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Biomembrane nanostructure-driven potentiation of bacterial protein vaccines:Mechanisms,platforms,and immunotherapeutic advances
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作者 Yuan-Yuan Chen Hui-Fen Qiang +2 位作者 Jie Gao Ting-Lin Zhang Yan Wu 《Infectious Diseases Research》 2026年第1期13-22,共10页
The global burden of bacterial infections,exacerbated by antimicrobial resistance(AMR),necessitates innovative strategies.Bacterial protein vaccines offer promise by eliciting targeted immunity while circumventing AMR... The global burden of bacterial infections,exacerbated by antimicrobial resistance(AMR),necessitates innovative strategies.Bacterial protein vaccines offer promise by eliciting targeted immunity while circumventing AMR.However,their clinical translation is hindered by their inherently low immunogenicity,often requiring potent adjuvants and advanced delivery systems.Biomembrane nanostructures(e.g.,liposomes,exosomes,and cell membrane-derived nanostructures),characterized by superior biocompatibility,intrinsic targeting ability,and immune-modulating properties,could serve as versatile platforms that potentiate vaccine efficacy by increasing antigen stability,enabling codelivery of immunostimulants,and facilitating targeted delivery to lymphoid tissues/antigen-presenting cells.This intrinsic immunomodulation promotes robust humoral and cellular immune responses to combat bacteria.This review critically reviews(1)key biomembrane nanostructure classes for bacterial protein antigens,(2)design strategies leveraging biomembrane nanostructures to enhance humoral and cellular immune responses,(3)preclinical efficacy against diverse pathogens,and(4)translational challenges and prospects.Biomembrane nanostructure-driven approaches represent a paradigm shift in the development of next-generation bacterial protein vaccines against resistant infections. 展开更多
关键词 biomembrane nanostructures bacterial protein vaccines antimicrobial resistance vaccine delivery IMMUNOMODULATION nanovaccines liposomes EXOSOMES cell membrane coating
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miR-101通过抑制DNA甲基转移酶3a抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移 被引量:14
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作者 刘健 庞亚梅 +5 位作者 王黄震 李艳波 孙欣 徐菲 任宏 刘大鹏 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期299-303,共5页
