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新疆维吾尔自治区吸毒人群丙型肝炎防治知识知晓现状及影响因素分析
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作者 马媛媛 王吉亮 +5 位作者 王宇翔 木合塔·阿布力米提 史蕾 高璇 曾长玉 倪明健 《中国预防医学杂志》 2025年第7期845-849,共5页
目的 了解新疆维吾尔自治区(新疆)吸毒人群丙型肝炎(丙肝)防治知识知晓现状及其影响因素,为制定干预措施和开展丙肝防治知识宣传教育提供科学依据。方法 采用中国疾病预防控制中心统一设计的调查问卷,结合新疆2024年丙肝哨点监测工作,... 目的 了解新疆维吾尔自治区(新疆)吸毒人群丙型肝炎(丙肝)防治知识知晓现状及其影响因素,为制定干预措施和开展丙肝防治知识宣传教育提供科学依据。方法 采用中国疾病预防控制中心统一设计的调查问卷,结合新疆2024年丙肝哨点监测工作,对吸毒人群丙肝防治知识知晓情况开展问卷调查,收集调查对象基本信息、丙肝防治知识知晓情况和行为信息等资料,分析吸毒人群丙肝防治知识知晓率,采用多因素logistic回归模型对知晓率的相关影响因素进行分析。结果 2024年共调查吸毒人群2 867人,获得有效问卷2 860份,问卷有效率为99.76%。吸毒人群丙肝防治知识知晓率为87.73%,其中完全知晓率为65.56%。“丙肝可以治愈”知晓率相对较低(86.43%)。多因素logistic回归分析显示,性别(女性:OR=0.46,95%CI:0.32~0.66)、民族(回族:OR=3.38,95%CI:1.60~7.10;汉族:OR=1.99, 95%CI:1.37~2.88)、文化程度(小学及以下:OR=2.30, 95%CI:1.20~4.44;初中:OR=2.08,95%CI:1.10~3.93;高中或中专:OR=2.94,95%CI:1.50~5.77;大专及以上:OR=3.41, 95%CI:1.58~7.36)、毒品摄入方式(注射:OR=1.58, 95%CI:1.20~2.08;口服:OR=1.41,95%CI:1.00~1.97)是吸毒人群丙肝防治知识知晓率的影响因素。结论 新疆地区应针对吸毒人群中维吾尔族、低文化程度、不同毒品摄入方式者,加强丙肝抗病毒治疗相关知识及传播途径等内容的健康宣传教育。 展开更多
关键词 丙型肝炎 吸毒人群 防治知识 知晓率
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Elecsys HBsAg II检测HBV感染者血清HBsAg变异性分析
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作者 温惠萍 吴茗 +3 位作者 刘洋 蒋秀娣 万维琴 何成山 《标记免疫分析与临床》 2025年第2期394-400,共7页
目的了解区域内乙型肝炎病毒(HBV)流行基因型及乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)变异情况,评价Elecsys HBsAg II可识别的HBsAg变异类型。方法收集HBsAg和HBV DNA阳性样本,提取血清基因组DNA,采用自建PCR体系扩增HBV S区基因,经琼脂糖凝胶电... 目的了解区域内乙型肝炎病毒(HBV)流行基因型及乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)变异情况,评价Elecsys HBsAg II可识别的HBsAg变异类型。方法收集HBsAg和HBV DNA阳性样本,提取血清基因组DNA,采用自建PCR体系扩增HBV S区基因,经琼脂糖凝胶电泳观察目的基因条带,切割目的条带测序,测序结果与标准野生型序列比对。结果150例样本成功扩增出HBV S区基因,HBsAg变异率达87.33%(131/150),检出5种HBV基因亚型,其中B基因型1种(58株),C基因型4种(92株),C基因型为流行优势感染株;HBV S区基因99个位点发生144种不同类型共计640次氨基酸突变,突变率1.82%(640/33900),各亚型在HBV S区基因不同表位区域突变率均存在较大差异(P<0.01),其中“α”决定簇内检出R122K、K122R、I126S/T、T126S/A、S126I、P127S/T、Q129H、M133T/I、F134L和S143T等14种不同类型的65次氨基酸突变。结论HBV感染者血清HBsAg变异性复杂,Elecsys HBsAg II可有效识别多种HBsAg变异类型,适用于HBsAg的筛查诊断。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 乙型肝炎病毒表面抗原 检测 感染 变异
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不同年代输血患者的乙型肝炎病毒感染检测结果与分析 被引量:3
