兔骨髓源性血管内皮祖细胞的分离、培养及鉴定 被引量：14

1

作者 吴波 卢正茂 +5 位作者 王尧 罗天航 薛绪潮 毕建威 康俊升 方国恩 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2010年第2期454-457,共4页

本研究探讨兔骨髓源性血管内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPC)的分离、培养及鉴定方法。抽取兔骨髓细胞,用梯度密度离心法获得单个核细胞,以内皮细胞培养液培养,通过细胞形态观察、免疫组织化学试验、流式细胞术以及内皮祖... 本研究探讨兔骨髓源性血管内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPC)的分离、培养及鉴定方法。抽取兔骨髓细胞,用梯度密度离心法获得单个核细胞,以内皮细胞培养液培养,通过细胞形态观察、免疫组织化学试验、流式细胞术以及内皮祖细胞吞噬功能进行鉴定。结果表明,新分离的骨髓单个核细胞呈圆形,培养48小时后可见贴壁细胞呈集落样生长,细胞呈圆形或不规则形,核分裂相明显,至培养第7天成片生长的细胞集落相互连接呈梭形的内皮样细胞。内皮祖细胞免疫组织化学检测结果显示CD133(+),CD34(+),Ⅷ因子(++),KDR(++);流式细胞术鉴定结果显示CD133的阳性率为(18.23±7.12)%,CD34的阳性率为(47.71±14.85)%,CD31的阳性率为(71.61±13.51)%,KDR的阳性率为(87.24±11.40)%。细胞吞噬功能鉴定说明超过80%的贴壁细胞都特异性地摄取了Dil-acLDL和FITC-UEA-1。结论:密度梯度离心法体外分离兔骨髓源的单个核细胞,在一定的诱导培养条件下能分化成为血管内皮祖细胞。 展开更多

关键词 骨髓 内皮祖细胞 细胞培养 细胞分离 细胞鉴定

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Accutase和胰蛋白酶消化传代对人胚纹状体来源神经干细胞凋亡的影响 被引量：4

2

作者 李婷 李晨 +1 位作者 张翠英 赵杰 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期185-194,共10页

目的探讨Accutase和胰蛋白酶消化神经干细胞（NSCs）后对其凋亡过程的影响。方法来自人类12～16周自然流产胚胎纹状体组织,分离并体外培养NSCs,将体外培养的第3～5代神经球,分别用胰蛋白酶、Accutase消化,消化过程中仅振荡打散,避免巴... 目的探讨Accutase和胰蛋白酶消化神经干细胞（NSCs）后对其凋亡过程的影响。方法来自人类12～16周自然流产胚胎纹状体组织,分离并体外培养NSCs,将体外培养的第3～5代神经球,分别用胰蛋白酶、Accutase消化,消化过程中仅振荡打散,避免巴斯德吸管反复吹打。将神经球打散成的单细胞悬液接种。用Annexin V/碘化丙啶染色、Hoechst 33342活细胞染色镜下观察等方法,在培养传代后2和24 h时间点检测神经干细胞凋亡率。结果两种酶消化后立即用台盼蓝染色判断细胞活性,Accutase消化后活细胞比例为（91.65±4.43）%,胰蛋白酶仅有（83.10±6.76）%,二者比较差异有统计学意义（P〈0.05）。体外培养的第3～5代人胚纹状体NSCs形成的神经球传代后2 h,Accutase和胰蛋白酶传代的细胞凋亡率差异有统计学意义（P〈0.01）,而到24 h时间点,Accutase消化的细胞凋亡率经Annexin V/碘化丙啶、Hoechst 33342活细胞染色两种方法检测已经达到50%,而胰蛋白酶消化后的细胞凋亡率在此时间点维持在15%～20%。Accutase消化后的NSCs生长4 d后,克隆形成率和神经球直径分别为（7.83±1.32）%和（43.5±9.76）μm,均显著低于胰蛋白酶传代组的（19.22±3.66）%和（58.4±18.73）μm（P〈0.01）。结论虽然台盼蓝染色显示Accutase消化神经球后的细胞存活比胰蛋白酶更多,但消化后24 h内,Accutase消化的细胞凋亡率显著升高,最终神经球新克隆形成率低,直径更小。胰蛋白酶消化振荡打散神经球后的凋亡率较Accutase具有明显优势;神经球消化后台盼蓝即时染色的结果不足以预示后期NSCs凋亡率。 展开更多

关键词 神经干细胞 神经球 Accutase 胰蛋白酶 凋亡

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自成人脂肪组织分离与培养间充质干细胞的实验研究 被引量：5

