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弓形虫感染对贫血孕妇妊娠结局的影响及免疫指标相关性研究 被引量：1
1
作者 丁金龙 钦博 +1 位作者 吴云路 赵坚 《中国地方病防治》 2025年第3期223-224,共2页
目的探究弓形虫感染对贫血病症孕妇妊娠结局产生的影响,以及与孕妇机体免疫指标之间的关联性,为预防及治疗弓形虫感染、优化贫血孕妇妊娠结局提供参考。方法于2021年1月至2024年12月期间在本院进行孕期检查并完成分娩的孕妇中筛选50例... 目的探究弓形虫感染对贫血病症孕妇妊娠结局产生的影响,以及与孕妇机体免疫指标之间的关联性,为预防及治疗弓形虫感染、优化贫血孕妇妊娠结局提供参考。方法于2021年1月至2024年12月期间在本院进行孕期检查并完成分娩的孕妇中筛选50例同时患有弓形虫感染与贫血病症孕妇为研究组,另选取同期在本院产检并分娩的无弓形虫感染且无贫血50例孕妇为对照组。对两组孕妇的分娩结果、机体免疫系统相关指标(涵盖体液免疫及细胞免疫的具体参数)以及肝肾功能的相应指标进行监测与比较分析,以探究不同条件下孕妇孕期状况与健康指标的关联与差异。结果相较于对照组,研究组孕妇出现不良妊娠结局的概率明显更高(14.00%vs 2.00%,P<0.05)。在免疫指标方面,研究组孕妇的IgA、补体C4水平高于对照组,而IgG、CD3、CD4、CD4/CD8、NK细胞等指标低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。同时,研究组孕妇的AST、ALT、SCr水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论弓形虫病感染明显提高贫血孕妇出现不良妊娠结局的概率,且与孕妇免疫指标的非正常改变紧密相关。故应强化贫血孕妇弓形虫感染筛查与监测及免疫功能评估,实施相应干预手段,优化妊娠结局。 展开更多
关键词 弓形虫病感染 贫血孕妇 免疫指标
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血液系统恶性肿瘤患者血清抗弓形虫抗体调查
2
作者 杨宇娟 王倩 +3 位作者 向立丽 蒙延娜 张慈现 付杰 《中国血吸虫病防治杂志(中英文)》 北大核心 2025年第1期93-97,共5页
目的调查血液系统恶性肿瘤患者刚地弓形虫感染血清学阳性率,并与健康对照者比较,从而为揭示血液系统恶性肿瘤发病机制提供新的见解。方法采集2017—2024年徐州市中心医院血液科收治的225例血液系统恶性肿瘤患者和300例健康体检者血液样... 目的调查血液系统恶性肿瘤患者刚地弓形虫感染血清学阳性率,并与健康对照者比较,从而为揭示血液系统恶性肿瘤发病机制提供新的见解。方法采集2017—2024年徐州市中心医院血液科收治的225例血液系统恶性肿瘤患者和300例健康体检者血液样本,采用化学发光法检测血清抗弓形虫IgG和IgM抗体。收集患者性别、年龄、猫接触、生食或食用未煮熟肉类、恶性肿瘤类别、临床症状、输血、治疗等人口学和临床特征,比较不同特征患者弓形虫感染血清学阳性率。结果血液系统恶性肿瘤患者与健康体检者年龄(t=0.72,P>0.05)、性别(χ^(2)=0.93,P>0.05)差异均无统计学意义。血液系统恶性肿瘤患者和健康体检者弓形虫感染血清学阳性率分别为20.89%和4.33%,差异具有统计学意义(χ^(2)=34.81,P<0.01);两者血清抗弓形虫IgG抗体阳性率分别为20.89%和4.33%,差异亦有统计学意义(χ^(2)=34.81,P<0.01);两者血清抗弓形虫IgM抗体阳性率分别为1.33%和0,差异无统计学意义(校正χ^(2)=2.02,P>0.05)。白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增生性肿瘤和骨髓增生异常综合征患者弓形虫感染血清学阳性率分别为23.08%、16.67%、19.23%、24.00%和26.09%,差异无统计学意义(χ^(2)=1.44,P>0.05),但均显著高于健康体检者(校正χ^(2)=23.92、10.74、13.76、12.84、14.54,P均<0.01)。不同性别、不同年龄、有无猫接触史、是否生食或食用未煮熟肉类、有无化疗、有无输血治疗等特征对血液系统恶性肿瘤患者弓形虫感染血清学阳性率均无显著影响(χ^(2)=0.76、1.97、0.00、2.81、2.38、0.66,P均>0.05)。结论血液系统恶性肿瘤患者弓形虫感染风险较高,应加强血液系统恶性肿瘤患者弓形虫感染监测。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 血液系统恶性肿瘤 血清学检测 影响因素
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弓形虫致密颗粒(GRA23)互作蛋白筛选
3
作者 姜鑫 王静 +2 位作者 付江明 李树东 范学伟 《今日畜牧兽医》 2025年第7期8-10,共3页
刚地弓形虫作为一种专性细胞内寄生顶复门原虫,其致病性主要依赖于分泌效应蛋白对宿主细胞功能的调控。研究表明,致密颗粒蛋白23(GRA23)作为关键毒力因子,通过介导纳虫空泡(PV)与宿主细胞质间的分子交换参与寄生虫营养获取过程。然而,GR... 刚地弓形虫作为一种专性细胞内寄生顶复门原虫,其致病性主要依赖于分泌效应蛋白对宿主细胞功能的调控。研究表明,致密颗粒蛋白23(GRA23)作为关键毒力因子,通过介导纳虫空泡(PV)与宿主细胞质间的分子交换参与寄生虫营养获取过程。然而,GRA23调控这一过程的分子机制,特别是其与宿主特异性蛋白的相互作用网络尚未阐明。本研究通过GST pulldown联合液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术,从35个候选互作蛋白中鉴定出过氧化物酶体生物发生因子3(PEX3)和热休克蛋白90家族成员TRAP1两个关键互作靶点,并经免疫共沉淀(Co-IP)实验验证。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 GRA23 Co-IP PEX3 TRAP1
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内镜下动力磨钻椎间孔成形术与环锯成形术治疗腰椎间盘突出症的比较
4
作者 宋阳 赵丽 +5 位作者 柯鹏辉 郭燕 赵龙 王梦格 徐文凤 戴越阳 《颈腰痛杂志》 2025年第4期632-638,共7页
