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新型双荧光素酶启动子报告分析系统的构建与验证
1
作者 吕环环 王胜利 +3 位作者 谢娜娜 党洁 霍正浩 马占兵 《宁夏医科大学学报》 2025年第1期23-30,共8页
目的 构建一种多功能的5’双荧光素酶启动子分析报告系统,该系统同时包含萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶元件,以弥补传统分析启动子活性时需同时转入双质粒的不足。方法 通过基于PCR的长DNA序列准确合成法(PAS)技术,制备含有双酶切位点... 目的 构建一种多功能的5’双荧光素酶启动子分析报告系统,该系统同时包含萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶元件,以弥补传统分析启动子活性时需同时转入双质粒的不足。方法 通过基于PCR的长DNA序列准确合成法(PAS)技术,制备含有双酶切位点的海肾荧光素酶基因和SV40启动子片段,采用重组克隆技术将其插入pGL3-basic质粒中,构建pGL-Duo双荧光素酶启动子分析报告质粒。随后,采用同源重组克隆技术将PGK启动子亚克隆到pGL-Duo质粒的多克隆位点(MCS)区。经酶切分析、DNA测序、293T细胞瞬时转染以及荧光素酶活性检测,验证pGL-Duo双荧光素酶报告系统的功能是否正常。结果 通过酶切分析和DNA测序,确认pGL-Duo报告质粒及其含PGK启动子的版本均构建正确。瞬时转染实验及荧光素酶活性检测显示,PGK启动子能有效启动萤火虫荧光素酶基因表达(P<0.01),双荧光素酶启动子报告分析系统功能正常。结论 成功构建并验证了一种新型双荧光素酶启动子报告分析系统,可为启动子转录活性及转录因子调控研究提供高效且便利的方案,适用于大规模启动子筛选、验证以及转录因子表达调控的研究。 展开更多
关键词 双荧光素酶 质粒 基因表达 启动子
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膀胱癌组织中CBX7 mRNA、miR-21表达及诊断价值分析
2
作者 胡伟强 王龙 +6 位作者 杜岳峰 甘为民 张刘勇 刘坤龙 张振琪 可龙龙 王琰涛 《转化医学杂志》 2025年第6期25-29,共5页
目的检测在膀胱癌组织中色素框同源蛋白7(CBX7 mRNA)、微小核糖核酸21(miR-21)的表达情况,并分析二者联合对膀胱癌的诊断价值。方法收集2021年1月至2023年12月于西安高新医院进行手术治疗的120例膀胱癌患者的癌组织和癌旁组织样本,采用... 目的检测在膀胱癌组织中色素框同源蛋白7(CBX7 mRNA)、微小核糖核酸21(miR-21)的表达情况,并分析二者联合对膀胱癌的诊断价值。方法收集2021年1月至2023年12月于西安高新医院进行手术治疗的120例膀胱癌患者的癌组织和癌旁组织样本,采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测CBX7 mRNA和miR-21的表达,分析膀胱癌组织和癌旁组织中CBX7 mRNA和miR-21的表达情况、不同临床病理特征患者膀胱癌组织CBX7 mRNA、miR-21表达情况,采用Pearson相关性分析法分析膀胱癌组织中CBX7 mRNA与miR-21表达的相关性,并采用受试者工作特征(ROC)曲线分析CBX7 mRNA、miR-21对膀胱癌的诊断价值。结果膀胱癌组织中CBX7 mRNA表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05),miR-21表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05)。TMN分期为Ⅲ~Ⅳ期、低分化、有淋巴结转移的患者膀胱癌组织CBX7 mRNA表达低于TMN分期为Ⅰ~Ⅱ期、中高分化、无淋巴结转移的患者(P<0.05),TMN分期为Ⅲ~Ⅳ期、低分化、有淋巴结转移的患者膀胱癌组织miR-21表达高于TMN分期为Ⅰ~Ⅱ期、中高分化、无淋巴结转移的患者(P<0.05)。膀胱癌组织CBX7 mRNA与miR-21表达呈负相关(r=-0.188,P<0.05);CBX7 mRNA、miR-21联合诊断膀胱癌的曲线下面积为0.945,敏感度、特异度分别为96.67%、82.50%。结论膀胱癌组织中CBX7 mRNA表达下调,miR-21表达上调,CBX7 mRNA与miR-21联合检测对膀胱癌的辅助诊断具有更高的价值。 展开更多
关键词 膀胱肿瘤 色素框同源蛋白7 MIR-21
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基于生物信息学分析炎性肠病差异基因表达及ceRNA调控网络
3
作者 郝帅 贺娜 +2 位作者 冯巩 张粉娜 杨永勤 《河北医药》 2025年第4期533-539,共7页
