目的探究脓毒症中免疫耗竭的特征并分析其与肠道菌群异位的相关性。方法采用随机数字表法将130只小鼠分为盲肠穿刺结扎(cecal ligation and puncture,CLP)组(n=100)和假手术(sham)组(n=30),通过CLP建立小鼠脓毒症模型;流式细胞术检测分...目的探究脓毒症中免疫耗竭的特征并分析其与肠道菌群异位的相关性。方法采用随机数字表法将130只小鼠分为盲肠穿刺结扎(cecal ligation and puncture,CLP)组(n=100)和假手术(sham)组(n=30),通过CLP建立小鼠脓毒症模型;流式细胞术检测分析小鼠外周血CD4^(+)T、CD8^(+)T和PD-1+T细胞亚群比例变化;心、肝、肾等脏器匀浆涂板检测细菌定植量变化;HE染色分析免疫器官的病理改变;免疫组化染色检测免疫器官内CD4、CD8和PD-1阳性细胞表达及定位,使用Image J软件对阳性细胞数变化进行定量。结果HE染色提示各级免疫器官随病程进展出现不同程度病理损伤;与Sham组小鼠相比,CLP组小鼠各脏器及外周血细菌定植量均显著增高(P<0.05),以肝脏感染最为严重;CLP组小鼠在术后第1、3、5天时外周血CD4^(+)T淋巴细胞比例较Sham组分别下降56%、70.57%和87.42%(P<0.001),CD8^(+)T淋巴细胞比例只在第5天时下降48.33%(P<0.001),而表达PD-1的CD4^(+)T细胞亚群比例分别升高为Sham组的673.08倍、423.08倍和600倍(P<0.001);免疫组化结果显示,CLP术后胸腺、脾脏和肠系膜淋巴结中CD4阳性细胞比例在早期最高时分别上升为Sham组的7.65倍、2.66倍和3.7倍(P<0.001),后期最低时分别较早期下降82.8%(P<0.001)、41.9%(P<0.01)和60.15%(P<0.001);CD8阳性细胞比例在早期升高后下降不显著;PD-1阳性细胞占比持续升高,最高时分别上升为Sham组的6.24倍、13.9倍和20.96倍(P<0.001),且其表达区域与CD4阳性细胞大致相同。结论脓毒症时炎症反应可引起免疫器官严重损伤,CD4^(+)T淋巴细胞持续耗竭,机体预防感染的能力下降,可能是造成肠道菌群异位加重,导致全身感染的重要原因。展开更多
文摘目的探究脓毒症中免疫耗竭的特征并分析其与肠道菌群异位的相关性。方法采用随机数字表法将130只小鼠分为盲肠穿刺结扎(cecal ligation and puncture,CLP)组(n=100)和假手术(sham)组(n=30),通过CLP建立小鼠脓毒症模型;流式细胞术检测分析小鼠外周血CD4^(+)T、CD8^(+)T和PD-1+T细胞亚群比例变化;心、肝、肾等脏器匀浆涂板检测细菌定植量变化;HE染色分析免疫器官的病理改变;免疫组化染色检测免疫器官内CD4、CD8和PD-1阳性细胞表达及定位,使用Image J软件对阳性细胞数变化进行定量。结果HE染色提示各级免疫器官随病程进展出现不同程度病理损伤;与Sham组小鼠相比,CLP组小鼠各脏器及外周血细菌定植量均显著增高(P<0.05),以肝脏感染最为严重;CLP组小鼠在术后第1、3、5天时外周血CD4^(+)T淋巴细胞比例较Sham组分别下降56%、70.57%和87.42%(P<0.001),CD8^(+)T淋巴细胞比例只在第5天时下降48.33%(P<0.001),而表达PD-1的CD4^(+)T细胞亚群比例分别升高为Sham组的673.08倍、423.08倍和600倍(P<0.001);免疫组化结果显示,CLP术后胸腺、脾脏和肠系膜淋巴结中CD4阳性细胞比例在早期最高时分别上升为Sham组的7.65倍、2.66倍和3.7倍(P<0.001),后期最低时分别较早期下降82.8%(P<0.001)、41.9%(P<0.01)和60.15%(P<0.001);CD8阳性细胞比例在早期升高后下降不显著;PD-1阳性细胞占比持续升高,最高时分别上升为Sham组的6.24倍、13.9倍和20.96倍(P<0.001),且其表达区域与CD4阳性细胞大致相同。结论脓毒症时炎症反应可引起免疫器官严重损伤,CD4^(+)T淋巴细胞持续耗竭,机体预防感染的能力下降,可能是造成肠道菌群异位加重,导致全身感染的重要原因。