3

作者 陈光辉 王燕 +1 位作者 李天德 邵建华 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期510-512,共3页

目的　探索成人脂肪组织源性间充质干细胞 (ADMSCs)的分离、体外培养 ,为其将来应用于临床心肌梗死的治疗提供实验依据。方法　无菌条件下获取腹部手术病人大网膜脂肪组织 ,胰酶消化 30min,离心 ,在含 1 5 %胎牛血清的DMEM中 ,37℃、5 %... 目的　探索成人脂肪组织源性间充质干细胞 (ADMSCs)的分离、体外培养 ,为其将来应用于临床心肌梗死的治疗提供实验依据。方法　无菌条件下获取腹部手术病人大网膜脂肪组织 ,胰酶消化 30min,离心 ,在含 1 5 %胎牛血清的DMEM中 ,37℃、5 %CO2 饱和湿度下常规培养 ,对第 2代细胞进行免疫组织化学染色 ,鉴定其表面分子CD4 4、HLA DR及Ⅷ因子。结果　成人脂肪组织中含有大量间充质干细胞 ,免疫化学染色鉴定除CD4 4阳性间充质干细胞外 ,所分离细胞同时含有部分HLA DR阳性成纤维细胞和Ⅷ因子阳性的血管内皮细胞。结论　建立了一种自人体脂肪组织分离、培养ADMSCs经济简便的方法 。 展开更多

关键词 间充质干细胞 脂肪组织 细胞培养

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MTT比色检测细胞增殖方法的改良及实验影响因素的观察 被引量：24

4

作者 黄瑾 安继红 +1 位作者 薛晓梅 赫国志 《白求恩医科大学学报》 CSCD 1992年第4期395-397,共3页

探讨了改良前后两种MTT比色法的显色机制及区别,并进行了改良方法与未改良方法及同位素掺入方法检测敏感性的比较和改良方法实验影响因素的观察。结果表明①改良前异丙醇只能溶解细胞外部甲,改良后异丙醇不但能溶解细胞周围的甲,而且能... 探讨了改良前后两种MTT比色法的显色机制及区别,并进行了改良方法与未改良方法及同位素掺入方法检测敏感性的比较和改良方法实验影响因素的观察。结果表明①改良前异丙醇只能溶解细胞外部甲,改良后异丙醇不但能溶解细胞周围的甲,而且能将细胞内的MTT代谢物全部溶解。②改良后较改良前的敏感性有了较大的提高,其敏感性检测结果与~3H-TdR检测结果相一致。③改良方法可以测出约3×10~3个CTLL_2细胞和用6×10~3个细胞活化后的PBL。④适当提高MTT浓度能进一步提高检测敏感性及OD值。 展开更多

关键词 MTT 比色 细胞增殖 CTLL2

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骨骼肌卫星细胞的生物学特性 被引量：10

5

作者 申传安 柴家科 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期373-374,共2页

关键词 细胞生物学 卫星细胞 骨骼肌 成肌调节因子

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磁性壳聚糖纳米介导eNOS基因转染受损平滑肌细胞初探 被引量：5

6

作者 陈朝婷 高峰 +2 位作者 陆平 蔡文玮 盛净 《东南大学学报（医学版）》 CAS 2011年第6期827-831,共5页

目的:探讨磁性壳聚糖(后简称磁聚糖)纳米载体对血管平滑肌细胞的毒性及介导内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因对受损血管平滑肌细胞的转染效率、表达及对细胞增生的影响。方法:原位共沉淀法制备磁聚糖并耦合eNOS质粒;MTT法检测磁聚糖对血管... 目的:探讨磁性壳聚糖(后简称磁聚糖)纳米载体对血管平滑肌细胞的毒性及介导内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因对受损血管平滑肌细胞的转染效率、表达及对细胞增生的影响。方法:原位共沉淀法制备磁聚糖并耦合eNOS质粒;MTT法检测磁聚糖对血管平滑肌细胞生长的毒性;分别以重组腺病毒表达载体(AdCMV-eNOS)、磁聚糖-eNOS和磁聚糖空载体在外加磁场下转染受损血管平滑肌细胞,免疫荧光染色及RT-PCR测定eNOS表达,流式细胞术检测转染效率及血管平滑肌细胞周期和凋亡情况。结果:在浓度低于20 mg.ml-1时,磁聚糖对血管平滑肌细胞的生长无明显毒副作用;磁聚糖-eNOS组转染效率[(58.7±3.6)%]较AdCMV-eNOS组[(78.1±2.5)%]低,但两组均检测到eNOS mRNA和蛋白表达,且两组受损血管平滑肌细胞G0/G1期细胞较磁聚糖空载体组明显增多(P<0.01),S/G2-M期细胞减少(P<0.01),3组的细胞凋亡无显著差异(P>0.05)。结论:正常浓度的磁聚糖对血管平滑肌细胞生长无抑制作用,该载体能成功介导eNOS基因的转染,延缓受损后血管平滑肌细胞增生周期。 展开更多