目的炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)是一种慢性肠道炎症性疾病,因其发病机制复杂、病因不明等因素,严重影响患者的生活质量。竞争性内源性RNA(ceRNA)在免疫调节中具有重要作用,构建1个ceRNA免疫调节网络,探讨其在IBD机制... 目的炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)是一种慢性肠道炎症性疾病,因其发病机制复杂、病因不明等因素,严重影响患者的生活质量。竞争性内源性RNA(ceRNA)在免疫调节中具有重要作用,构建1个ceRNA免疫调节网络,探讨其在IBD机制研究、临床诊断和治疗中的潜在作用。方法检索GEO数据库与IBD相关的数据集GSE59071、GSE36807和GSE75214,使用R语言分析差异表达基因(DEGs),并通过starBase数据库、miRTarBase数据库和miRDB数据库预测DEGs的miRNA,LncRNADisease数据库预测IBD相关的lncRNA,使用Cytoscape软件构建lncRNA-miRNA-mRNA ceRNA调控网络。使用DSigDB数据库预测关键基因的药物分子。结果纳入炎症性肠病样本305例和健康样本40例,共筛选出150个共表达DEGs。功能富集分析(GO)显示多数DEGs参与对脂多糖的反应、对细菌来源分子的反应和细胞对生物刺激的反应的生物过程。KEGG通路富集分析显示,DEGs主要集中在IL-17信号通路、补体和凝血级联与TNF信号通路等多个信号通路。通过starBase数据库、miRTarBase数据库和miRDB数据库预测的靶向miRNA和LncRNADisease数据库预测的lncRNA构建1个包含2种lncRNA、104种miRNA和133种mRNA的ceRNA调控网络。同时预测了黄体酮CTD 00006624等关键基因的药物分子。结论研究分析了IBD差异表达基因的生物学功能,并构建了1个与IBD相关的ceRNA调控网络,为IBD发病机制的研究提供了新方法和思路,以及为IBD的诊断和有效治疗提供潜在分子靶点。 展开更多
关键词 IBD 生物信息学分析 竞争性内源性RNA
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长期高海拔暴露对大鼠不同肠段肠道菌群组成的影响 被引量：1
4
作者 赵志芳 张栩绯 +2 位作者 孙宁 李昊 马海林 《现代消化及介入诊疗》 2024年第5期552-559,共8页
目的探讨长期高海拔暴露对大鼠不同肠段肠道菌群组成和结构的影响,并对其关键受影响肠段进行初步探索。方法将6周龄SD大鼠随机分为对照组(Control组)与高原暴露组(HA组)。HA组暴露于模拟海拔3500~4000 m的低压氧舱中20周。20周后使用高... 目的探讨长期高海拔暴露对大鼠不同肠段肠道菌群组成和结构的影响,并对其关键受影响肠段进行初步探索。方法将6周龄SD大鼠随机分为对照组(Control组)与高原暴露组(HA组)。HA组暴露于模拟海拔3500~4000 m的低压氧舱中20周。20周后使用高通量16s rRNA测序对两组大鼠进行微生物组分析,并确定十二指肠、空肠、回肠与结肠菌群群落的核心变化。结果高原缺氧环境下,结肠微生物丰富度显著降低,前肠微生物丰富度和多样性无明显变化,结肠的AVD值高于其他肠段,且在高原长期暴露处理后趋向更稳定;在Bray-curtis距离下,回肠与结肠的菌群结构在Control组与HA组之间有显著差异,而十二指肠和空肠则无显著变化;所有肠段的主要菌门为厚壁菌门(Firmicutes),但优势菌属在不同肠段和处理组中有所不同,其中乳杆菌属对菌群变化有较高贡献;回肠的菌属互作网络复杂度高于其他肠段,而结肠的菌属互作关系最少;空肠与回肠主要由丰富类群组成,而结肠的丰富类群占比明显减少,主要为条件稀有类群。十二指肠在Control组与HA组中类群组成有所差异。结论高原长期暴露显著重塑了大鼠回肠及结肠中的肠道菌群组成和结构,尤其是回肠的菌群变化最为明显。回肠的菌群结构在高原缺氧条件下表现出较低的复杂度和关键菌属的突出作用,尤其是乳杆菌属的变化,暗示其具有较高的研究价值。 展开更多
关键词 脑-肠轴理论 肠道菌群 高海拔暴露
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香烟烟雾提取物对破骨细胞体积及整合素αvβ3基因表达的影响 被引量：1
5
作者 秦颖 葛化冰 刘琪 《北京口腔医学》 CAS 2024年第3期184-189,共6页
目的探讨香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)对破骨细胞体积及整合素αvβ3基因表达的影响。方法首先制作CSE溶液,实验采用7周龄C57BL/6J小鼠骨髓单个核细胞加入M-CSF和RANKL诱导生成破骨细胞,将浓度为5%的CSE加入实验组破骨... 目的探讨香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)对破骨细胞体积及整合素αvβ3基因表达的影响。方法首先制作CSE溶液,实验采用7周龄C57BL/6J小鼠骨髓单个核细胞加入M-CSF和RANKL诱导生成破骨细胞,将浓度为5%的CSE加入实验组破骨细胞作用3 d,对照组不加入CSE。通过Trap染色识别对照组和实验组破骨细胞并于光镜下采图;通过甲苯胺蓝染色识别两组破骨细胞在骨片上形成的骨陷窝并于光镜下采图,均用NIH imageJ计算数量及面积。用实时荧光定量聚合酶链反应,以GAPDH作为内参,最后通过2-ΔΔCT计算,以检测Trap、CTR以及整合素αvβ3 mRNA表达水平。通过Western blot检测整合素αvβ3蛋白表达。结果破骨细胞表面积及细胞核数量的计量表明,实验组诱导形成的破骨细胞显著大于对照组(P<0.01)。实验组骨片上吸收陷窝数量及面积明显多于对照组(P<0.05),CSE处理组的TRAP mRNA水平为1.16±0.13,明显高于对照组(P<0.05),CTRmRNA水平为0.38±0.04,明显低于对照组(P<0.01)。CSE处理组的整合素αvβ3mRNA水平为1.75±0.05,显著高于对照组(P<0.01),蛋白质印迹分析结果也明显高于对照组(P<0.05)。结论CSE能显著增加破骨细胞的体积并上调整合素αvβ3的基因表达,并可能对骨吸收有促进作用。 展开更多
