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日本血吸虫消减雌性成虫cDNA文库的建立及其特异表达基因的筛选 被引量:3
1
作者 王衍海 彭鸿娟 +1 位作者 陈晓光 沈树满 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期45-50,共6页
目的筛选雌性日本血吸虫特异表达基因。方法感染日本血吸虫6周的家兔,用静脉灌注法收集成虫,经核糖核酸固定液固定,分别提取雌、雄成虫总RNA,纯化后获得mRNA,并反转录为cDNA。用抑制性消减杂交技术(SSH)构建雌、雄成虫正向消减(雌虫消... 目的筛选雌性日本血吸虫特异表达基因。方法感染日本血吸虫6周的家兔,用静脉灌注法收集成虫,经核糖核酸固定液固定,分别提取雌、雄成虫总RNA,纯化后获得mRNA,并反转录为cDNA。用抑制性消减杂交技术(SSH)构建雌、雄成虫正向消减(雌虫消减雄虫)及反向消减(雄虫消减雌虫)cDNA文库。用斑点杂交法筛选差异表达基因,挑选目标基因片段(与正向消减探针杂交的信号明显高于与反向消减探针杂交信号的克隆)进行测序、同源性搜索及基因功能预测分析。以日本血吸虫肌动蛋白(actin)基因作内参照,用半定量PCR(semi-quantitative PCR)鉴定目标基因在雌、雄虫体内的表达。结果得到正向消减及反向消减cDNA文库,斑点杂交筛选出50个雌虫特异性表达的克隆,经测序得到42个表达序列标签(EST),其中,有17个基因(占40·5%)与已知日本血吸虫卵壳蛋白基因高度同源;17个基因(占40·5%)与日本血吸虫未知基因高度同源、且有一小片段与卵壳蛋白基因高度同源;有8个基因(占19·0%)与日本血吸虫其他未知基因高度同源。半定量PCR结果,6个基因在雌虫体内的表达水平明显高于雄虫,分别与GenBank的血吸虫卵壳蛋白基因AY222885、AY222895、AB017097、AF519182、M32281及血吸虫其他基因AY813556高度同源。结论构建了雌、雄成虫正向消减及反向消减cDNA文库。用SSH可筛选日本血吸虫雌性特异性表达基因。 展开更多
关键词 日本血吸虫 成虫 雌性特异性表达基因 抑制性消减杂交 卵壳蛋白
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日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj26GST)疫苗免疫BALB/c小鼠脾细胞动态观察 被引量:2
2
作者 张丽 李文桂 谭建蓉 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1028-1032,1038,共6页
目的观察日本血吸虫重组Bb(pGEX—Sj26GST)疫苗免疫BALB/c小鼠后脾细胞增殖、亚群和凋亡的动态变化。方法将疫苗分别经皮下注射(SC组)和鼻腔粘膜接种(IN组)免疫BALB/c鼠,在免疫后O~22周每2周每组随机剖杀4只小鼠,无菌取脾,... 目的观察日本血吸虫重组Bb(pGEX—Sj26GST)疫苗免疫BALB/c小鼠后脾细胞增殖、亚群和凋亡的动态变化。方法将疫苗分别经皮下注射(SC组)和鼻腔粘膜接种(IN组)免疫BALB/c鼠,在免疫后O~22周每2周每组随机剖杀4只小鼠,无菌取脾,制成单个悬浮脾细胞,用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测脾细胞增殖水平、用流式细胞仪(FACsort)检测T细胞亚群和脾细胞凋亡状况。