL-6含量。在体外抗原可快速激活系统血液免疫反应。红细胞调控各种白细胞释放IL-8和IL-6的机制是复杂的,如红细胞对IL-8和IL-6激活率与血浆和CD35分子量表达密切相关,红细胞IL-8和IL-6吸附率与Fy6和gp130表达密切相关。红细胞与血浆在系统血液免疫反应调控中扮演着重要的角色。 展开更多
关键词 抗原 红细胞 IL-8 IL-6 系统血液免疫反应
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卵清蛋白激发对肠道菌群失调小鼠T细胞功能亚群的影响 被引量：16
10
作者 孙大庆 杨锡强 +3 位作者 王莉佳 李欣 刘恩梅 赵晓东 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期473-476,共4页
目的:探讨卵清蛋白(OVA)雾化吸入激发对抗生素致肠道菌群失调小鼠肺组织及脾脏中T淋巴细胞功能亚群的影响。方法:32只BALB/c小鼠随机分为4组:菌群失调组、菌群失调加激发组、激发组、对照组。于实验第14天采用流式细胞术(FCM)检测肺组... 目的:探讨卵清蛋白(OVA)雾化吸入激发对抗生素致肠道菌群失调小鼠肺组织及脾脏中T淋巴细胞功能亚群的影响。方法:32只BALB/c小鼠随机分为4组:菌群失调组、菌群失调加激发组、激发组、对照组。于实验第14天采用流式细胞术(FCM)检测肺组织及脾脏中Th1、Th2、Th17以及CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Tregs)水平。结果:菌群失调加激发组小鼠肺组织中Th2、Th17细胞水平增高,脾脏中Th1、Th2、Th17均与对照组无差异;菌群失调组及菌群失调加激发组小鼠肺组织及脾脏中Tregs水平均降低。结论:抗生素致肠道菌群失调小鼠经卵清蛋白雾化吸入激发后,可产生Th2、Th17细胞优势的变应性气道反应,与Tregs调节功能不足可能有关。 展开更多
关键词 卵清蛋白 肠道菌群 气道变应性 T淋巴细胞
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抗人VEGF受体Ⅱ胞外Ⅲ区单克隆抗体的制备 被引量：14
11
作者 李容 熊冬生 +4 位作者 邵晓枫 李长辉 许元富 刘嘉 杨纯正 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期193-197,共5页
目的　制备人血管内皮细胞生长因子受体Ⅱ (Kinaseinsertdomaintontainingreceptor,KDR)胞外Ⅲ区的单克隆抗体 (McAb) ,探讨其抑制VEGF诱导的体外活性。方法　在大肠杆菌中表达重组KDR胞外Ⅲ区融合蛋白。融合蛋白经抗E tag柱分离纯化后... 目的　制备人血管内皮细胞生长因子受体Ⅱ (Kinaseinsertdomaintontainingreceptor,KDR)胞外Ⅲ区的单克隆抗体 (McAb) ,探讨其抑制VEGF诱导的体外活性。方法　在大肠杆菌中表达重组KDR胞外Ⅲ区融合蛋白。融合蛋白经抗E tag柱分离纯化后免疫Balb/c小鼠 ,采用传统杂交瘤技术制备抗KDR胞外Ⅲ区McAb ,采用ELISA和Western免疫印迹鉴定其亚类和抗原结合特异性 ,并测定单克隆抗体对VEGF1 65刺激脐静脉内皮细胞株ECV30 4增殖的中和活性。结果　成功筛选出一株能稳定分泌抗KDR胞外Ⅲ区单克隆抗体的杂交瘤细胞株 (1D3) ,其分泌抗体亚类为IgG1。该McAb可明显阻断VEGF1 65对脐静脉内皮细胞株ECV30 4的刺激增生作用。结论　抗人血管内皮细胞生长因子受体KDR胞外Ⅲ区McAb可通过封闭KDR而抑制VEGF活性 ,McAb 展开更多
关键词 单克隆抗体 制备 血管内皮细胞生长因子受体 杂交瘤
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人NK细胞体外高效扩增的实验研究 被引量：10
12
作者 黄庆生 李琦 +2 位作者 黄勇 商澎 张明杰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1167-1169,1173,共4页
