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新型双荧光素酶启动子报告分析系统的构建与验证
1
作者 吕环环 王胜利 +3 位作者 谢娜娜 党洁 霍正浩 马占兵 《宁夏医科大学学报》 2025年第1期23-30,共8页
目的 构建一种多功能的5’双荧光素酶启动子分析报告系统,该系统同时包含萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶元件,以弥补传统分析启动子活性时需同时转入双质粒的不足。方法 通过基于PCR的长DNA序列准确合成法(PAS)技术,制备含有双酶切位点... 目的 构建一种多功能的5’双荧光素酶启动子分析报告系统,该系统同时包含萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶元件,以弥补传统分析启动子活性时需同时转入双质粒的不足。方法 通过基于PCR的长DNA序列准确合成法(PAS)技术,制备含有双酶切位点的海肾荧光素酶基因和SV40启动子片段,采用重组克隆技术将其插入pGL3-basic质粒中,构建pGL-Duo双荧光素酶启动子分析报告质粒。随后,采用同源重组克隆技术将PGK启动子亚克隆到pGL-Duo质粒的多克隆位点(MCS)区。经酶切分析、DNA测序、293T细胞瞬时转染以及荧光素酶活性检测,验证pGL-Duo双荧光素酶报告系统的功能是否正常。结果 通过酶切分析和DNA测序,确认pGL-Duo报告质粒及其含PGK启动子的版本均构建正确。瞬时转染实验及荧光素酶活性检测显示,PGK启动子能有效启动萤火虫荧光素酶基因表达(P<0.01),双荧光素酶启动子报告分析系统功能正常。结论 成功构建并验证了一种新型双荧光素酶启动子报告分析系统,可为启动子转录活性及转录因子调控研究提供高效且便利的方案,适用于大规模启动子筛选、验证以及转录因子表达调控的研究。 展开更多
关键词 双荧光素酶 质粒 基因表达 启动子
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膀胱癌组织中CBX7 mRNA、miR-21表达及诊断价值分析
2
作者 胡伟强 王龙 +6 位作者 杜岳峰 甘为民 张刘勇 刘坤龙 张振琪 可龙龙 王琰涛 《转化医学杂志》 2025年第6期25-29,共5页
目的检测在膀胱癌组织中色素框同源蛋白7(CBX7 mRNA)、微小核糖核酸21(miR-21)的表达情况,并分析二者联合对膀胱癌的诊断价值。方法收集2021年1月至2023年12月于西安高新医院进行手术治疗的120例膀胱癌患者的癌组织和癌旁组织样本,采用... 目的检测在膀胱癌组织中色素框同源蛋白7(CBX7 mRNA)、微小核糖核酸21(miR-21)的表达情况,并分析二者联合对膀胱癌的诊断价值。方法收集2021年1月至2023年12月于西安高新医院进行手术治疗的120例膀胱癌患者的癌组织和癌旁组织样本,采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测CBX7 mRNA和miR-21的表达,分析膀胱癌组织和癌旁组织中CBX7 mRNA和miR-21的表达情况、不同临床病理特征患者膀胱癌组织CBX7 mRNA、miR-21表达情况,采用Pearson相关性分析法分析膀胱癌组织中CBX7 mRNA与miR-21表达的相关性,并采用受试者工作特征(ROC)曲线分析CBX7 mRNA、miR-21对膀胱癌的诊断价值。结果膀胱癌组织中CBX7 mRNA表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05),miR-21表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05)。TMN分期为Ⅲ~Ⅳ期、低分化、有淋巴结转移的患者膀胱癌组织CBX7 mRNA表达低于TMN分期为Ⅰ~Ⅱ期、中高分化、无淋巴结转移的患者(P<0.05),TMN分期为Ⅲ~Ⅳ期、低分化、有淋巴结转移的患者膀胱癌组织miR-21表达高于TMN分期为Ⅰ~Ⅱ期、中高分化、无淋巴结转移的患者(P<0.05)。膀胱癌组织CBX7 mRNA与miR-21表达呈负相关(r=-0.188,P<0.05);CBX7 mRNA、miR-21联合诊断膀胱癌的曲线下面积为0.945,敏感度、特异度分别为96.67%、82.50%。结论膀胱癌组织中CBX7 mRNA表达下调,miR-21表达上调,CBX7 mRNA与miR-21联合检测对膀胱癌的辅助诊断具有更高的价值。 展开更多
关键词 膀胱肿瘤 色素框同源蛋白7 MIR-21
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基于生物信息学分析炎性肠病差异基因表达及ceRNA调控网络