关键词 香烟烟雾提取物 破骨细胞 骨吸收陷窝 整合素ΑVΒ3 细胞迁移
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Fam172a基因敲除活化ERK通路加重肝细胞脂毒性损伤的研究
6
作者 李梦绮 韦何锐 +6 位作者 罗婧 安稳 宋阿倩 何玲玲 杨君茹 魏红山 肖凡 《医学分子生物学杂志》 CAS 2024年第6期501-507,共7页
目的初步探讨Fam172a基因敲除加重脂毒性肝细胞损伤的作用机制。方法利用Fam172a基因敲除(Fam172a^(-/-))小鼠,检测肝功能、肝组织脂质堆积和炎症细胞因子水平。利用Fam172a基因敲减的HepG2细胞系,检测细胞内脂质堆积和炎症细胞因子水... 目的初步探讨Fam172a基因敲除加重脂毒性肝细胞损伤的作用机制。方法利用Fam172a基因敲除(Fam172a^(-/-))小鼠,检测肝功能、肝组织脂质堆积和炎症细胞因子水平。利用Fam172a基因敲减的HepG2细胞系,检测细胞内脂质堆积和炎症细胞因子水平。蛋白质印迹检测蛋白质水平。结果与对照组相比,Fam172a^(-/-)小鼠血浆ALT和AST水平明显升高;肝脏结构损伤、脂质堆积和炎症加重;pERK/ERK相对表达水平显著上调。Fam172a基因敲减后,HepG2细胞内甘油三酯含量和炎症细胞因子水平增加,且pERK/ERK相对表达水平也显著升高。然而,应用ERK抑制剂后可明显减轻Fam172a基因敲减造成的脂毒性肝细胞损伤。结论Fam172a基因敲除可通过活化ERK加重肝细胞脂毒性。 展开更多
关键词 Fam172a 细胞外调节蛋白激酶 脂毒性 非酒精性脂肪肝
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细胞色素P450CYP2C9基因多态性对甲苯磺丁脲代谢动力学的影响 被引量：22
7
作者 李健 文思远 +4 位作者 王睿 陈昆 方翼 裴斐 王升启 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期695-699,共5页
目的研究细胞色素P450CYP2C9基因多态性对甲苯磺丁脲代谢动力学的影响。方法用基因芯片对137名健康志愿者进行CYP2C9基因多态性检测,将受试者分为CYP2C9野生型、杂合突变型和纯合突变型3组,用高效液相色谱法检测甲苯磺丁脲在受试者体内... 目的研究细胞色素P450CYP2C9基因多态性对甲苯磺丁脲代谢动力学的影响。方法用基因芯片对137名健康志愿者进行CYP2C9基因多态性检测,将受试者分为CYP2C9野生型、杂合突变型和纯合突变型3组,用高效液相色谱法检测甲苯磺丁脲在受试者体内的药物代谢动力学参数,统计分析各组间药代动力学性质差异。结果在137名受试者中发现了9个CYP2C91/3杂合型突变体和1个CYP2C93/3纯合型突变体,其余为野生型个体。将9名CYP2C91/3,1名CYP2C93/3以及随机抽取的10名野生型个体分组,以甲苯磺丁脲为探药进行药物代谢动力学研究。结果在杂合型突变个体组以及纯合型突变个体组中,甲苯磺丁脲的代谢率显著低于对照的野生型个体组。结论CYP2C9基因多态性对甲苯磺丁脲代谢具有显著影响并呈基因剂量效应,检测突变型个体对指导临床合理用药和个体化医疗具有重要意义。 展开更多
关键词 甲苯磺丁脲 细胞色素P450 CYP2C9 等位基因 单核苷酸多态性 基因分型
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Kartagener综合征合并分泌性中耳炎患者的基因诊断 被引量：13
8
作者 张静 白银 +5 位作者 尤少华 籍灵超 贾婧杰 邱昕 徐丛 王洪田 《中华耳科学杂志》 CSCD 北大核心 2014年第1期41-44,共4页
目的应用基因筛查技术进行kartagener综合征合并慢性分泌性中耳炎患者的基因诊断。方法将2010年1月至2013年12月就诊于解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科的8例kartagener综合征合并慢性分泌性中耳炎患者作为研究对象。采集病史、绘制家系图... 目的应用基因筛查技术进行kartagener综合征合并慢性分泌性中耳炎患者的基因诊断。方法将2010年1月至2013年12月就诊于解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科的8例kartagener综合征合并慢性分泌性中耳炎患者作为研究对象。采集病史、绘制家系图,进行纯音测听、声导纳检查;应用sanger测序进行热点基因筛查,并对1例患者及其父母应用全外显子组测序进行基因筛查,应用Pomol软件对候选基因编码蛋白进行3D-蛋白结构模拟。结果 8例患者均伴有慢性分泌性中耳炎。应用sanger测序进行热点基因筛查的患者,均未发现所筛查位点基因突变;应用全外显子组测序的1例患者发现c.8030G>A(p.R2677Q)突变,位于基因DNAH5。结论慢性分泌性中耳炎患者应考虑kartagener综合征的可能性,以免漏诊误诊,基因筛查为该病提供了分子遗传学诊断证据。 展开更多