目的:建立人NK细胞体外大量扩增的方法。方法:采用基因工程方法,在K562细胞上同时表达IL-15、IL-18、4-1BBL3种基因,构建特定的K562工程细胞作为刺激细胞。IL-15、IL-18基因分别与一段特殊的跨膜蛋白基因融合,4-1BBL直接跨膜表达,使这3... 目的:建立人NK细胞体外大量扩增的方法。方法:采用基因工程方法,在K562细胞上同时表达IL-15、IL-18、4-1BBL3种基因,构建特定的K562工程细胞作为刺激细胞。IL-15、IL-18基因分别与一段特殊的跨膜蛋白基因融合,4-1BBL直接跨膜表达,使这3种蛋白在K562细胞中表达后锚定于细胞膜表面。其次,以照射致死的该K562工程细胞作为刺激细胞,以人外周血单个核细胞(PBMC)为扩增培养对象,通过与IL-2的共刺激作用,使NK细胞在体外培养条件下得到大量的扩增。结果:经过21d的刺激培养后,CD56+CD3-细胞数量扩增了(520±75)倍。CD56+CD3-细胞的纯度从培养前占PBMC的7%±4%到扩增后占总细胞比例的93%±3%。PBMC中的T细胞基本上没有得到扩增,扩增后的细胞中CD3+细胞只占2%±1.2%。扩增的细胞具备了NK细胞的基本特征和生物学特性,除了CD56+CD3-外,还对扩增的NK细胞上NKG2D、NKp46、NKp44、NKp30、CD94、CD158b、CD158a、NKB1、NKAT2等标记进行了验证。细胞毒实验表明,在效应细胞∶靶细胞为5∶1时,扩增的NK细胞的杀伤率达到了95%±4%。结论:建立的NK细胞体外扩增方法,达到了较高的扩增水平,且扩增的细胞活性较好。本方法以PBMC为原始材料,能够实现NK细胞体外的大规模制备,这将为抗病毒与抗肿瘤的NK细胞免疫治疗奠定基础。 展开更多
关键词 扩增 自然杀伤细胞 白细胞介素15 白细胞介素18 4-1BB配体
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标本放置时间及年龄对CD4^+CD25^+调节性T细胞的影响 被引量：13
13
作者 张爱梅 翟志敏 +5 位作者 徐修才 李庆 徐静玮 邬志伟 胡世莲 王怡平 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期62-65,共4页
目的探讨标本放置时间及年龄对外周血CD4+CD25+调节性T细胞的影响,明确标本可放置的时间界限,建立不同年龄段的正常参考值范围。方法以171例不同年龄健康人的外周血为标本,采用双色直接荧光素标记法和多参数流式细胞术检测和分析。结果1... 目的探讨标本放置时间及年龄对外周血CD4+CD25+调节性T细胞的影响,明确标本可放置的时间界限,建立不同年龄段的正常参考值范围。方法以171例不同年龄健康人的外周血为标本,采用双色直接荧光素标记法和多参数流式细胞术检测和分析。结果10份标本均分别在室温下放置0、1、2、3、4、5和6h检测时,CD4+CD25+Treg及CD4+CD25highT细胞分别为(12.00±1.12)%、(11.56±1.19)%、(10.72±1.29)%、(10.29±1.57)%、(8.11±1.28)%、(7.97±1.07)%、(7.70±0.93)%及(1.41±0.26)%、(1.45±0.26)%、(1.32±0.26)%、(1.27±0.28)%、(1.09±0.24)%、(0.95±0.18)%、(0.91±0.21)%。4~6岁组(n=34)、7~14岁组(n=24)、20~59岁组(n=95)、60岁以上组(n=18)健康人群CD4+CD25+Treg参考值分别是(6.55±1.28)%、(9.41±2.08)%、(11.67±2.14)%和(9.73±2.79)%,CD4+CD25high分别是(0.92±0.30)%、(1.21±0.45)%、(1.44±0.52)%及(1.51±0.55)%。结论外周血CD4+CD25+Treg和CD4+CD25highT细胞的检测结果随标本放置时间延长呈逐渐降低趋势,因此为真实反映体内CD4+CD25+Treg水平,标本放置时间应限制在3h以内。不同年龄段健康人群外周血中的CD4+CD25+Treg和CD4+CD25highT数值有明显差异,在探讨各种免疫相关性疾病与CD4+CD25+Treg之间的关系时,应该以与其年龄段相匹配的正常参考值为依据。 展开更多
关键词 CD4^+CD25^+ 调节性T细胞 正常参考值 标本放置时间界限
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兔抗人NDR2高效价抗血清的制备、纯化及鉴定 被引量：13
14
作者 张文红 刘新平 +4 位作者 王吉村 韩月恒 邓艳春 周洁 药立波 《第四军医大学学报》 北大核心 2002年第8期716-720,共5页