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作者 沈树强 吴学忠 《临床血液学杂志》 2025年第2期131-135,共5页
目的:探讨最适合临床输血(备血)患者乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)感染指标的检测方法,以及不同年代输血(备血)患者HBV感染状况。方法:采集2020年7月—2024年2月安徽理工大学第一附属医院5 978例住院输血(备血)患者的血液标本,... 目的:探讨最适合临床输血(备血)患者乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)感染指标的检测方法,以及不同年代输血(备血)患者HBV感染状况。方法:采集2020年7月—2024年2月安徽理工大学第一附属医院5 978例住院输血(备血)患者的血液标本,采用光激化学发光法、核酸检测法和胶体金法进行HBV感染指标检测,比较三种方法乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性检出率,同时分析不同年代、不同性别患者HBsAg和单一表面抗体(抗HBs)指标的差异情况。结果:5 978例输血(备血)患者HBV感染指标检测结果显示,HBsAg核酸检测法、光激化学发光法的灵敏度均为100.00%,高于胶体金法(90.85%)(P>0.05);患者HBsAg和单一抗HBs的阳性率分别为7.31%和28.62%。自20世纪40至80年代,患者HBsAg和单一抗HBs阳性率均呈现升高趋势,且80年代患者HBsAg阳性率最高(15.62%),21世纪10年代患者单一抗HBs阳性率最高(57.58%)。男性患者单一抗HBs阳性率(27.79%)与女性(29.60%)相近(P>0.05),但男性患者HBsAg阳性率(9.75%)明显高于女性(4.44%)(P<0.05)。HBsAg阳性患者中“大三阳”(HBsAg+HBeAg+抗HBc阳性)、“小三阳”(HBsAg+抗HBe+抗HBc阳性)和“HBsAg+抗HBc阳性”组合的阳性率分别为13.50%、65.45%、11.21%。结论:光激化学发光法较适宜临床输血前HBV感染指标的检测应用与推广,以保障临床输血安全,避免输血感染纠纷的发生。不同年代男性患者HBV感染率明显高于女性,但男性患者HBV保护性抗体阳性率与女性无显著性差别,提示HBV传播的预防与控制仍然不可忽视。 展开更多
关键词 年代 输血 患者 HBV感染指标
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SRSF1通过增加P53的稳定性抑制乙型肝炎病毒复制
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作者 刘佳俊 龙少媛 +1 位作者 胡接力 崔静 《陆军军医大学学报》 北大核心 2025年第13期1475-1483,共9页
目的探究丝氨酸/精氨酸富集剪接因子1(serine/arginine-rich splicing factor 1,SRSF1)对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制的影响和机制。方法通过Southern blot、Northern blot、ELISA实验在不同的HBV复制细胞模型中检测SRSF1... 目的探究丝氨酸/精氨酸富集剪接因子1(serine/arginine-rich splicing factor 1,SRSF1)对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制的影响和机制。方法通过Southern blot、Northern blot、ELISA实验在不同的HBV复制细胞模型中检测SRSF1对HBV复制的影响;通过荧光定量PCR实验、荧光素酶报告系统以及ChIP实验在HepG2细胞中研究SRSF1对HBV核心启动子/增强子活性的影响。利用Western blot和泛素化检测实验探索SRSF1与P53的关系,同时在不同的HBV复制细胞模型中验证P53对HBV复制的影响,之后明确P53在SRSF1抑制HBV中的作用。结果过表达SRSF1可以在多种HBV复制细胞模型中显著抑制HBV DNA和HBV RNA,降低HBeAg和HBsAg的分泌水平(P<0.0001)。SRSF1还可以抑制HBV核心启动子活性,尽管这种抑制是通过间接机制调控的。此外,SRSF1通过保护P53免受泛素化和随后的蛋白酶体降解从而增强P53的稳定性。同时,过表达P53或敲低P53对HBV的调控作用也在不同的细胞模型中得到了验证(P<0.0001)。结论剪接因子SRSF1的过表达可以显著抑制HBV的复制,且该抑制效应在多种肝癌细胞模型中均有重现性,这一抑制效应由其增强P53的稳定性来介导。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 复制 SRSF1 P53 SR蛋白
