目的探讨氟康唑对阿萨希毛孢子菌(T.asahii)蛋白质组学的影响,从蛋白层面揭示T.asahii对氟康唑胁迫的响应过程及唑类耐药机制。方法以T.asahii AS 2.2174作为研究菌株,基于微量液基稀释法测定氟康唑的最低抑菌浓度(MIC)。应用串联质谱标...目的探讨氟康唑对阿萨希毛孢子菌(T.asahii)蛋白质组学的影响,从蛋白层面揭示T.asahii对氟康唑胁迫的响应过程及唑类耐药机制。方法以T.asahii AS 2.2174作为研究菌株,基于微量液基稀释法测定氟康唑的最低抑菌浓度(MIC)。应用串联质谱标签(TMT)技术结合液相色谱与串联质谱(LC-MS/MS)技术检测氟康唑(1×MIC)处理前后T.asahii蛋白丰度的变化。以差异倍数≥1.20或≤0.83,且P<0.05作为筛选标准,鉴定差异表达蛋白(DEPs)。对DEPs进行Gene Ontlogy(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,以了解DEPs的生物学属性以及DEPs参与的主要生物学通路。最后,使用多反应监测(MRM)技术对目标差异蛋白进行靶向验证。结果氟康唑对T.asahii AS 2.2174的MIC值为8μg/ml。共鉴定到DEPs 196个,其中上调DEPs 93个,下调DEPs 103个。功能富集分析提示DEPs主要参与甾醇合成与代谢、药物代谢、应激反应、能量代谢及翻译等生物学过程。目标差异蛋白在MRM靶向验证和TMT-LC-MS/MS检测中具有一致的表达趋势。结论在氟康唑胁迫下,T.asahii蛋白丰度发生显著改变。生物信息学分析揭示了T.asahii响应氟康唑胁迫的复杂分子机制,这些机制对于了解T.asahii唑类耐药性及挖掘新的药物靶点提供了重要见解。展开更多
目的真菌的细胞膜上普遍存在高渗透压信号蛋白1(high osmolarity signaling protein 1,Sho1),其结构相对保守,在致病机制中发挥重要作用。然而,Sho1蛋白对白念珠菌致病能力的影响尚未见报道。因此,建立构建白念珠菌SHO1基因敲除株的方法...目的真菌的细胞膜上普遍存在高渗透压信号蛋白1(high osmolarity signaling protein 1,Sho1),其结构相对保守,在致病机制中发挥重要作用。然而,Sho1蛋白对白念珠菌致病能力的影响尚未见报道。因此,建立构建白念珠菌SHO1基因敲除株的方法,为后续深入探索Sho1蛋白对白念珠菌生物学性状及致病能力的影响提供了理论基础。方法基因敲除技术选择采用SN152(His-/Leu-/Arg-)缺陷株为亲本株,运用融合PCR技术和同源互补的His和Leu质粒,目的基因可以被快速有效地敲除。通过结晶紫染色实验观察生物膜形成能力、聚苯乙烯孔板模型检测其黏附能力、革兰染色油镜观察菌丝形态,初步探索了Sho1蛋白对白念珠菌致病能力的影响。结果构建了his和融合PCR-his基因敲除盒,leu和融合PCR-leu基因敲除盒并将它们电转化到SN152中,用缺陷培养基筛选敲除株。通过PCR、琼脂糖凝胶电泳和基因测序方法验证SHO1基因敲除株。实验结果提示敲除SHO1基因后会导致生物膜的形成能力下降。结论成功构建了白念珠菌SHO1基因敲除株,SHO1基因的敲除使白念珠菌的生物膜生成能力降低,致病力下降。展开更多
文摘目的探讨氟康唑对阿萨希毛孢子菌(T.asahii)蛋白质组学的影响,从蛋白层面揭示T.asahii对氟康唑胁迫的响应过程及唑类耐药机制。方法以T.asahii AS 2.2174作为研究菌株,基于微量液基稀释法测定氟康唑的最低抑菌浓度(MIC)。应用串联质谱标签(TMT)技术结合液相色谱与串联质谱(LC-MS/MS)技术检测氟康唑(1×MIC)处理前后T.asahii蛋白丰度的变化。以差异倍数≥1.20或≤0.83,且P<0.05作为筛选标准,鉴定差异表达蛋白(DEPs)。对DEPs进行Gene Ontlogy(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,以了解DEPs的生物学属性以及DEPs参与的主要生物学通路。最后,使用多反应监测(MRM)技术对目标差异蛋白进行靶向验证。结果氟康唑对T.asahii AS 2.2174的MIC值为8μg/ml。共鉴定到DEPs 196个,其中上调DEPs 93个,下调DEPs 103个。功能富集分析提示DEPs主要参与甾醇合成与代谢、药物代谢、应激反应、能量代谢及翻译等生物学过程。目标差异蛋白在MRM靶向验证和TMT-LC-MS/MS检测中具有一致的表达趋势。结论在氟康唑胁迫下,T.asahii蛋白丰度发生显著改变。生物信息学分析揭示了T.asahii响应氟康唑胁迫的复杂分子机制,这些机制对于了解T.asahii唑类耐药性及挖掘新的药物靶点提供了重要见解。
文摘目的真菌的细胞膜上普遍存在高渗透压信号蛋白1(high osmolarity signaling protein 1,Sho1),其结构相对保守,在致病机制中发挥重要作用。然而,Sho1蛋白对白念珠菌致病能力的影响尚未见报道。因此,建立构建白念珠菌SHO1基因敲除株的方法,为后续深入探索Sho1蛋白对白念珠菌生物学性状及致病能力的影响提供了理论基础。方法基因敲除技术选择采用SN152(His-/Leu-/Arg-)缺陷株为亲本株,运用融合PCR技术和同源互补的His和Leu质粒,目的基因可以被快速有效地敲除。通过结晶紫染色实验观察生物膜形成能力、聚苯乙烯孔板模型检测其黏附能力、革兰染色油镜观察菌丝形态,初步探索了Sho1蛋白对白念珠菌致病能力的影响。结果构建了his和融合PCR-his基因敲除盒,leu和融合PCR-leu基因敲除盒并将它们电转化到SN152中,用缺陷培养基筛选敲除株。通过PCR、琼脂糖凝胶电泳和基因测序方法验证SHO1基因敲除株。实验结果提示敲除SHO1基因后会导致生物膜的形成能力下降。结论成功构建了白念珠菌SHO1基因敲除株,SHO1基因的敲除使白念珠菌的生物膜生成能力降低,致病力下降。