目的　制备高效价的 NDR2抗体 .方法　构建p Rset- A- ndr2 ,p GEX- 4 T- 1- ndr2 - a和 p GEX- 4 T- 1- ndr2 - b三种重组表达质粒 ,并分别在大肠杆菌中诱导表达相应的融合蛋白 ;用全长 GST- NDR2蛋白免疫兔 ,然后用 GST- NDR2 - A和 G... 目的　制备高效价的 NDR2抗体 .方法　构建p Rset- A- ndr2 ,p GEX- 4 T- 1- ndr2 - a和 p GEX- 4 T- 1- ndr2 - b三种重组表达质粒 ,并分别在大肠杆菌中诱导表达相应的融合蛋白 ;用全长 GST- NDR2蛋白免疫兔 ,然后用 GST- NDR2 - A和 GST- NDR2 - B片段加强免疫 ;对包涵体形式表达的 6 His-NDR2进行初步的纯化 ;利用固定于硝酸纤维素膜上的 NDR2抗原亲和吸附纯化抗血清 .结果　经免疫得到了高效价的兔抗人 NDR2多克隆抗血清 ,亲和纯化提高了 NDR2抗体的特异性 ;免疫组化表明 NDR2是一种胞浆蛋白 .结论　用全长NDR2蛋白免疫兔 ,再用片段加强免疫 ,可以提高蛋白的抗原性 ,制备得到高效价的抗体 .纯化后的特异性 NDR2抗体 ,为进一步研究 展开更多
关键词 高效价NDR2抗体 制备 纯化 鉴定 Myc表达 免疫血清 亲和纯化 易感性 特异性
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456例婴幼儿ABO血型正反定型及IgM型抗体的分析 被引量：13
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作者 李楚 张勇萍 +2 位作者 杨世明 苏苹 穆士杰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1396-1398,共3页
目的探讨婴幼儿ABO血型正反定型相符率及IgM型抗体产生情况。方法采用微柱凝胶法对456例婴幼儿血标本进行ABO血型正反定型,对正反定型不相符者再采用增强试管法进行IgM型抗体对比检测,观察IgM型抗体的凝集强度及效价。结果在456例婴幼... 目的探讨婴幼儿ABO血型正反定型相符率及IgM型抗体产生情况。方法采用微柱凝胶法对456例婴幼儿血标本进行ABO血型正反定型,对正反定型不相符者再采用增强试管法进行IgM型抗体对比检测,观察IgM型抗体的凝集强度及效价。结果在456例婴幼儿血标本中,ABO血型正反定型相符率为79.4%（362/456）,其中年龄1个月以内患儿的相符率为66.2%（96/145）,2～6个月患儿的相符率为74.5%（102/137）,7～12个月患儿的相符率为91.9%（114/124）,13～24个月患儿的相符率为100%（50/50）。微柱凝胶法对婴幼儿血清IgM型抗体检出率为79.5%（329/414）,增强试管法检出率为93.2%（386/414）。抗体凝集强度为±～2＋,抗体效价为1∶2～1∶8。结论部分6个月以内的婴幼儿IgM型抗体尚未产生或效价很低,常规方法容易漏检,是引起ABO血型正反定型不相符的主要原因,采用增强试管法可提高对婴幼儿血清IgM型抗体的检出率。 展开更多
关键词 婴幼儿 ABO血型 正反定型 IgM型抗体 微柱凝胶法 增强试管法
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镉离子单克隆抗体的鉴定及竞争ELISA的建立 被引量：18
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作者 唐勇 王建华 +3 位作者 向军俭 王宏 邓宁 杨红宇 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期214-217,221,共5页
目的制备Cd2+单克隆抗体(McAbs,单抗),建立Cd2+间接竞争酶免疫学检测方法(ELISA)。方法利用双功能螯合剂iEDTA将Cd2+分别与血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)偶联,制备免疫抗原和检测抗原。免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术制备抗Cd2+的... 目的制备Cd2+单克隆抗体(McAbs,单抗),建立Cd2+间接竞争酶免疫学检测方法(ELISA)。方法利用双功能螯合剂iEDTA将Cd2+分别与血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)偶联,制备免疫抗原和检测抗原。