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hcmv-miR-UL112-3p对TLR4基因调控的生物信息学分析
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作者 张双红 胡清华 +3 位作者 康春枝 何小小 段亚群 罗丽娟 《中国实验诊断学》 2025年第3期329-335,共7页
目的通过生物信息学方法对hcmv-miR-UL112-3p进行靶基因预测及靶基因生物学功能分析,构建靶基因集合编码蛋白质间相互关系网络。方法通过miRbase在线数据库检索hcmv-miR-UL112-3p序列,miRanda数据库预测hcmv-miR-UL112-3p靶基因,利用Enr... 目的通过生物信息学方法对hcmv-miR-UL112-3p进行靶基因预测及靶基因生物学功能分析,构建靶基因集合编码蛋白质间相互关系网络。方法通过miRbase在线数据库检索hcmv-miR-UL112-3p序列,miRanda数据库预测hcmv-miR-UL112-3p靶基因,利用Enrichr数据库对预测靶基因进行GO分析及KEGG富集分析。运用STRING12.0和Cytoscape制作蛋白质-蛋白质相互作用网络。结果hcmv-miR-UL112-3p成熟序列为AAGUGACGGUGAGAUCCAGGCU。hcmv-miR-UL112-3p与靶基因TLR4 mRNA有两个结合位点(5234-5255nt和3551-3572nt)。GO分析和KEGG分析显示,靶基因主要参与了调控RNA聚合酶Ⅱ启动子转录、基因表达、细胞增殖及信号转导等生物学过程;PPI网络分析筛选出hcmv-miR-UL112-3p调控10个核心基因为RPS3、CD74、H3C12、MRPL36、RPS24、CALM2、RPL8、MRPL46、RPL31及SNRPD1。结论hcmv-miR-UL112-3p与靶基因TLR4 mRNA存在结合位点,参与了细胞的生物学过程,可能为研究HCMV感染致病机制提供新的思路。 展开更多
关键词 hcmv-miR-UL112-3p 生物信息学 靶基因预测 MIRNA
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Staufen家族蛋白在真核生物细胞中功能及调控机制的研究进展
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作者 邵泽华 唐颢 郭宏伟 《中华实用诊断与治疗杂志》 2025年第2期179-183,共5页
Staufen(STAU)家族蛋白是真核生物中一类关键的RNA结合蛋白,主要包括STAU1和STAU2两个成员。STAU蛋白含有多个双链RNA结合结构域,在mRNA运输、定位、翻译及降解等生物学过程中发挥重要作用。细胞内STAU1主要通过STAU介导的mRNA降解通路... Staufen(STAU)家族蛋白是真核生物中一类关键的RNA结合蛋白,主要包括STAU1和STAU2两个成员。STAU蛋白含有多个双链RNA结合结构域,在mRNA运输、定位、翻译及降解等生物学过程中发挥重要作用。细胞内STAU1主要通过STAU介导的mRNA降解通路影响mRNA稳定性及大范围运输,STAU2则在神经元树突及突触局部翻译、神经发育及突触可塑性中扮演关键角色。二者在不同类型细胞及生理病理条件下呈现出特异、协同互补或竞争拮抗的作用特征,对胚胎发育、神经元功能及多种疾病的发生、发展均有重要影响。本文就STAU家族蛋白的结构、功能、调控机制、互作关系及在生理和病理中作用的研究进展作一综述。 展开更多
关键词 Staufen家族蛋白 RNA结合蛋白 双链RNA结合结构域 转录后调控 真核生物
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SpliceTransformer可解析与人类疾病相关的组织特异性可变剪接
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《浙江大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第1期119-119,共1页
2024年10月23日,浙江大学良渚实验室沈宁/刘志红教授团队在《自然·通讯》(Nature Communications)发表了题为“SpliceTransformer predicts tissue-specific splicing linked to human diseases”的研究论文(DOI:10.1038/s41467-02... 2024年10月23日,浙江大学良渚实验室沈宁/刘志红教授团队在《自然·通讯》(Nature Communications)发表了题为“SpliceTransformer predicts tissue-specific splicing linked to human diseases”的研究论文(DOI:10.1038/s41467-024-53088-6),开发了基于Transformer架构的多模态深度学习模型SpliceTransformer(简称SpTransformer)。该方法可以用于解析和组织特异性剪接变异相关的疾病,筛选出特异性影响某些人体组织的突变及基因。通过对多个突变数据库,共涉及超过17万个样本的全外显子组测序数据的分析,研究者发现组织特异性剪接和基因的组织特异性表达之间存在相对独立性,即使是在多种组织中普遍表达的基因也可能通过剪接变异对特定组织产生重要影响,进而可能引发相关疾病。该研究为理解疾病背后的遗传因素提供了除基因表达水平以外的重要视角。游宁远博士研究生为论文第一作者。研究得到国家自然科学基因、浙江省重点研发计划等支持。 展开更多