关键词 KARTAGENER综合征 原发性纤毛运动障碍 基因筛查 全外显子组测序 常染色体隐性遗传
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遗传性耳聋家庭康复与预防模式的探讨 被引量：11
9
作者 韩明昱 卢彦平 +6 位作者 边旭明 汪龙霞 黄莎莎 王国建 康东洋 张昕 戴朴 《中华耳科学杂志》 CSCD 北大核心 2014年第1期11-14,共4页
目的通过耳聋产前诊断对先证者为人工耳蜗植入者的遗传性耳聋家庭的生育指导，探讨遗传性耳聋家庭康复与预防的理想模式。方法58个耳聋家庭参与了此研究，这些耳聋家庭均育有一子，为先天性耳聋患者并植入了人工耳蜗，父母均为听力正常... 目的通过耳聋产前诊断对先证者为人工耳蜗植入者的遗传性耳聋家庭的生育指导，探讨遗传性耳聋家庭康复与预防的理想模式。方法58个耳聋家庭参与了此研究，这些耳聋家庭均育有一子，为先天性耳聋患者并植入了人工耳蜗，父母均为听力正常者，计划生育听力健康后代。先证者接受详细的体格检查、听力学及影像学检查后，先证者及其父母均采集外周血并提取DNA，进行GJB2序列分析、SLC26A4常见突变外显子分析和线粒体基因（mtDNA）12SrRNA检测，明确了分子病因和后代再发风险。接受产前诊断时，母亲妊娠11，26周，根据母亲的妊娠时间，行适当的产前诊断取材并提取胎儿DNA，测定胎儿基因型，预测胎儿听力状态。结果35个耳聋家庭的先证者为GJB2纯合或复合突变，父母均为GJB2突变携带者；23个耳聋家庭的先证者为SLC26A4纯合或复合突变，父母均为SLC26A4突变携带者。此58个耳聋家庭再发风险均为25％，共行产前诊断64例次（6个家庭母亲怀孕2次，进行了2次产前诊断），44例次检测结果显示胎儿仅携带一个父系或母系突变，或未携带任何已知突变，随访胎儿出生后听力均正常；20例次检测结果显示胎儿与先证者基因型相同，父母自愿选择终止妊娠。结论对于分子病因明确的遗传性耳聋家庭，先证者接受人工耳蜗植入获得最佳听力语言康复效果，再生育时通过耳聋基因诊断结合产前诊断预防聋儿出生，是最理想的耳聋康复与预防模式。 展开更多
关键词 遗传性耳聋 耳蜗植入 GJB2基因 SLC26A4基因 基因诊断 产前诊断
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北京地区耳聋残疾人群大前庭水管相关SLC26A4基因热点突变分子流行病学调查 被引量：11
10
作者 左路杰 张勋 +4 位作者 袁永一 王国建 康东洋 张昕 戴朴 《中华耳科学杂志》 CSCD 北大核心 2012年第2期237-240,共4页
目的分析北京耳聋残疾人群中SLC26A4基因热点突变IVS7-2A>G和2168A>G发生频率,初步探讨SLC26A4基因热点突变在北京地区耳聋残疾人群中的分子诊断意义。方法抽查北京地区持耳聋残疾证患者6247例,均抽取外周静脉血并提取DNA,以博奥... 目的分析北京耳聋残疾人群中SLC26A4基因热点突变IVS7-2A>G和2168A>G发生频率,初步探讨SLC26A4基因热点突变在北京地区耳聋残疾人群中的分子诊断意义。方法抽查北京地区持耳聋残疾证患者6247例,均抽取外周静脉血并提取DNA,以博奥生物有限公司提供的晶芯九项遗传性耳聋基因检测试剂盒(微阵列芯片)对SLC26A4基因的热点突变IVS7-2A>G和2168A>G进行检测,并对其发生频率进行分析。结果在6247名受检耳聋残疾人群中,携带SLC26A4基因IVS7-2A>G和2168A>G突变的例数共计177例,总阳性检出率为2.83%(177/6247)。IVS7-2A>G突变携带者141例(纯合27例,单杂合突变114例),2168A>G突变携带者26例(纯合4例,单杂合突变22例),SLC26A4基因2168A>G/IVS7-2A>G复合杂合突变携带者10例。针对IVS7-2A>G和2168A>G突变的SLC26A4基因双等位基因突变例数为41例,双等位基因突变率为0.66%(41/6247)。结论 1、在6247例耳聋残疾人中,通过SLC26A4基因热点突变IVS7-2A>G和2168A>G检测能够明确分子学诊断的占总体的0.46%(41/6247);2、在北京地区持证聋人群体中,SLC26A4基因热点突变检出率较我院门诊就诊的耳聋患者低,此项课题的开展,有助于了解北京地区残疾人群中与大前庭水管综合征密切相关的SLC26A4基因热点突变分布情况,在分子水平上为耳聋残疾人群明确诊断或指导进一步诊断,并对IVS7-2A>G和2168A>G突变检测阳性患者的婚配、生育具有一定的指导意义。 展开更多
关键词 耳聋 基因 SLC26A4 芯片 大前庭水管 分子遗传学诊断
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日本脑炎病毒非结构蛋白NS5对IFN-α介导的信号转导通路的抑制作用 被引量：6
11
作者 赵慧 邓永强 +6 位作者 陈水平 姜涛 韩剑峰 李晓峰 于学东 秦成峰 秦鄂德 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期811-815,共5页
