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流产布氏杆菌的检测及生物型PCR鉴定 被引量:10
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作者 朱战波 周玉龙 +3 位作者 朱洪伟 王海波 崔玉东 朴范泽 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2008年第8期574-576,共3页
目的确定近年来黑龙江省部分牛场频繁发生奶牛流产的病因。方法对发病的4个牛场进行流行病学调查,从流产胎牛真胃内容物中分离布氏杆菌;根据布氏杆菌不同种IS711设计用于鉴别流产布氏杆菌(B.abortus)、猪布氏杆菌(B.suis)和羊布氏杆菌(B... 目的确定近年来黑龙江省部分牛场频繁发生奶牛流产的病因。方法对发病的4个牛场进行流行病学调查,从流产胎牛真胃内容物中分离布氏杆菌;根据布氏杆菌不同种IS711设计用于鉴别流产布氏杆菌(B.abortus)、猪布氏杆菌(B.suis)和羊布氏杆菌(B.ovis)的4条引物,应用PCR方法进行生物型鉴定。结果从流产胎牛真胃内容物中分离出6株布氏杆菌,经PCR可扩增,产物大小为498bp。鉴定为流产布氏杆菌。结论引起奶牛流产的主要病原为牛流产布氏杆菌。 展开更多
关键词 奶牛 流产布氏杆菌 PCR 生物型
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AMOS-PCR在宁夏布鲁氏菌种型鉴定中的应用 被引量:9
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作者 马学平 高建炜 +1 位作者 秦迎旭 宋晓佳 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2010年第9期652-654,共3页
目的评价AMOS-PCR方法在布鲁氏菌种型鉴定中的实用性,为快速鉴定布鲁氏菌提供辅助方法。方法血培养法分离布鲁氏菌,用常规方法和AMOS-PCR对牛种104M疫苗株、羊种M5株和宁夏分离的5株布鲁氏菌进行种型鉴定。结果 5个分离菌株经AMOS-PCR... 目的评价AMOS-PCR方法在布鲁氏菌种型鉴定中的实用性,为快速鉴定布鲁氏菌提供辅助方法。方法血培养法分离布鲁氏菌,用常规方法和AMOS-PCR对牛种104M疫苗株、羊种M5株和宁夏分离的5株布鲁氏菌进行种型鉴定。结果 5个分离菌株经AMOS-PCR均扩增出731和178 bp的特异性条带,鉴定为羊种布鲁氏菌。结论 AMOS-PCR在布鲁氏菌鉴定中具有特异、快速、准确等特点,适合作为一种辅助鉴定方法推广应用。 展开更多
关键词 AMOS-PCR 布鲁氏菌 种型鉴定 宁夏 中国
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羊布鲁菌16MUGPase基因缺失株的构建及其特性分析 被引量:2
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作者 卜昭阳 杨艳玲 +7 位作者 郎需龙 钱晶 李诗雨 李争 卢晓冉 沙洲 王莉 王兴龙 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2017年第7期690-694,共5页
目的构建羊布鲁菌16M株的尿苷三磷酸-葡萄糖-1-磷酸-尿苷酰基转移酶(UTP-glucose-1-phosphate-uridylyltransferase,简称UGPase)基因缺失候选疫苗株,并对其侵染宿主巨噬细胞的能力及毒力进行初步分析。方法采用PCR技术对羊布鲁菌的UGPas... 目的构建羊布鲁菌16M株的尿苷三磷酸-葡萄糖-1-磷酸-尿苷酰基转移酶(UTP-glucose-1-phosphate-uridylyltransferase,简称UGPase)基因缺失候选疫苗株,并对其侵染宿主巨噬细胞的能力及毒力进行初步分析。方法采用PCR技术对羊布鲁菌的UGPase基因上、下游同源臂进行克隆,利用基因同源重组技术构建自杀质粒,经两步筛选法对重组菌株筛选后,进行巨噬细胞黏附侵袭试验和小鼠体内毒力试验。结果自杀质粒p BK-CMV-Sac B-△UGP构建成功,经双向筛选获得了羊布鲁菌UGPase基因缺失株16M△UGP。16M△UGP缺失株侵入巨噬细胞的CFU数低于16M强毒株,但高于M5疫苗株;小鼠攻毒14 d后,其平均脾指数为(6.55±0.27)g,平均克脾菌数为1.64×104CFU/g,均低于16M强毒株。结论成功构建了羊布鲁菌16M株的UGPase基因缺失株,并证实了UGPase基因的缺失对16M株毒力具有一定影响。 展开更多
关键词 羊布鲁菌 UGPase基因缺失株 毒力
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羊布氏菌vjbR基因的克隆及原核表达 被引量:1