关键词 基因载体 磁性壳聚糖 内皮型一氧化氮合酶基因 血管平滑肌细胞

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大鼠骨髓间充质干细胞体外培养与慢病毒转染方法的建立 被引量：4

7

作者 张红珊 方建培 +1 位作者 苏浩彬 杨旻 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2011年第6期1472-1476,共5页

本研究建立大鼠骨髓间充质干细胞(BMMSC)体外分离培养、表型鉴定和标记的方法,为临床进行细胞移植治疗提供合格的细胞。无菌条件下取大鼠股骨、胫骨,用冲洗法冲出骨髓,贴壁培养法分离纯化BMMSC,体外扩增;流式细胞术进行免疫表型鉴定,并... 本研究建立大鼠骨髓间充质干细胞(BMMSC)体外分离培养、表型鉴定和标记的方法,为临床进行细胞移植治疗提供合格的细胞。无菌条件下取大鼠股骨、胫骨,用冲洗法冲出骨髓,贴壁培养法分离纯化BMMSC,体外扩增;流式细胞术进行免疫表型鉴定,并进行成骨,成脂分化鉴定;利用携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的慢病毒液转染大鼠BMMSC。结果表明,贴壁培养法能有效分离纯化大鼠BMMSC,细胞呈均一的成纤维细胞样;流式细胞术显示,第4代BMMSC中CD29、CD44表达阳性,CD34、CD45表达阴性。在相应的诱导培养条件下,BMMSC均能成骨及成脂分化。BMMSC用慢病毒液转染后表达GFP。结论:贴壁培养法简单、可行和稳定;分离培养的细胞具有BMMSC的生物学特性和多向分化潜能;BMMSC经慢病毒液转染后表达GFP,标记效率高,可作为标记细胞的一种有效手段,适合体内示踪。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 慢病毒转染 贴壁培养法

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人胚胎骨髓间充质干细胞和单个核细胞静脉移植治疗大鼠脑梗死疗效的比较 被引量：2

8

作者 黄爱华 张萍萍 +3 位作者 张斌 马步青 关云谦 周逸丹 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期497-506,共10页