目的 对比分析内镜下动力磨钻椎间孔成形术和环锯成形术在椎间孔镜下腰椎间盘突出摘除术中应用的临床疗效、安全性和优缺点。方法 回顾性分析2023年1月至2024年2月就诊于安徽医科大学第一附属医院疼痛科且接受微创手术治疗的腰椎间盘突... 目的 对比分析内镜下动力磨钻椎间孔成形术和环锯成形术在椎间孔镜下腰椎间盘突出摘除术中应用的临床疗效、安全性和优缺点。方法 回顾性分析2023年1月至2024年2月就诊于安徽医科大学第一附属医院疼痛科且接受微创手术治疗的腰椎间盘突出症患者80例,根据手术方式不同分为对照组和实验组,实验组采用全动力磨钻椎间孔成形术,对照组采用环锯技术椎间孔成形术,进行回顾性病例对照研究。对比分析两组手术总时长、透视次数、术后并发症及术前术后疼痛视觉模拟评分(VAS)、Oswestry功能障碍指数(ODI)、日本骨科协会(JOA)评分等指标。结果 实验组手术总时长[(96.3±24.2)min]、术中透视次数[(7.3±1.7)次]明显少于对照组[(121.3±26.5) min、(11.2±2.4)次],差异有统计学意义(P<0.05)。实验组患者住院时间[(7.5±2.5) d]、术后首次下床活动时间[(1.6±0.7) d]与对照组[(7.8±1.5) d、(1.5±0.8) d]差异无统计学意义(P>0.05)。实验组术后3个月VAS评分[(2.4±0.9)分]、术后6个月VAS评分[(1.6±0.5)分]、末次随访VAS评分[(1.2±0.2)分]均小于对照组[(2.9±0.7)分、(1.9±0.5)分、(1.4±0.3)分],差异有统计学意义(P<0.05),而术后3 d与术后1个月VAS评分两组对比差异无统计学意义(P>0.05);实验组术后6个月综合ODI(9.9±3.5)%、JOA评分[(24.49±3.55)分]均优于对照组术后综合ODI(11.9±5.0)%、JOA评分[(21.15±3.36)分],差异有统计学意义(P<0.05)。实验组的并发症发生率低于对照组,但差异无统计学意义(χ^(2)=0.721,P=0.396);实验组治疗有效率(87.5%)高于对照组(80.0%),但差异无统计学意义(χ^(2)=0.827,P=0.363)。结论 内镜下动力磨钻椎间孔成形术和环锯成形术比较,在优化手术总时长、减少术中透视次数、改善患者中远期疼痛及功能障碍方面具有优势。 展开更多
关键词 椎间孔成形术 腰椎间盘突出 动力磨钻 环锯成形术 内镜脊柱手术 临床疗效 术中透视
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刚地弓形虫与线虫共感染的相互作用机制研究进展
5
作者 吕芳丽 林鑫埕 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 北大核心 2025年第4期562-566,574,共6页
自然界中寄生虫共感染现象比较普遍,共感染既可影响宿主的免疫应答,也可影响寄生虫各自的发病机制。原虫和蠕虫可诱导不同的免疫应答,共感染可能会影响机体对这些寄生虫的免疫应答和感染的结局。刚地弓形虫是一种嗜神经原虫,可引起持续... 自然界中寄生虫共感染现象比较普遍,共感染既可影响宿主的免疫应答,也可影响寄生虫各自的发病机制。原虫和蠕虫可诱导不同的免疫应答,共感染可能会影响机体对这些寄生虫的免疫应答和感染的结局。刚地弓形虫是一种嗜神经原虫,可引起持续的亚临床神经炎症,与精神和神经退行性疾病以及其他疾病有关。迄今为止,有关弓形虫与线虫共感染相互作用机制的研究尚有限。本文综述了弓形虫与几种线虫(弓首蛔虫、旋毛虫、多形螺旋线虫和巴西日圆线虫)共感染在人或动物宿主中的相互作用机制。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 线虫 共感染 相互作用 机制
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孕期刚地弓形虫感染对滋养层细胞和蜕膜免疫细胞表面CD73表达的影响及其与不良妊娠的关系 被引量：1
6
作者 景天宇 牟汝涛 +4 位作者 张帆 刘现兵 胡雪梅 张海霞 李志丹 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 北大核心 2025年第2期210-216,共7页
目的 探讨孕期刚地弓形虫感染对滋养层细胞及蜕膜免疫细胞表面CD73表达的影响,并分析其与不良妊娠结局的关系。方法 收集健康早孕期正常流产的蜕膜和绒毛组织4个,采用聚蔗糖-泛影葡胺淋巴细胞分离液分离蜕膜单个核细胞,percoll法分离滋... 目的 探讨孕期刚地弓形虫感染对滋养层细胞及蜕膜免疫细胞表面CD73表达的影响,并分析其与不良妊娠结局的关系。方法 收集健康早孕期正常流产的蜕膜和绒毛组织4个,采用聚蔗糖-泛影葡胺淋巴细胞分离液分离蜕膜单个核细胞,percoll法分离滋养层细胞,将纯化的蜕膜单个核细胞和滋养层细胞分别分为对照组和感染组,每组1×107个,感染组按细胞与弓形虫3∶1感染,感染后24 h,采用流式细胞术检测滋养层细胞、蜕膜自然杀伤细胞(decidualnaturalkiller,dNK)、蜕膜巨噬细胞(decidualmacrophage,dMφ)和蜕膜树突状细胞(decidualdendriticcell,dDC)表面CD73表达。将分离的滋养层细胞分为对照组和感染组,每组1×10^(7)个,感染组按细胞与弓形虫1∶1感染,感染后24 h提取蛋白,蛋白质免疫印记(Westernblotting)分析弓形虫感染后滋养层细胞CD73蛋白的相对表达水平。野生型C57BL/6J雌鼠60只与雄鼠30只,CD73基因敲除(CD73^(-/-))雌鼠60只与雄鼠30只均分别按雌雄比为2∶1随机合笼过夜。孕鼠随机均分为野生型对照组和野生型感染组,CD73^(-/-)对照组和CD73^(-/-)感染组,孕8 d,感染组孕鼠分别经腹腔注射400个弓形虫速殖子,对照组注射等量生理盐水。孕14 d,解剖子宫并观察胎盘、胎鼠情况,计算异常胎率。免疫组化染色检测胎盘组织中CD73的表达。采用GraphPad Prism9.0软件进行统计学分析,组间数据分析采用独立样本Student’st检验。结果 流式细胞术结果显示,对照组滋养层细胞表面CD73阳性细胞比例为(39.25±1.43)%,高于感染组的(31.27±2.79)%(t=5.31,P <0.05),对照组dDC、dMφ和dNK细胞表面CD73阳性细胞比例分别为(38.17±7.71)%、(25.80±6.85)%、(9.39±0.75)%,高于感染组的(36.33±7.64)%、(20.58±5.18)%、(7.74±1.08)%(t=4.25、5.24、3.57,均P <0.05);Westernblotting结果显示,对照组滋养层细胞CD73蛋白相对表达水平为0.79±0.07,较感染组的0.38±0.05显著下调(t=24.80,P <0.01);免疫组化结果显示,野生型对照组胎盘组织阳性细胞呈棕色集中表达在胎盘侧,尤其近血管处,野生型感染组阳性细胞较对照组少。野生型感染组小鼠胎盘组织CD73表达灰度值为9.79±0.30,较野生型对照组的20.20±4.60显著降低(t=3.89,P <0.05)。野生型对照组和CD73^(-/-)对照组胎盘胎鼠发育良好,有光泽,子宫圆润饱满,野生型感染组和CD73^(-/-)感染组孕鼠明显缺血,伴有严重淤血,胎鼠与胎盘不成形,出现吸收胎鼠现象,胎盘发育不良。野生型感染组小鼠胎盘和胎鼠体质量分别为(0.05±0.01) g和(0.07±0.03) g,低于野生型对照组的(0.07±0.01) g和(0.13±0.08) g (t=3.22、5.36,均P <0.01);CD73^(-/-)对照组分别为(0.07±0.04) g和(0.12±0.01) g,与野生型对照组差异无统计学意义(t=0.62、 0.13,均P> 0.05);CD73^(-/-)感染组分别为(0.03±0.00) g和(0.01±0.00) g,较野生型感染组显著减轻(t=3.10、5.08,均P <0.01)。野生型对照组和CD73^(-/-)对照组异常胎率均为0,野生型感染组为(55.73±0.18)%,较野生型对照组显著增加(t=7.79,P <0.01),CD73^(-/-)感染组为(76.00±0.20)%,较野生型感染组显著增加(t=2.44,P <0.05)。结论孕早期刚地弓形虫感染可显著下调母胎微环境中滋养层细胞及蜕膜免疫细胞(dNK、dMφ和dDC)表面CD73的表达,且CD73表达下调与弓形虫感染致不良妊娠的发生密切相关。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 不良妊娠 CD73 滋养层细胞 蜕膜免疫细胞 免疫微环境