目的探讨日本脑炎病毒抑制IFN-α介导的JAK-STAT信号转导通路过程中发挥关键作用的病毒特异蛋白,为阐明日本脑炎病毒抑制Ⅰ型IFN介导的JAK-STAT信号转导通路的作用机制奠定基础。方法分别构建日本脑炎病毒编码的7种非结构蛋白基因(NS1,N... 目的探讨日本脑炎病毒抑制IFN-α介导的JAK-STAT信号转导通路过程中发挥关键作用的病毒特异蛋白,为阐明日本脑炎病毒抑制Ⅰ型IFN介导的JAK-STAT信号转导通路的作用机制奠定基础。方法分别构建日本脑炎病毒编码的7种非结构蛋白基因(NS1,NS2A,NS2B,NS3,NS4A,NS4B和NS5)的重组真核表达载体。采用间接免疫荧光法和Western blotting观察它们在细胞内的表达及定位情况。利用含萤火虫荧光素酶(Luc)报告基因的重组载体pISRE-Luc,观察表达病毒不同非结构蛋白的细胞内IFN-α介导的JAK-STAT信号转导通路的活化程度。构建融合表达红色荧光蛋白的STAT1重组真核表达载体pRed-STAT1,利用该重组载体在表达病毒非结构蛋白的细胞内观察融合蛋白Red-STAT1在IFN-α作用下的细胞内定位情况。同时,对表达病毒非结构蛋白的细胞内IFN-α介导的STAT1分子的磷酸化水平进行检测。结果日本脑炎病毒的7种非结构蛋白均可在哺乳动物细胞内正确表达,而且表达蛋白均位于细胞质中。在这7种非结构蛋白中,NS5可阻断STAT1分子的核转运及抑制STAT1分子的磷酸化水平,从而抑制IFN-α介导的细胞内JAK-STAT信号转导通路的活化。结论日本脑炎病毒的非结构蛋白NS5对Ⅰ型IFN系统的信号转导通路具有显著的抑制作用,可能是一种Ⅰ型IFN系统的拮抗蛋白。 展开更多
关键词 干扰素Ⅰ型 JAK-STAT信号转导通路 脑炎病毒 日本 病毒非结构蛋白质类
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Smad3选择性调节TGF-β1促进大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的实验研究 被引量：6
12
作者 王运涛 郑启新 +4 位作者 吴小涛 郭晓东 茅祖斌 陈辉 赵梓汝 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期625-629,701,共6页
目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)信号转导通路下游信号分子Smad2、Smad3在TGF-β1促进大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)成骨分化中的作用。方法采用RT-PCR、Western blot检测TGF-β1促MSCs成骨分化过程中Smad2、Smad3mRNA和蛋白表达的变化... 目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)信号转导通路下游信号分子Smad2、Smad3在TGF-β1促进大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)成骨分化中的作用。方法采用RT-PCR、Western blot检测TGF-β1促MSCs成骨分化过程中Smad2、Smad3mRNA和蛋白表达的变化;脂质体介导稳定转染Smad3ΔC,间接免疫荧光试验鉴定;采用RT-PCR检测转染细胞中碱性磷酸酶(ALP)和核心结合因子(cbfa1)mRNA的表达,用对硝基苯磷酸盐(PNP)法检测细胞ALP活性,用茜素红染色法检测细胞矿化能力,观察Smad3ΔC对MSCs成骨分化的影响。结果在TGF-β1刺激后24h,MSCs中Smad3的mRNA和蛋白表达量明显减少(P<0.01),而整个刺激过程中,Smad2的mRNA和蛋白表达量无明显变化(P>0.05);稳定转染细胞中c-Myc抗原阳性表达;受TGF-β1刺激后,MSCs和V-MSCs(空载体转染组)中ALP、cbfa1mRNA的表达水平、矿化能力明显高于Smad3ΔC-MSCs;随TGF-β1刺激时间延长,Smad3ΔC-MSCs中ALP活性增加缓慢,仅于48h有明显增加(P<0.05),但与同时段MSCs和V-MSCs中ALP活性相比,差异有极显著性意义(P<0.01)。结论TGF-β1促进MSCs成骨分化这一生物学效应的输出受Smad3特异性和选择性的调节。 展开更多
关键词 转化生长因子Β1 骨髓间充质干细胞 SMAD2 SMAD3
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鼠尾静脉流体力学转染技术对绿色荧光蛋白表达质粒器官靶向分布的影响 被引量：6
13
作者 刘亮明 罗杰 +5 位作者 张吉翔 郭宏兴 邓欢 徐江晶 尹东 熊高飞 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2007年第23期4558-4561,共4页