3
作者 郝帅 贺娜 +2 位作者 冯巩 张粉娜 杨永勤 《河北医药》 2025年第4期533-539,共7页
目的炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)是一种慢性肠道炎症性疾病,因其发病机制复杂、病因不明等因素,严重影响患者的生活质量。竞争性内源性RNA(ceRNA)在免疫调节中具有重要作用,构建1个ceRNA免疫调节网络,探讨其在IBD机制... 目的炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)是一种慢性肠道炎症性疾病,因其发病机制复杂、病因不明等因素,严重影响患者的生活质量。竞争性内源性RNA(ceRNA)在免疫调节中具有重要作用,构建1个ceRNA免疫调节网络,探讨其在IBD机制研究、临床诊断和治疗中的潜在作用。方法检索GEO数据库与IBD相关的数据集GSE59071、GSE36807和GSE75214,使用R语言分析差异表达基因(DEGs),并通过starBase数据库、miRTarBase数据库和miRDB数据库预测DEGs的miRNA,LncRNADisease数据库预测IBD相关的lncRNA,使用Cytoscape软件构建lncRNA-miRNA-mRNA ceRNA调控网络。使用DSigDB数据库预测关键基因的药物分子。结果纳入炎症性肠病样本305例和健康样本40例,共筛选出150个共表达DEGs。功能富集分析(GO)显示多数DEGs参与对脂多糖的反应、对细菌来源分子的反应和细胞对生物刺激的反应的生物过程。KEGG通路富集分析显示,DEGs主要集中在IL-17信号通路、补体和凝血级联与TNF信号通路等多个信号通路。通过starBase数据库、miRTarBase数据库和miRDB数据库预测的靶向miRNA和LncRNADisease数据库预测的lncRNA构建1个包含2种lncRNA、104种miRNA和133种mRNA的ceRNA调控网络。同时预测了黄体酮CTD 00006624等关键基因的药物分子。结论研究分析了IBD差异表达基因的生物学功能,并构建了1个与IBD相关的ceRNA调控网络,为IBD发病机制的研究提供了新方法和思路,以及为IBD的诊断和有效治疗提供潜在分子靶点。 展开更多
关键词 IBD 生物信息学分析 竞争性内源性RNA
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黄芪多糖抑制2型糖尿病大鼠肝脏PTP1B的表达改善胰岛素抵抗的机制 被引量：14
4
作者 欧阳静萍 王念 +4 位作者 张德玲 邹丰 刘坚 杨海鹭 徐怡 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期569-570,共2页
关键词 黄芪多糖 2型糖尿病 PTP1B 胰岛素抵抗
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雄激素受体基因E211 G＞A多态性与汉族女性青春期后痤疮的关联性分析 被引量：6
5
作者 田黎明 谢红付 +2 位作者 杨婷 王玮蓁 李吉 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期113-116,共4页
目的:探讨雄激素受体(AR)基因E211G>A单核苷酸多态性与汉族女性青春期后痤疮的关联性,为汉族女性青春期后痤疮发病遗传学研究奠定基础。方法:将女性青春期后痤疮患者79例和正常女性志愿者80例分为女性青春期后痤疮组和女性正常对照组... 目的:探讨雄激素受体(AR)基因E211G>A单核苷酸多态性与汉族女性青春期后痤疮的关联性,为汉族女性青春期后痤疮发病遗传学研究奠定基础。方法:将女性青春期后痤疮患者79例和正常女性志愿者80例分为女性青春期后痤疮组和女性正常对照组,采用PCR技术扩增出AR-E211G>A基因多态位点的片段,用限制性内切酶StuⅠ进行酶切,产物在2%琼脂糖凝胶上电泳,确定G>A基因的3种基因型,即GG、GA、AA,观察两组基因型频数和等位基因型频数分布的差异。结果:女性青春期后痤疮组GA+AA基因型频数低于对照组(P=0.028,OR=0.937,95%CI=0.885～0.992)。女性青春期后痤疮组A等位基因频数低于对照组(P=0.029,OR=0.968,95%CI=0.941～0.996)。结论:AR-E211A等位基因的存在使青春期后女性患痤疮的风险性明显降低。 展开更多
关键词 雄激素受体 基因多态性 女性青春期后痤疮 汉族 遗传学
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外源突变型p53和潜伏膜蛋白1基因在转基因鼠不同器官组织中的表达 被引量：18
6