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1987—2023年中国区域犬感染弓形虫的空间流行病学分析 被引量：1
7
作者 苏雅静 林雪 +2 位作者 梁小燕 张晨 薛頔 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第2期121-128,共8页
目的 刚地弓形虫是一种全球广泛分布的胞内原生动物病原体,犬类被认为是人类感染弓形虫的潜在危险因素。本研究旨在系统分析1987—2023年中国区域犬弓形虫感染的流行病学特征,以期为我国刚地弓形虫的预防和控制提供科学依据。方法 通过P... 目的 刚地弓形虫是一种全球广泛分布的胞内原生动物病原体,犬类被认为是人类感染弓形虫的潜在危险因素。本研究旨在系统分析1987—2023年中国区域犬弓形虫感染的流行病学特征,以期为我国刚地弓形虫的预防和控制提供科学依据。方法 通过PubMed、中国知网(CNKI)、万方数据库和百度学术数据库检索1987—2023年中国区域犬弓形虫流行病学数据,并利用Excel建立数据库。ArcGIS 10.2软件对犬弓形虫流行病学数据进行可视化展现。统计分析采用SPSS 26.0软件,采用χ2检验进行组间差异的比较,以P<0.05为差异有统计学意义。结果 1987—2023年,中国犬感染弓形虫的血清阳性率总体呈平稳趋势,犬弓形虫血清抗体总阳性率为13.97%。其中,云南省的犬弓形虫血清阳性率居全国之首,高达27.65%,而陕西省的犬弓形虫血清阳性率则较低,仅为0.56%,各省份间差异具有统计学意义(P<0.05)。全国34个省级行政区中,部分地区未见犬弓形虫流行病学数据。西南地区的犬弓形虫血清阳性率显著高于其他地区(P<0.05)。对比1987—2004年和2005—2023年2个时期的犬弓形虫血清阳性率,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 犬弓形虫感染在我国分布广泛,流行周期稳定。应采相应防控措施,加强相关疫情监测,提高公众对弓形虫病的防控知识普及,以降低弓形虫病的传播风险,保障公共健康安全。 展开更多
关键词 弓形虫 犬 空间流行病学 动态 GIS技术
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弓形虫感染小鼠孕中期母胎界面程序性死亡蛋白1及其配体对自然杀伤细胞亚型及功能的调控
8
作者 孙嘉月 白秋花 +6 位作者 陈晓丹 吕佳音 何姗姗 唐莉莉 廖德君 刘登宇 傅晓茵 《中国血吸虫病防治杂志(中英文)》 北大核心 2025年第5期465-474,共10页
目的 探讨小鼠孕早期感染弓形虫后,孕中期母胎界面程序性死亡蛋白1(programmed cell death protein-1, PD-1)及其程序性死亡蛋白配体1(programmed cell death protein ligand 1, PD-L1)通路对自然杀伤(natural killer,NK)细胞亚型和功... 目的 探讨小鼠孕早期感染弓形虫后,孕中期母胎界面程序性死亡蛋白1(programmed cell death protein-1, PD-1)及其程序性死亡蛋白配体1(programmed cell death protein ligand 1, PD-L1)通路对自然杀伤(natural killer,NK)细胞亚型和功能的调节作用。方法 将12只雌性C57BL/6J小鼠(6~8周龄)随机分为对照组和感染组,每组6只。妊娠第6.5天(Gd6.5)时,每只感染组孕鼠均采用腹腔注射方式感染150只弓形虫PRU株速殖子,对照组小鼠腹腔注射等量生理盐水。妊娠第12.5天(Gd12.5)时取孕鼠子宫和胎盘组织观察其病理变化,检测组织中PD-1、PD-L1及肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α mRNA表达水平,并采用流式细胞术检测母胎界面NK细胞上PD-1和DX5表达水平。此外,设置JEG-3滋养层细胞与NK92MI细胞体外共培养体系为对照组,在此基础上加入弓形虫速殖子作为感染组,通过实时荧光定量PCR(real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,RT-qPCR)法检测细胞PD-1、PD-L1及DX5mRNA表达水平,采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞培养上清液中TNF-α浓度。结果 Gd12.5时,对照组孕鼠胎盘蜕膜组织细胞结构清晰完整,子宫柱状上皮细胞无明显异常改变;感染组孕鼠子宫和胎盘组织均出现不同程度炎症细胞浸润和淤血。对照组孕鼠子宫组织中PD-1、PD-L1、TNF-α mRNA相对表达水平分别为1.004±0.004、1.001±0.001、1.001±0.001,感染组分别为2.480±0.720、3.355±0.920、2.391±0.073;对照组胎盘组织中PD-1、PD-L1、TNF-α mRNA相对表达水平分别为1.007±0.010、1.006±0.006、1.001±0.001,感染组分别为6.948±1.918、3.225±1.034、1.536±0.150;与对照组相比,感染组子宫组织(t=3.55、4.43、33.02,P均<0.05)和胎盘组织中PD-1、PDL1、TNF-α mRNA表达水平(t=5.36、3.72、6.18,P均<0.05)均升高。流式细胞术检测结果显示,对照组孕鼠子宫组织中PD-1^(+)NK细胞、PD-1^(+)DX5^(+)NK细胞和DX5^(+)NK细胞比例分别为(12.200±1.082)%、(9.373±7.728)%、(44.000±4.095)%,感染组分别为(21.733±1.630)%、(18.767±1.242)%、(73.367±0.611)%;对照组胎盘组织中PD-1^(+)NK细胞、PD-1^(+)DX5^(+)NK细胞和DX5^(+)NK细胞比例分别为(1.100±0.510)%、(2.277±1.337)%、(96.167±2.831)%,感染组分别为(26.867±9.722)%、(23.433±6.983)%、(82.467±2.248)%。