目的研究miR-101对乳腺癌细胞增殖和迁移能力的影响,并分析miR-101影响乳腺癌细胞生物学行为的可能机制。方法采用实时荧光定量PCR检测miR-101和DNA甲基转移酶3a(DNMT3a)在乳腺癌组织和相对应的正常乳腺组织,正常乳腺细胞以及多种乳腺... 目的研究miR-101对乳腺癌细胞增殖和迁移能力的影响,并分析miR-101影响乳腺癌细胞生物学行为的可能机制。方法采用实时荧光定量PCR检测miR-101和DNA甲基转移酶3a(DNMT3a)在乳腺癌组织和相对应的正常乳腺组织,正常乳腺细胞以及多种乳腺癌细胞系中的表达水平,应用慢病毒介导感染的方法分别将miR-101序列及shRNA-DNMT3a转至MDAMB-231人乳腺癌细胞,通过Western blot法检测DNMT3a以及上皮钙黏素(E-cadherin)的表达,分析miR-101影响乳腺癌细胞生物学行为的可能机制。通过MTT法检测乳腺癌细胞的增殖能力,划痕实验检测乳腺癌细胞的迁移能力。结果miR-101在MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-361、HCC70乳腺癌细胞系及乳腺癌组织中表达低于正常乳腺组织及MCF-10A乳腺细胞系,而DNMT3a表达则升高。Western blot实验结果显示过表达miR-101的MDA-MB-231细胞中,DNMT3a的表达明显下降,而E-cadherin的表达升高;应用shRNA-DNMT3a抑制DNMT3a表达后,E-cadherin的表达也明显升高,证实miR-101可能通过抑制DNMT3a而发挥作用。体外实验显示过表达miR-101可明显抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖和迁移能力。结论miR-101抑制乳腺癌细胞增殖和迁移能力可能是通过抑制DNMT3a进而恢复E-cadherin表达来实现。 展开更多
关键词 乳腺癌 miR-101 DNMT3a 上皮钙黏素 增殖 迁移
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日本血吸虫Mr23000抗原与白细胞介素-12多价DNA疫苗诱导小鼠保护性免疫的研究 被引量:5
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作者 卜玲毅 石佑恩 +3 位作者 甘燕 朱晓华 宁长修 朱红刚 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期82-85,共4页
目的研究能共同表达日本血吸虫Mr23000膜抗原(Sj23)与白细胞介素-12(IL-12)的多价DNA疫苗PV-IL12-Sj23诱导BALB/c小鼠免疫保护作用。方法在多价DNA疫苗PV-IL12-Sj23和PV-IL12的基础上,构建空白质粒PV和仅表达Sj23的质粒PV-Sj23。50只BAL... 目的研究能共同表达日本血吸虫Mr23000膜抗原(Sj23)与白细胞介素-12(IL-12)的多价DNA疫苗PV-IL12-Sj23诱导BALB/c小鼠免疫保护作用。方法在多价DNA疫苗PV-IL12-Sj23和PV-IL12的基础上,构建空白质粒PV和仅表达Sj23的质粒PV-Sj23。50只BALB/c小鼠分为5组,每组10只,分别注射多价DNA疫苗PV-IL12-Sj23、表达Sj23的质粒PV-Sj23、表达IL-12质粒PV-IL12、空白质粒PV和生理盐水,100μg/只,免疫1次。4周后每只鼠攻击感染40±2条尾蚴,42d后剖杀,计数成虫及肝内虫卵数。结果成功地构建了空白质粒PV和只表达Sj23的质粒PV-Sj23及多价DNA疫苗PV-IL12-Sj23。PV-IL12-Sj23组和PV-Sj23组分别获得了45.5%和27.2%的减虫率,两组比较差异有显著性(P<0.05),减卵率分别为58.4%和33.9%。结论多价DNA疫苗PV-IL12-Sj23可诱导BALB/c小鼠产生较显著的抗血吸虫免疫保护作用,且保护性效果比单价DNA疫苗PV-Sj23好。 展开更多
关键词 日本血吸虫 DNA疫苗诱导 保护性免疫 白细胞介素-12(IL-12) BALB/c小鼠 多价DNA疫苗 免疫保护作用 SJ23 IL12 保护性效果 生理盐水 攻击感染 抗血吸虫 PV 质粒 膜抗原 虫卵数 减虫率 显著性
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应用CRISPR/Cas9系统构建Rev-erbβ基因敲除的HEK293细胞系 被引量:5
4
作者 陈芳 张伟锋 +3 位作者 赵俊丽 杨沛艳 马锐 夏海滨 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1446-1452,共7页
目的利用成簇的、规律间隔的短回文重复序列/Cas9核酸酶(CRISPR/Cas9)基因组编辑技术,构建Rev-erbβ基因敲除的HEK293细胞系。方法通过单向导RNA(sgRNA)介导Cas9蛋白对目的基因靶位点DNA进行特异性的切割,然后经DNA同源重组单向导RNA或... 目的利用成簇的、规律间隔的短回文重复序列/Cas9核酸酶(CRISPR/Cas9)基因组编辑技术,构建Rev-erbβ基因敲除的HEK293细胞系。方法通过单向导RNA(sgRNA)介导Cas9蛋白对目的基因靶位点DNA进行特异性的切割,然后经DNA同源重组单向导RNA或非同源末端连接方式进行修复,以实现对Rev-erbβ基因进行敲入、敲除修饰操作的目的。首先,针对Rev-erbβ基因设计4个sgRNA,经筛选选择活性较高的sgRNA1及sgRNA2用于构建p CMV-h Cas9-U6-Rev-erbβsgRNA1&sgRNA2串联载体。然后将p CMV-h Cas9-U6-Rev-erbβsgRNA1&sgRNA2和p Ad-E1/hRev-erbβdonor质粒载体共转染至HEK293细胞,通过药物筛选、克隆化及序列测序获得整合有外源供体基因片段的一条链,另一条链为片段缺失的Rev-erbβ基因完全敲除的HEK293(Rev-erbβ-/-)细胞系。最后通过用Western blot法和实时定量PCR对敲除Rev-erbβHEK293细胞系(C3-6)进行检测。结果敲除Rev-erbβ基因的HEK293细胞系中均未检测到Rev-erbβmRNA和蛋白质的表达。结论利用CRISPR/Cas9技术,成功构建了基因定点修饰和敲除的Rev-erbβ-/-HEK293细胞系,为Rev-erbβ的功能和作用机制研究提供有效工具。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 HEK 293细胞 Rev-erbβ 基因敲入 基因敲除