结果未刺激及sjAWA刺激时SC组小鼠脾细胞增值水平于免疫后4~20周明显升高,ConA刺激时于4~18周显著升高,均于免疫后8周达最高水平;IN组脾细胞增殖水平原液组、SjAwA组和ConA组分别于2~18周、2~10周及14~18周、2~8周和12~18周显著升高,均于免疫后4周达最大值(P〈0.01或P〈0.05)。SC组和IN组CD+T细胞分别于免疫后2~14周、2周及6~16周升高,并于8周达峰值(P〈0.01或P〈0.05);两组CD+T细胞均于2~20周轻微升高,分别于8周和6周达较高值(P〉0.05)。未刺激和ConA刺激时SC组脾细胞凋亡水平分别于免疫后2~4周、2~6周升高显著,均于免疫后2周达最大值(P〈O.01或P〈O.05);IN组均于4周显著升高并达峰值(P〈O.01)。结论日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj26GST)疫苗可诱导脾细胞的增殖,增加cD+T细胞的数目,抑制脾细胞的凋亡而发挥保护性免疫应答。 展开更多
关键词 日本血吸虫 重组Bb(pGEX—Sj26GST)疫苗 脾细胞增殖 T细胞亚群 脾细胞凋亡
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日本血吸虫PA28亚单位蛋白的表达与鉴定、纯化及免疫反应性的评价 被引量:1
3
作者 彭鸿娟 陈晓光 +1 位作者 李华 王春梅 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第3期183-185,189,共4页
目的 将亚克隆在pET32a(+)质粒上的日本血吸虫蛋白酶体激活因子PA2 8亚单位基因进行表达及蛋白纯化 ,并对表达产物用Western -blot及ELISA方法进行免疫反应性的评价。方法 将重组表达质粒 pET32a(+) -PA2 8转化入大肠杆菌BL2 1中 ,IPT... 目的 将亚克隆在pET32a(+)质粒上的日本血吸虫蛋白酶体激活因子PA2 8亚单位基因进行表达及蛋白纯化 ,并对表达产物用Western -blot及ELISA方法进行免疫反应性的评价。方法 将重组表达质粒 pET32a(+) -PA2 8转化入大肠杆菌BL2 1中 ,IPTG诱导表达后超声裂菌 ,离心后取上清进行SDS -PAGE ,观察融合蛋白的表达情况 ;用Ni-NTA柱子纯化目标蛋白 ;将SDS -PAGE后的蛋白从凝胶转移到PVDF膜上 ,分别用 6 -His抗体、日本血吸虫尾蚴感染 6周的兔血清及紫外照射减毒尾蚴免疫的兔血清作一抗进行免疫印迹 ,将纯化后的融合蛋白作为包被抗原 ,检测正常兔血清及感染兔血清 ,对该蛋白的免疫反应性作出评价。结果 重组菌株用IPTG诱导后于 4 8kDa处有一表达条带 ,该蛋白与硫氧还蛋白融合表达 ,带有 6 -His,用抗 6 -His抗体做免疫印迹有特异性的单一反应带 ,用尾蚴感染兔血清及紫外照射减毒尾蚴免疫的兔血清做免疫印迹 ,结果显示该目的蛋白带与以上多抗具有敏感特异的反应条带。ELISA的结果显示该蛋白与血吸虫感染兔血清具有较敏感特异的免疫反应性。结论 PA2 8蛋白与硫氧还蛋白融合表达后为可溶性蛋白且分子量约为 4 8kDa ,该蛋白与血吸虫感染兔血清及紫外照射减毒尾蚴免疫的兔血清具有较敏感特异的免疫反应性。 展开更多
关键词 日本血吸虫 PA28亚单位 蛋白 表达 鉴定 纯化 免疫反应性 评价
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日本血吸虫成虫呕吐物的生化及免疫学特性分析 被引量:1
4