目的比较人胚胎骨髓间充质干细胞(MSC)和单个核细胞(MNC)经静脉移植后对脑梗死的疗效。方法采用大脑中动脉远端凝断法制造大鼠脑梗死模型。将大鼠分为假手术组、缺血对照组(造模后经尾静脉给予生理盐水)、MSC组(造模后经尾静脉给予MSC)... 目的比较人胚胎骨髓间充质干细胞(MSC)和单个核细胞(MNC)经静脉移植后对脑梗死的疗效。方法采用大脑中动脉远端凝断法制造大鼠脑梗死模型。将大鼠分为假手术组、缺血对照组(造模后经尾静脉给予生理盐水)、MSC组(造模后经尾静脉给予MSC)和MNC组(造模后经尾静脉给予MNC)。移植后2 d,取脑进行梗死体积测定;移植后1、3、5、7 d,采用肢体放置测验和平衡木实验进行行为学评价;移植后7 d,采用免疫荧光法测量梗死周边纹状体区激活的小胶质细胞Iba-1的染色丰度;移植后3、7 d,采用ELISA检测移植后梗死灶周边纹状体区胶质源性神经营养因子(GDNF)和脑源性神经营养因子(BDNF)的蛋白水平。结果缺血对照组、MSC组和MNC组的相对梗死体积分别为(37.85±4.40)%、(33.41±3.82)%和(30.23±3.63)%,其中,MSC组(t=2.100,P=0.034)和MNC组(t=2.109,P=0.0009)显著低于缺血对照组,MNC组显著低于MSC组(t=1.743,P=0.043)。移植后1 d,缺血对照组的肢体放置成功率为(4.32±0.71)%,明显低于假手术组的(9.73±0.36)%(t=2.178,P=8.61×10-11);MSC组和MNC组分别为(5.09±0.62)%(t=2.1009,P=0.024)和(5.90±0.68)%(t=2.1008,P=0.0001),明显高于缺血对照组;MNC组又明显高于MSC组(t=2.1009,P=0.0165)。MSC组和MNC组损伤对侧前肢错步数占总步数的百分比分别为(5.56±0.86)%(t=2.120,P=0.020)和(5.13±0.95)%(t=2.131,P=0.003),明显低于缺血对照组的(6.47±0.61)%。移植后3 d,MNC组的肢体放置成功率为(6.91±1.10)%,明显高于缺血对照组的(5.80±0.82)%(t=2.110,P=0.027);MSC组为(6.30±0.77)%,与缺血对照组差异无统计学意义(t=2.101,P=0.199)。MNC组损伤对侧前肢错步数占总步数的百分比为(4.34±0.58)%,明显低于缺血对照组的(5.31±0.65)%(t=2.100,P=0.006)和MSC组的(4.92±0.53)%(t=2.100,P=0.041),MSC组与缺血对照组差异无统计学意义(t=2.109,P=0.139)。假手术组、缺血对照组、MSC组和MNC组的Iba-1相对丰度分别为1.00+0.00、1.72±0.21、1.23±0.08和1.48±0.06,其中,缺血对照组显著升高,为假手术组的(1.72±0.21)倍(t=2.262,P=2.9×10-6),MSC组则降低至假手术组的(1.23±0.08)倍,比缺血对照组显著降低(t=2.178,P=3.91×10-5),MNC组降低至假手术组的(1.48±0.06)倍,比缺血对照组显著降低(t=2.200,P=0.007),MSC组和MNC组间差异也有统计学意义(t=2.120,P=7.09×10-6)。移植后3 d,MSC组的BDNF和GDNF分别为(531.127±73.176)pg/mg蛋白(t=2.109,P=0.003)和(127.780±16.733)pg/mg蛋白(t=2.100,P=2.76×10-5),均明显高于缺血对照组的(401.988±89.006)pg/mg蛋白和(86.278±14.832)pg/mg;MNC组分别为(627.429±65.646)pg/mg蛋白(t=2.144,P=0.017)和(153.117±20.443)pg/mg蛋白(t=2.144,P=0.017),均明显高于MSC组。移植后7 d,MSC组的BDNF和GDNF分别为(504.776±83.282)pg/mg蛋白(t=2.101,P=0.005)和(81.641±11.019)pg/mg蛋白(t=2.100,P=0.002),均明显高于缺血对照组的(389.257±70.440)pg/mg蛋白和(64.322±9.855)pg/mg;MNC组分别为(589.068±63.323)pg/mg蛋白(t=2.100,P=0.027)和(102.161±19.932)pg/mg蛋白(t=2.144,P=0.017),也均明显高于MSC组。结论脑梗死后1 h静脉移植人骨髓MSC和MNC都能够减小梗死体积、改善动物行为。二者的疗效产生机制可能均与抑制脑内炎症反应,促进脑内神经营养因子的产生有关。MNC减小梗死体积和改善动物行为比MSC更有效,推测可能与MNC诱导脑内产生的细胞因子GDNF和BDNF的量比MSC更高有关。 展开更多

关键词 脑梗死 间充质干细胞 单个核细胞 炎症 小胶质细胞 移植

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miR-155抑制AngⅡ诱导的主动脉血管平滑肌细胞周期转换 被引量：2

9

作者 张紫微 杨丽霞 +4 位作者 郭瑞威 吕晋琳 陆霓虹 王先梅 石燕昆 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2017年第3期281-286,334,共7页

目的:观察转染miR-155后对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导小鼠主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)细胞周期转换的影响并探讨其机制。方法:原代培养小鼠VSMC,用1×10-6 mol/L AngⅡ作用于VSMC48 h后,... 目的:观察转染miR-155后对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导小鼠主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)细胞周期转换的影响并探讨其机制。方法:原代培养小鼠VSMC,用1×10-6 mol/L AngⅡ作用于VSMC48 h后,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q-RT-PCR)检测空白对照组及AngⅡ组miR-155表达水平。用q-RTPCR及Western blot检测分别转染miR-155及阴性对照后各组AngⅡ1型受体(angiotensinⅡtype 1 receptor,AT1R)的m RNA及蛋白表达水平;用Western blot检测转染miR-155 mimic及阴性对照后对AT1R下游细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2)、核糖体蛋白S6激酶(P70S6K1)通路的影响。分别检测转染miR-155 mimic及使用血管紧张素受体阻滞剂缬沙坦、m TOR通路抑制剂雷帕霉素、ERK1/2抑制剂U0126对细胞周期素D1(Cyclin D1)的表达影响,并使用流式细胞分析检测细胞周期变化,探讨miR-155对细胞周期的影响及其机制。结果:AngⅡ可显著降低miR-155的表达。miR-155可从m RNA及蛋白水平抑制AT1R表达,并抑制AngⅡ促AT1R表达的作用。转染miR-155 mimic后可显著抑制AngⅡ促进ERK1/2、P70S6K1通路激活的作用。转染miR-155 mimic、使用缬沙坦、雷帕霉素、U0126抑制AngⅡ促Cyclin D1表达的作用,并使细胞周期阻滞在G0/G1期。结论:miR-155可通过抑制AT1R间接抑制AngⅡ促进ERK1/2、P70S6K1通路激活及Cyclin D1表达的作用,抑制AngⅡ促进细胞周期转换的作用。 展开更多

