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福建省常见库蠓种类巢式PCR分子鉴定及遗传分析方法的建立
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作者 张圣昀 陈朱云 +1 位作者 肖丽贞 王金章 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 北大核心 2025年第3期403-408,共6页
目的基于巢式PCR技术,建立一种福建省常见库蠓种类的分子鉴定方法,并开展库蠓的遗传进化分析。方法2023年6月—2024年7月,在福建省内采用灯诱法采集蠓虫,制作成玻片标本后进行形态学鉴定。设计、合成库蠓线粒体细胞色素C氧化酶亚基1(co... 目的基于巢式PCR技术,建立一种福建省常见库蠓种类的分子鉴定方法,并开展库蠓的遗传进化分析。方法2023年6月—2024年7月,在福建省内采用灯诱法采集蠓虫,制作成玻片标本后进行形态学鉴定。设计、合成库蠓线粒体细胞色素C氧化酶亚基1(cox1)序列的巢式PCR特异性引物。提取蠓虫基因组DNA,分别进行巢式PCR和普通PCR扩增,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后与形态学鉴定结果进行比较。巢式PCR扩增产物测序后使用SeqMan Pro软件拼接,BLAST比对核苷酸同源性。使用Clustal X软件对cox1序列进行比对分析。使用WinArl35、popart软件绘制单倍型网络图并计算单倍型多样性指数(Hd)。利用MEGA 11软件对样品序列进行特征分析,使用邻接法构建系统进化树。基于P距离模型,计算不同种类库蠓种群内、种群间的遗传距离。结果共采集35份蠓虫样品,经形态学鉴定为12种蠓虫,分别为荒川库蠓、原野库蠓、尖喙库蠓、霍飞库蠓、北京库蠓、苏岛库蠓、多斑库蠓、棒须库蠓、环基库蠓、东方库蠓、中华细蠓和武夷蠛蠓。巢式PCR结果显示,形态学鉴定为库蠓的29份DNA样品均能扩增出特异性条带,库蠓检出率为100%(29/29);普通PCR结果显示,形态学鉴定为库蠓的29份DNA样品仅17份扩增出亮度较低的特异性条带,库蠓检出率为58.6%(17/29)。BLSAT结果显示,形态学鉴定为环基库蠓的4条cox1序列与GenBank中C.flumineus(ON002367)的序列一致性最高,为91.64%~91.78%,与环基库蠓参考序列(KY441782)的一致性仅为84.78%~84.87%;形态学鉴定为东方库蠓的3条cox1序列与C.flumineus(ON002367)的序列一致性最高,为91.64%~91.78%,与东方库蠓参考序列(KT352219)的一致性仅为81.93%~82.42%;其他22条cox1序列的BLSAT结果与形态学鉴定结果一致,序列一致性为86.78%~100%。cox1单倍型网络图结果显示,29条cox1序列共有22个单倍型,不同种类库蠓间的遗传变异水平差异较大(Hd=0.9680)。系统进化树结果显示,29条cox1序列均按照其所属亚属在进化树上聚集。遗传距离分析结果显示,各种类库蠓间遗传距离范围在0.0004~0.2229;种内遗传距离范围在0.0000~0.0062。结论建立了基于巢式PCR技术建立的分子鉴定方法,该法能够适用于福建省内多种常见库蠓的鉴定。 展开更多
关键词 库蠓 巢式PCR 线粒体细胞色素C氧化酶亚基1 分子鉴定 遗传进化
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我国库蠓属带纹亚属一新种(双翅目:蠓科) 被引量:5
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作者 瞿逢伊 曹敏 刘荣兴 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期321-324,共4页