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HBV C反基因锁核酸对转基因小鼠体内病毒活性的抑制效果
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作者 韦武均 肖树荣 +6 位作者 邓益斌 罗艳红 许桂丹 胡仁统 彭彬 农顺强 陈晓昊 《右江民族医学院学报》 2025年第1期50-55,共6页
目的探讨基于HBV C反基因锁核酸(Antigene LNA)对转基因小鼠体内病毒活性的抑制效果。方法将24只HBV转基因小鼠随机分为4组(n=6),分别为反基因锁核酸(Antigene LNA)组、拉米夫定(3TC)组、无关序列(NC)组和空白(Blank)组。其中Antigene ... 目的探讨基于HBV C反基因锁核酸(Antigene LNA)对转基因小鼠体内病毒活性的抑制效果。方法将24只HBV转基因小鼠随机分为4组(n=6),分别为反基因锁核酸(Antigene LNA)组、拉米夫定(3TC)组、无关序列(NC)组和空白(Blank)组。其中Antigene LNA组、NC组和Blank组小鼠按0.5μg/g注射剂量,分别在第1天、第3天和第5天通过尾静脉注射400μL 5%GLU-阳离子聚合物-Antigene LNA、400μL 5%GLU-阳离子聚合物-无关序列、400μL 5%GLU-阳离子聚合物;而3TC组小鼠按10μg/μL的拉米夫定溶液每天灌胃2次,连续7 d。采用实时荧光定量PCR检测血清HBV DNA,磁微粒化学发光法检测血清HBeAg、HBsAg,免疫组化检测肝脏HBsAg、HBcAg细胞阳性率,HE染色观察肝、肾组织细胞变化。结果治疗后的第7天,与3TC组、NC组、Blank组比较,Antigene LNA组血清HBeAg、HBV DNA、HBsAg抑制率明显降低,差异有统计学意义(P<0.001)。肝脏组织HBsAg、HBcAg阳性细胞百分比显著下降(P<0.001)。小鼠肝、肾组织细胞结构无明显变化。结论Antigene LNA能有效抑制体内HBV病毒活性,为HBV基因治疗提供新的治疗策略。 展开更多
关键词 反基因锁核酸 转基因小鼠 乙型肝炎病毒
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庚型肝炎病毒在与HIV共感染临床病程延缓中的免疫调控作用
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作者 李贞 段智 +5 位作者 陈辉 刘杏仁 刘然 杨慧 刘凌泳 王宁 《中国热带医学》 北大核心 2025年第10期1354-1358,共5页
庚型肝炎病毒(Hepatitis G virus,HGV)共感染日益成为影响人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Vi⁃rus,HIV)感染者肝功能和免疫功能的重要因素。在HIV感染者中,HGV的高流行率及其免疫学机制的复杂性,表明HGV可能通过免疫逃逸、细... 庚型肝炎病毒(Hepatitis G virus,HGV)共感染日益成为影响人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Vi⁃rus,HIV)感染者肝功能和免疫功能的重要因素。在HIV感染者中,HGV的高流行率及其免疫学机制的复杂性,表明HGV可能通过免疫逃逸、细胞因子失衡及影响肝脏功能等机制,减缓HIV的病程。本文综述HGV与HIV共感染的免疫学机制,重点阐述HGV如何通过抑制免疫系统功能、改变免疫细胞亚群分布等方式,潜在地延缓HIV的临床进展。同时,总结针对该共感染的诊断方法及其局限性,分析HGV检测的挑战和新兴技术应用,并讨论现有治疗策略,强调在HIV抗病毒治疗基础上,个体化治疗方案对优化临床管理的重要性。本文旨为理解HGV与HIV共感染的免疫学特征和临床管理提供新视角,并展望未来研究方向,尤其是在早期诊断、免疫治疗和个体化治疗方案方面的潜在突破。 展开更多
关键词 庚型肝炎病毒 人类免疫缺陷病毒 共感染 免疫机制 临床管理
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冻干甲型肝炎减毒活疫苗纯化工艺的优化 被引量:1
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作者 李秋睿 康远航 +5 位作者 张慧影 李春雷 丛丹 陈锡铜 陶大伟 徐艳玲 《中国生物制品学杂志》 2025年第9期1101-1104,1110,共5页