与对照组相比,感染组小鼠子宫组织中PD-1^(+)NK细胞(t=8.45,P<0.05)、DX5^(+)NK细胞比例(t=12.29,P<0.05)升高,PD-1^(+)DX5^(+)NK细胞比例无显著变化(Z=-1.09,P > 0.05);胎盘组织中PD-1^(+)NK细胞(t=4.58,P<0.05)、PD-1^(+)DX5^(+)NK细胞比例升高(t=5.15,P<0.05),而DX5^(+)NK细胞比例下降(t=-6.56,P<0.05)。JEG-3细胞与NK92MI细胞体外共培养体系检测结果显示,对照组细胞上PD-1、PD-L1、DX5 mRNA相对表达水平分别为1.010±0.005、1.002±0.003、1.001±0.001,感染组分别为3.638±1.258、0.397±0.158、4.267±1.750;对照组和感染组细胞培养上清液中TNF-α浓度分别为(12.441±0.001)、(22.056±3.205)pg/mL;与对照组相比,感染组PD-1(t=3.62,P<0.05)、DX5 mRNA(t=3.23,P<0.05)表达均上调,PD-L1 mRNA表达下调(t=-6.63,P<0.05),且细胞培养上清液中TNF-α浓度升高(t=5.20,P<0.05)。结论 刚地弓形虫感染后,小鼠孕中期母胎界面中PD-L1表达水平及DX5^(+)NK细胞PD-1表达水平均上调、DX5^(+)NK细胞比例下降,提示PD-1/PD-L1通路可能通过调控DX5^(+)NK细胞亚群抑制NK细胞功能。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 妊娠 程序性死亡蛋白1 程序性死亡蛋白受体1 自然杀伤细胞 小鼠
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弓形虫WH6株培养上清降低METTL3表达抑制肝癌细胞HepG2增殖研究
9
作者 孙航 李亚楠 +6 位作者 朱文菊 王琦 董宏杰 赵桂华 徐超 尹昆 解晓曼 《中国病原生物学杂志》 北大核心 2025年第8期988-993,共6页
目的探讨弓形虫WH6株培养上清是否通过调控METTL3介导的m6A甲基化修饰抑制肝癌细胞HepG2增殖。方法采用弓形虫WH6株培养上清感染HepG2细胞模型,结合CCK-8增殖检测、划痕愈合及Transwell侵袭实验系统评估弓形虫WH6株培养上清液对肝癌细... 目的探讨弓形虫WH6株培养上清是否通过调控METTL3介导的m6A甲基化修饰抑制肝癌细胞HepG2增殖。方法采用弓形虫WH6株培养上清感染HepG2细胞模型,结合CCK-8增殖检测、划痕愈合及Transwell侵袭实验系统评估弓形虫WH6株培养上清液对肝癌细胞表型的影响。通过siRNA转染构建METTL3敲低细胞系,联合qRT-PCR和Western blot检测m6A甲基化核心因子表达变化。所有数据均采用SPSS 22.0进行方差分析与t检验。结果弓形虫WH6株培养上清显著抑制HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭能力。CCK-8实验显示,感染24、48、72 h后细胞增殖抑制率分别为28.4%(1.30±0.10 vs.0.93±0.09,P<0.05)、42.3%(2.08±0.08 vs 1.20±0.08,P<0.01)和46.5%(3.03±0.11 vs 1.62±0.15,P<0.01);划痕实验和Transwell实验进一步证实其对细胞迁移和侵袭的抑制作用;数据库分析显示METTL3在肝癌组织中高表达且与患者预后不良相关(P<0.05);敲低METTL3实验证实其对HepG2细胞增殖具有时间依赖性的抑制作用(72 h抑制率达26.2%,2.44±0.07 vs.1.80±0.05,P<0.01);弓形虫WH6株培养上清通过下调METTL3表达(mRNA降低至36.8%,蛋白降低至46.1%)并上调VEPH1表达来发挥抑制作用。结论本研究揭示了弓形虫WH6株培养上清液通过METTL3/VEPH1通路抑制肝癌细胞恶性表型的新机制,为肝癌治疗提供了潜在靶点。 展开更多
关键词 弓形虫中国Ⅰ型WH6株 肝癌 HEPG2细胞 增殖 METTL3
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刚地弓形虫表面抗原相关序列蛋白SRS67与SRS20A基因克隆及生物信息学分析
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作者 陈晓晓 尹德琦 +7 位作者 马文宇 易婷婷 李宏伟 刘醴君 刘志君 杜孟泽 周双海 李秋明 《中国血吸虫病防治杂志(中英文)》 北大核心 2025年第4期387-397,共11页
目的采用生物信息学方法预测刚地弓形虫表面抗原相关序列蛋白SRS67和SRS20A的结构和免疫原性,并构建原核表达载体进行蛋白表达,以探讨重组蛋白功能及成为弓形虫病疫苗候选分子的潜力。方法自Toxo DB数据库下载刚地弓形虫SRS67和SRS20A... 目的采用生物信息学方法预测刚地弓形虫表面抗原相关序列蛋白SRS67和SRS20A的结构和免疫原性,并构建原核表达载体进行蛋白表达,以探讨重组蛋白功能及成为弓形虫病疫苗候选分子的潜力。方法自Toxo DB数据库下载刚地弓形虫SRS67和SRS20A基因及氨基酸序列,于ORF Finder网站对SRS67和SRS20A基因开放阅读框进行分析。采用Prot Param软件预测刚地弓形虫SRS67和SRS20A蛋白相对分子质量、等电点、氨基酸组成及脂溶性指数等理化性质,采用Prot Scale工具预测蛋白亲/疏水性,采用TMHMM软件预测蛋白跨膜区域,在SignalP-4.1网站预测蛋白信号肽,通过NPS@SPOMA和SWISS-MODEL网站预测蛋白的二级结构和三级结构,采用Net Phos-3.1程序预测蛋白磷酸化位点,应用Immuonmedicine Group程序预测蛋白抗原决定簇,通过IEDB网站和SYFPEITHI网站分别预测蛋白B细胞表位、辅助性T细胞(helper T cell,Th)抗原表位和细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)抗原表位,并采用Vaxi Jen 2.0软件对表位进行抗原性评分以筛选优势表位。根据Toxo DB数据库中刚地弓形虫SRS67和SRS20A基因序列合成引物序列,以弓形虫c DNA为模板,通过PCR反应扩增SRS67和SRS20A基因,并将扩增产物基因进行双酶切,回收目的片段。通过T4连接酶将目的片段转化至DH5α感受态细胞中,挑取阳性单菌落培养后提取pET-32a-SRS67和pET-32a-SRS20A重组质粒,并将其转化至表达感受态中进行小量诱导表达。采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfatepolyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)及Western blotting检测重组蛋白表达水平。