作者 何迎春 田道法 +2 位作者 田甜 卢芳国 刘宇勤 《中国临床康复》 CSCD 北大核心 2005年第42期99-101,共3页
目的:观察转基因小鼠鼻腔、鼻咽、肺、食道、胃、大肠、肝、肾、脾中外源突变型p53m t和潜伏膜蛋白1基因的表达情况。方法:实验于2005-03/04在湖南中医学院中西医结合系基础研究室完成。选取4月龄转p53m t和潜伏膜蛋白1基因F0代小鼠1只... 目的:观察转基因小鼠鼻腔、鼻咽、肺、食道、胃、大肠、肝、肾、脾中外源突变型p53m t和潜伏膜蛋白1基因的表达情况。方法:实验于2005-03/04在湖南中医学院中西医结合系基础研究室完成。选取4月龄转p53m t和潜伏膜蛋白1基因F0代小鼠1只,以正常同龄未转基因C57BL/6J小鼠4只作为对照。采用免疫组化分别检测转基因鼠和对照鼠鼻腔、鼻咽、肺、食道、胃、大肠、肝、肾、脾中p53m t和潜伏膜蛋白1基因的表达强度,用图像分析系统测定阳性反应物的平均灰度值。系统设定白色最大灰度为256,黑色最小灰度为0。灰度值越小,代表阳性反映程度越高。结果:实验纳入转基因鼠1只,对照鼠4只,均进入结果分析。①蛋白质阳性表达信号的定位分布:转基因鼠p53m t和潜伏膜蛋白1基因的免疫组化阳性信号均为棕黄色的颗粒或斑块,表达量高,p53m t蛋白绝大部分分布于细胞膜和胞浆内,少数位于细胞核中。对照鼠p53mt蛋白在组织中呈弱表达,潜伏膜蛋白1的蛋白阳性信号主要位于上皮细胞的细胞膜和胞浆中。②转基因鼠和对照鼠不同组织部位中p53m t基因表达的平均灰度值:转基因鼠食道、肝、脾中平均灰度值较高(131.75±17.25,135.15±13.14,139.42±11.55),在鼻腔黏膜、鼻咽组织、大肠中平均灰度值较低(96.61±12.43,109.26±9.90,109.45±6.72)。除了胃、脾外,各组织部位与对照鼠比较均有显著差异(P<0.05)。③转基因鼠和对照鼠不同组织部位中潜伏膜蛋白1基因表达的平均灰度值:转基因鼠鼻咽部平均灰度值最低(106.75±19.57),其次为鼻腔、食道、肺、胃,而在大肠、肝、脾中表达水平较高(152.29±12.17,134.98±17.79,158.35±10.75)。除鼻腔、大肠、肝、脾外,各组织部位中潜伏膜蛋白1基因的表达水平与对照鼠比较均有显著差异(P<0.05)。④转基因鼠不同组织部位中p53mt基因与潜伏膜蛋白1基因表达水平的相关性分析:转基因鼠鼻腔黏膜、鼻咽组织、食道、肺、胃、大肠、肝、肾、脾中潜伏膜蛋白1基因表达水平和p53m t基因表达水平无相关性(相关系数｜r｜分别为0.744,0.459,0.589,0.722,0.258,0.252,0.337,0.111,0.209)。结论:外源突变型p53m t基因在转基因鼠鼻腔、鼻咽和大肠中表达水平较高,潜伏膜蛋白1基因在鼻咽组织中表达呈最高。两种基因在不同器官组织部位的表达均存在显著性差异,尤以潜伏膜蛋白1基因表达的组织特异性较强,但两种基因的表达不存在相关性。 展开更多
关键词 转基因 蛋白质P53 病毒包膜蛋白质类 基因表达
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葡萄胎发病新基因F10在原发性肝癌中的表达分析 被引量：6
7
作者 周瑾 邢福祺 +2 位作者 余良宽 庞战军 冯桂萍 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期601-603,共3页
目的通过检测原发性肝细胞癌中F10基因的表达,探讨该基因对肝细胞癌发生和发展的可能作用。方法采用地高辛标记F10探针,原位杂交检测人肝细胞癌组织及癌旁组织F10基因的表达水平;通过实时荧光定量PCR方法,在PEABI7000型荧光定量PCR仪上... 目的通过检测原发性肝细胞癌中F10基因的表达,探讨该基因对肝细胞癌发生和发展的可能作用。方法采用地高辛标记F10探针,原位杂交检测人肝细胞癌组织及癌旁组织F10基因的表达水平;通过实时荧光定量PCR方法,在PEABI7000型荧光定量PCR仪上检测肝细胞癌患者手术切除的癌组织及癌旁组织F10基因拷贝数。结果原位杂交结果表明肝癌组织F10基因阳性表达,癌旁组织F10基因不表达;荧光定量PCR显示8例肝细胞癌标本中有6例肿瘤组织中F10基因表达明显高于癌旁组织,其中2例高出4倍以上。结论原发性肝癌组织中存在F10基因的高表达,相应的癌旁组织中未见其表达,提示F10基因在肝细胞癌的发生、发展中起一定的作用。 展开更多
关键词 基因 F10 原位杂交 实时荧光定量聚合酶链反应 癌 肝细胞
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中国南极越冬队员外周血生物钟基因Clock和Bmal1昼夜性节律表达赴南极前后对比 被引量：8
8
作者 余万霰 陈绍平 +3 位作者 夏艳芝 王国卿 王洁 张永虹 《南昌大学学报（医学版）》 CAS 2012年第2期1-5,共5页