目的 优化冻干甲型肝炎(简称甲肝)减毒活疫苗纯化工艺,以提高疫苗的质量和安全性。方法 优化甲肝病毒(hepatitis A virus,HAV)收获物抽提次数(6次)和离心力(2 990、4 070、5 316、6 728×g),检测不同抽提次数和离心力下的病毒滴度... 目的 优化冻干甲型肝炎(简称甲肝)减毒活疫苗纯化工艺,以提高疫苗的质量和安全性。方法 优化甲肝病毒(hepatitis A virus,HAV)收获物抽提次数(6次)和离心力(2 990、4 070、5 316、6 728×g),检测不同抽提次数和离心力下的病毒滴度。将抽提液混匀,检测超滤前三氯甲烷残留量;使用截留相对分子质量为300 KD的膜包进行超滤浓缩,检测原液三氯甲烷残留量、蛋白质含量及病毒滴度及膜下病毒含量。分别采用两种工艺制备原液,取样检测病毒滴度、蛋白质含量和三氯甲烷残留量。结果 随着抽提次数的增加,抽提上清液的病毒滴度呈递减趋势,前4次抽提上清液的病毒滴度平均值均大于7.00 lgCCID50/mL,第5和6次均小于7.00 lgCCID50/mL,选择病毒收获物抽提次数为4次;4组不同离心条件制备的原液病毒滴度均值在8.11~8.39 lgCCID50/mL范围内,差异无统计学意义(F=1.319,P=0.334)。使用300 KD的膜包进行超滤浓缩,膜下病毒检测均为阴性;三氯甲烷残留量显著降低(t=4.975,P=0.037),原液病毒滴度和蛋白质含量检测结果均在合格范围内。优化前、后工艺制备的原液病毒滴度及三氯甲烷残留量差异均无统计学意义(t分别为-0.970和2.306,P分别为0.369和0.082),但优化后工艺制备的原液三氯甲烷残留量低于优化前工艺;两种工艺制备的原液蛋白质含量稳定,远低于内控合格标准。结论 成功对冻干甲肝减毒活疫苗的纯化工艺进行了优化,进一步提高了疫苗质量。 展开更多
关键词 甲型肝炎病毒 甲型肝炎减毒活疫苗 纯化 工艺优化
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基于多聚化重组抗原的检测戊型肝炎病毒IgM与IgG抗体的ELISA的建立及初步评估 被引量:33
8
作者 葛胜祥 张军 +6 位作者 彭耿 黄果勇 何志强 顾颖 朱子恒 吴文翰 夏宁邵 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期74-82,共9页
建立并评估分别检测戊型肝炎 (戊肝 )病毒IgM与IgG抗体的捕获法及间接法ELISA。以原核表达的多聚化重组HEV蛋白为抗原 ,建立戊肝捕获法IgMELISA(E2 -IgM )和间接法IgGELISA(E2 -IgG)。利用 2 9只实验感染猴系列血清及多份临床急性肝炎... 建立并评估分别检测戊型肝炎 (戊肝 )病毒IgM与IgG抗体的捕获法及间接法ELISA。以原核表达的多聚化重组HEV蛋白为抗原 ,建立戊肝捕获法IgMELISA(E2 -IgM )和间接法IgGELISA(E2 -IgG)。利用 2 9只实验感染猴系列血清及多份临床急性肝炎血清、正常人血清以及单克隆抗体评估所建立的方法的敏感性与特异性 ,并与商品化试剂 (Genelabs公司抗 -HEVIgG和IgM试剂 ,GL -IgG/GL -IgM )进行比较。 2 9只恒河猴E2 -IgM和E2-IgG的阳转率均为 10 0 % ,其中 75 %在感染后 4周内阳转 ,均早于ALT异常时间。E2 -IgM持续 2~ 14周 ,平均6周 ;E2 -IgG在 70周时仍无一阴转。GL -IgG阳转率为 79 3% ( 2 3/ 2 9) ,多数晚于ALT异常时间 ,平均持续约18周 ,但最长为 1只在感染后 70周时仍为阳性。用E2 -IgM试剂盒检测 92 8份正常人血清 ,仅 2份OD值略高于0 2。检测 5 10份临床急性肝炎血清 ,可明显将其区分为 2个部分 ,一个部分OD值小于 0 2 ,其OD值分布与正常人相似 ;另一个部分OD值大于 0 4,共 131份 ,其中 10 9份大于 1 0。可能分别对应于急性肝炎中的非戊肝患者和戊肝患者。 119份非甲~丙急性肝炎中 ,E2 -IgM阳性 5 7份 ,GL -IgM阳性 2 9份 (E2 -IgM均阳性 )。 5 0 6 0份普通人群血清的E2 -IgGOD值在 0 2以下 。 展开更多
关键词 戊型肝炎 诊断 试剂 IGM IGG
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cDNA文库噬菌体展示法的建立及乙型肝炎病毒前S1蛋白结合蛋白筛检 被引量:31
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作者 董菁 施双双 +4 位作者 王业东 皇甫竞坤 李莉 张玲霞 成军 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期321-322,共2页