目的调查上海地区吸血蠓的种类。方法根据上海浦东机场(芦苇湿地)2007-2009年夜间紫外线灯诱获得的蠓类材料,经初步分类后用树胶酚法制作玻片标本,镜检其形态和量度特征,鉴定蠓种。结果发现库蠓属一新种,命名为上海库蠓Culicoides(Beltr... 目的调查上海地区吸血蠓的种类。方法根据上海浦东机场(芦苇湿地)2007-2009年夜间紫外线灯诱获得的蠓类材料,经初步分类后用树胶酚法制作玻片标本,镜检其形态和量度特征,鉴定蠓种。结果发现库蠓属一新种,命名为上海库蠓Culicoides(Beltranmyia)shanghaiensis sp.nov.。该新种鉴别特征为:①翅无斑,基室具0~7根大毛;②雌蠓复眼分离,小眼间具细毛,喙头比(P/H)0.7,头喙比(H/P)1.45,触角比(AR)1.18,触角第3~14节具感器(其中第4~10节的感器出现频率分别为:0.7、0.5、0.5、0.7、0.5、0.8和0.7,呈无规律的缺失),具一个发达的受精囊;③雄蠓阳基侧突基部窄连。新种形态酷似Culicoides homoc hrous Remm,但该种翅基室密布大毛;雌蠓复眼分离、光裸,头喙比为1.03~1.04;雄蠓阳基侧突分离。此外,沟栖库蠓Culicoides charadraeus Arnaud和稀见库蠓Culicoides rarus Das Gupta与本新种亦相似,但前2种雌蠓复眼光裸、密接(或窄离),触角比>1.61,翅基室无大毛,雄蠓尾器有明显不同。结论描述采自上海的库蠓属带纹亚属一新种,并与近似种的鉴别作了分析讨论。 展开更多
关键词 双翅目 蠓科 上海库蠓 新种
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荒川库蠓内部结构组织学研究 被引量:1
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作者 甯媛 曾雯雯 +6 位作者 汪琳 徐媛媛 刘江欣 代青浪 勾康晋源 卢雪 侯晓晖 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CSCD 北大核心 2021年第5期696-702,709,共8页
目的利用石蜡切片技术对荒川库蠓成虫内部结构组织学进行研究。方法采集荒川库蠓成虫,制作永久玻片后进行形态鉴定,将标本的翅和足解下后,其余部分在Duboscq-Brasil固定液中固定,逐级脱水、二甲苯透明、石蜡包埋、连续切片以及苏木素-... 目的利用石蜡切片技术对荒川库蠓成虫内部结构组织学进行研究。方法采集荒川库蠓成虫,制作永久玻片后进行形态鉴定,将标本的翅和足解下后,其余部分在Duboscq-Brasil固定液中固定,逐级脱水、二甲苯透明、石蜡包埋、连续切片以及苏木素-伊红染色后,对切片进行脱水、透明、中性树胶封片处理,光学显微镜下观察荒川库蠓组织结构。结果对荒川库蠓成虫消化系统、神经系统、呼吸系统和生殖系统等内部组织结构的观察结果显示,消化系统由消化道和消化腺2部分组成,消化道又可分为前肠、中肠及后肠,中肠是消化道最发达的部分;消化腺分为左右2个腺体,均包括主腺和附腺,主腺具有分泌作用,附腺是分泌物的蓄积场所。中枢神经系统由脑和腹神经索2部分组成。脑分为前脑、中脑和后脑,其中前脑发出视神经与复眼相连;中脑发出神经至触角;后脑发出围食道神经与咽下神经节相连。腹神经索包含1个咽下神经节、 3个胸神经节和5个腹神经节。呼吸系统主要包括气门、气囊等。气门2对,分别位于中胸和后胸。气囊主要包括背支囊和腹支囊,呈管状或泡状,着色不明显。生殖系统主要包括雌性和雄性内生殖器官。雌性内生殖器官包括1对卵巢、 1对输卵管、 1个受精囊和1对生殖附腺,雄性内生殖器官包括1对精巢、 1对输精管、 1根射精管以及1对生殖附腺。结论荒川库蠓的内部结构组成与其他双翅目昆虫相似,但各系统器官的数量、大小和形态等存在明显差异。 展开更多
关键词 荒川库蠓 成虫 内部结构 组织学
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