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新型丝素蛋白支架复合兔髓核细胞体内初步构建组织工程髓核的研究 被引量：1
1
作者 赵家宁 徐宝山 +5 位作者 曾超 杨强 马信龙 张春秋 李秀兰 张扬 《天津医药》 CAS 北大核心 2014年第11期1076-1079,I0002,共5页
目的探讨新型丝素蛋白多孔支架复合经PKH26标记的兔髓核细胞初步构建组织工程髓核的可行性。方法消化分离兔髓核细胞,培养获取P1代细胞,对P1代髓核细胞行番红O以及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色;PKH26标记兔髓核细胞,MTT法检测标记前后髓核... 目的探讨新型丝素蛋白多孔支架复合经PKH26标记的兔髓核细胞初步构建组织工程髓核的可行性。方法消化分离兔髓核细胞,培养获取P1代细胞,对P1代髓核细胞行番红O以及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色;PKH26标记兔髓核细胞,MTT法检测标记前后髓核细胞增殖情况,将标记后的细胞接种支架,体外培养4 d后,将细胞-支架复合物植入裸鼠皮下,体内培养12周后,进行活体荧光成像技术检测、HE染色、甲苯胺蓝染色、番红O染色和Ⅱ型胶原免疫组化染色。结果 P1代髓核细胞番红O染色阳性,Ⅱ型胶原免疫组织化学染色阳性;标记后细胞荧光强度分布均匀,标记前后髓核细胞光密度(OD)值比较差异无统计学意义(P>0.05);活体成像技术显示裸鼠皮下植入的细胞-支架复合体呈现强烈荧光;HE染色见多孔支架内壁有大量髓核细胞填满并分泌大量细胞外基质;甲苯胺蓝染色、番红O染色及Ⅱ型胶原免疫组化染色均呈阳性,细胞周围大量细胞外基质分泌。结论以新型丝素蛋白多孔支架复合兔髓核细胞经体内培养形成的类髓核样组织,可用于组织工程化髓核的构建。 展开更多
关键词 丝素蛋白 组织工程 免疫组织化学 髓核 PKH26
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脑出血患者脑利钠肽前体和超敏肌钙蛋白的水平及意义 被引量：4
2
作者 杨会 宋安军 刘兴德 《贵阳医学院学报》 CAS 2014年第6期848-850,共3页
目的:探讨脑利钠肽前体(NT-pro BNP)和超敏肌钙蛋白T(c Tn T)在急性脑出血患者血浆中的水平。方法:高血压脑出血患者60例,根据病历资料及治疗结果分为康复组和死亡组,用电化学发光法检测2组患者入院第1天时血浆NT-pro BNP和c Tn T水平,... 目的:探讨脑利钠肽前体(NT-pro BNP)和超敏肌钙蛋白T(c Tn T)在急性脑出血患者血浆中的水平。方法:高血压脑出血患者60例,根据病历资料及治疗结果分为康复组和死亡组,用电化学发光法检测2组患者入院第1天时血浆NT-pro BNP和c Tn T水平,同时观察康复组患者入院后第7天和第14天时血浆NT-pro BNP和c Tn T水平。结果:与康复组比较,入院第1天时死亡组患者NT-pro BNP和c Tn T均显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);康复组患者脑出血第7天时,NT-pro BNP和c Tn T显著高于第1天和第14天,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:急性脑出血预后与发病时患者血浆NT-pro BNP和c Tn T水平有关,NT-pro BNP和c Tn T水平在发病后第7天最高。 展开更多
关键词 脑出血 高血压 脑利钠肽前体 超敏肌钙蛋白T 化学发光
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急性脑出血患者血清MMP-9与CRP动态变化 被引量：5
3
作者 黄福英 《贵阳医学院学报》 CAS 2013年第6期648-649,共2页