为寻找乙型肝炎病毒 (HBV)前S1蛋白的结合蛋白 ,将前S1蛋白包被于聚苯乙烯平板 ,经过“包被 吸附 洗脱”筛检过程 ,获得前S1蛋白结合蛋白的cDNA序列 ,并将推断的氨基酸序列进行相互比较 ,经生物信息学方法获得结合蛋白的全长序列。共经... 为寻找乙型肝炎病毒 (HBV)前S1蛋白的结合蛋白 ,将前S1蛋白包被于聚苯乙烯平板 ,经过“包被 吸附 洗脱”筛检过程 ,获得前S1蛋白结合蛋白的cDNA序列 ,并将推断的氨基酸序列进行相互比较 ,经生物信息学方法获得结合蛋白的全长序列。共经过 4轮生物淘洗过程。结果提示 ,神经胶质瘤抑制子候选基因区基因 (GLTSCR) 2上游部分序列存在于与HBV前S1结合的重组T7噬菌体中 ,多个克隆的测序结果发现前S1蛋白结合蛋白具有KxPxKSGxxxL结构域。HBV前S1蛋白的结合蛋白可能是GLTSCR 2的编码产物。 展开更多
关键词 CDNA文库 噬菌体展示法 乙型肝炎病毒 前S1蛋白结合蛋白 筛检
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乙型肝炎病毒(adr亚型)转基因小鼠的研究 被引量:32
10
作者 胡卫江 李建秀 +6 位作者 余宏宇 戴德顺 王新民 孙伟 郝光荣 王肖鹏 胡以平 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期212-215,共4页
目的:制备含有2.0拷贝乙型肝炎病毒(HBV,adr亚型)基因组的转基因小鼠,为HBV相关医学问题的研究准备实验动物模型。方法:应用受精卵原核显微注射的方法,产生HBV转基因小鼠。用PCR,Southern-blot... 目的:制备含有2.0拷贝乙型肝炎病毒(HBV,adr亚型)基因组的转基因小鼠,为HBV相关医学问题的研究准备实验动物模型。方法:应用受精卵原核显微注射的方法,产生HBV转基因小鼠。用PCR,Southern-bloting杂交、放射免疫、免疫组织化学以及亚显微结构分析等方法,研究外源基因在转基因小鼠体内的整合、表达以及复制。应用常规病理切片及血清生物化学方法分析转基因小鼠的病理学改变。结果:得到了4只整合有HBV基因组的建立者小鼠,并证明HBV基因在转基因小鼠体内可以稳定遗传,在肝、肾组织内可特异性表达、复制,并在肝细胞内发现了Dane颗粒。转基因小鼠的肝、肾组织未见明显的病理学改变。结论:获得了HBV的转基因小鼠,其病毒基因可以表达,并有病毒颗粒形成。该小鼠对于HBV的各个基因产物是免疫耐受的,其基本生物学特性与人类的HBV携带者特征相似。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 转基因小鼠 DANE颗粒 ADR亚型
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HBV标志物定量与病毒载量关系探讨 被引量:18
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作者 田沂 唐晓鹏 +2 位作者 杨旭 罗开忠 黄力 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第13期1305-1307,共3页
目的研究乙型肝炎病毒各血清标志物含量与HBV-DNA含量的关系。方法采用时间分辨免疫荧光分析法(TRIFA)和实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)分别测定1486例乙肝患者血清中乙型肝炎病毒抗原抗体定量和病毒含量。结果不同HBV标志物阳性模式... 目的研究乙型肝炎病毒各血清标志物含量与HBV-DNA含量的关系。方法采用时间分辨免疫荧光分析法(TRIFA)和实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)分别测定1486例乙肝患者血清中乙型肝炎病毒抗原抗体定量和病毒含量。结果不同HBV标志物阳性模式的HBsAg定量存在显著差异,相同模式的HBsAg定量也差异极大。HBeAg(+)模式的HBV-DNA显著高于HBeAb(+)模式及HBeAg(-)HBeAb(-)模式(P<0.01),而后两者间无显著差异(P>0·05)。HBsAg、HBeAg含量与HBV DNA正相关(r值分别为0.383、0.635,P=0.01),HBeAb含量与HBV DNA负相关(r=-0.563,P=0.01)。HBsAg定量与HBeAg定量正相关(r=0.466,P=0.01),与HBeAb定量负相关(r=-0·524,P=0·01)。结论HBV标志物定量之间及与HBV DNA含量间存在一定相关性,但个体差异极大。全面了解HBV标志物含量及HBV DNA定量可更准确判断病毒复制、状态,为临床决策提供可靠依据。 展开更多
关键词 HBV DNA 肝炎病毒 乙型 PCR 荧光定量 免疫荧光分析 时间分辨
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酵母双杂交技术筛选克隆HCV核心蛋白结合蛋白基因1 被引量:66