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IL-37通过抑制哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的磷酸化而诱导SMMC-7721肝癌细胞凋亡和自噬 被引量:5
5
作者 李婷婷 朱迪 +3 位作者 牟童 郭振 蒲俊良 吴忠均 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期440-445,共6页
目的观察白细胞介素37(IL-37)诱导SMMC-7721肝癌细胞凋亡和自噬的机制。方法体外培养SMMC-7721细胞,SMMC-7721细胞分为处理组和对照组,处理组分别予以不同剂量(50、100、200)ng/mL的重组人IL-37(rh IL-37)。CCK-8法检测SMMC-7721细胞增... 目的观察白细胞介素37(IL-37)诱导SMMC-7721肝癌细胞凋亡和自噬的机制。方法体外培养SMMC-7721细胞,SMMC-7721细胞分为处理组和对照组,处理组分别予以不同剂量(50、100、200)ng/mL的重组人IL-37(rh IL-37)。CCK-8法检测SMMC-7721细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测凋亡和自噬相关蛋白Bax、Bcl-2、微管相关蛋白1轻链3(LC3)和beclin 1及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的水平,透射电子显微镜观察自噬体的形成情况。结果 IL-37可抑制SMMC-7721肝细胞癌细胞的增殖、诱导SMMC-7721细胞凋亡和自噬;IL-37处理组Bax、LC3和beclin 1水平增加,Bcl-2水平降低,mTOR的磷酸化被抑制;可见明显自噬体形成。结论 IL-37可诱导肝细胞癌SMMC-7721细胞发生凋亡和自噬,可能与mTOR的磷酸化有关。 展开更多
关键词 白细胞介素37(IL-37) SMMC-7721细胞 凋亡 自噬 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)
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GRIM-19及其靶基因产物STAT3与肺癌相关性的研究 被引量:11
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作者 叶静 赵继京 +1 位作者 刘荣玉 肖卫华 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2008年第6期599-602,共4页
目的观察干扰素/维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关的基因(GRIM-19)蛋白及其靶基因产物转录信号转导子与激活子3(STAT3)蛋白在肺癌组织和癌旁组织中的表达,探讨GRIM-19及其靶基因产物STAT3在肺癌发生、发展中的作用。方法用Western blot... 目的观察干扰素/维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关的基因(GRIM-19)蛋白及其靶基因产物转录信号转导子与激活子3(STAT3)蛋白在肺癌组织和癌旁组织中的表达,探讨GRIM-19及其靶基因产物STAT3在肺癌发生、发展中的作用。方法用Western blot方法检测37例人肺癌及其癌旁组织中GRIM-19蛋白、STAT3蛋白水平的表达,对两组蛋白的表达与相关临床病理特征进行统计学分析。结果①在肺癌组织中GRIM-19蛋白表达明显低于癌旁组织(P<0.01),而STAT3蛋白表达则高于癌旁组织(P<0.01),且GRIM-19与STAT3在肺癌组织中的表达呈负相关(r=-0.327;P<0.05)。②GRIM-19蛋白表达水平与肺癌临床分期相关(P<0.05),而STAT3蛋白表达水平则与肺癌临床分期(P<0.05)及是否有淋巴结转移相关(P<0.05),两者均与患者性别、年龄、组织分型、吸烟指数之间无关联(P>0.05)。结论GRIM-19和STAT3蛋白在肺癌组织中有表达,并与临床分期相关,提示GRIM-19作为一个新的细胞凋亡促进基因,在肺癌的发生发展过程中可能发挥着重要的作用。 展开更多
关键词 肺肿瘤 印迹法 蛋白质 基因
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Rab23在人乳腺癌细胞Bcap-37侵袭迁移中的作用 被引量:4
7
作者 赵洁 刘亚莉 +2 位作者 简强 李娟 迟素敏 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期813-817,共5页
目的探讨过表达和敲除Rab23对人乳腺癌Bcap-37细胞侵袭迁移能力的影响。方法应用Western blot法检测乳腺细胞HBL-100及乳腺癌细胞Bcap-37、MDA-MB-231、MCF-7中Rab23的表达情况。慢病毒转染乳腺癌细胞Bcap-37,筛选出稳定过表达和敲除Ra... 目的探讨过表达和敲除Rab23对人乳腺癌Bcap-37细胞侵袭迁移能力的影响。方法应用Western blot法检测乳腺细胞HBL-100及乳腺癌细胞Bcap-37、MDA-MB-231、MCF-7中Rab23的表达情况。慢病毒转染乳腺癌细胞Bcap-37,筛选出稳定过表达和敲除Rab23的Bcap-37细胞。划痕愈合试验、Transwell实验检测过表达和敲除Rab23后Bcap-37细胞侵袭迁移能力的变化。结果 Western blot法结果显示,Rab23在乳腺和乳腺癌细胞系中均有表达,且Bcap-37细胞表达水平最高,与HBL-100细胞相比,差异有统计学意义(P<0.01);与空载体Bcap-37细胞比较,过表达Rab23的Bcap-37细胞侵袭迁移能力明显增强(P<0.01);敲除Rab23的Bcap-37细胞侵袭迁移能力明显减弱(P<0.01)。结论 Rab23在乳腺癌细胞Bcap-37的侵袭迁移中发挥着重要作用。 展开更多