目的:探讨急性脑出血患者血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)与急性时相反应蛋白(CRP)动态变化及二者的相关性。方法:43例急性脑出血患者,于入院时(发病24 h内)及发病后第48 h、第72 h、第7天、第10天检测血清MMP及CRP水平;同时选择20例健康... 目的:探讨急性脑出血患者血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)与急性时相反应蛋白(CRP)动态变化及二者的相关性。方法:43例急性脑出血患者,于入院时(发病24 h内)及发病后第48 h、第72 h、第7天、第10天检测血清MMP及CRP水平;同时选择20例健康体检者为对照组,清晨取血检测血清MMP-9及CRP水平,分析MMP-9与CRP的相关性。结果:脑出血组患者MMP-9、CRP水平在各个时间段与对照组比较均明显升高(P<0.05);脑出血组于发病24 h内血清MMP-9及CRP水平即明显增高,发病后第3天达高峰,与24 h、48 h比较差异有统计学意义(P<0.05),第7天较第3天有所下降(P<0.05),第10天明显下降并低于发病24 h水平(P<0.05)。相关性分析表明,脑出血患者发病全过程均呈正相关(r=0.834,P<0.05)。结论:急性脑出血患者疾病过程中血清MMP-9与CRP化具有相关性,可能协同参与脑出血急性期脑水肿和损伤的病理过程。 展开更多
关键词 脑出血 基质金属蛋白酶 C反应蛋白质 血脑屏障
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脐带间充质干细胞体外传代培养后细胞核型稳定性
4
作者 崔冬冰 何志旭 +1 位作者 李永念 王凤昌 《贵阳医学院学报》 CAS 2013年第5期449-453,457,共6页
目的：研究脐带间充质干细胞（uc-MSCs）在经过培养和传代后是否会出现染色体异常改变。方法：收集剖宫产足月胎儿脐带，采用胶原酶加胰酶消化法和机械法分离出UC-MSCs间充质干细胞贴壁培养传代，观察细胞形态、免疫表型及细胞增殖实验... 目的：研究脐带间充质干细胞（uc-MSCs）在经过培养和传代后是否会出现染色体异常改变。方法：收集剖宫产足月胎儿脐带，采用胶原酶加胰酶消化法和机械法分离出UC-MSCs间充质干细胞贴壁培养传代，观察细胞形态、免疫表型及细胞增殖实验等生物学特性，利用G显带分析原代（Po）和第3～6代（P3～P6）细胞的染色体核型。结果：染色体核型分析显示,P0和P3～P6UC-MSCs均为正常二倍体核型，G显带未见染色体结构异常；UC-MSCs呈成纤维样形态生长，P3～P6代高表达CD73、CD90、CD44，并且UC-MSCs在培养2～3d时达到对数增长期。结论：UC-MSCs在体外连续传代培养6代以内染色体结构稳定，未出现染色体异常改变。 展开更多
关键词 脐带 间充质干细胞 连续传代 核型分析 细胞 培养的
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PKH26荧光标记牛尾髓核细胞的实验研究 被引量：2
5
作者 丁晓明 徐宝山 +6 位作者 伍耀宏 许海委 杨强 马信龙 张春秋 李秀兰 张扬 《天津医药》 CAS 北大核心 2014年第9期849-852,I0001,共5页
目的探讨PKH26荧光标记在牛尾髓核细胞的应用,为髓核组织工程的体内研究提供可示踪的种子细胞。方法从牛尾椎间盘中分离髓核组织,通过酶消化法获取原代细胞,倒置显微镜下观察,P1代髓核细胞进行番红O、甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染... 目的探讨PKH26荧光标记在牛尾髓核细胞的应用,为髓核组织工程的体内研究提供可示踪的种子细胞。方法从牛尾椎间盘中分离髓核组织,通过酶消化法获取原代细胞,倒置显微镜下观察,P1代髓核细胞进行番红O、甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色,对P1代髓核细胞进行PKH26荧光染料标记,并对标记后细胞的活性、荧光强度(0、14、28 d)、增殖特性及基因表达进行评估。