目的:观察流体力学尾静脉注射对绿色荧光蛋白基因器官靶向性的影响,为今后质粒载体的基因治疗和功能研究寻找潜在的靶器官。方法:实验于2005-12/2006-04在江西省分子医学重点实验室完成。选用健康雄性昆明鼠40只,将32只小鼠按随机数字... 目的:观察流体力学尾静脉注射对绿色荧光蛋白基因器官靶向性的影响,为今后质粒载体的基因治疗和功能研究寻找潜在的靶器官。方法:实验于2005-12/2006-04在江西省分子医学重点实验室完成。选用健康雄性昆明鼠40只,将32只小鼠按随机数字表法分为流体力学注射和常规注射两大组,每大组再分为转染组和对照组两个小组(n=8),并设正常对照组(n=8)。①流体力学转染组将100μg/只绿色荧光蛋白表达质粒溶液2mL在5s内快速注入尾静脉;对照组仅在5s内注入林格氏液2mL。②常规注射组则将2mL林格氏液或绿色荧光蛋白表达质粒溶液在30s左右注入尾静脉。注射结束后24h采集各组小鼠血清检测转氨酶,并采集肝、脾、心、肾、肺和脑组织进行冰冻切片,部分肝组织采用多聚甲醛固定后切片,荧光显微镜下观察。结果:40只小鼠全部进入结果分析,无脱失。①流体力学注射组和常规注射组小鼠血清转氨酶与正常对照组比较差异均无显著性意义(P>0.05)。②常规尾静脉注射引起少数肾小球细胞表达绿色荧光蛋白,而肝、脾、心、肺及脑等组织未见明显绿色荧光蛋白表达。③流体力学注射引起肝内绿色荧光蛋白高水平表达,肝细胞表达率接近45%,其他组织则无绿色荧光蛋白表达。结论:流体力学方法是肝靶向性的活体基因转染方法,绿色荧光蛋白可作为该方法进行目的基因研究的一个可靠和方便的示踪剂。 展开更多
关键词 发光蛋白质类 质粒 生物力学 肝
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重庆市永川地区青少年耳聋患者耳聋基因热点突变筛查分析 被引量：12
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作者 刘启珍 陈丽鸿 +1 位作者 张应龙 江洪 《中华耳科学杂志》 CSCD 北大核心 2013年第1期126-130,共5页
目的筛查重庆市永川地区非综合征型青少年耳聋患者中我国耳聋基因热点突变,初步了解该地区耳聋基因热点突变谱系及发生频率。方法收集重庆市永川区特殊教育学校的永川籍非综合征型青少年耳聋患者60例,经监护人知情同意,抽取外周静脉全... 目的筛查重庆市永川地区非综合征型青少年耳聋患者中我国耳聋基因热点突变,初步了解该地区耳聋基因热点突变谱系及发生频率。方法收集重庆市永川区特殊教育学校的永川籍非综合征型青少年耳聋患者60例,经监护人知情同意,抽取外周静脉全血并提取基因组DNA,应用晶芯R九项遗传性耳聋检测试剂盒(微阵列芯片)检测中国人群中常见的4个耳聋基因的9个突变位点,包括GJB2(235delC、176del16、299delAT和35delG)、SLC26A4(IVS7-2A>G、2168A>G)、线粒体12SrRNA(1494C>T、1555A>G)、GJB3(538C>T)。结果 60例受检者全部为重度或极重度非综合征型耳聋,共检出耳聋基因突变22例,其中GJB2235delC纯合突变型2例;GJB2235delC/176del16复合杂合突变型1例;GJB2235delC/299delAT复合杂合突变型1例;GJB2235delC杂合突变型8例;GJB2299delAT纯合突变型1例;GJB235delG/SLC26A4IVS7-2A>G复合杂合突变型1例;SLC26A4IVS7-2A>G杂合突变型2例;线粒体12SrRNA1555A>G均质型突变型6例。60例受检者中47号与55号为亲兄妹,后续统计仅纳入先证者,所以只将47号纳入统计,样本总量计为59例。59例耳聋患者中我国耳聋基因热点突变的携带率是37.29%(22/59),其中GJB2基因突变是该人群首要的致病因素,携带率为23.73%(14/59),线粒体12SrRNA基因突变检出率为10.17%(6/59),高于SLC26A4基因的5.08%(3/59),未检出GJB3基因突变。结论重庆市永川地区非综合征型青少年耳聋患者耳聋基因突变携带率较高,对该地区耳聋患者及高危人群进行耳聋基因突变的筛查是防控永川地区遗传性耳聋的首要步骤,在此基因诊断的基础上再结合用药指导、产前诊断、临床干预可有效减少该地区耳聋的发生。 展开更多
关键词 遗传性耳聋 非综合征型耳聋 热点突变 基因诊断 基因芯片
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TAT-N24穿膜融合多肽的表达与鉴定 被引量：7
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作者 王桂华 孙黎 +5 位作者 邓豫 李小兰 曹小年 来森艳 陶德定 胡俊波 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期175-178,共4页
目的表达并纯化TAT-N24穿膜融合多肽,初步探讨其生物学活性。方法构建pTAT-HA-N24原核表达载体,在BL21大肠埃希菌中表达并纯化TAT-N24融合多肽,利用SDS凝胶电泳检测纯化蛋白的纯度,利用免疫细胞化学和流式细胞术检测TAT-N24融合蛋白的... 目的表达并纯化TAT-N24穿膜融合多肽,初步探讨其生物学活性。方法构建pTAT-HA-N24原核表达载体,在BL21大肠埃希菌中表达并纯化TAT-N24融合多肽,利用SDS凝胶电泳检测纯化蛋白的纯度,利用免疫细胞化学和流式细胞术检测TAT-N24融合蛋白的穿膜能力和生物学活性。结果在原核表达系统中成功构建并表达纯化了TAT-N24穿膜融合多肽,其在6 mol/L尿素和DMSO中均具有较好的溶解性,纯化的融合多肽经SDS凝胶电泳分析未见明显杂蛋白混入,利用免疫细胞化学染色可见TAT-N24处理结肠HT29细胞12 h后90%以上的细胞中可检测到TAT-N24,流式细胞术检测细胞周期可见TAT-N24能够有效地诱导细胞周期阻滞,抑制结肠癌细胞生长。结论TAT-N24具有高效的穿膜能力,并能有效抑制结肠癌细胞增殖,可望开发成为有效的肿瘤分子治疗药物。 展开更多