关键词 Rab23 慢病毒转染 乳腺癌 侵袭 迁移
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肺腺癌c-Src及核仁磷蛋白/B23(NPM1)蛋白的高表达与化疗疗效负相关 被引量:6
8
作者 贺兼斌 向志 +2 位作者 肖集文 肖海波 刘理静 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1378-1381,共4页
目的观察c-Src蛋白及核仁磷蛋白/B23(NPM1)在肺腺癌组织中的表达并探讨与化疗疗效的关系。方法选择2012-10-10/2015-06-30期间怀化市第一人民医院确诊的肺腺癌患者的肿瘤标本共107例,采用免疫组织化学染色方法检测c-Src蛋白和NPM1蛋白... 目的观察c-Src蛋白及核仁磷蛋白/B23(NPM1)在肺腺癌组织中的表达并探讨与化疗疗效的关系。方法选择2012-10-10/2015-06-30期间怀化市第一人民医院确诊的肺腺癌患者的肿瘤标本共107例,采用免疫组织化学染色方法检测c-Src蛋白和NPM1蛋白的表达情况,分析c-Src蛋白和NPM1蛋白的表达与肺腺癌发生、发展的关系,其中Ⅲ-Ⅳ期患者55例予以吉西他滨联合顺铂方案规则化疗4疗程,探讨c-Src蛋白和NPM1蛋白的表达与化疗疗效的关系。结果 c-Src蛋白和NPM1蛋白在肺腺癌组织中皆为阳性表达,临床分期越高,c-Src蛋白和NPM1蛋白的表达越高,同时c-Src蛋白和NPM1蛋白在肿瘤细胞的表达随分化程度的升高而降低,化疗疗效随c-Src蛋白和NPM1蛋白的表达升高而降低。结论高表达c-Src、NPM1的肺腺癌化疗敏感性较差,高表达c-Src和NPM1可能与肺腺癌低分化有关。 展开更多
关键词 C-SRC 核仁磷蛋白/B23(nucleophosmin/B23 NPM1) 肺腺癌 化学(药物)疗法
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埃兹蛋白(ezrin)基因沉默抑制人前列腺癌PC-3细胞增殖和侵袭 被引量:4
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作者 阳宁 王玲 +2 位作者 陈仙 刘俊 罗志刚 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期821-824,828,共5页
目的观察埃兹蛋白(ezrin)在前列腺癌组织中的表达,探讨ezrin基因沉默对人前列腺癌PC-3细胞增殖、侵袭的影响及相关机制。方法收集前列腺癌和良性前列腺增生患者的标本各20例,采用荧光实时定量PCR检测ezrin mRNA水平、Western blot法检测... 目的观察埃兹蛋白(ezrin)在前列腺癌组织中的表达,探讨ezrin基因沉默对人前列腺癌PC-3细胞增殖、侵袭的影响及相关机制。方法收集前列腺癌和良性前列腺增生患者的标本各20例,采用荧光实时定量PCR检测ezrin mRNA水平、Western blot法检测ezrin蛋白水平。培养PC-3细胞,分别用培养液、Scramble siRNA、ezrin siRNA处理48 h;MTT法检测细胞增殖情况,TranswellTM侵袭实验检测细胞侵袭能力,荧光实时定量PCR、Western blot法检测上皮钙黏素、神经钙黏素的mRNA和蛋白水平。结果与良性前列腺增生患者的组织相比,前列腺癌组织中ezrin mRNA、蛋白表达水平均明显增加。与Scramble siRNA处理的PC-3细胞相比,ezrin表达下调后,PC-3细胞增殖受到明显抑制,平均穿膜细胞数、神经钙黏素水平降低,上皮钙黏素水平增加。Scramble siRNA处理的PC-3细胞与单纯培养液处理的PC-3细胞上述指标无明显差异。结论 Ezrin在前列腺癌组织中高表达,ezrin基因沉默能抑制PC-3细胞的增殖和侵袭,同时上调上皮钙黏素表达及下调神经钙黏素表达。 展开更多
关键词 前列腺癌 EZRIN 上皮钙黏素 神经钙黏素
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miR-130b在肝细胞癌中的表达及临床病理意义 被引量:3
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作者 许秋然 蔡文伟 +2 位作者 张美齐 刘青光 刘欣 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期387-392,共6页
目的探讨miR-130b在人肝细胞癌(HCC)中的表达、与临床病理特征的关系及可能机制。方法用实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-130b在86例HCC及癌旁组织、不同肝癌细胞系的表达;免疫组织化学染色检测miR-130b不同表达水平的HCC组织中上皮钙黏素(... 目的探讨miR-130b在人肝细胞癌(HCC)中的表达、与临床病理特征的关系及可能机制。方法用实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-130b在86例HCC及癌旁组织、不同肝癌细胞系的表达;免疫组织化学染色检测miR-130b不同表达水平的HCC组织中上皮钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的表达情况;qRT-PCR检测miR-130b在LO2人正常永生化肝细胞及Hep G2、Hep3B、SMMC-7721、Hu7肝癌细胞系的表达水平;应用人工合成的miR-130b抑制物转染SMMC-7721细胞,TranswellTM实验检测SMMC-7721细胞侵袭能力变化;应用人工合成的miR-130b抑制物及PPARγ小干扰RNA(siRNA)转染SMMC-7721人肝癌细胞,qRT-PCR检测癌细胞中miR-130b、PPARγ、E-cadherin、vimentin的mRNA水平,Western blot法检测癌细胞中PPARγ、E-cadherin、vimentin的蛋白水平。