目的观察中国南极考察队越冬队员外周血淋巴细胞钟基因Clock和Bmal 1表达昼夜节律性变化。方法在中国第25次南极考察队越冬队员中选择8名队员,平均年龄38岁,均为男性,在1个昼夜周期内设立6个时点(ZT):02:00、06:00、10:00、14:00、18:00... 目的观察中国南极考察队越冬队员外周血淋巴细胞钟基因Clock和Bmal 1表达昼夜节律性变化。方法在中国第25次南极考察队越冬队员中选择8名队员,平均年龄38岁,均为男性,在1个昼夜周期内设立6个时点(ZT):02:00、06:00、10:00、14:00、18:00和22:00,每一时点采集外周静脉血6mL,采集赴南极前后2组血样。用实时定量RT-PCR方法,测定不同昼夜时点(ZT)样品中核心钟基因Clock和Bmal 1的mRNA表达量,通过余弦法和Clock Lab软件获取节律参数,进行赴南极前后对比。结果赴南极前,8个样本Clock和Bmal 1的mRNA表达均有显著昼夜节律特征(P<0.05),Clock的峰值相位位于-335.85±13.80,Bmal 1的峰值相位位于-307.12±8.17。赴南极后,仅2例Clock和3例Bmal 1表达还存在显著昼夜节律变化。Clock的峰值相位移位到-42.28±5.27,Bmal 1的同峰值相位移位到-184.58±29.58。结论南极特殊周期环境对人体生物钟基因表达的昼夜节律会产生影响。 展开更多
关键词 CLOCK基因 Bmal1基因 昼夜节律 外周血淋巴细胞 南极 越冬队员 中国
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JTV1对K562细胞增殖和凋亡的影响及其机制 被引量：4
9
作者 吴燕 刘北忠 +6 位作者 王翀 钟梁 朱丹 王春光 金丹婷 高艳军 黎亮 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期452-455,共4页
目的观察上调JTV1基因的表达对人白血病K562细胞系增殖与凋亡的影响并探讨其机制。方法将携带有JTV1基因的pcDNA3.1-JTV1载体转染人K562细胞作为阳性转染组,转染pcDNA3.1空载体作为空载体转染组,未转染的K562细胞为未转染组。通过集落... 目的观察上调JTV1基因的表达对人白血病K562细胞系增殖与凋亡的影响并探讨其机制。方法将携带有JTV1基因的pcDNA3.1-JTV1载体转染人K562细胞作为阳性转染组,转染pcDNA3.1空载体作为空载体转染组,未转染的K562细胞为未转染组。通过集落形成实验检测各组K562细胞的增殖能力,采用流式细胞术与Annexin-PI双染色结合分析细胞周期和细胞凋亡率,同时采用RT-PCR法检测JTV1基因及凋亡相关基因Bcl-2、Bax、C-myc mRNA水平的变化,采用Western blotting检测基因JTV1及凋亡相关基因Bcl-2、Bax、C-myc蛋白水平的变化。结果集落形成实验结果显示上调JTV1基因表达后K562细胞的增殖能力明显降低。流式细胞术与Annexin-PI双染色检测结果显示,与空载体转染组及未转染组相比,阳性转染组K562细胞的G期细胞比例明显升高(P<0.05);阳性转染组中Bax基因的mRNA水平和蛋白水平较空载体转染组及未转染组均明显上升,而Bcl-2基因和C-myc基因的mRNA水平和蛋白水平则明显下调(P<0.05)。结论 JTV1基因过表达可能通过抑制基因Bcl-2和C-myc的表达增强基因Bax的表达,从而抑制K562细胞系的增殖并促进其凋亡。 展开更多
关键词 基因 jtv-1 基因 BCL-2 基因 C-MYC 基因 BAX K562细胞
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甘草黄酮对2型糖尿病大鼠骨骼肌中PPARγ蛋白的影响 被引量：6
10
作者 赵海燕 杨少娟 +1 位作者 马永平 王彦芳 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第21期3246-3249,共4页