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作者 李克 王琳 +12 位作者 成军 张玲霞 段惠娟 陆荫英 杨继珍 刘妍 洪源 夏小兵 王刚 董菁 李莉 钟彦伟 陈菊梅 《世界华人消化杂志》 CAS 2001年第12期1379-1383,共5页
目的克隆与丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白结合的肝细胞中的未知蛋白基因。方法应用酵母双杂交系统3.构建HCV核心蛋白诱饵质粒,转化酵母AH109后与含文库质粒的酵母Y187进行配合,在营养缺陷培养基上进行双杂交筛选。筛选出30个阳性克隆,对既... 目的克隆与丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白结合的肝细胞中的未知蛋白基因。方法应用酵母双杂交系统3.构建HCV核心蛋白诱饵质粒,转化酵母AH109后与含文库质粒的酵母Y187进行配合,在营养缺陷培养基上进行双杂交筛选。筛选出30个阳性克隆,对既能在4缺营养缺陷培养基上生长(SD/-Trp-Leu-Ade-His)又能在涂有X-α-半乳糖(X-α-gal)的四缺培养平皿上长出蓝色菌落,提取此酵母克隆的质粒转化大肠杆菌后进行测序,进行生物信息学分析.将HCV核心蛋白基因分为大、中、小三段,与所克隆的未知功能基因回交,以证实其相互作用的部位。结果分析的结果显示,其中1号克隆的测序结果与GenBank中的1个未知功能序列有99%的同源性,初步证明了此基因与HCV核心蛋白有结合活性(GenBank号:AY032593).HCV核心蛋白的全长、2/3,1/3三段,回交显示三段均能在酵母中与此未知基因具有结合作用。结论 HCV核心蛋白结合蛋白肝细胞基因克隆成功,核心蛋白与此未知基因的作用部位应是氨基端.此项研究结果,为以后研究此基因在HCV致病机制以及在肝细胞中的生理功能提供了线索。 展开更多
关键词 C型肝炎样病毒属 遗传学 病毒蛋白质类 遗传学 病毒基因 分子克隆 遗传学技术
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酵母双杂交技术筛选Hcbp6结合的肝细胞蛋白编码基因 被引量:29
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作者 王琳 李克 +7 位作者 成军 陆荫英 张健 陈天艳 洪源 刘妍 王刚 钟彦伟 《世界华人消化杂志》 CAS 2003年第4期385-388,共4页
目的:Hcbp6是与核心蛋白相结合的未知功能蛋白基因,为了初步提示他的生物学功能和在细胞中的存在形式,采用酵母双杂交体系寻找与他相互作用的肝细胞蛋白,探讨Hcbp6的生物功能。方法:应用酵母双杂交系统3,构建Hcbp6诱饵质粒并转化酵母AH1... 目的:Hcbp6是与核心蛋白相结合的未知功能蛋白基因,为了初步提示他的生物学功能和在细胞中的存在形式,采用酵母双杂交体系寻找与他相互作用的肝细胞蛋白,探讨Hcbp6的生物功能。方法:应用酵母双杂交系统3,构建Hcbp6诱饵质粒并转化酵母AH109,与含人肝细胞cDNA文库质粒的酵母Y187进行配合,在涂有x-α-gal营养缺陷型培养基(SD/Trp-Leu-His-Ade)上筛选生长。挑选蓝色克隆,提取此酵母克隆的质粒,转化大肠杆菌提取质粒DNA后进行测序,然后进行生物信息学分析。结果:筛选出4种与Hcbp6特异性相互作用的蛋白,包括Paralemmin(PALM)、Ran结合蛋白2(Ranbp2)、跨膜运输蛋白21(Tmp21)和血清白蛋白。结论:推测该蛋白可能为一分泌性蛋白,或与分泌蛋白的形成有关,进一步的生物学功能的研究需要更多的实验加以探讨。 展开更多
关键词 Hcbp6 酵母双杂交技术 筛选 肝细胞 编码基因 生物学 肝细胞蛋白 分泌蛋白 血清白蛋白 核心蛋白 蛋白基因 融合蛋白 肝细胞结合蛋白6 毒性肝炎
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丙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白6基因和蛋白的生物信息学分析 被引量:42
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作者 成军 李克 +2 位作者 陆荫英 王琳 刘妍 《世界华人消化杂志》 CAS 2003年第4期378-384,共7页