结果miR-130b在HCC组织中表达水平显著高于对应癌旁组织;肝癌组织中miR-130b异常表达与门静脉侵犯、原发肿瘤分级、肿瘤TNM分期显著相关;miR-130b在不同肝癌细胞系中表达均高于LO2细胞;miR-130b高表达组PPARγ及E-cadherin蛋白水平显著低于miR-130低表达组,而vimentin水平显著高于miR-130b低表达组,相关性分析结果显示肝癌组织中miR-130b与PPARγ蛋白、E-cadherin蛋白水平呈显著负相关,与vimentin蛋白水平呈显著正相关;抑制miR-130b水平,可上调PPARγ蛋白的水平,E-cadherin蛋白的表达显著增加,而vimentin蛋白表达显著降低,SMMC-7721细胞的侵袭能力降低。PPARγsiRNA可部分逆转miR-130b抑制物对SMMC-7721细胞的作用。结论miR-130b在HCC组织中表达上调并与HCC恶性临床病理特征有关,miR-130b可能通过抑制PPARγ表达及诱导上皮间质转化促进肝癌细胞侵袭。 展开更多
关键词 miR-130b 肝细胞癌 侵袭 PPARΓ EMT
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miR-141-3p通过促进波形蛋白表达增强CNE-2人鼻咽癌细胞的增殖、侵袭和迁移 被引量:5
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作者 孙哲 周兰柱 +1 位作者 吴俊 王文忠 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期63-69,共7页
目的探讨微小RNA 141-3p(miR-141-3p)能否通过调节波形蛋白(vimentin)促进CNE-2人鼻咽癌(NPC)细胞的迁移。方法实时定量PCR检测NPC组织和癌旁组织miR-141-3p表达,免疫组织化学染色法和Western blot法检测vimentin的表达水平。采用实时定... 目的探讨微小RNA 141-3p(miR-141-3p)能否通过调节波形蛋白(vimentin)促进CNE-2人鼻咽癌(NPC)细胞的迁移。方法实时定量PCR检测NPC组织和癌旁组织miR-141-3p表达,免疫组织化学染色法和Western blot法检测vimentin的表达水平。采用实时定量PCR和Western blot法分别筛选5-8F、CNE-2、HNE1人NPC细胞中miR-141-3p相对表达量最高的细胞株,实时定量PCR和Western blot法共同验证miR-141-3p与vimentin表达关系;采用小干涉RNA(si-miR-141-3p)下调CNE-2细胞miR-141-3p、噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖抑制率、Transwell^(TM)小室法检测细胞侵袭和迁移、Western blot法检测vimentin表达量。结果与癌旁组织相比,NPC组织中miR-141-3p和vimentin表达量均显著增加,与NP69细胞相比,miR-141-3p和vimentin在CNE-2细胞中表达均显著增加;下调CNE-2细胞中miR-141-3p后,细胞侵袭和迁移能力均下降,细胞增殖能力显著降低,vimentin蛋白表达量显著降低。结论miR-141-3p能够通过促进vimentin表达增强CNE-2细胞的增殖和迁移。 展开更多
关键词 鼻咽癌 miR-141-3p 上皮间质转化(EMT) VIMENTIN 细胞侵袭 细胞迁移
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过表达miR-134b抑制CD133^+ U87胶质瘤干细胞增殖及侵袭 被引量:3
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作者 刘义锋 张保朝 +6 位作者 温昌明 闻公灵 周国平 张敬伟 贺海发 汪宁 李巍 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期637-642,共6页
目的探讨微小RNA-134b(miR-134b)在胶质瘤干细胞(GSC)中的作用及相关机制。方法实时定量PCR检测U87胶质瘤细胞系分离出的CD133^+ GSC和CD133^- GSC中miR-134b的表达量;包装慢病毒,构建过表达miR-134b的GSC,实时定量PCR检测其miR-134b、C... 目的探讨微小RNA-134b(miR-134b)在胶质瘤干细胞(GSC)中的作用及相关机制。方法实时定量PCR检测U87胶质瘤细胞系分离出的CD133^+ GSC和CD133^- GSC中miR-134b的表达量;包装慢病毒,构建过表达miR-134b的GSC,实时定量PCR检测其miR-134b、CD133、神经干细胞蛋白(nestin)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9和MMP-12 mRNA表达水平;Western blot法检测过表达miR-134b的GSC中Notch2、MMP-2、MMP-9和MMP-12蛋白表达;Transwell^(TM)侵袭实验检测过表达miR-134b对GSC侵袭能力的影响;建立U87细胞裸鼠成瘤模型,皮下注射过表达miR-134b(实验组)及空载体(对照组)的CD133^+ GSC,定期测量肿瘤大小,70 d后处死裸鼠,测定肿瘤质量,以探讨过表达miR-134b对在体肿瘤生长的影响。结果实时定量PCR检测结果表明,与CD133^- GSC相比,CD133^+ GSC中miR-134b表达显著下调;通过慢病毒包装的方法成功构建过表达miR-134b的GSC,其miR-134b的表达显著高于空载体对照细胞,而MMP-2、MMP-9 mRNA及蛋白表达无显著变化,而MMP-12的mRNA及蛋白表达均显著下降;Transwell^(TM)侵袭实验结果表明,与对照组相比,过表达miR-134b抑制CD133^+ GSC的侵袭能力;实验组裸鼠体内肿瘤体积显著低于对照组,与对照组相比,过表达miR-134b的实验组肿瘤质量也降低了42%。结论过表达miR-134b抑制CD133^+ GSC的生长和侵袭。 展开更多