关键词 MIR-155 血管紧张素Ⅱ 血管平滑肌细胞 细胞周期

原文传递

成骨生长肽羧基端片段及其衍生物对成骨细胞作用的体外研究 被引量：3

10

作者 刘虹丽 丁晓颖 +3 位作者 张鹏 邱明才 田桂杰 王德心 《天津医科大学学报》 2005年第3期349-352,364,共5页

目的:探讨成骨生长肽羧基端片段OGP(10-14)及其衍生物G38I、G38K在体外对大鼠成骨细胞增殖和分化的影响。方法:用细胞记数和MTT法评价OGP(10-14)及其衍生物G38I、G38K对成骨细胞增殖的作用。测定细胞培养上清液碱性磷酸酶含量,细胞中Ⅰ... 目的:探讨成骨生长肽羧基端片段OGP(10-14)及其衍生物G38I、G38K在体外对大鼠成骨细胞增殖和分化的影响。方法:用细胞记数和MTT法评价OGP(10-14)及其衍生物G38I、G38K对成骨细胞增殖的作用。测定细胞培养上清液碱性磷酸酶含量,细胞中Ⅰ型胶原蛋白和mRNA表达水平,了解药物对细胞分化的影响。结果:药物在10-11mmol/L浓度时促进细胞增殖的作用增强。OGP(10-14)和G38I处理组与空白对照组比较,显著提高上清液中碱性磷酸酶含量、上调Ⅰ型胶原蛋白和mRNA表达水平(P<0.01,P<0.05)。结论:OGP(10-14)及其衍生物可促进成骨细胞增殖、提高细胞活性,OGP(10-14)和G38I可增加细胞中Ⅰ型胶原的合成,促进细胞分化和成骨作用。 展开更多

关键词 成骨生长肽羧基端片段 衍生物 成骨细胞 碱性磷酸酶 Ⅰ型胶原

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一种新的将神经球分散为单细胞悬液的方法 被引量：3

11

作者 董恺 张愚 《首都医科大学学报》 CAS 2006年第5期620-622,共3页

目的比较3种将神经球打散成单细胞悬液的方法对神经干细胞活性的影响。方法将16～20周人胚胎神经干细胞体外培养扩增形成神经球，分别用胰蛋白酶消化法、巴斯德管吹打法和消化振荡法，将神经球打散成单细胞悬液，通过台盼蓝染色测定细... 目的比较3种将神经球打散成单细胞悬液的方法对神经干细胞活性的影响。方法将16～20周人胚胎神经干细胞体外培养扩增形成神经球，分别用胰蛋白酶消化法、巴斯德管吹打法和消化振荡法，将神经球打散成单细胞悬液，通过台盼蓝染色测定细胞活性及接种后增生情况，观察3种方法对神经干细胞活性的影响。结果消化振荡法打散神经球，细胞存活率（96．20％）和再次成球率（19．24％）都较其他2种方法高，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论消化振荡法对人胚胎神经干细胞的活性影响较小，是一种有效、安全的将神经球打散成单细胞悬液的实验方法。 展开更多

关键词 人 胚胎 神经干细胞 神经球

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不同浓度共聚物在保护超声介导细胞损伤和基因转染中的作用 被引量：1

12

作者 陈云超 张青萍 +4 位作者 黄道中 李开艳 王志辉 洪恺 王芬 《化学与生物工程》 CAS 2007年第8期33-37,共5页

选用三种不同的细胞系C2C12、3T3-MDEI和CHO-E为研究对象,考察了三种不同水溶性的共聚物F127、L61和P85在超声介导细胞损伤和基因转染中的作用。结果显示,在较低浓度时,共聚物提高了超声介导的细胞损伤(P<0.05)和基因转染(P<0.01)... 选用三种不同的细胞系C2C12、3T3-MDEI和CHO-E为研究对象,考察了三种不同水溶性的共聚物F127、L61和P85在超声介导细胞损伤和基因转染中的作用。结果显示,在较低浓度时,共聚物提高了超声介导的细胞损伤(P<0.05)和基因转染(P<0.01);在较高浓度时,F127和P85可以保护超声介导的细胞损伤作用(P<0.01),而L61有较高的毒性。 展开更多