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作者 卜昭阳 王景龙 +5 位作者 李晓艳 万丽娜 郎需龙 万忠海 孟柯音 王兴龙 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第2期188-190,195,共4页
目的克隆并原核表达羊布氏菌强毒株16M vjbR基因。方法 PCR扩增羊布氏杆菌16M株vjbR基因,亚克隆至原核表达载体pET-28a中,构建重组原核表达质粒pET-28a-vjbR,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经His Trap FF纯... 目的克隆并原核表达羊布氏菌强毒株16M vjbR基因。方法 PCR扩增羊布氏杆菌16M株vjbR基因,亚克隆至原核表达载体pET-28a中,构建重组原核表达质粒pET-28a-vjbR,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经His Trap FF纯化后,进行Western blot分析。结果扩增的vjbR基因大小为708 bp,与预期一致;重组原核表达质粒pET-28a-vjbR经双酶切及测序证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为29 000,诱导4 h表达量可达6.84 mg/ml;纯化的重组蛋白纯度为65.7%,能被羊布氏杆菌阳性血清所识别。结论成功在大肠杆菌中表达了羊布氏菌VJBR蛋白,为其功能的研究、羊布病诊断试剂盒的研制及亚单位疫苗的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 羊布氏菌 vjbR基因 密度感应系统 克隆 原核细胞 基因表达
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布鲁菌抗体ELISA检测方法比较试验 被引量:1
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作者 曹芸 封林 +3 位作者 曾政 黄诚 黄恒 姚璐 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2019年第1期109-110,114,共3页
为了筛选可靠的布鲁菌病诊断试剂,本中心选择5种诊断试剂盒分别对180份临床血清(牛、羊血清各90份)进行比较检测,对检测结果不一致的样本,进一步用经典的补体结合试验(CFT)进行验证,分析各种方法之间的符合性。结果显示:cELISA-IVDC与iE... 为了筛选可靠的布鲁菌病诊断试剂,本中心选择5种诊断试剂盒分别对180份临床血清(牛、羊血清各90份)进行比较检测,对检测结果不一致的样本,进一步用经典的补体结合试验(CFT)进行验证,分析各种方法之间的符合性。结果显示:cELISA-IVDC与iELISA-IVDC之间符合率为98.3%(177/180),cELISA-Sva与iELISA-Sva之间符合率为91.7%(165/180);iELISA-IVDC、iELISA-Sva、iELISA-Idexx与CFT的符合率分别为98.9%(178/180)、93.3%(168/180)和87.8%(158/180);cELISA-IVDC、cELISA-Sva与CFT之间的符合率分别为96.7%(174/180)和89.4%(161/180)。结果表明,不同布鲁菌病诊断试剂盒检测结果存在差异,其中iELISA-IVDC和cELISA-IVDC与CFT的符合率最高;iELISA-IVDC与cELISA-IVDC之间的符合率高于其他布鲁菌病试剂盒。 展开更多
关键词 布鲁菌病 抗体诊断试剂 比较
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牛种布鲁菌VirB12蛋白的原核表达及纯化 被引量:1
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作者 唐峰 闫广谋 +2 位作者 唐雨顺 刘永华 李冰 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第8期1130-1133,共4页
目的原核表达并纯化牛种布鲁菌(Brucella)VirB12蛋白。方法利用PCR法从牛种布鲁菌基因组中扩增VirB12基因,插入pET-30a(+)载体,构建重组表达质粒pETV12,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经组氨酸结合树脂柱纯化后... 目的原核表达并纯化牛种布鲁菌(Brucella)VirB12蛋白。方法利用PCR法从牛种布鲁菌基因组中扩增VirB12基因,插入pET-30a(+)载体,构建重组表达质粒pETV12,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经组氨酸结合树脂柱纯化后,进行SDS-PAGE及Western blot分析。结果重组表达质粒pETV12经双酶切及测序证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约22 000,纯化的重组蛋白纯度达94%,可被布鲁菌免疫兔血清特异性识别。结论原核表达并纯化了牛种布鲁菌VirB12蛋白,为进一步研究VirB12蛋白的结构、功能及相关疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 布鲁菌 VirB12基因 原核细胞 基因表达