目的研究甘草黄酮(LF)对实验性2型糖尿病大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)表达的影响,探索LF改善糖尿病大鼠胰岛素抵抗的分子机制。方法采用高脂高糖饲料喂养结合一次性小剂量腹腔注射STZ的方法建立2型糖尿病实验大鼠模型。将实... 目的研究甘草黄酮(LF)对实验性2型糖尿病大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)表达的影响,探索LF改善糖尿病大鼠胰岛素抵抗的分子机制。方法采用高脂高糖饲料喂养结合一次性小剂量腹腔注射STZ的方法建立2型糖尿病实验大鼠模型。将实验大鼠分为正常对照组、糖尿病模型组、甘草黄酮治疗组和阳性对照组。分别以溶剂(1,2-丙二醇)、甘草黄酮[300 mg/(kg·d)]或吡格列酮[10 mg/(kg·d)]连续灌胃6周。采用免疫印迹(Western blot)方法检测各组大鼠骨骼肌中PPARγ蛋白的表达量。结果糖尿病模型组骨骼肌中PPARγ蛋白的表达量较正常对照组降低了45.06%(P<0.01)。与糖尿病模型组相比,甘草黄酮治疗组和阳性对照组骨骼肌中PPARγ蛋白的表达量分别提高了69.87%(P<0.01)和71.00%(P<0.01)。结论甘草黄酮能显著提高糖尿病大鼠骨骼肌中PPARγ蛋白的表达量,提示甘草黄酮改善胰岛素抵抗的部分原因可能与PPARγ蛋白表达的上调有关。 展开更多
关键词 甘草黄酮 2型糖尿病 胰岛素抵抗 PPARΓ 蛋白表达
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应用微卫星标记分析中华白海豚遗传多样性 被引量：6
11
作者 陈红珊 陈裕隆 +1 位作者 杨金玲 吴玉萍 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第B04期66-67,共2页
[目的]初步了解中华白海豚的遗传多样性。[方法]利用4个微卫星标记检测中华白海豚的多态信息含量、杂合度和等位基因数。[结果]微卫星座位PMC2、PMC4在珠海海域的中华白海豚中呈中度多态,PMC2、PMC3在厦门海域的中华白海豚中呈中度多态... [目的]初步了解中华白海豚的遗传多样性。[方法]利用4个微卫星标记检测中华白海豚的多态信息含量、杂合度和等位基因数。[结果]微卫星座位PMC2、PMC4在珠海海域的中华白海豚中呈中度多态,PMC2、PMC3在厦门海域的中华白海豚中呈中度多态,在两个海域中均检测出多态性的座位有PMC2和PMC4。[结论]微卫星座位PMC2、PMC4可用于中华白海豚遗传多样性水平的评估。中华白海豚在本研究采用的4个座位中显示的遗传多样性程度不高。 展开更多
关键词 微卫星 多态性 中华白海豚 遗传
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弓形虫GRA1基因的克隆与原核表达 被引量：3
12
作者 孙玲 刘慧颖 +3 位作者 李淑红 宫鹏涛 张西臣 宁静 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期631-635,共5页
目的:克隆并构建PET-28a-GRA1重组表达载体,转化入大肠杆菌E.coli BL21,诱导表达并鉴定,为进一步研究GRA1的生物学特性和免疫保护作用奠定实验基础。方法:根据GenBank中编码GRA1的已知基因序列设计并合成一对引物,应用PCR技术扩增GRA1基... 目的:克隆并构建PET-28a-GRA1重组表达载体,转化入大肠杆菌E.coli BL21,诱导表达并鉴定,为进一步研究GRA1的生物学特性和免疫保护作用奠定实验基础。方法:根据GenBank中编码GRA1的已知基因序列设计并合成一对引物,应用PCR技术扩增GRA1基因,插入原核表达载体PET-28a中,构建重组表达质粒PET-28a-GRA1,转化E.coli BL21,IPTG诱导后,进行SDS-PAGE和Western blotting鉴定。结果:克隆的GRA1基因与GenBank收录的基因序列同源性为100%。对重组质粒进行酶切和PCR鉴定,获得573bp大小的目的基因片段,与预期结果相符,成功地构建了重组质粒PET-28a-GRA1。SDS-PAGE电泳分析表明重组蛋白条带的相对分子质量约为24 000,Western blotting显示重组蛋白能被鼠抗弓形虫血清识别。结论:成功获取GRA1基因,构建了PET-28a-GRA1重组质粒并获得了高效表达。 展开更多
关键词 GRA1基因 原核表达载体 弓形虫 克隆 GRAl SDS-PAGE BLOTTING 重组表达载体
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小鼠吸入性鼠疫病理学和毒力相关基因的体内转录 被引量：5
13
作者 王虹 刘海洪 +7 位作者 吴小红 高亚兵 王津 郭兆彪 彭瑞云 宋亚军 李才 杨瑞馥 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1169-1172,共4页