关键词 TAT-N24穿膜融合多肽 HT29细胞 肿瘤分子治疗
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GJB2基因听力学表型与基因型关系分析 被引量：12
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作者 代志瑶 孙宝春 +5 位作者 黄莎莎 康东洋 张昕 董敏 袁永一 戴朴 《中华耳科学杂志》 CSCD 北大核心 2014年第1期34-36,共3页
目的分析GJB2基因的听力学表型与基因型关系。方法2007年4月-2011年3月在解放军总医院就诊的具有完整听力学资料的1481名非综合征性耳聋患者，均进行GJB2编码区测序，并对其GJB2基因突变检出阳性率及与听力学表型关系进行统计学分析。结... 目的分析GJB2基因的听力学表型与基因型关系。方法2007年4月-2011年3月在解放军总医院就诊的具有完整听力学资料的1481名非综合征性耳聋患者，均进行GJB2编码区测序，并对其GJB2基因突变检出阳性率及与听力学表型关系进行统计学分析。结果1481例患者GJB2基因阳性突变率为20．05％，双耳感音神经性聋组阳性突变率为20．66％，高于单耳耳聋组（2．08％）（P〈0．01）。在双耳感音神经性聋组中，极重度聋组中的GJB2阳性检出率最高（26．07％），其次是重度（18．12％）、中度（17．4％），轻度组为11．54％，各组间阳性检出率差异有统计学意义（P〈0．01）。对297例GJB2基因突变阳性患者听力曲线分型分析中，发现了10例上升型听力曲线（14．93％），但GJB2耳聋听力图仍以残余型（26．27％）、平坦型（25．16％）常见，各组阳性检出率差异有统计学意义（P〈0．01）。结论GJB2基因突变者听力学表型呈多样性，在进行基因检测时，除重视双耳重度、极重度感音神经性聋或听力图为残余型和平坦型的人群外，也应该对单耳耳聋、双耳轻度听力损失或听力图为上升型感音神经性聋患者进行常规耳聋基因检测。 展开更多
关键词 GJB2 感音神经性 基因诊断
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遗传性耳聋相关基因SLC26A4新突变致病性分析 被引量：11
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作者 高雪 辛凤 +1 位作者 袁慧军 戴朴 《中华耳科学杂志》 CSCD 北大核心 2014年第1期26-29,共4页
目的验证SLC26A4基因ivs16+10C>T变异与遗传性耳聋的相关性,确定其是否致病。方法我们采集了一个聋-聋婚配家庭中的2例样本(编号7518)、200例大前庭水管散发病例及200例正常听力对照的血液样本及临床资料,分析该变异在人群的携带情... 目的验证SLC26A4基因ivs16+10C>T变异与遗传性耳聋的相关性,确定其是否致病。方法我们采集了一个聋-聋婚配家庭中的2例样本(编号7518)、200例大前庭水管散发病例及200例正常听力对照的血液样本及临床资料,分析该变异在人群的携带情况。采用在线软件预测(Fruitfly)及RT-PCR法验证SLC26A4基因ivs16+10C>T变异是否对剪切位点的识别产生影响。结果 SLC26A4 ivs16+10C>T变异在中国人群中携带率低。在200例EVAS散发患者及200例正常人中检测,均未发现携带该变异。Fruitfly结果显示SLC26A4 ivs16+10C>T对剪切位点的识别没有影响,RT-PCR证实SLC26A4编码cDNA长度没有改变。结论 SLC26A4 ivs16+10C>T变异是非致病的核苷酸多态,推测7518家庭的后代不会复制父母的听力。 展开更多
关键词 SLC26A4基因 ivsl6+10c〉T 致病性 大前庭水管综合征
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某航校飞行学员高频听力损失研究 被引量：5
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作者 李佳 张红蕾 +8 位作者 李大鹏 蔡庆 龚维熙 李丽 李平 李娟 郑伟 董晶 郭睿 《中华耳科学杂志》 CSCD 北大核心 2014年第1期109-111,共3页
目的跟踪某航校飞行学员人群连续两年的高频听力变化,根据结果判断其变化趋势并进行基因组学筛查,探讨mtDNA4977缺失与噪声性听力损失关系。方法随机抽取某航校2009级140名飞行学员进行听力学检测,连续跟踪调研两年,着重观察个体两年间... 目的跟踪某航校飞行学员人群连续两年的高频听力变化,根据结果判断其变化趋势并进行基因组学筛查,探讨mtDNA4977缺失与噪声性听力损失关系。方法随机抽取某航校2009级140名飞行学员进行听力学检测,连续跟踪调研两年,着重观察个体两年间左右耳高频频段4000、6000、8000Hz之间的听阈值及高频听力累加值的变化情况,针对筛查出的听力下降学员进行mtDNA4977片段缺失情况诊断,应用SPSS19.0统计软件进行同一人群配对样本T检验以验证是否具有统计学意义,以X2检验进行组间基因缺失频率的比较。结果在调查的飞行学员人群中,两年间右耳4000Hz频段有明显变化(p<0.05),其他各高频频段及高频听力累加值无明显统计学意义(p>0.05)。两组mtD-NA4977缺失率差异有统计学意义(P<0.05)。结论在高年级飞行学员人群中存在噪声性听力损失,携带mtDNA4977缺失基因型的个体对噪声性听力损失易感。 展开更多