作者 袁仕善 易新元 +2 位作者 曾宪芳 黄跃龙 Larry McReynolds 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2002年第5期347-350,共4页
目的 分析日本血吸虫成虫呕吐物与感染血清的免疫反应性 ,寻找特异性的血吸虫病诊断抗原。方法 采用 SDS- PAGE和免疫印迹分析呕吐物的免疫反应性 ,过碘酸钠氧化处理以鉴定呕吐物的抗原决定簇的性质。结果 日本血吸虫成虫呕吐物中存... 目的 分析日本血吸虫成虫呕吐物与感染血清的免疫反应性 ,寻找特异性的血吸虫病诊断抗原。方法 采用 SDS- PAGE和免疫印迹分析呕吐物的免疫反应性 ,过碘酸钠氧化处理以鉴定呕吐物的抗原决定簇的性质。结果 日本血吸虫成虫呕吐物中存在能被血吸虫感染血清识别的特异抗原 31/ 32、4 7、6 0 / 6 2 k Da蛋白及 6 7k Da蛋白 ;31/ 32 k Da蛋白和 6 7k Da蛋白的抗原表位为蛋白 ,而 4 7k Da蛋白和 6 0 / 6 2 k Da蛋白的抗原表位为糖基。结论 日本血吸虫成虫呕吐物中存在血吸虫感染血清识别的特异抗原 ,其中 31/ 32 k Da蛋白已报告可用于血吸虫病诊断 ,4 7k Da蛋白和 6 0 / 6 2k Da蛋白含糖基表位并具有潜在的诊断价值。 展开更多
关键词 日本血吸虫 成虫 呕吐物 免疫印迹
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运用生物信息技术分析日本血吸虫Z88基因cDNA序列 被引量:4
5
作者 黄家芳 肖建华 +3 位作者 曾桥 万志刚 张愉快 胡永轩 《寄生虫病与感染性疾病》 CAS 2004年第2期53-56,共4页
目的 通过基因序列分析 ,寻找日本血吸虫新的基因 ,为日本血吸虫病防治筛选新的候选疫苗抗原。方法 从已构建的日本血吸虫成虫 c DNA文库中挑取已知克隆 (克隆号为 Z88) ,测定其全长 c DNA序列后 ,再运用生物信息学方法以及相关软件... 目的 通过基因序列分析 ,寻找日本血吸虫新的基因 ,为日本血吸虫病防治筛选新的候选疫苗抗原。方法 从已构建的日本血吸虫成虫 c DNA文库中挑取已知克隆 (克隆号为 Z88) ,测定其全长 c DNA序列后 ,再运用生物信息学方法以及相关软件对此基因进行分析。结果 通过测定以及分析可知此基因的 c DNA序列为1 3 0 3 bp,编码 3 49个氨基酸 ,为 Dna J-相似蛋白 ,与果蝇、鲐、人及鼠的 Dna J-相似蛋白有一定同源性。二级结构分析预测提示其具有一定抗原性。结论  Z88基因为日本血吸虫 Dna J-相似蛋白基因 ,可能参与蛋白折叠。 展开更多
关键词 日本血吸虫 eDNA序列 生物信息学 DnaJ-相似蛋白
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液态低温冷藏血吸虫卵孵化实验初探 被引量:5
6
作者 陈陵 叶红 +3 位作者 万佳嘉 徐亮 毛勇 吴子松 《寄生虫病与感染性疾病》 CAS 2014年第2期60-62,共3页
目的观察液态冷藏血吸虫卵的活性,为规范血吸虫卵孵化法提供阳性参考品。方法人工获取家兔血吸虫肝卵,保存1.2%的NaCl溶液,冰箱4oC冷藏,观察血吸虫卵存活时间和孵化活性;观察不同温度保存血吸虫卵孵化活性;比较不同地区的自来... 目的观察液态冷藏血吸虫卵的活性,为规范血吸虫卵孵化法提供阳性参考品。方法人工获取家兔血吸虫肝卵,保存1.2%的NaCl溶液,冰箱4oC冷藏,观察血吸虫卵存活时间和孵化活性;观察不同温度保存血吸虫卵孵化活性;比较不同地区的自来水孵化血吸虫卵的效果。结果液态低温冷藏保存25周虫卵能孵出毛蚴,第9周时孵化出的毛蚴数量开始明显减少,活力明显减弱。保存温度4℃5d均能孵出,18℃4d能孵出,25oC3d能孵出,30oCld后即不能孵出。不同地区水的pH6.4~7.1之间,脱氯水余氯含量0.02~0.05ppm之间,新鲜自来水余氯含量0.05—0.27ppm之间,均孵出毛蚴。结论液态低温冷藏血吸虫卵可以保持较长的活性,可以建立血吸虫孵化质控参考品。 展开更多