目的探讨吸入感染鼠疫的发生、发展过程及重要鼠疫菌致病相关基因的体内表达规律。方法采用滴鼻法建立小鼠吸入性鼠疫感染模型,并观察不同感染时间的组织病理学改变;采用免疫组化和逆转录-实时定量PCR方法检测感染小鼠组织中鼠疫菌5种... 目的探讨吸入感染鼠疫的发生、发展过程及重要鼠疫菌致病相关基因的体内表达规律。方法采用滴鼻法建立小鼠吸入性鼠疫感染模型,并观察不同感染时间的组织病理学改变;采用免疫组化和逆转录-实时定量PCR方法检测感染小鼠组织中鼠疫菌5种毒力相关蛋白及其基因(caf1、lcrV、lcrG、pla、psaA)的表达和转录。结果鼠疫菌吸入后可诱导小鼠产生肺鼠疫型和非肺鼠疫型鼠疫。在小鼠体内感染状态下的鼠疫菌体表面能够检测到上述5种毒力相关蛋白的表达。其毒力基因的转录呈时相、组织差异性。结论在体内感染状态下,5种毒力相关蛋白均呈菌体表面可检测到的表达;各毒力相关基因在不同时间、不同组织中转录具有很大的差异性,这种差异性可能与其功能及宿主细胞的作用密切相关。 展开更多
关键词 耶尔森菌 鼠疫 组织病理学 毒力相关基因
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雌激素上调LRP16基因表达靶启动子区的研究 被引量：7
14
作者 司艺玲 韩为东 +4 位作者 赵亚力 李琦 李雪 宋海静 母义明 《军医进修学院学报》 CAS 北大核心 2006年第3期161-163,共3页
目的:鉴定雌激素上调LRP16基因表达关键的靶启动子区域并探讨其分子机制。方法:对LRP16基因5′-侧翼2.6kb中的-213bp至-24bp启动子区进行亚克隆,构建5个控制不同启动子长度的荧光素酶报告重组子pS7-11,以既往构建的pS5、pS6为对照,与雌... 目的:鉴定雌激素上调LRP16基因表达关键的靶启动子区域并探讨其分子机制。方法:对LRP16基因5′-侧翼2.6kb中的-213bp至-24bp启动子区进行亚克隆,构建5个控制不同启动子长度的荧光素酶报告重组子pS7-11,以既往构建的pS5、pS6为对照,与雌激素受体α(ERα)真核表达载体共转染MCF-7和Hela细胞,加入雌二醇(17β-E2)刺激后通过Luciferase assay方法测定相对荧光素酶活性。结果:MCF-7和Hela两个细胞系各组相对荧光素酶活性值上升趋势相平行,-213bp至-24bp区域各启动子克隆均具有较高的转激活活性,特别是pS10,在MCF-7细胞中对报告基因的上调活性达427倍,远远高于pS5。结论:E2主要通过-213bp至-24bp区域增强LRP16基因的转录,其中-213bp至-126bp(pS10)应为关键的启动子区。 展开更多
关键词 雌激素 基因表达调控 LRP16 启动区(遗传学)
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中国白兔白介素-10基因的克隆、表达及其抗体的制备 被引量：7
15
作者 孟庆玲 才学鹏 +4 位作者 乔军 景志忠 张艳 田广孚 郭爱疆 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2007年第3期203-207,共5页
目的克隆并表达中国白兔IL-10基因,制备抗IL-10多克隆抗体。方法运用RT-PCR对从ConA诱导后的中国白兔外周血单核细胞(PMBCr)总RNA中扩增IL-10基因,克隆后进行测序和遗传进化分析,同时将其亚克隆pET28a中,在大肠杆菌中诱导表达,并用纯化... 目的克隆并表达中国白兔IL-10基因,制备抗IL-10多克隆抗体。方法运用RT-PCR对从ConA诱导后的中国白兔外周血单核细胞(PMBCr)总RNA中扩增IL-10基因,克隆后进行测序和遗传进化分析,同时将其亚克隆pET28a中,在大肠杆菌中诱导表达,并用纯化的表达产物制备多克隆抗体。结果该基因全长537 bp,编码178个氨基酸。与欧洲兔IL-10基因同源性很高,但与鼠、鸡、河豚和斑马鱼等不同物种IL-10基因差异较大。经IPTG诱导后,重组菌体裂解物经SDS-PAGE电泳可检测到相对分子质量为23.4×103的重组蛋白。Western blot分析表明,中国白兔IL-10基因已经表达。重组表达的蛋白量可占菌体蛋白的15.2%。结论成功实现了中国白兔IL-10的原核表达,制备了小鼠抗兔IL-10的多克隆抗体。 展开更多
关键词 白细胞介素.10基因 表达 抗体制备
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巴马香猪Toll样受体4基因cDNA的克隆及生物信息学分析 被引量：7
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作者 巨向红 徐汉进 +3 位作者 雍艳红 安立龙 效梅 许英梅 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2010年第3期185-190,I0001,共7页