免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术制备抗Cd2+的单抗。鉴定单抗的效价、特异性、亚类及亲和力。以该抗体为基础建立检测镉离子的间接竞争ELISA方法,分析该方法的灵敏度、检测限、工作范围。结果成功制备出Cd-iEDTA-KLH和Cd-iEDTA-BSA偶联物;筛选出一株稳定分泌抗Cd-iEDTA单抗的杂交瘤细胞株C2C5,该细胞株分泌的抗体亚类为IgG1,腹水抗体效价为1×106,相对亲和力结合常数Ka为1.6×109L/mol。特异性结果显示,除Hg2+外,该抗体与Pb2+、Fe3+、Mn2+、Mg2+、Zn2+、Al3+、Ni2+、Ca2+、Cu2+等金属离子的交叉反应低。建立了检测镉离子的间接竞争ELISA方法,该方法的检测限为10ng/mL,IC50为250ng/mL。结论建立了镉离子的竞争ELISA检测方法,检测限达到无公害水产品的国家标准(100ng/g)。 展开更多
关键词 镉离子 单克隆抗体 竞争ELISA
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地鳖虫纤溶活性蛋白组分的提取及对肿瘤细胞的抑制作用 被引量：17
17
作者 林静华 吴映娥 +2 位作者 蔡应木 李兴暖 韩雅莉 《国际检验医学杂志》 CAS 2007年第12期1088-1090,1093,共4页
目的探讨地鳖虫纤溶活性蛋白组分的提取及对肿瘤细胞的抑制作用。方法使用硫酸铵沉淀、DEAE离子交换层析和SephadexG75凝胶层析的方法，从地鳖虫体内提取出纤溶活性蛋白并检测其活性，研究其体外抗肿瘤的作用；并通过噻唑蓝（MTT）法和... 目的探讨地鳖虫纤溶活性蛋白组分的提取及对肿瘤细胞的抑制作用。方法使用硫酸铵沉淀、DEAE离子交换层析和SephadexG75凝胶层析的方法，从地鳖虫体内提取出纤溶活性蛋白并检测其活性，研究其体外抗肿瘤的作用；并通过噻唑蓝（MTT）法和流式细胞术检测地鳖虫纤溶活性蛋白对2种肿瘤细胞（人食管癌细胞株Eca109和人宫颈癌细胞株HeLa）的增殖抑制及周期的影响。结果（1）地鳖虫体内存在具有纤溶活性的纤溶活性蛋白；（2）地鳖虫纤溶活性蛋白对肿瘤细胞的增殖抑制率与剂量和时间密切相关；（3）随着地鳖虫纤溶活性蛋白浓度的增加，G1期细胞数量明显减少，G2／M期的细胞数量有所增加。结论地鳖虫纤溶活性蛋白具有体外抑制肿瘤细胞的作用。 展开更多
关键词 蜚蠊目 蛋白质类 分离和提纯 抗肿瘤药
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乙型脑炎病毒SA_(14)-14-2减毒疫苗株的生物学和基因稳定性 被引量：10
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作者 许乐燕 徐闻青 +2 位作者 徐帆洪 王兵 张秀娟 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第10期833-837,共5页
目的研究乙型脑炎病毒(JEV)SA14-14-2减毒疫苗株传代过程中的生物学和基因稳定性,为疫苗的安全性和免疫原性提供依据。方法将JEVSA14-14-2减毒疫苗株PHKC7代病毒在原代地鼠肾细胞(PHKC)上连续传代,检测各代次病毒的培养特性以及第8、12... 目的研究乙型脑炎病毒(JEV)SA14-14-2减毒疫苗株传代过程中的生物学和基因稳定性,为疫苗的安全性和免疫原性提供依据。方法将JEVSA14-14-2减毒疫苗株PHKC7代病毒在原代地鼠肾细胞(PHKC)上连续传代,检测各代次病毒的培养特性以及第8、12、17和22代病毒的安全性及免疫原性;对起止代次病毒(PHKC8和22代)进行全基因组序列测定,对中间代次病毒(PHKC12和17代)的结构蛋白基因进行测序,并与基因库乙脑病毒SA14-14-2株(D90195)比较。结果各代次病毒产生的细胞病变基本一致,病毒滴度在17代前较稳定;在BHK21细胞上形成的蚀斑形态一致;小鼠脑内的致病力未发生变化,乳鼠传代返祖试验高代次病毒毒力有升高趋势。8、12、17和22代病毒免疫小鼠后,对P3强毒攻击均具有保护作用。E蛋白核苷酸和氨基酸序列,PHKC8代与D90195完全一致;而PHKC12、17和22代出现单个碱基(第2142或2143位)突变,导致E389氨基酸改变(D→N或D→A),但并非回复突变。4个代次病毒的PrM-C区结构蛋白基因均未发生变化。PHKC8、22代病毒的其他核苷酸突变发生在基因组非结构蛋白区和3′端非编码区;全序列PHKC8和22代与D90195比较,发现7～8个核苷酸不同,导致3～4个氨基酸的差异,核苷酸和氨基酸的同源性分别大于99.93%和99.88%,且以上突变不存在于明确的相关减毒位点上。结论JEVSA14-14-2减毒疫苗株在PHKC上连续传15代,仍保持高度的生物学和基因稳定性,疫苗生产用病毒控制在10代以内较为安全。 展开更多