结果经生物信息学预测发现,刚地弓形虫SRS67基因与SRS20A基因长度分别为633、987 bp,分别具有7个和15个开放阅读框、编码210个和328个氨基酸。SRS67蛋白相对分子质量为23135.65,有信号肽(D=0.590),无跨膜区,含有22个磷酸化位点、8个抗原决定簇,为亲水性蛋白;SRS20A蛋白相对分子质量为34944.91,有信号肽(D=0.697)和跨膜区,含39个磷酸化位点、15个抗原决定簇,为亲水性蛋白。SRS67蛋白和SRS20A蛋白二级结构相似,均包含α-螺旋、β-折叠及无规则卷曲;三级结构模型呈典型球状特征,全球模型质量评估分值分别为0.74和0.77。SRS67蛋白和SRS20A蛋白分别具有22个和39个磷酸化位点。SRS67蛋白平均抗原倾向指数为1.0464,含有8个抗原决定簇;SRS20A蛋白平均抗原倾向指数为1.0374,含有15个抗原决定簇。SRS67蛋白具有7个优势B细胞表位;SRS20A蛋白具有8个优势B细胞表位。对于Th细胞表位,SRS67与SRS20A分别筛选出10个和20个优势表位;对于CTL细胞表位,SRS67与SRS20A分别筛选出2个和3个优势表位。PCR扩增SRS67基因及SRS20A基因产物长度分别约为633 bp和987 bp,与预期相符。分别构建含目的基因的重组质粒,诱导表达发现SRS67重组蛋白经0.1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropylβ-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导16 h后在沉淀中表达量最多、SRS20A重组蛋白经0.5 mmol/L IPTG诱导16 h后在沉淀中表达量最多,且SDS-PAGE及Western blotting检测结果表明重组蛋白表达成功。结论SRS67和SRS20A蛋白具有多个细胞表位和良好免疫原性。本研究成功表达了重组SRS67和SRS20A蛋白,为后续研究蛋白功能及筛选有效的弓形虫病疫苗抗原提供了理论依据。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 表面抗原相关序列蛋白 SRS67 SRS20A 生物信息学分析 克隆
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基于重组聚合酶扩增技术检测弓形虫方法的建立及应用 被引量：1
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作者 宋绍征 顾乐盈 +3 位作者 武颖超 孟雅琴 于康英 黄晓华 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第2期107-112,共6页
目的 旨在建立一种基于重组聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)技术检测弓形虫的方法,并应用于宠物猫临床样本验证。方法 以弓形虫基因529重复序列(Rep-529)作为靶标基因序列,设计引物和探针,构建Rep-529重组质粒作... 目的 旨在建立一种基于重组聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)技术检测弓形虫的方法,并应用于宠物猫临床样本验证。方法 以弓形虫基因529重复序列(Rep-529)作为靶标基因序列,设计引物和探针,构建Rep-529重组质粒作为标准品,建立荧光RPA反应体系。将质粒标准品10倍比稀释成不同浓度作为检测模板,进行灵敏度测试;分别以弓形虫、隐孢子虫、新孢子虫、旋毛虫、贾第鞭毛虫、牛巴贝斯虫、环形泰勒虫等几种寄生虫基因组DNA作为模板,进行特异性测试;同时应用荧光RPA法和RT-PCR法对52例阳性和40例阴性猫临床样本进行检测,比较分析2种方法检测结果的符合率。结果 本实验成功建立了一种以PTRep重组质粒为标准品、ToxD-F/ToxD-R为引物、RepD-P为荧光探针的RPA反应体系,反应恒定温度为39℃,反应时间为30 min,检测灵敏度为1拷贝/μL,与隐孢子虫、新孢子虫、旋毛虫、贾第鞭毛虫、牛巴贝斯虫、环形泰勒虫等寄生虫无任何明显交叉反应,特异性良好。共检测了92例猫临床粪便样本,荧光RPA检测方法的阳性符合率高于常规RT-PCR法(98.08%vs.82.69%),阳性率差异无统计学意义(χ^(2)=1.392,P>0.05)。结论 本研究成功建立的弓形虫荧光RPA检测方法,具有快速、灵敏、特异、准确等特点,有可能作为弓形虫临床现场快速检测方法。 展开更多
关键词 重组聚合酶扩增 弓形虫 检测 灵敏度 特异性
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妊娠期弓形虫病发病机制和预防措施 被引量：1
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作者 王蕊曦 谢跃 王辉 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第2期129-135,共7页
刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种专性细胞内寄生原虫,全世界广泛分布,严重危害人类和动物健康。免疫力正常人群感染弓形虫往往呈现无症状状态,妊娠期女性感染导致的流产、死胎、以及新生儿先天性弓形虫脑病和眼弓形虫病是构成人类... 刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种专性细胞内寄生原虫,全世界广泛分布,严重危害人类和动物健康。免疫力正常人群感染弓形虫往往呈现无症状状态,妊娠期女性感染导致的流产、死胎、以及新生儿先天性弓形虫脑病和眼弓形虫病是构成人类健康的重大威胁。终末宿主猫对弓形虫病在人群的散播发挥核心作用,但人们对妊娠期女性与猫的直接接触是否一定增加弓形虫导致的流产风险认识却不够深入,本文将综述人类弓形虫病的传播途径,孕期感染临床特征、发病机制以及科学的预防措施,为妊娠期间个人防护、人与宠物猫的和谐健康相处提供参考。 展开更多
关键词 弓形虫 妊娠 流产机制 猫 预防措施
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基于CRISPR/Cas9技术的刚地弓形虫bfd2缺陷虫株的构建及表型分析 被引量：1
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作者 章孝成 胡媛 +3 位作者 彭荟 沈玉娟 刘华 曹建平 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 北大核心 2025年第2期217-222,共6页