关键词 血吸虫 孵化 液态冷藏
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日本血吸虫蛋白质组学研究进展 被引量:2
7
作者 洪炀 林矫矫 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CSCD 北大核心 2021年第6期725-731,共7页
蛋白是基因功能的主要体现者和具体实施者。近年来,日本血吸虫蛋白质组学研究受到关注并取得一些进展。本文对国内外在日本血吸虫蛋白质组学方面的研究进展作一综述,以期为阐述日本血吸虫的生长发育机制,筛选诊断抗原标识、疫苗候选分... 蛋白是基因功能的主要体现者和具体实施者。近年来,日本血吸虫蛋白质组学研究受到关注并取得一些进展。本文对国内外在日本血吸虫蛋白质组学方面的研究进展作一综述,以期为阐述日本血吸虫的生长发育机制,筛选诊断抗原标识、疫苗候选分子和新治疗药物靶标等提供有参考价值的信息。 展开更多
关键词 日本血吸虫 蛋白质组学 生长发育机制
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东洞庭湖及长江涨水期水体血吸虫感染性实验报告
8
作者 谢木生 赵正元 +4 位作者 周艺彪 彭先平 刘启立 刘兆春 蔡凯平 《实用预防医学》 CAS 2002年第6期588-589,共2页
目的 探讨东洞庭湖及邻近长江水域在涨水期不同月份的水位下 ,血吸虫病易感地带水体感染性的变化。 方法 在东洞庭湖及长江水域各设 1个观察现场 ,采用小白鼠作为水体感染实验动物。 1999年 5月至 8月分别采用一批小白鼠连续感染 3 d... 目的 探讨东洞庭湖及邻近长江水域在涨水期不同月份的水位下 ,血吸虫病易感地带水体感染性的变化。 方法 在东洞庭湖及长江水域各设 1个观察现场 ,采用小白鼠作为水体感染实验动物。 1999年 5月至 8月分别采用一批小白鼠连续感染 3 d,每天 2 h。 结果 东洞庭湖水域在 5、6、7、8月涨水期小白鼠感染率分别为 80 .49% ,10 0 % ,79.49% ,14.63 % ;长江水域感染率分别为 15 .0 0 % ,15 .3 8% ,2 8.2 1% ,7.5 0 %。 结论 在涨水期东洞庭湖水域哨鼠感染率明显高于长江水域 ( P<0 .0 1) ; 展开更多
关键词 血吸虫 涨水期 水体感染性
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三种灭螺药物与除草剂复配灭螺效果观察与成本效益分析 被引量:4
9
作者 陈登 朱匡纪 +8 位作者 张剑锋 严晓岚 王洪歆 杜海娟 邵丰尧 张晓 黄清湘 章兰金 闻礼永 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期443-448,454,共7页