关键词 乙型脑炎 减毒活疫苗 SA14-14-2株 基因稳定性 生物学稳定性
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食品中镉离子胶体金免疫层析快速检测方法的建立及应用 被引量：9
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作者 王亚楠 王晓斐 +3 位作者 牛琳琳 雷壮 张海棠 王自良 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第18期152-158,共7页
目的:建立更加灵敏、特异的食品镉离子胶体金免疫层析快速检测方法。方法:用1-(4-异硫氰苄基)乙烯基二胺-N,N,N’,N’-四乙酸(1-(4-isothiocyanobenzyl)ethylenediamine-N,N,N’,N’-tetraacetic acid,iEDTA)鳌合镉离子合成Cd^(2+)-iEDT... 目的:建立更加灵敏、特异的食品镉离子胶体金免疫层析快速检测方法。方法:用1-(4-异硫氰苄基)乙烯基二胺-N,N,N’,N’-四乙酸(1-(4-isothiocyanobenzyl)ethylenediamine-N,N,N’,N’-tetraacetic acid,iEDTA)鳌合镉离子合成Cd^(2+)-iEDTA半抗原,异硫氰酯法制备免疫原Cd^(2+)-iEDTA-牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)和包被原Cd^(2+)-iEDTA-鸡卵清蛋白(ovalbumin,OVA),电感耦合等离子体发射光谱法和聚丙烯酰胺凝胶法进行鉴定;用Cd^(2+)-iEDTA-BSA免疫Balb/C小鼠,细胞融合技术筛选Cd^(2+)-EDTA单克隆抗体(mAb)杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备Cd^(2+)-EDTA mAb;应用Cd^(2+)-EDTA mAb建立Cd^(2+)残留胶体金免疫层析快速检测方法 (Cd^(2+)-Strip),并测定其性能。结果:免疫原偶联成功,Cd^(2+)-iEDTA-BSA中BSA与Cd^(2+)的含量分别为7.1 mg/mL和191.7μg/mL;筛选出1A3C11、2B7D8、2E10G9、4F3E7共4株杂交瘤细胞,经9次传代分泌抗体稳定,亲和力最高的2E10G9株亲和常数(Ka)为7.58×10~8 L/mol,对Cd^(2+)-iEDTA的半数抑制浓度为16.3μg/L,与Hg^(2+)-EDTA的交叉反应(cross-reaction,CR)率为18.6%,与其他重金属离子无CR;Cd^(2+)-Strip的检测时间为10 min,检出限为5μg/L,其检测结果与竞争ELISA试剂盒(Cd^(2+)ELISA-Kit)、电感耦合等离子体发射光谱法符合率为100%。结论:制备出了亲和力高、特异性强的Cd^(2+)mAb,建立了灵敏、特异、快速、简便的食品镉离子胶体金免疫层析快速检测方法。 展开更多
关键词 镉离子 免疫原 单克隆抗体 胶体金免疫层析 快速检测
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动物脑水解物研究概况 被引量：27
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作者 钟玉旭 邹立家 +2 位作者 李素霞 张天民 李复兰 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 1996年第4期177-180,共4页
脑水解物是动物脑来源的含有氨基酸和小分子肽等的混合物。本文综述了国内外脑水解物药物的化学成分、药理作用及临床应用。
关键词 脑水解物 脑血管疾病 药理 化学成分
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