关键词 共聚物 超声 细胞保护 细胞损伤 基因转染

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Echistatin对人增生性瘢痕成纤维细胞的作用研究 被引量：2

13

作者 范鹏举 李珍 黄晓元 《中国医学工程》 2007年第6期469-472,共4页

目的研究Echistatin对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖、凋亡及Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达的影响。方法体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞,设Echistatin处理组和对照组,MTT法、流式技术及RT-PCR法检测人增生性瘢痕成纤维细胞增殖、凋亡及Ⅰ、Ⅲ... 目的研究Echistatin对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖、凋亡及Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达的影响。方法体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞,设Echistatin处理组和对照组,MTT法、流式技术及RT-PCR法检测人增生性瘢痕成纤维细胞增殖、凋亡及Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达。结果Echistatin可明显抑制人增生性瘢痕成纤维细胞增殖,促进凋亡,降低Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达。结论Echistatin可作为防治增生性瘢痕的筛选药物。 展开更多

关键词 ECHISTATIN 成纤维细胞 瘢痕

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逆转录病毒介导的牛生长激素基因转染NIH3T3细胞和人胚肺成纤维细胞

14

作者 宋诗铎 郑东钧 +5 位作者 祁伟 隋志芳 李为 方晖 何屏 魏殿军 《天津医药》 CAS 北大核心 2002年第2期94-97,共4页

目的:以牛生长激素(bGH)为模型,建立逆转录病毒载体转移系统,体外转染鼠成纤维细胞株NIH3T3和人胚肺成纤维细胞2BS,以获得bGH表达。方法:将PCR扩增的bGH基因片段插入逆转录病毒载体pSXLG-MDR相应酶切位点,获得的重组逆转录病毒质粒。应... 目的:以牛生长激素(bGH)为模型,建立逆转录病毒载体转移系统,体外转染鼠成纤维细胞株NIH3T3和人胚肺成纤维细胞2BS,以获得bGH表达。方法:将PCR扩增的bGH基因片段插入逆转录病毒载体pSXLG-MDR相应酶切位点,获得的重组逆转录病毒质粒。应用脂质体方法转染重组质粒进入包装细胞PA317,筛选长春新碱抗性克隆株,收集上清液感染NIH3T3细胞和人胚肺成纤维细胞2BS,筛选携带bGH基因的成纤维细胞的克隆株3T3/bGH和2BS/bGH。结果:RT-PCR分析表明基因转染组的3T3/bGH细胞和2BS/bGH细胞在相当于680bp处有一清晰的条带,而空质粒对照组无相应条带出现。RIA分析表明转染基因细胞的培养液及胞浆蛋白有bGH蛋白表达,而作为对照的3T3/mdr细胞和NIH/3T3细胞均无此蛋白表达。结论:应用逆转录病毒IRBS载体系统转染bGH基因进入成纤维细胞,该系统易筛选,转染效率较高。 展开更多

关键词 逆转录病毒载体转移系统 生长激素 成纤维细胞 基因转染 NIH3T3细胞 基因治疗

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复制性衰老减弱人胚骨髓间充质干细胞静脉移植治疗大鼠脑梗死的疗效

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作者 黄爱华 张萍萍 +3 位作者 张斌 马步青 关云谦 周逸丹 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2015年第6期865-874,共10页

目的比较不同代次的人胚胎骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs)移植治疗大鼠脑梗死模型的疗效,包括梗死体积和行为学改变以及疗效产生机制,包括对梗死区激活的小胶质细胞的抑制、产生营养性细胞因子上的差别... 目的比较不同代次的人胚胎骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs)移植治疗大鼠脑梗死模型的疗效,包括梗死体积和行为学改变以及疗效产生机制,包括对梗死区激活的小胶质细胞的抑制、产生营养性细胞因子上的差别。方法体外培养人胚胎骨髓来源间充质干细胞,并通过连续传代制作复制性衰老模型。分别收集传第4代和第10代的MSC用于移植。制作大鼠大脑中动脉远端阻塞(distal middle cerebral artery occlusion,d MCAO)脑梗死模型。实验分假手术组(无脑梗死)、缺血对照组〔脑梗死模型给予0.9%(质量分数)氯化钠注射液〕和MSC细胞治疗组。移植组在造模后1 h经尾静脉移植1×106不同代次的BM-MSC,移植后2、4 d进行行为学评价;移植后2 d部分动物进行梗死体积测定;部分动物灌注取脑,免疫组织化学法计数并对比皮质梗死区激活的小胶质细胞CD68染色的数量;另一部分动物于移植4 d用ELISA法检测梗死灶区域大鼠来源的脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、胰岛素样生长因子(insulin like growth factor-1,IGF-1)的浓度。结果只有第4代人BM-MSC能够有效减少梗死体积,并在移植后第2天改善脑梗死模型动物的神经功能。移植后第4天,仅第4代BM-MSC移植组脑内BDNF、IGF-1蛋白浓度明显高于缺血对照组,小胶质细胞激活明显低于对照组;第10代MSC对营养性细胞因子和小胶质细胞的影响和缺血对照组相比,差异无统计学意义。结论脑梗死后1 h移植早代次的BM-MSCs会产生减小梗死体积、改善动物行为的作用,但晚代次细胞的作用不明显,原因可能和晚代次细胞促进脑内神经营养因子表达,抑制脑内小胶质细胞激活的能力下降有关。 展开更多