目的:克隆丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白结合的肝细胞的蛋白基因,对新发现的基因及编码产物的结构与功能,及其基因表达的调节机制的结构基础进行生物信息学分析。方法:应用酵母双杂交技术,以HCV的核心蛋白作为“诱饵(bait)”,筛选鉴定与其... 目的:克隆丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白结合的肝细胞的蛋白基因,对新发现的基因及编码产物的结构与功能,及其基因表达的调节机制的结构基础进行生物信息学分析。方法:应用酵母双杂交技术,以HCV的核心蛋白作为“诱饵(bait)”,筛选鉴定与其结合的肝细胞中蛋白的编码基因。应用生物信息学(bioinformatics)技术,对其中筛选得到的人HCV核心蛋白结合蛋白6(HCBP6)全长基因及其编码产物的一级结构序列,进行生物信息学分析。获得该基因的基因组序列,并利用同源基因序列的比对,确定该基因在染色体上的定位,并确定人HCBP6基因的内含子序列。对其编码上游的基因组DNA序列进行分析,获得该基因启动子序列的一些信息。同时,根据同源基因序列的比较,确定了小鼠HCBP6的基因序列和氨基酸残基序列。通过对氨基酸残基序列的疏水性特点的分析,确定了HCBP6蛋白的潜在的抗原结构位点。通过蛋白质一级结构的在线计算机软件的分析,对人HCBP6蛋白质一级结构潜在的功能性结构位点进行了计算机辅助分析预测。结果:通过酵母双杂交技术的筛选和鉴定,结合生物信息学分析,证实人HCBP6基因由456 nt组成,编码产物由152 aa组成。人HCBP6的基因组DNA是没有内含子序列的DNA结构。通过生物信息学技术分析,确定人HCBP6基因组DNA定位于人22号染色体上。在对人HCBP6基因启动子序列的生物信息学分析中发现了几段可能的启动子序列结构,以及可能的转录因子蛋白潜在的结合位点。利用同样的技术,确定了小鼠的HCBP6的基因序列和蛋白质一级结构序列。对人HCBP6的蛋白质一级结构序列进行分析,发现在其序列中第80-110氨基酸残基序列之间存在疏水性结构位点,提示抗原位点所在,对其进行免疫学分析提供了可能。利用在线软件,对人的 HCBP6蛋白质结构中潜在的功能位点进行了初步的预测,为进一步研究HCBP6蛋白的生物学功能的实验研究,提供了丰富的信息。这些生物信息学分析的结果,虽然目前还只是初步的,有些还不能被实验所证实,但是,对新基因的结构与功能的研究来说,毕竟这种生物信息学分析,能够提供一些线索,对下一步结构与功能分析实验的设计,具有很大的帮助。结论:酵母双杂交技术结合生物信息学技术,是克隆、分析蛋白结合蛋白的基因,对于其功能结构域的预测的有效工具,在病毒性肝炎的致病机制研究中具有重要应用前景。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 核心蛋白结合蛋白6 基因 生物信息学 小鼠 氨基酸 分子生物学 克隆
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环介导逆转录等温扩增技术(RT-LAMP)在丙型肝炎病毒基因检测中的应用 被引量:55
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作者 李启明 马学军 +4 位作者 周蕊 彭夫望 高寒春 匡治州 侯云德 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期334-338,共5页
该文介绍了一种便捷、灵敏而又特异的环介导逆转录等温扩增基因检测技术,该技术分别使用特异对应于靶序列中8个基因区段的3对特殊引物,并在反转录酶和Bst-DNA聚合酶的作用下对靶序列进行等温核酸扩增反应,整个检测反应只需1~2h。利... 该文介绍了一种便捷、灵敏而又特异的环介导逆转录等温扩增基因检测技术,该技术分别使用特异对应于靶序列中8个基因区段的3对特殊引物,并在反转录酶和Bst-DNA聚合酶的作用下对靶序列进行等温核酸扩增反应,整个检测反应只需1~2h。利用这种技术成功检测了丙型肝炎病毒基因,对60份经Real-timePCR或RT—-PCR验证阳性的血清样品检测,阳性符合率为98%。同时,对扩增终产物进一步进行酶切分析,并与HIV、HBV和不同亚型流感病毒RNA进行交叉反应和特异性测试,均与预期结果吻合。将Real-timePCR定量后的RNA系列稀释后对检测方法的灵敏度进行了测试。结果显示,该技术的检测灵敏度在理论上可达到10个拷贝的RNA分子。以上结果证明,RT-LAMP扩增技术是一种检测程序简单、灵敏度和特异性较高的基因检测手段,在丙型肝炎病毒的快速检测方面具有一定的开发潜力。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 环介导逆转录等温扩增 实时监控聚合酶链反应
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基因芯片技术在肝炎病毒研究中的应用 被引量:31
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作者 刘妍 成军 +2 位作者 王建军 杨倩 陆荫英 《世界华人消化杂志》 CAS 2003年第4期461-463,共3页
0引言 基因芯片(gene chip)也称为DNA微距阵(DNA microarray)、DNA芯片(DNA chip)等,是近年发展起来的一项前沿生物技术.