目的 基于成簇规律间隔短回文重复序列核酸酶技术(CRISPR/Cas9)构建刚地弓形虫ME49株缓殖子形成缺陷基因2 (bfd2)缺陷虫株并进行表型分析,探讨弓形虫BFD2对虫体分化和增殖作用。方法 运用E-CRISPR数据库设计bfd2向导RNA (SgRNA),并使用Q... 目的 基于成簇规律间隔短回文重复序列核酸酶技术(CRISPR/Cas9)构建刚地弓形虫ME49株缓殖子形成缺陷基因2 (bfd2)缺陷虫株并进行表型分析,探讨弓形虫BFD2对虫体分化和增殖作用。方法 运用E-CRISPR数据库设计bfd2向导RNA (SgRNA),并使用Q5定点基因敲除试剂盒突变pSAG1::CAS9-U6::SgUPRT质粒上的SgRNA,构建pSAG1::CAS9-U6::SgBFD2质粒。将乙胺嘧啶抗性基因、bfd2基因上下游序列连接成供体DNA(donorDNA)并克隆于pUC19质粒上,PCR扩增donorDNA。以ME49虫株为背景,pSAG1::CAS9-U6::SgBFD2质粒和donorDNA片段电穿孔共转染ME49弓形虫速殖子,电转后悬液接种至人包皮成纤维细胞(HFF),3μmol/L乙胺嘧啶单克隆筛选电转虫株。将筛选出的单克隆虫株接种HFF细胞,培养传代后,PCR鉴定虫株 △bfd2敲除情况。通过体外增殖试验观察虫株在HFF内的增殖情况,噬斑试验观察虫株在HFF细胞上形成噬斑的能力,苏木精-伊红(HE)染色观察虫株感染小鼠的肝脏病理情况。采用GraphPadPrism9进行统计学分析,实验数据使用双尾非成对Studentt检验和ANOVA检验。结果 成功构建pSAG1::CAS9-U6::SgBFD2质粒和donorDNA质粒,编码乙胺嘧啶抗性基因(DHFR)序列成功插入靶位点,经PCR鉴定、筛选出 △bfd2基因敲除单克隆虫株(ME49 △bfd2株)。增殖试验结果显示,ME49株感染的HFF内,每个纳虫泡中> 16、=16和≤8个速殖子的纳虫泡数量占比分别为(55.33±5.03)%、(27.00±3.00)%和(17.67±4.04)%,ME49 △bfd2株感染的分别为(25.33±4.16)%、(42.67±3.06)%和(32.00±6.93)%,ME49株感染的HFF中> 16个速殖子的纳虫泡数量高于ME49 △bfd2虫株(t=6.337,P <0.01)。噬斑试验结果显示,接种100、1 000、10 000个ME49株速殖子感染的HFF分别形成(13.50±3.11)、(119.75±4.86)和(264.25±28.61)个噬斑,均高于ME49 △bfd2株感染的(1.25±0.96)、(6.75±0.96)和(22.00±5.72)个(t=7.415、 57.72、 18.04,均P <0.01)。HE结果显示,ME49 △bfd2株感染小鼠肝脏炎症较ME49株感染小鼠减轻。结论 基于CRISPR/Cas9技术成功构建BFD2缺陷虫株,且BFD2的缺失可抑制弓形虫的分化、增殖,并减轻小鼠肝脏炎症。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 缓殖子形成缺陷基因2 CRISPR/Cas9 表型分析 质粒
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刚地弓形虫致密颗粒蛋白3基因缺陷虫株的构建及毒力鉴定
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作者 王佩豪 吴敏敏 都建 《中国血吸虫病防治杂志(中英文)》 北大核心 2025年第3期304-309,共6页
目的构建刚地弓形虫ME49株致密颗粒蛋白3(dense granule protein 3,GRA3)基因缺陷虫株并鉴定其毒力。方法利用规律成簇间隔短回文重复序列及其相关蛋白9[clustered regularly interspaced short palindromic repeats(CRIS-PR)/CRISPR-as... 目的构建刚地弓形虫ME49株致密颗粒蛋白3(dense granule protein 3,GRA3)基因缺陷虫株并鉴定其毒力。方法利用规律成簇间隔短回文重复序列及其相关蛋白9[clustered regularly interspaced short palindromic repeats(CRIS-PR)/CRISPR-associated protein 9,CRISPR/Cas9]技术构建基因缺陷虫株。使用E-CRISPR软件设计向导RNA(guide RNA,g RNA),利用Q5定点突变试剂盒突变p SAG1::Cas9-U6::sg UPRT质粒上的g RNA,构建p SAG1::Cas9-U6::sg GRA3质粒。构建一个含有GRA3基因上游序列、乙胺嘧啶抗性基因二氢叶酸还原酶胸苷酸合酶(dihydrofolate reductase-thymidylate synthase,DHFR-TS)和GRA3基因下游序列的GRA3基因供体质粒,并通过PCR扩增出GRA3基因供体DNA。将p SAG1::Cas9-U6::sg GRA3质粒和GRA3基因供体DNA电穿孔转染野生型刚地弓形虫ME49速殖子,电转后的虫株悬液接种于人包皮成纤维(human foreskin fibroblast,HFF)细胞中,并用乙胺嘧啶进行筛选,获得乙胺嘧啶抗性虫株后进行单克隆筛选,采用PCR和Western blotting鉴定弓形虫GRA3基因缺陷单克隆株ME49Δgra3,采用Western blotting检测弓形虫ME49Δgra3株中GRA3蛋白表达水平。将新鲜裂解的弓形虫ME49株和ME49Δgra3株速殖子各1000个加入接种有HFF细胞的12孔板中,置于37℃含5%CO_(2)的细胞培养箱中培养7 d,以结晶紫染液染色法计数空斑数量。采用吉姆萨染色法对弓形虫ME49株和ME49Δgra3株速殖子感染的HFF细胞进行染色,计数细胞中含有1、2、4个和>4个弓形虫纳虫泡数量的细胞。比较弓形虫ME49株和ME49Δgra3株感染的C57BL/6小鼠35 d存活率。结果PCR扩增发现,DHFR-TS基因上、下游同源臂条带在弓形虫ME49Δgra3株中均成功扩增,ME49株未扩增出相应条带;GRA3基因条带在弓形虫ME49株中成功扩增,ME49Δgra3株未扩增出GRA3基因条带但扩增出含DHFR-TS基因的条带。Western blotting检测发现,弓形虫ME49Δgra3株中未见GRA3蛋白表达。弓形虫ME49株平均形成(352.67±26.39)个空斑、ME49Δgra3株平均形成(235.00±26.29)个空斑,差异有统计学意义(t=5.472,P<0.01)。吉姆萨染色结果显示,弓形虫ME49株感染的HFF细胞中,纳虫泡内至少含有4个弓形虫速殖子的比例为(75.67±2.52)%,高于ME49Δgra3株感染组[(59.67±2.31)%](t=8.113,P<0.01);纳虫泡内含有1个或2个弓形虫速殖子的比例为(24.33±2.52)%,低于ME49Δgra3株感染组[(40.33±2.31)%](t=-8.113,P<0.01)。感染弓形虫ME49株和ME49Δgra3株的小鼠分别自感染后第8、9天开始死亡,感染后第35天存活率分别为10.00%(1/10)和70.00%(7/10),差异具有统计学意义(χ^(2)=6.762,P<0.01)。结论成功构建了刚地弓形虫ME49Δgra3株,GRA3蛋白可能增强弓形虫ME49株毒力。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 致密颗粒蛋白3 基因缺陷 规律成簇间隔短回文重复序列及其相关蛋白9 毒力