结果分离得到的髓核细胞数为(1.56±0.35)×106/g,倒置显微镜下,原代细胞培养4 d开始贴壁,细胞成群生长,14 d铺满瓶底,原代细胞、P1代细胞均呈类软骨样细胞形态;P1代髓核细胞甲苯胺蓝染色异染、番红O染色和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色阳性;PKH26标记前后细胞活性均在95%以上,1、14、28 d呈递减趋势,但28 d时细胞仍可检测出较强的荧光,标记后的细胞增殖及基因表达(Ⅰ、Ⅱ型胶原及聚集蛋白聚糖)与标记前的细胞相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论牛尾髓核组织中可以分离出数量满意的髓核细胞,且具有软骨样细胞的表型,可以用作种子细胞;PKH26标记后的髓核细胞无生物学特性的变化,可以用作髓核细胞体内研究的示踪染料。 展开更多
关键词 组织工程 椎间盘 牛尾 髓核细胞 PKH26
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PKH26标记和分子荧光活体成像技术在软骨组织工程研究中的应用 被引量：1
6
作者 祁霁舟 徐宝山 +2 位作者 彭江 许文静 杨强 《天津医药》 CAS 北大核心 2014年第12期1156-1159,I0010,共5页
目的探讨PKH26荧光标记和分子荧光活体成像技术在软骨组织工程中的应用。方法用PKH26荧光标记犬软骨细胞,种植到多孔支架上,体外培养1周后异位移植到裸鼠背部,4周后用分子荧光活体成像系统示踪,并与X线检查结果对比。然后处死裸鼠取材,... 目的探讨PKH26荧光标记和分子荧光活体成像技术在软骨组织工程中的应用。方法用PKH26荧光标记犬软骨细胞,种植到多孔支架上,体外培养1周后异位移植到裸鼠背部,4周后用分子荧光活体成像系统示踪,并与X线检查结果对比。然后处死裸鼠取材,与免疫组织化学染色和免疫荧光观察结果对比。结果 4周分子荧光活体成像系统观察裸鼠背部标本处呈圆形强荧光,表明组织工程软骨在裸鼠体内生长良好。组织学切片结果显示番红O染色、Ⅱ型胶原免疫组化染色和甲苯胺蓝染色阳性,荧光显微镜下观察结果显示组织工程化软骨中细胞均呈红色荧光,Ⅱ型胶原免疫荧光染色呈绿色荧光,叠加后呈黄色荧光。结论 PKH26荧光标记和分子荧光活体成像2种方法结合应用于软骨组织工程中,能够较理想地且大体无创伤性评估组织工程化软骨组织在体内的生长情况。 展开更多
关键词 软骨细胞 组织工程 荧光 PKH26
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PKH26荧光素标记脂肪间充质干细胞的生物学特性的研究 被引量：1
7
作者 黄绍代 王玉 +9 位作者 鲁长风 陈鹏 王冲 刘雪剑 孙百川 张凯红 荆晓光 胡丹 彭江 田建伟 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2018年第9期1343-1347,共5页
目的研究PKH26荧光素染料对脂肪间充质干细胞(ADSCs)生物学特性的影响。方法分离培养新生SD大鼠的ADSCs,通过流式细胞仪、成脂、成骨、成软骨诱导鉴定ADSCs的免疫表型和多向分化的能力。用细胞膜荧光素染料PKH26对第二代脂肪干细胞进行... 目的研究PKH26荧光素染料对脂肪间充质干细胞(ADSCs)生物学特性的影响。方法分离培养新生SD大鼠的ADSCs,通过流式细胞仪、成脂、成骨、成软骨诱导鉴定ADSCs的免疫表型和多向分化的能力。用细胞膜荧光素染料PKH26对第二代脂肪干细胞进行标记,通过倒置相差显微镜、荧光显微镜以及CCK-8法评估标记后细胞的形态、荧光强度以及增殖活性的变化。结果成功分离和培养ADSCs,其纯度达95%以上,并成功将ADSCs诱导成脂肪、骨、软骨;PKH26标记24 h后,在荧光显微镜下可见细胞膜上均匀分布的强红色荧光,细胞的形态以及增殖活性与未标记的细胞无明显差异。结论 PKH26荧光素染料标记后对ADSCs的形态及增殖活性无明显影响,是一种理想的细胞标志物,能够很好的应用于示踪间充质干细胞的迁移转归及干细胞标记等方面的研究。 展开更多
关键词 脂肪间充质干细胞 PKH26 细胞标记
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