关键词 基因芯片技术 肝炎病毒 拉咪呋啶 丙型肝炎病毒 分型检测 药物作用靶点 靶细胞 肝癌 10子生物学 发病机制
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戊型肝炎病毒结构区基因在大肠杆菌中的表达及其在诊断中的应用 被引量:25
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作者 毕胜利 江永珍 +4 位作者 赵洪兰 李景元 鲁健 曹经瑗 刘崇柏 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第2期118-122,共5页
利用融合蛋白表达载体pGEX-3X表达了戊型肝炎病毒第二(ORF2)和第三读码框(ORF3)区的两个抗原表位,并利用ORF2表位上游自然存在的限制性内切酶位点和ORF3下游通过PCR引入的限制性内切酶位点,使两个免疫... 利用融合蛋白表达载体pGEX-3X表达了戊型肝炎病毒第二(ORF2)和第三读码框(ORF3)区的两个抗原表位,并利用ORF2表位上游自然存在的限制性内切酶位点和ORF3下游通过PCR引入的限制性内切酶位点,使两个免疫表位区域形成嵌合。表达的三种抗原均溶于水。可利用商品化的谷胱甘肽-4B亲合层析柱得到纯化的抗原。经试用发现,基因重组抗原作为酶联免疫试剂的抗原用于检测血清中抗戊型肝炎病毒抗体,与新加坡进口试剂盒有高度的一致性。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 基因表达 结构区基因 诊断
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乙型肝炎病毒前S1基因酵母表达载体的构建及表达 被引量:23
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作者 陆荫英 李克 +3 位作者 成军 王琳 刘妍 张玲霞 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期341-342,共2页
为探讨乙型肝炎病毒 (HBV)前S1蛋白的功能 ,在真核生物酵母细胞中表达HBV前S1基因。以HBVayw亚型全长质粒pCP10为模板 ,多聚酶链反应 (PCR)扩增HBV前S1基因 ,克隆到pGEM T载体中 ,双酶切后回收与酵母表达质粒pGBKT7连接。将重组载体转... 为探讨乙型肝炎病毒 (HBV)前S1蛋白的功能 ,在真核生物酵母细胞中表达HBV前S1基因。以HBVayw亚型全长质粒pCP10为模板 ,多聚酶链反应 (PCR)扩增HBV前S1基因 ,克隆到pGEM T载体中 ,双酶切后回收与酵母表达质粒pGBKT7连接。将重组载体转化酵母细胞AH10 9,提取酵母蛋白质 ,进行十二烷基磺酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和Western免疫印迹分析。结果成功地构建了HBV前S1基因酵母表达载体 ,Western免疫印迹显示HBV前S1在酵母细胞中表达 ,表达产物在胞内存在 ,分子量 30kD左右。表明HBV前S1蛋白在酵母细胞中表达成功。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 酵母 基因表达 前S1基因
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酵母双杂交技术筛选HBcAg肝细胞结合蛋白基因 被引量:31
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作者 陆荫英 王琳 +3 位作者 成军 李克 刘妍 张玲霞 《世界华人消化杂志》 CAS 2003年第4期426-429,共4页
目的:乙型肝炎病毒(HBV)核心蛋白(HBcAg)在HBV感染的肝细胞中可同时存在于筛选并克隆人肝细胞cDNA文库中与HBcAg相互作用蛋白的基因。方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增HBcAg基因,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH... 目的:乙型肝炎病毒(HBV)核心蛋白(HBcAg)在HBV感染的肝细胞中可同时存在于筛选并克隆人肝细胞cDNA文库中与HBcAg相互作用蛋白的基因。方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增HBcAg基因,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人肝cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基和X-α-半乳糖X-α-gal)上进行双重筛选阳性菌落,PCR从中扩增出目的片段并测序,进行生物信息学分析。结果:成功克隆出HBcAg基因并在酵母细胞中表达,配合后选出既能在四缺(SD/-Trp-Leu-Ade-His)培养基又能在铺有X-α-gal的四缺培养基上均能生长,并变成蓝色的真阳性菌落16个,其中含金属硫蛋白A2基因的菌落有2个、未知基因4个、补体8α基因1个、NAD(P)H脱氢酶亚基1个、维甲酸受体应答元件2基因1个、细胞色素c氧化酶基因1个、细胞色素b基因1个、DAZ相关蛋白2基因2个、线粒体核蛋白L41基因2个、人血白蛋白基因1个。结论:成功克隆出乙型肝炎病毒核心蛋白的结合蛋白,为进一步研究HBcAg在病毒装配、损害肝细胞、感染致病等方面的具体作用提供了新线索。 展开更多
关键词 酵母双杂交技术 筛选 HBCAG 肝细胞 结合蛋白 基因 多聚酶链反应 乙型肝炎病毒
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乙型肝炎病毒对细胞信号转导的影响 被引量:26
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作者 成军 刘妍 +2 位作者 陆荫英 李克 王琳 《世界华人消化杂志》 CAS 2003年第4期472-474,共3页
0引言 乙型肝炎病毒(HBV)是嗜肝DNA病毒的一种,HBVDNA长度为3.2kb,具有4个开放读码框架(ORF),分别编码HBV的表面抗原蛋白,核心/e抗原,X蛋白以及HBV DNA的聚合酶.此外,HBV DNA结构中还有4段启动子、2段增强子以及与HBV DNA复制过程密切... 0引言 乙型肝炎病毒(HBV)是嗜肝DNA病毒的一种,HBVDNA长度为3.2kb,具有4个开放读码框架(ORF),分别编码HBV的表面抗原蛋白,核心/e抗原,X蛋白以及HBV DNA的聚合酶.此外,HBV DNA结构中还有4段启动子、2段增强子以及与HBV DNA复制过程密切相关的顺向重复序列1、2(DR1、DR2)等[1]. 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 信号转导 肝细胞 聚合酶 表面抗原蛋白 E抗原 肝纤维化 肝细胞癌 分子生物学
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