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刚地弓形虫sub3基因敲除株的构建及体外表型分析
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作者 王龙江 吴燕 +3 位作者 李瑾 谢金晶 张欣 孙慧 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 北大核心 2025年第3期324-328,共5页
目的利用规律间隔成簇短回文重复序列关联蛋白9(CRISPR/Cas9)技术构建刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)类枯草杆菌蛋白酶基因sub3敲除株并进行体外表型分析,探究TgSUB3对弓形虫黏附、入侵和生长繁殖的作用。方法利用定点突变方法将pSAG1::... 目的利用规律间隔成簇短回文重复序列关联蛋白9(CRISPR/Cas9)技术构建刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)类枯草杆菌蛋白酶基因sub3敲除株并进行体外表型分析,探究TgSUB3对弓形虫黏附、入侵和生长繁殖的作用。方法利用定点突变方法将pSAG1::CAS9⁃U6::sgUPRT中的sgUPRT突变为Tgsub3的单向导RNA(sgRNA),构建sub3基因敲除质粒pSAG1::CAS9⁃U6::sgSUB3。PCR扩增带有sub3上下游40 bp同源臂的二氢叶酸还原酶抗性供体片段,将质粒和供体片段通过电转化的方式导入弓形虫RHΔku80速殖子,经过乙胺嘧啶抗性选择和单克隆筛选,PCR鉴定敲除株RHΔku80Δsub3(Δsub3)。鉴定正确的敲除株Δsub3进行噬斑试验、入侵试验和增殖试验,分析其体外表型,以RHΔku80为对照,使用软件GraphPad Prism 9进行统计学分析。结果经PCR鉴定,在Δsub3中扩增到的条带大小符合预期,Δsub3敲除株构建成功。噬斑试验结果显示,RHΔku80和Δsub3形成的噬斑面积分别为(60.42±23.20)任意单位和(2.21±1.89)任意单位,二者差异有统计学意义(t=17.79,P<0.01);入侵实验结果显示,RHΔku80和Δsub3的入侵效率分别为(37.94±18.18)%和(22.97±15.36)%,差异无统计学意义(t=0.89,P>0.05)。增殖试验结果显示,RHΔku80和Δsub3纳虫泡中含有8个及以上速殖子的纳虫泡数量分别为(56.33±8.58)%和(39.67±11.84)%;含有4个及以下速殖子的纳虫泡数量分别为(43.67±8.58)%和(60.33±11.84)%,与RHΔku80虫株相比,纳虫泡内速殖子个数显著减少(F=17.93,P<0.01)。结论成功构建弓形虫Δsub3敲除株,TgSUB3的缺失影响弓形虫速殖子的生长繁殖。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 类枯草杆菌蛋白酶3 CRISPR/Cas9 表型分析
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1例弓形虫IgM抗体假阳性案例分析
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作者 李虎 杨春秋 +2 位作者 王楠楠 朱进进 余莉 《标记免疫分析与临床》 2025年第3期656-660,共5页
目的通过病原学检测并结合患者临床症状以及影像学检查排除弓形虫感染,通过实验设计以及查阅文献分析患者血清弓形虫IgM抗体假阳性原因,并总结归纳处理流程,为临床提供全面的诊疗思路。方法通过外周血涂片镜检、弓形虫核酸检测以及影像... 目的通过病原学检测并结合患者临床症状以及影像学检查排除弓形虫感染,通过实验设计以及查阅文献分析患者血清弓形虫IgM抗体假阳性原因,并总结归纳处理流程,为临床提供全面的诊疗思路。方法通过外周血涂片镜检、弓形虫核酸检测以及影像学脑部磁共振成像(MRI)检测排除弓形虫感染;通过不同检测平台复检,增加类风湿因子(RF)、嗜异性抗体、冷凝集素的检测,以及动态监测弓形虫IgM抗体变化趋势分析假阳原因。结果患者血清中升高的弓形虫IgM抗体为假阳性,其血清中存在的EBV-IgM抗体和检测试剂发生交叉反应,干扰了检测结果。结论发现弓形虫IgM抗体异常升高时,应参考相应处理流程,增加相关检测,分析原因,避免误诊。 展开更多
关键词 弓形虫病 假阳性 IGM抗体 传染性单核细胞增多症
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台州地区孕妇弓形虫感染因素logistic回归分析防治知识知晓率调查
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作者 应灵潇 柴芝红 程爱花 《中国地方病防治》 2025年第3期204-205,共2页
目的了解台州地区孕妇弓形虫病感染情况、防治知识知晓率及相关影响因素,为制定预防策略提供依据。方法选取2023年5月至2024年12月台州地区多家综合医院孕检的600例孕妇,采用酶联免疫吸附法检测弓形虫抗体,自行设计问卷收集资料,运用单... 目的了解台州地区孕妇弓形虫病感染情况、防治知识知晓率及相关影响因素,为制定预防策略提供依据。方法选取2023年5月至2024年12月台州地区多家综合医院孕检的600例孕妇,采用酶联免疫吸附法检测弓形虫抗体,自行设计问卷收集资料,运用单因素和多因素logistic回归分析感染危险因素。结果弓形虫感染率为6.0%,其中IgG抗体阳性率4.2%,IgM抗体阳性率2.2%。食用生肉(OR=2.60)和接触流浪动物(OR=3.20)是感染的独立危险因素(P<0.05)。孕妇弓形虫病防治知识知晓率为20.0%,城市高于农村、文化程度高者高于低者、医护人员高于其他职业者。感染组不良妊娠结局发生率(27.8%)显著高于未感染组(5.3%)。结论台州地区孕妇弓形虫感染存在一定风险,防治知识知晓率较低。建议针对高风险因素和低知晓率人群加强健康教育;规范肉类检疫和宠物管理;在资源允许地区优先推广弓形虫抗体检测,以降低感染率,减少不良妊娠结局,保障母婴健康。 展开更多
关键词 孕妇 弓形虫感染 LOGISTIC回归分析 知晓率
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弓形虫RH株ROP16 I蛋白通过JAK-STAT3途径对MH-S细胞增殖及细胞周期影响的研究
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作者 李佳铭 党甜甜 +1 位作者 殷荷 赵志军 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第2期113-120,共8页