关键词 微小RNA-134b(miR-134b) 基质金属蛋白酶(MMP) U87胶质瘤
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miR-141-3p靶向调控前列腺癌LNCaP细胞雄激素受体的表达 被引量:3
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作者 王琛 欧阳永日 +2 位作者 路蔓 卫军霞 张惠中 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期736-739,共4页
目的检测LNCa P细胞内miR-141-3p对雄激素受体(AR)基因靶向调控作用,明确AR是否为miR-141-3p的靶基因。方法将miR-141-3p mimics转染LNCa P细胞后,利用反转录PCR和Western blot法分别检测LNCa P细胞中AR的mRNA和蛋白表达。采用PCR方法... 目的检测LNCa P细胞内miR-141-3p对雄激素受体(AR)基因靶向调控作用,明确AR是否为miR-141-3p的靶基因。方法将miR-141-3p mimics转染LNCa P细胞后,利用反转录PCR和Western blot法分别检测LNCa P细胞中AR的mRNA和蛋白表达。采用PCR方法扩增得到含有miR-141-3p结合位点的AR mRNA 3'非翻译区(3'UTR)片段,并插入到pmiR-report载体萤光素酶基因的3'下游区,并将所构建载体命名为pmiR-AR-3'UTR;萤光素酶报告基因检测试剂盒检测miR-141-3p对pmiR-AR-3'UTR靶向抑制效果。结果转染miR-141-3p mimics可降低LNCa P细胞内源AR的mRNA和蛋白水平;萤光素酶活性检测结果显示:与对照组相比,miR-141-3p可明显抑制pmiR-AR-3'UTR萤光素酶活性。结论 AR是miR-141-3p的靶基因。 展开更多
关键词 前列腺癌 雄激素受体 miR-141-3p
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3μm厚切片在乳腺癌HER-2扩增检测中的可行性探讨 被引量:2
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作者 张洪兰 刘华 +5 位作者 张春芳 杨聪颖 王红霞 聂艳红 齐冬雪 陈昊 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期701-703,共3页
乳腺癌HER-2基因扩增是曲妥珠单抗赫赛汀(Herceptin)靶向治疗和辅助治疗的重要参考指标,能有效延长患者的生存期,降低复发率。用于诊断HER-2状态的最常用技术是免疫组化法检测HER-2蛋白水平和荧光原位杂交法(fluorescence in situ hy... 乳腺癌HER-2基因扩增是曲妥珠单抗赫赛汀(Herceptin)靶向治疗和辅助治疗的重要参考指标,能有效延长患者的生存期,降低复发率。用于诊断HER-2状态的最常用技术是免疫组化法检测HER-2蛋白水平和荧光原位杂交法(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测HER-2DNA水平,其中FISH法是检测扩增的“金标准”。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 ERBB-2基因 原位杂交 荧光 切片厚度
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结核分枝杆菌融合抗原Rv3914-6His的原核表达、纯化与抗原性检测 被引量:2
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作者 蔡家麟 潘欣 +2 位作者 王颖 陈敏 廖万清 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2013年第3期12-17,共6页
血清学诊断是目前临床诊断中应用最为广泛的方法之一,用原核表达并鉴定了系列结核分枝杆菌抗原融合蛋白Rv1908c-6His、Rv0733-6His、Rv0899-6His、Rv1411c-6His和Rv3914-6His,并以此包被酶标板,以Rv2031c-6His为阳性对照,采用间接ELISA... 血清学诊断是目前临床诊断中应用最为广泛的方法之一,用原核表达并鉴定了系列结核分枝杆菌抗原融合蛋白Rv1908c-6His、Rv0733-6His、Rv0899-6His、Rv1411c-6His和Rv3914-6His,并以此包被酶标板,以Rv2031c-6His为阳性对照,采用间接ELISA方法比较了34例活动性结核病患者与35例健康体检者血清中抗结核分枝杆菌抗原的IgG水平。结果显示,活动性结核病患者中针对Rv1411c-6His、Rv3914-6His和Rv2031c-6His的IgG水平明显高于健康体检者,其中Rv3914-6His的AUC值(0.786 7)略高于目前临床应用的类似于16 ku的抗原Rv2031c-6His(AUCRv2031c=0.754),提示Rv3914抗原可能是结核病血清诊断的新的候选标志物。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 表达纯化 抗原 血清学诊断
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miR-129-1-3p通过靶向抑制WEE1蛋白激酶表达逆转HNE1/CDDP人鼻咽癌细胞顺铂耐药 被引量:2
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作者 张浩轩 陆进 +1 位作者 蒋成义 卢伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1014-1019,共6页