关键词 脑梗死 间充质干细胞 小胶质细胞 细胞因子 移植

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半胱氨酸蛋白酶在EPA和DHA抑制HL-60细胞增殖中的作用

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作者 张乾勇 糜漫天 +1 位作者 承海 唐勇 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第20期2039-2041,共3页

目的探讨ω3多不饱和脂肪酸抑制HL60细胞增殖与半胱氨酸蛋白酶(caspases)之间的关系。方法用6.0×10-5mol/L二十碳五烯酸或二十二碳六烯酸处理HL60细胞,运用MTT比色法、流式细胞仪分析ω3脂肪酸对HL60细胞增殖能力和凋亡的影响,RTPC... 目的探讨ω3多不饱和脂肪酸抑制HL60细胞增殖与半胱氨酸蛋白酶(caspases)之间的关系。方法用6.0×10-5mol/L二十碳五烯酸或二十二碳六烯酸处理HL60细胞,运用MTT比色法、流式细胞仪分析ω3脂肪酸对HL60细胞增殖能力和凋亡的影响,RTPCR和免疫印迹技术分析细胞caspase3、caspase8基因的表达变化,激酶活性分析检测caspase8活性。并观察caspases特异性抑制剂对ω3脂肪酸引起的HL60细胞生长抑制的拮抗作用。结果HL60细胞经ω3多不饱和脂肪酸处理后,细胞增殖能力减弱,G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,并检测到约6%的凋亡率,caspase3、caspase8基因表达增加,caspase8活性升高。caspases抑制剂可以部分拮抗ω3脂肪酸对HL60细胞的增殖抑制作用。结论ω3脂肪酸可以抑制HL60细胞增殖,并诱导细胞凋亡,而上调caspases的表达和/或活性可能在此过程中发挥重要作用。 展开更多

关键词 Ω-3多不饱和脂肪酸 半胱氨酸蛋白酶 HL-60细胞

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人参皂苷Rg1促进神经干细胞增殖的实验研究 被引量：12

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作者 郑友生 廖联明 +2 位作者 江敏 寇世缨 李燕 《世界中西医结合杂志》 2011年第12期1021-1024,共4页

目的探讨人参皂苷Rg1是否对神经干细胞的增殖具有促进作用。方法从大鼠脑组织分离神经细胞,在培养液中加入10μg.L-1表皮生长因子(EGF)和10μg.L-1碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),使形成富含神经干细胞的神经球。在培养液中加入人参皂苷R... 目的探讨人参皂苷Rg1是否对神经干细胞的增殖具有促进作用。方法从大鼠脑组织分离神经细胞,在培养液中加入10μg.L-1表皮生长因子(EGF)和10μg.L-1碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),使形成富含神经干细胞的神经球。在培养液中加入人参皂苷Rg1,观察其对神经干细胞增殖的促进作用。采用大鼠缺血性中风后遗症模型,观察人参皂苷Rg1对大鼠神经功能恢复的影响。结果在表皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子培养条件下可出现明显的神经球。在2μmol.L-1浓度下人参皂苷Rg1可以增加神经细胞中神经球的数量,表明人参皂苷Rg1可以促进神经干细胞的生存和增殖。2μmol.L-1浓度下人参皂苷Rg1可以显著促进神经球的形成。缺血性中风大鼠给与人参皂苷Rg1后其横木行走评分增加,在第14天实验中,中剂量和高剂量组行走评分分别为(4.09±0.49)分和(4.74±0.62)分,而模型对照组为(3.41±0.67)分,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。免疫组化显示对大脑组织的细胞增殖也有促进作用。结论人参皂苷Rg1对神经干细胞增殖的促进作用,表明其在神经系统损伤性疾病的康复中有潜在的治疗价值,值得进一步研究。 展开更多