目的 探究I型弓形虫RH株ROP16蛋白对小鼠肺泡巨噬细胞株MH-S细胞增殖及细胞周期的影响和机制。方法 将ROP16 I过表达慢病毒感染MH-S细胞后经嘌呤霉素筛选获得稳定表达ROP16 I的过表达细胞株。RT-qPCR和Western-blot验证过表达效果,cck-... 目的 探究I型弓形虫RH株ROP16蛋白对小鼠肺泡巨噬细胞株MH-S细胞增殖及细胞周期的影响和机制。方法 将ROP16 I过表达慢病毒感染MH-S细胞后经嘌呤霉素筛选获得稳定表达ROP16 I的过表达细胞株。RT-qPCR和Western-blot验证过表达效果,cck-8检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期变化。Western-blot及RT-qPCR检测p53、p21、CDK6、Cyclin D1、STAT3、p-STAT3(Y705)及JAK1蛋白或基因的表达水平,免疫荧光检测ROP16 I与p-STAT3(Y705)在MH-S细胞中的亚细胞共定位。结果 ROP16 I过表达慢病毒感染MH-S细胞后可检测到ROP16 I蛋白及基因表达。cck-8检测发现ROP16 I可促进MH-S细胞增殖(P<0.01),提升细胞活力。流式细胞术检测发现ROP16 I过表达可使MH-S细胞细胞周期G0/G1期降低,G2期、S期升高。相较于MH-S细胞组、MH-S-vector组,MH-S-ROP16细胞组p53及p21蛋白表达降低,CDK6、Cyclin D1、p-STAT3(Y705)及JAK1蛋白表达升高,p53及p21 mRNA表达降低,CDK6及Cyclin D1 mRNA表达升高(均P<0.01)。免疫荧光检测发现ROP16 I与p-STAT3(Y705)共同定位于细胞核及其周围细胞质中。结论 I型弓形虫RH株ROP16蛋白可激活JAK-STAT3途径,诱导细胞周期G0/G1期缩短,G2/S期延长,促进细胞增殖,为揭示弓形虫的免疫逃避机制提供了理论依据,为弓形虫肺炎防治研究奠定了理论基础。 展开更多
关键词 ROP16蛋白 MH-S细胞 细胞周期 STAT3 p-STAT3(Y705)
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刚地弓形虫棒状体蛋白16过表达人单核THP⁃1细胞的转录组学分析
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作者 李佳铭 陈梅 +2 位作者 党甜甜 殷荷 赵志军 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 北大核心 2025年第3期317-323,共7页
目的转录组测序分析Ⅰ型RH株刚地弓形虫棒状体蛋白16(ROP16)过表达人单核THP⁃1细胞的基因表达谱变化,筛选免疫应答相关驱动基因。方法将人单核THP⁃1细胞接种于96孔板,过表达组中加入ROP16过表达慢病毒,对照组加入等量培养基,72 h后在荧... 目的转录组测序分析Ⅰ型RH株刚地弓形虫棒状体蛋白16(ROP16)过表达人单核THP⁃1细胞的基因表达谱变化,筛选免疫应答相关驱动基因。方法将人单核THP⁃1细胞接种于96孔板,过表达组中加入ROP16过表达慢病毒,对照组加入等量培养基,72 h后在荧光显微镜下观察转染情况。TRIzol法提取过表达组和对照组人单核THP⁃1细胞总RNA,并进行转录组测序,筛选差异表达基因(DEG),绘制火山图。对DEG进行聚类分析、京都基因与基因组百科全书(KEGG)代谢通路富集分析和基因本体(GO)功能富集分类,筛选出过表达组和对照组的DEG,并进行实时荧光定量PCR(qPCR)验证。两组间比较采用独立样本t检验。结果荧光显微镜下过表达组90%以上的人单核THP⁃1细胞表达绿色荧光,对照组细胞未见绿色荧光。qPCR结果表明,过表达组ROP16 mRNA相对转录水平(1083.484±68.990)较对照组(1.000±0)显著上调(t=22.9,P<0.01),表明已构建稳定表达ROP16的THP⁃1细胞株。共筛选出312个DEG,其中193个表达上调,119个表达下调。KEGG注释结果显示,注释到有机体系统的DEG占比最高(24.2%),显著富集于85个条目,其中免疫系统显著富集的基因有47个。KEGG富集分析发现,DEG富集至20条信号通路上,Th1和Th2细胞分化、自然杀伤细胞介导的细胞毒性及IL⁃17信号通路等3条与免疫系统相关的通路分别富集DEG 6、7和8个。GO功能注释结果显示,共有309个DEG注释到生物过程、细胞组分和分子功能等3个一级节点分类下的55个二级节点分类中。GO富集结果显示,DEG显著富集于炎症反应、肿瘤坏死因子产物负调控、细胞因子产生、γ干扰素产生的正调节,以及与免疫应答相关的通路中。qPCR检测发现ROP16过表达组中MAN2B1、FOS、C1QA的mRNA相对转录水平(25.994±0.382、60.584±2.968、36.759±0.180)均高于对照组(1.000±0.039、1.000±0.015、1.000±0)(t=92.00、28.39、280.7,P<0.05或0.01),LMNB1、IL⁃6和IL⁃12 mRNA相对转录水平(0.728±0.054、0.517±0.073、0.587±0.015)均低于对照组(1.052±0.027、1.000±0.039、1.000±0.010)(t=7.64、8.24、33.62,P<0.05或0.01)。结论Ⅰ型RH株弓形虫效应分子ROP16过表达后,人单核THP⁃1细胞基因表达谱发生了明显变化。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 棒状体蛋白16 人单核THP⁃1细胞 转录组 免疫应答
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刚地弓形虫迁移入脑机制及脑内抗感染研究进展
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作者 李静 李仕毓 +1 位作者 张一卓 郑斌 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第7期762-766,共5页
刚地弓形虫是一种专性细胞内寄生原虫,可入侵中枢神经系统引起弓形虫脑炎、精神分裂症等。弓形虫迁移入脑必须穿过限制性细胞屏障(血脑屏障、血脑脊液屏障和脑膜)。弓形虫可通过跨细胞途径、细胞旁途径和“特洛伊木马”单独或联合机制... 刚地弓形虫是一种专性细胞内寄生原虫,可入侵中枢神经系统引起弓形虫脑炎、精神分裂症等。弓形虫迁移入脑必须穿过限制性细胞屏障(血脑屏障、血脑脊液屏障和脑膜)。弓形虫可通过跨细胞途径、细胞旁途径和“特洛伊木马”单独或联合机制入侵脑组织,弓形虫感染后的过度炎症反应会破坏血脑屏障,使其通透性增加,进一步促进弓形虫迁移入脑造成中枢神经系统的持续性感染。本文就弓形虫感染宿主迁移入脑机制和入脑后脑实质细胞抗弓形虫感染进行综述,旨在深入理解弓形虫的致病机制,并为新药研发提供线索。 展开更多
关键词 弓形虫 迁移 中枢神经系统 限制性细胞屏障 炎症
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