目的研究TLR4在猪自然免疫中的作用及机制,为抗病育种及免疫佐剂的开发提供依据。方法利用NCBI公布的TLR4基因序列设计引物,RT-PCR技术克隆巴马香猪TLR4基因。结果所得基因序列提交GenBank,登录号:GQ304754。经序列分析,发现巴马香猪TLR... 目的研究TLR4在猪自然免疫中的作用及机制,为抗病育种及免疫佐剂的开发提供依据。方法利用NCBI公布的TLR4基因序列设计引物,RT-PCR技术克隆巴马香猪TLR4基因。结果所得基因序列提交GenBank,登录号:GQ304754。经序列分析,发现巴马香猪TLR4基因开放阅读框长2526 bp,编码785个氨基酸,该蛋白等电点为6.58,分子量为96.4×103;与普通猪比对发现巴马香猪TLR4基因有5个碱基发生突变;与小鼠、狗、鸡、牛、羊和人的同源性分别为71.9%、81.5%、54.2%、86.4%、85.5%和81.9%;TLR4膜外区蛋白为背侧多个α螺旋和内侧多个β折叠平行交替排列构成一个弯曲状螺旋结构;N末端存在信号肽,且可能在23～24位氨基酸处存在裂解位点;胞外区有13个明显的LRR,分别位于第53～74、77～100、101～124、149～173、174～192、201～225、372～393、398～429、446～469、470～494、495～518、519～541、543～566位氨基酸区;膜外区含8个N连接的糖基化位点。结论本研究成功克隆巴马香猪TLR4基因,为进一步研究该基因的功能和蛋白质的特性奠定了基础。 展开更多
关键词 猪 TOLL样受体 生物信息学分析
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KLK6 mRNA在乳腺癌中的表达及其临床病理和生物学意义 被引量：3
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作者 胡成进 陈英剑 +2 位作者 闻新棉 孙晓明 杨道理 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1085-1087,共3页
目的对正常乳腺组织和癌组织KLK6 mRNA进行定量,分析其表达与临床病理特征的关系,并探讨乳腺癌细胞株MCF-7中KLK6基因被沉默后细胞增殖及凋亡的变化。方法应用实时荧光定量PCR检测48例乳腺癌切除组织中KLK6基因mRNA的表达量,并分析KLK6 ... 目的对正常乳腺组织和癌组织KLK6 mRNA进行定量,分析其表达与临床病理特征的关系,并探讨乳腺癌细胞株MCF-7中KLK6基因被沉默后细胞增殖及凋亡的变化。方法应用实时荧光定量PCR检测48例乳腺癌切除组织中KLK6基因mRNA的表达量,并分析KLK6 mRNA的表达量与ER、PR及肿瘤转移情况的相关性。以体外化学合成的siRNA干扰乳腺癌细胞株MCF-7中KLK6基因的表达,分析细胞周期、细胞凋亡及细胞形态的变化。结果KLK6 mRNA在73%(35/48)的乳腺癌组织中表达水平增高,明显高于正常组织(P<0.01),有淋巴结转移的患者癌组织中的表达水平明显低于未转移组(P<0.05);ER(+)组低于ER(-)组(P<0.05);PR(+)组与PR(-)组差异不明显(P>0.05);与乳腺癌相关基因CerbB-2的表达无相关性(P>0.05)。MCF-7细胞中KLK6基因表达沉默后,S期细胞增加13.23%,细胞凋亡无明显变化。结论KLK6 mRNA在乳腺癌组织表达增高,并与ER状态及肿瘤转移情况有关。体外MCF-7细胞株和体内移植瘤KLK6基因表达沉默后肿瘤细胞生长加快。提示KLK6基因表达受雌激素下调的影响,是促乳腺癌细胞增殖的抑制因子,从而为乳腺癌的防治提供了新思路。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 KLK6 荧光定量PCR SIRNA
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TNF-α在饮食诱导糖尿病大鼠肝脏的表达及罗格列酮的干预研究 被引量：5
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作者 王战建 张耀 +4 位作者 苏杰英 庞建华 宋庆芳 王振贤 徐焕宇 《河北医药》 CAS 2007年第1期33-35,共3页
目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在高糖、高脂饮食诱导的2型糖尿病大鼠肝脏的表达以及罗格列酮对2型糖尿病合并脂肪肝的治疗作用。方法通过高糖、高脂饮食结合小剂量链脲佐菌素的方法建立2型糖尿病大鼠合并脂肪肝的动物模型,再给予罗... 目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在高糖、高脂饮食诱导的2型糖尿病大鼠肝脏的表达以及罗格列酮对2型糖尿病合并脂肪肝的治疗作用。方法通过高糖、高脂饮食结合小剂量链脲佐菌素的方法建立2型糖尿病大鼠合并脂肪肝的动物模型,再给予罗格列酮进行干预治疗。4周、8周末测量大鼠血糖、血脂和胰岛素水平,18周末测各组大鼠血糖、血清血脂、胰岛素、丙氨碱转氨酶、TNF-α和瘦素水平,并检测TNF-α在肝脏的蛋白表达水平。结果TNF-α在糖尿病组大鼠肝脏的表达明显增加,罗格列酮可以显著降低糖尿病大鼠血糖、血脂和肝脏的脂肪含量,改善胰岛素抵抗状态,降低TNF-α在肝脏的表达水平。结论罗格列酮对合并脂肪肝的糖尿病大鼠具有一定的治疗作用。 展开更多