关键词 人参皂苷RG1 神经干细胞 神经球

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PDGF-BB促粒细胞/巨核细胞生长及其作用机制的研究 被引量：7

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作者 毛利靖 叶洁瑜 +1 位作者 梁恩瑜 杨默 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期555-561,共7页

目的:探讨血小板衍生生长因子(PDGF-BB)对体外粒-单核细胞集落形成单位(CFU-GM)、巨核细胞集落形成单位(CFU-MK)的生成作用及其对人巨核细胞株CHRF抗凋亡作用的具体机制。方法:采用血浆凝固培养法培养小鼠和人骨髓细胞CFU-GM和CFU-MK,探... 目的:探讨血小板衍生生长因子(PDGF-BB)对体外粒-单核细胞集落形成单位(CFU-GM)、巨核细胞集落形成单位(CFU-MK)的生成作用及其对人巨核细胞株CHRF抗凋亡作用的具体机制。方法:采用血浆凝固培养法培养小鼠和人骨髓细胞CFU-GM和CFU-MK,探讨PDGF-BB对两者CFU-GM、CFU-MK形成能力的影响。通过AnnexinV/PI双染、活性Caspase-3表达及JC-1线粒体膜势能流式细胞术检测研究PDGF-BB对人巨核细胞株CHRF的抗凋亡作用机制。结果:PDGF-BB 0-100 ng/ml能够促进小鼠/人CFU-GM和CFU-MK的增殖并呈剂量依赖性,其中50 ng/ml作用最为明显(P<0.01)。流式细胞术检测结果表明,PDGF-BB通过线粒体及Caspase-3通路对人巨核细胞株CHRF发挥抗凋亡作用(P<0.05)。结论:PDGF-BB能够促进体外小鼠和人粒-单核系及巨核系造血生成,且能通过线粒体途径和Caspase-3通路对巨核细胞发挥抗凋亡作用。 展开更多

关键词 血小板衍生生长因子 粒-单核细胞集落形成单位 巨核细胞集落形成单位 巨核细胞株 细胞凋亡

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细胞自噬与ULK1蛋白关系的研究进展 被引量：8

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作者 杨龙灿 张莹 +4 位作者 余曦 孙家维 李继伟 张旭阳 潘宁波 《医学综述》 2018年第23期4635-4639,4646,共6页

细胞自噬是生物体重要的代谢过程,在各个生理、病理过程中扮演重要角色。它由自噬相关蛋白控制,受多条信号通路调控。细胞自噬在神经退行性病变、肿瘤发生、缺血/再灌注损伤、糖尿病、循环系统疾病等方面有重要作用,其可以清除细胞内受... 细胞自噬是生物体重要的代谢过程,在各个生理、病理过程中扮演重要角色。它由自噬相关蛋白控制,受多条信号通路调控。细胞自噬在神经退行性病变、肿瘤发生、缺血/再灌注损伤、糖尿病、循环系统疾病等方面有重要作用,其可以清除细胞内受损的物质或细胞器,为细胞提供原料和良好的细胞环境。而在细胞自噬的形成过程中,unc-51样激酶1(ULK1)蛋白发挥重要作用,它是细胞自噬的起始开关。因此,通过对ULK1蛋白上下游信号的深入研究,以ULK1蛋白为治疗靶点,干预和调控细胞自噬,将为疾病的治疗提供新的方向。 展开更多

关键词 细胞自噬 Unc-51样激酶1蛋白 缺血/再灌注

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医学细胞生物学实验教学及考核方法改革 被引量：11

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作者 刘岚 陈绍坤 +4 位作者 税青林 余红 田强 赵矫 赵小平 《山西医科大学学报（基础医学教育版）》 2009年第4期433-435,共3页

为了使医学细胞生物学实验教学更加符合理论教学的实际需要、充分配合课堂理论教学，从调整教学内容、改革教学方法、完善成绩评定体系三个方面的改革进行了探讨，以达到充分发挥实验课的作用、提高学生的创新意识和学习兴趣，从而达到... 为了使医学细胞生物学实验教学更加符合理论教学的实际需要、充分配合课堂理论教学，从调整教学内容、改革教学方法、完善成绩评定体系三个方面的改革进行了探讨，以达到充分发挥实验课的作用、提高学生的创新意识和学习兴趣，从而达到培养新世纪复合型人才的目标。 展开更多

关键词 医学细胞生物学 实验课程 实验改革

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