关键词 飞行学员 高频听力 DNA 线粒体 基因 噪声 职业性
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香烟烟雾暴露对中国树鼩CXCR4、MHC-1、TNF-α、MCP mRNA表达的影响 被引量：3
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作者 周顺长 吴健鸿 +2 位作者 张景辉 袁宗辉 曾繁典 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期463-467,共5页
目的观察香烟烟雾暴露对中国树鼩(Tupaia belangeri chinensis)血液、肺脏、心肌及支气管趋化因子受体4(CXCR4)、主要组织相容性复合体-1(MHC-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白(MCP)mRNA表达的影响,探讨香烟烟雾暴露与炎... 目的观察香烟烟雾暴露对中国树鼩(Tupaia belangeri chinensis)血液、肺脏、心肌及支气管趋化因子受体4(CXCR4)、主要组织相容性复合体-1(MHC-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白(MCP)mRNA表达的影响,探讨香烟烟雾暴露与炎性相关细胞因子表达的关系及中国树鼩作为实验动物的应用价值。方法以灵长目中国树鼩为实验动物,动式染毒装置进行烟雾暴露12周,采集股静脉血0.5 mL,经股动脉放血合并颈椎脱臼法处死中国树鼩后,分别取肺、心脏及支气管组织100 mg。以GAPDH为内参,实时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定吸入组及非吸入组中国树鼩的外周血、肺脏、心肌及支气管组织CXCR4、MHC-1、TNF-α、MCPmRNA的表达。结果烟雾暴露12周后吸入组中国树鼩外周血和支气管CXCR4表达量明显低于对照组(P<0.05),吸入组中国树鼩外周血中TNF-α表达量明显高于对照组(P<0.05);MHC-1、MCPmRNA表达量未见明显变化。结论香烟烟雾暴露可引起CXCR4和TNF-α的表达变化。中国树鼩对香烟烟雾暴露较敏感,是具有开发应用价值的灵长目实验动物。 展开更多
关键词 香烟烟雾暴露 树鼩 趋化因子受体4 主要组织相容性复合体-1 肿瘤坏死因子-α 单核细胞趋化蛋白
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孕期补充DHA对脂多糖所致宫内感染仔鼠脑组织TLR4表达的影响 被引量：3
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作者 刘艳 丰利芳 +2 位作者 唐庆 徐三清 罗小平 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期445-449,共5页
目的探讨宫内感染的孕鼠经二十二碳六烯酸(DHA)干预后,对围产期炎症暴露的仔鼠脑组织炎症状态的影响。方法将孕鼠随机分为3组,①实验组(LPS+DHA组):孕期第1天开始给予DHA 130 mg/kg灌胃至分娩。于孕第17、18天连续2次腹腔注射LPS,剂量为... 目的探讨宫内感染的孕鼠经二十二碳六烯酸(DHA)干预后,对围产期炎症暴露的仔鼠脑组织炎症状态的影响。方法将孕鼠随机分为3组,①实验组(LPS+DHA组):孕期第1天开始给予DHA 130 mg/kg灌胃至分娩。于孕第17、18天连续2次腹腔注射LPS,剂量为350μg/kg;②模型组(LPS组):无菌生理盐水灌胃,同期连续2次腹腔注射LPS,剂量同上;③对照组(NS组):无菌生理盐水灌胃,同期腹腔注射无菌生理盐水0.6 mL。取各组孕21天,生后第1、7、14天(G21,P1,P7,P14)的胎鼠及幼鼠脑组织,用苏木精-伊红染色法观察不同时间点脑组织的病理改变。Realtime-PCR法检测脑组织Toll样受体4(TLR4)、IL-1βmRNA转录水平,Western blot法检测脑组织TLR4、IL-1β蛋白表达水平。结果模型组新生鼠平均出生体重较实验组及对照组减低(均P<0.05)。模型组脑组织苏木精-伊红染色见细胞水肿,组织疏松,细胞数减少。实验组脑细胞水肿较模型组减轻,细胞数减少不明显,而对照组脑组织炎性改变不明显。模型组及实验组IL-1βmRNA、IL-1β蛋白表达较对照组高(均P<0.05),但实验组表达较模型组减低(均P<0.05)。模型组及实验组TLR4mRNA、TLR4蛋白表达较对照组升高(均P<0.05),实验组表达较模型组减少(均P<0.05)。结论孕期LPS腹腔注射可引起孕鼠胎盘和胎儿的炎症反应,导致子代的脑损伤。孕期补充DHA能减少仔鼠脑内致炎细胞因子的表达,因此可能会降低宫内炎症暴露仔鼠脑损伤的发生率。 展开更多
关键词 宫内感染 脑损伤 二十二碳六烯酸 脂多糖 新生大鼠
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