关键词 2型糖尿病 非酒精性脂肪肝 胰岛素抵抗 肿瘤坏死因子-Α 罗格列酮
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高脂与高果糖喂养大鼠对骨骼肌脂代谢相关蛋白基因表达的影响 被引量：4
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作者 任路平 陈树春 +3 位作者 宋光耀 李凡 孙文 彭兰博 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期654-657,共4页
目的观察高脂、高果糖饮食喂养大鼠骨骼肌细胞内脂代谢相关蛋白基因表达的变化,比较两种不同饮食因子对大鼠肌肉脂代谢的影响。方法 Wistar雄性大鼠随机分为对照组、高脂组及高果糖组,分别喂养8周,测定3组大鼠空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素... 目的观察高脂、高果糖饮食喂养大鼠骨骼肌细胞内脂代谢相关蛋白基因表达的变化,比较两种不同饮食因子对大鼠肌肉脂代谢的影响。方法 Wistar雄性大鼠随机分为对照组、高脂组及高果糖组,分别喂养8周,测定3组大鼠空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、骨骼肌三酰甘油(TG),正常葡萄糖高胰岛素钳夹技术测定葡萄糖输注率(GIR),并测定骨骼肌脂质转运相关蛋白:脂蛋白酯酶(LPL)和脂肪酸转位酶(FAT/CD36);脂质合成相关蛋白:肌肉固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)、脂肪酸合成酶(FAS)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、硬脂酰CoA去饱和酶(SCD-1)和脂质氧化相关蛋白:肉毒碱棕榈酰基转移酶1β(CPTⅠβ)、解偶联蛋白3(UCP3)的基因表达。结果与对照组相比,高脂组及高果糖组FBG、FINS、骨骼肌TG均增高,差异有统计学意义(P<0.05);而GIR则显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,高脂组及高果糖组中LPL、FAT/CD36和SREBP-1c、FAS、ACC、SCD-1的基因表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05);同时,CPTⅠβ和UCP3的基因表达亦增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论高脂饮食和高果糖饮食均可引起机体的胰岛素抵抗及骨骼肌脂质堆积,肌肉内脂肪堆积与脂质转运增强、脂质合成增加有关,同时肌肉内脂质氧化相关酶类基因表达亦适应性增加。 展开更多
关键词 胰岛素抵抗 肌 骨骼 甘油三酯类
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脂毒性与2型糖尿病大鼠β细胞凋亡关系的研究 被引量：4
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作者 向薇 黄贵心 +1 位作者 石锋 黄晓君 《中国糖尿病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期60-62,共3页
目的探讨脂毒性对β细胞凋亡的作用及其作用机制,了解其与T2DM发病的关系。方法高脂饲养结合STZ小剂量注射诱导正常SD大鼠发生T2DM,检测凋亡的β细胞,比较各组血清相应指标。结果所造模型符合T2DM发病特点,TG、TC、FBG均高于其他组,β... 目的探讨脂毒性对β细胞凋亡的作用及其作用机制,了解其与T2DM发病的关系。方法高脂饲养结合STZ小剂量注射诱导正常SD大鼠发生T2DM,检测凋亡的β细胞,比较各组血清相应指标。结果所造模型符合T2DM发病特点,TG、TC、FBG均高于其他组,β细胞凋亡率增加,且与血糖水平呈正相关。结论脂毒性促进β细胞凋亡增加,β细胞功能受损,最终导致T2DM发生。 展开更多
关键词 糖尿病 2型 脂毒性 Β细胞 凋亡
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