目的探讨miR-129-1-3p对人鼻咽癌耐药细胞HNE1/顺铂(CDDP)敏感性的影响及相关作用机制。方法培养人鼻咽癌HNE1细胞及耐CDDP的HNE1/CDDP细胞,噻唑蓝(MTT)法检测HNE1/CDDP细胞对于CDDP的耐药指数;采用反转录PCR检测miR-129-1-3p和WEE1蛋... 目的探讨miR-129-1-3p对人鼻咽癌耐药细胞HNE1/顺铂(CDDP)敏感性的影响及相关作用机制。方法培养人鼻咽癌HNE1细胞及耐CDDP的HNE1/CDDP细胞,噻唑蓝(MTT)法检测HNE1/CDDP细胞对于CDDP的耐药指数;采用反转录PCR检测miR-129-1-3p和WEE1蛋白激酶在两种细胞的表达水平。采用脂质体法将miR-129-1-3p模拟物(miR-129-1-3p mimics)和阴性对照RNA(miR-NC)转染HNE1/CDDP细胞,并设立对照组。MTT法检测转染后HNE1/CDDP细胞对CDDP的半数抑制浓度(IC50)变化,Western blot法检测转染后各组细胞WEE1蛋白水平,双荧光素酶实验评价miR-129-1-3p对WEE1的靶向调控作用。结果HNE1/CDDP细胞对于CDDP的耐药指数为5.29。HNE1细胞中的miR-129-1-3p水平高于耐CDDP的HNE1/CDDP细胞,WEE1 mRNA水平低于耐CDDP的HNE1/CDDP细胞,miR-129-1-3p水平与WEE1 mRNA水平呈负相关(r=-0.9784)。与其余两组相比,miR-129-1-3p mimics转染后,HNE1/CDDP细胞对CDDP的IC50明显降低,WEE1的蛋白水平也明显降低。双荧光素酶实验结果显示miR-129-1-3p靶向调控WEE1的3'非翻译区(3'-UTR)。结论miR-129-1-3p通过靶向抑制WEE1表达逆转HNE1/CDDP鼻咽癌细胞CDDP耐药。 展开更多
关键词 miR-129-1-3p WEE1蛋白激酶 鼻咽癌细胞 顺铂(CDDP) 耐药
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miR-153靶向抑制活化蛋白C(APC)加重脂多糖诱导的脓毒症大鼠肺损伤及机制 被引量:2
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作者 杨亚东 彭金娥 +8 位作者 佘秋芳 汤瑜 汪江 章金鹏 刘兴 蔡榕松 周子尧 曾爽 许冀 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期911-917,共7页
目的探讨miR-153靶向活化蛋白C(APC)调控脂多糖(LPS)诱导的大鼠脓毒症肺损伤的机制。方法雌性SD大鼠分为对照组、LPS组、LPS联合miR-153抑制物(miR-153 inhibitor)组、LPS联合miR-153抑制物阴性对照(inhibitor NC)组、LPS和miR-153 inhi... 目的探讨miR-153靶向活化蛋白C(APC)调控脂多糖(LPS)诱导的大鼠脓毒症肺损伤的机制。方法雌性SD大鼠分为对照组、LPS组、LPS联合miR-153抑制物(miR-153 inhibitor)组、LPS联合miR-153抑制物阴性对照(inhibitor NC)组、LPS和miR-153 inhibitor联合APC小干扰RNA(si-APC)组、LPS和miR-153 inhibitor联合APC小干扰RNA阴性对照(si-NC)组。除对照组外,其余各组通过给予相应处理后,再给予LPS诱导建立大鼠脓毒症损伤模型。通过实时定量PCR检测miR-153的表达,Western blot法检测APC、B淋巴细胞瘤因子2(Bcl2)和裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)的蛋白表达;分离并培养大鼠肺泡上皮细胞,CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡。ELISA检测大鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、白细胞介素6(IL-6)、IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达水平;双荧光素报告实验检测miR-153和APC的关系。结果与对照组相比,脓毒症肺损伤大鼠模型中,miR-153表达明显增加,APC明显降低。LPS组的细胞活力、Bcl2蛋白表达和SOD活性明显降低,细胞凋亡率、c-caspase-3蛋白表达、MDA、IL-6、IL-1β、TNF-α含量显著增加;与LPS联合inhibitor NC组相比,LPS联合miR-153 inhibitor组的细胞活力、Bcl2蛋白表达和SOD活性明显增加,细胞凋亡率、c-caspase-3蛋白表达、MDA、IL-6、IL-1β、TNF-α表达显著降低。miR-153可以靶向调控APC的表达,与LPS和miR-153 inhibitor联合si-NC组相比,LPS和miR-153 inhibitor联合si-APC组的细胞活力、Bcl2蛋白表达和SOD活性明显降低,细胞凋亡率、c-caspase-3蛋白表达、MDA、IL-6、IL-1β、TNF-α表达显著增加。结论LPS诱导肺组织miR-153表达增强,靶向抑制APC,促进脓毒症大鼠肺组织的细胞凋亡、氧化应激和炎症反应,加重损伤。 展开更多
关键词 miR-153 活化蛋白C(APC) 脂多糖 脓毒症肺损伤
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抗ATRX-C_(2193-2492)多克隆抗体的制备和鉴定 被引量:1
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作者 唐双阳 刘志敏 +4 位作者 李冉辉 陈艳 赵兰华 申海艳 万艳平 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期536-539,545,共5页