目的观察灭螺药物25%杀螺胺悬浮剂(SCN)、26%四聚·杀螺胺悬浮剂(MNSC)、50%氯硝柳胺乙醇胺盐可湿性粉剂(WPN)及其与草甘膦复配药在实验室和现场的灭螺效果分析及应用成本,评价各种灭螺药物及复配药推广应用价值。方法将SCN、MNSC... 目的观察灭螺药物25%杀螺胺悬浮剂(SCN)、26%四聚·杀螺胺悬浮剂(MNSC)、50%氯硝柳胺乙醇胺盐可湿性粉剂(WPN)及其与草甘膦复配药在实验室和现场的灭螺效果分析及应用成本,评价各种灭螺药物及复配药推广应用价值。方法将SCN、MNSC和草甘膦分别配制成有效剂量为2μl/L(室内浸杀法)、2 ml/m^3(现场浸杀法)和2 ml/m^2(室内和现场喷洒法)的药剂,同时将WPN粉剂分别配制成有效剂量为2 mg/L(室内浸杀法)、2 g/m^3(现场浸杀法)和2 g/m^2(室内和现场喷洒法)的药剂。设SCN、SCN复配草甘膦(1:1)、MNSC、MNSC复配草甘膦(1:1)、WPN复配草甘膦(1:1)5个实验组,设WPN为药物对照组,另设草甘膦对照组和清水对照组。室内浸杀实验中,每组分别投放钉螺30只;现场浸杀实验投放螺袋9袋,每袋30只钉螺。分别于施药后24、48和72 h从每个投放点各取3个螺袋,计算钉螺死亡率。室内喷洒实验中,每组投放钉螺100只,于施药后第1、3和7天计算钉螺死亡率;现场喷洒实验中,每组施药1个有螺沟渠小区(面积约为100 m^2),施药后第1、3、7天用棋盘式抽样法每组抽取10框钉螺,计算钉螺死亡率。结合灭螺药物及其复配药用药成本、灭螺人工费、除草人工费等进行成本-效益分析。结果室内浸杀实验结果显示,除SCN复配草甘膦实验组浸杀24 h钉螺死亡率为96.7%(29/30)外,其余4个实验组浸杀24、48、72 h钉螺死亡率均达100%,实验组与药物对照组差异无统计学意义(P>0.05)。室内喷洒实验结果显示,除SCN复配草甘膦实验组喷洒后第1天钉螺死亡率为91.0%(91/100),第3、7天钉螺死亡率均≥95%,其余4个实验组喷洒后第3、7天钉螺死亡率均达100%,实验组与药物对照组差异无统计学意义(P>0.05)。现场浸杀实验结果显示,除SCN复配草甘膦实验组外(>95%),其余4个实验组和药物对照组浸杀24、48、72 h钉螺死亡率均达100%,各组差异无统计学意义(P>0.05)。现场喷洒实验结果显示,MNSC复配草甘膦实验组喷洒后第1、3、7天钉螺死亡率均为100%,高于药物对照组的91.8%(258/281)、95.4%(206/216)、94.5%(147/155)(P<0.05),其他4个实验组与药物对照组差异无统计学意义(P>0.05)。现场灭螺中,使用单种灭螺药需先人工除草再使用原药灭螺,需投工两次,SCN、MNSC和WPN 3种原药每100 m^2灭螺的合计成本分别为101.00元、101.80元和103.90元;应用复配药灭螺,每100 m^(2 )SCN复配草甘膦、MNSC复配草甘膦和WPN复配草甘膦的合计成本分别为69.50元、70.30元和72.40元,均低于使用单种相应灭螺药原药的成本。结论灭螺药物SCN、MNSC和WPN及其与草甘膦复配物均能有效灭螺,但综合考虑灭螺的效果和应用成本,推荐在现场喷洒灭螺中应用剂量为2 g/m^2或2 ml/m^2的灭螺药物复配草甘膦药。 展开更多
关键词 灭螺药 复配 杀螺效果 成本-效益
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貌似“颅内肿瘤”的病例分析
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作者 蒋雨平 初曙光 汪寅 《中国临床神经科学》 2011年第2期221-224,共4页
病例资料患者住院号:579×××,男,47岁。水产养殖工。因头痛20d余,伴右侧偏盲,于2008年7月18日入院。现病史20d余前无明确诱因下出现头痛,呈持续性阵发性加剧。
关键词 病例分析 颅内肿瘤 病例资料 水产养殖 阵发性 持续性 头痛
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