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布鲁菌病误诊为梨状肌综合征1例 被引量:3
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作者 阙方绪 王文春 《西南国防医药》 CAS 2018年第9期902-902,共1页
病例 男,21岁.西南某高校大一学生.因“反复右侧臀部疼痛18d”收治入科。18d前.患者平地行走时无明显诱因出现右侧臀部疼痛不适.疼痛呈持续性钝痛.疼痛程度尚轻.卧床休息后疼痛可有所缓解.患者未行特殊处理。后上述疼痛逐渐加重... 病例 男,21岁.西南某高校大一学生.因“反复右侧臀部疼痛18d”收治入科。18d前.患者平地行走时无明显诱因出现右侧臀部疼痛不适.疼痛呈持续性钝痛.疼痛程度尚轻.卧床休息后疼痛可有所缓解.患者未行特殊处理。后上述疼痛逐渐加重.至发病后第3d.右侧臀部疼痛剧烈忍受.行走困难.并伴有右小腿外侧及足背放射性疼痛。患者遂赴当地县医院就诊.诊断为“梨状肌综合征”.予以口服消炎镇痛药物、针灸、中药局部外敷等治疗.右侧臀部疼痛稍有所缓解。 展开更多
关键词 布鲁菌病 梨状肌综合征 误诊
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羊布氏菌外膜蛋白10基因的原核表达
8
作者 李晓艳 王景龙 +2 位作者 卜昭阳 张瑞 王兴龙 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第1期39-42,共4页
目的原核表达并纯化羊布氏菌外膜蛋白10(Outer membrane protein,Omp10)。方法利用PCR技术扩增羊布氏菌16M株Omp10基因,插入原核表达载体pET-28a(+),构建重组原核表达质粒pET-28a-Omp10,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达的重组O... 目的原核表达并纯化羊布氏菌外膜蛋白10(Outer membrane protein,Omp10)。方法利用PCR技术扩增羊布氏菌16M株Omp10基因,插入原核表达载体pET-28a(+),构建重组原核表达质粒pET-28a-Omp10,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达的重组Omp10经HisTrapTMFF纯化后,Western blot分析表达产物的反应原性。结果重组原核表达质粒pET-28a-Omp10经双酶切及测序证明构建正确;表达的重组Omp10相对分子质量约15 000,能被羊布氏菌阳性血清所识别。结论已成功在大肠杆菌中表达了羊布氏菌Omp10,为羊布氏菌病血清学诊断方法的建立提供了材料。 展开更多
关键词 羊布氏菌 细菌外膜蛋白质类 原核细胞 基因表达 诊断 鉴别
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种特异性标志——位于布氏菌微孔部位的外膜蛋白2(Omp2)的基因变化
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作者 T.A.Ficht 林涛译 尚德秋 《地方病译丛》 北大核心 1992年第6期20-22,共3页
我们试图以 Omp 2位点上的基因变异为手段,对布氏菌属内的各个种进行鉴定。牛种布氏菌 Omp 2位点包含有两个紧密相关基因,它们至少表达外膜蛋白的一个主要成分。这两个基因被900个碱基对(Pb)分隔,羌且在相反的方向完向。已经证实 Omp2b... 我们试图以 Omp 2位点上的基因变异为手段,对布氏菌属内的各个种进行鉴定。牛种布氏菌 Omp 2位点包含有两个紧密相关基因,它们至少表达外膜蛋白的一个主要成分。这两个基因被900个碱基对(Pb)分隔,羌且在相反的方向完向。已经证实 Omp2b 基因只能在牛种布氏菌或当其被克隆到埃希氏大肠杆菌(E.coll)中才能表达。但这并不排除 Omp2a 展开更多
关键词 布鲁氏菌 外膜蛋白 基因
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羊种布鲁氏菌心内膜炎一例 被引量:5
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作者 王鑫 赵宝珍 徐彦霞 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期303-303,共1页
关键词 羊种布鲁氏菌心内膜炎 诊断 病例报告
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