目的制备X连锁的α地中海贫血/精神发育迟滞综合症(ATRX)蛋白C端的多克隆抗体,分析ATRX蛋白在宫颈组织中的表达和定位。方法将纯化后的6His-ATRX-C_(2193-2492)蛋白免疫BALB/c小鼠,获得抗血清;饱和硫酸铵盐析沉淀法以及亲和层析法纯化... 目的制备X连锁的α地中海贫血/精神发育迟滞综合症(ATRX)蛋白C端的多克隆抗体,分析ATRX蛋白在宫颈组织中的表达和定位。方法将纯化后的6His-ATRX-C_(2193-2492)蛋白免疫BALB/c小鼠,获得抗血清;饱和硫酸铵盐析沉淀法以及亲和层析法纯化抗血清,制备抗ATRX-C_(2193-2492)多克隆抗体。采用ELISA检测抗体效价;并用Western blot法鉴定其特异性;利用免疫组织化学技术检测宫颈癌组织细胞中ATRX的表达与定位。结果制备的ATRX-C_(2193-2492)抗血清效价可达1∶12 800,该抗体能特异性识别ATRX-C_(2193-2492)蛋白;并检测出在宫颈癌癌旁组织中ATRX具有较高表达并主要定位在细胞核,而在宫颈癌组织细胞中虽仍主要表达于细胞核,但表达量明显减少。结论成功制备了抗ATRX-C_(2193-2492)多克隆抗体,能够应用于宫颈组织中的ATRX蛋白表达的检测。 展开更多
关键词 x连锁的α地中海贫血/精神发育迟滞综合症(ATRX) 多克隆抗体 宫颈癌 表达
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下调Drosha基因表达促进MGC-803胃癌细胞对表阿霉素的敏感性 被引量:1
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作者 徐丽云 陈燕林 +3 位作者 文思阳 杜燕娥 唐曦 柳满然 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1207-1211,共5页
目的构建Drosha基因稳定沉默的胃癌细胞株并探讨其对表阿霉素敏感性的影响。方法将靶向干扰Drosha的序列重组到慢病毒载体并感染MGC-803细胞;采用实时定量PCR检测Drosha mRNA水平、Western blot法检测Drosha蛋白水平;MTT法检测野生型MGC... 目的构建Drosha基因稳定沉默的胃癌细胞株并探讨其对表阿霉素敏感性的影响。方法将靶向干扰Drosha的序列重组到慢病毒载体并感染MGC-803细胞;采用实时定量PCR检测Drosha mRNA水平、Western blot法检测Drosha蛋白水平;MTT法检测野生型MGC-803细胞对表阿霉素的半数抑制剂量(IC50);流式细胞术检测用IC50的表阿霉素处理后各组细胞的凋亡率,Western blot法检测凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-9、Bax、Bcl-2的蛋白水平。结果成功构建稳定Drosha基因沉默的MGC-803细胞株;下调Drosha后,经0.5 mg/L(IC50)表阿霉素处理,MGC-803细胞凋亡率明显增加,MGC-803细胞caspase-3、caspase-9、Bax表达上调,Bcl-2表达降低。结论沉默细胞中Drosha表达能提高胃癌细胞对表阿霉素的敏感性。 展开更多
关键词 DROSHA MGC-803胃癌细胞 表阿霉素
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胰岛素生长因子1(IGF-1)通过S1P/S1PR1信号激活PI3K通路促进小鼠肺泡上皮细胞迁移 被引量:5
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作者 耿建 母迷迷 +5 位作者 冀彩丽 李梦婷 马丽 王梓璇 华梦晴 宋传旺 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期996-1002,共7页
目的探讨胰岛素样生长因子1(IGF-1)对肺泡上皮细胞(AEC)迁移的影响及其相关机制。方法在磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂渥曼青霉素(Wortmannin)存在与否的情况下,采用IGF-1、鞘氨醇1磷酸(S1P)刺激AEC后,划痕愈合实验检测MLE-12小鼠AEC的迁... 目的探讨胰岛素样生长因子1(IGF-1)对肺泡上皮细胞(AEC)迁移的影响及其相关机制。方法在磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂渥曼青霉素(Wortmannin)存在与否的情况下,采用IGF-1、鞘氨醇1磷酸(S1P)刺激AEC后,划痕愈合实验检测MLE-12小鼠AEC的迁移,Western blot法检测磷酸化的蛋白激酶B(p-AKT)的表达。采用IGF-1刺激AEC后,ELISA检测S1P的分泌,Western blot法检测其蛋白表达。阻断实验中,AEC S1P受体1(S1PR1)干扰或受S1PR1阻断抗体作用后,划痕实验检测IGF-1对细胞迁移的影响,Western blot法检测p-AKT蛋白表达。结果IGF-1刺激12 h后,AEC的p-AKT表达增加,细胞迁移加快;阻断PI3K信号后,IGF-1促进AEC迁移效应部分消失。IGF-1诱导AEC产生S1P,S1P通过S1PR1加快AEC迁移;S1P刺激AEC后p-AKT表达增强,阻断PI3K通路后,S1P加快AEC迁移的能力降低。AEC预先被阻断S1PR1或S1PR1干扰后,IGF-1加快AEC迁移和促进AEC p-AKT表达的效应被部分降低。结论IGF-1通过S1P-S1PR1信号激活PI3K通路促进AEC迁移。 展开更多
关键词 肺泡上皮细胞(AEC) 迁移 胰岛素样生长因子1(IGF-1) 鞘氨醇1磷酸(S1P) 磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)
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