关键词 全外显子组测序 博士研究生 特定组织 组织特异性 可变剪接 研发计划 遗传因素 刘志红
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肠道金属离子转运体SLC30A1是调控机体循环锌离子稳态的关键
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《浙江大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第1期48-48,共1页
2024年10月18日,浙江大学医学院闵军霞、王福俤教授团队联合张岩教授团队在《先进科学》(Advanced Science)发表题为“The intestinal transporter SLC30A1 plays a critical role in regulating systemic zinc homeostasis”的研究论文... 2024年10月18日,浙江大学医学院闵军霞、王福俤教授团队联合张岩教授团队在《先进科学》(Advanced Science)发表题为“The intestinal transporter SLC30A1 plays a critical role in regulating systemic zinc homeostasis”的研究论文(DOI:10.1002/advs.202406421),阐明了肠道金属离子转运体溶质载体家族30成员1(SLC30A1)(ZnT1)在肠道上皮细胞的特殊定位是调控机体锌离子稳态的关键因素,揭示了其在维持正常的肠道屏障及功能中发挥着重要作用,并通过冷冻电镜解析了SLC30A1的蛋白结构,构建了SLC30A1选择性转运锌离子的途径模式。 展开更多
关键词 浙江大学医学院 离子稳态 肠道上皮细胞 肠道屏障 冷冻电镜 SLC 锌离子
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大肠杆菌表达的戊型肝炎病毒ORF2片段的聚合现象研究 被引量:37
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作者 李少伟 张军 +5 位作者 何志强 葛胜祥 顾颖 林鉴 刘如石 夏宁邵 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期463-467,共5页
在大肠杆菌中表达了戊型肝炎病毒 (HEV)ORF2的a .a .394~a .a .6 0 4片段 ,得到的重组蛋白NE2在SDS PAGE中主要以可被尿素解聚的二聚体形式存在 ,二聚体对病人血清的反应性明显强于单体 ;质谱分析表明NE2可形成从二聚体到至少六聚体的... 在大肠杆菌中表达了戊型肝炎病毒 (HEV)ORF2的a .a .394~a .a .6 0 4片段 ,得到的重组蛋白NE2在SDS PAGE中主要以可被尿素解聚的二聚体形式存在 ,二聚体对病人血清的反应性明显强于单体 ;质谱分析表明NE2可形成从二聚体到至少六聚体的多种聚体 ;动态光散射测定表明平均分子半径约 4nm ,相当于四聚体 ,但分散度较大 ,提示为多种大小不一的聚合体的混合物。这些证据表明NE2蛋白可形成以同源二聚体为基本单位的多种聚合体形式 ,其中以二聚体间的结合最为紧密 ,并且以二聚体为基础可进一步装配出多种更高级结构 ,从而具有作为HEV疫苗及诊断试剂抗原的良好前景。 展开更多
关键词 大肠杆菌 表达 戊型肝炎病毒ORF2片段 聚合现象 组装 二聚体 原核表达
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DNA聚合酶对变性高效液相色谱在基因突变检测中的影响 被引量:52
6
作者 柳满然 潘凯枫 +1 位作者 王祎 吕有勇 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第10期1160-1163,共4页
背景与目的:变性高效液相色谱(denaturinghigh-performanceliquidchromatography,DHPLC)是最近发展起来的一种灵敏而高通量的基因突变检测技术,在工作中我们发现某些因素,尤其是DNA聚合酶干扰DHPLC分辨力。本文详细地分析了具校正功能... 背景与目的:变性高效液相色谱(denaturinghigh-performanceliquidchromatography,DHPLC)是最近发展起来的一种灵敏而高通量的基因突变检测技术,在工作中我们发现某些因素,尤其是DNA聚合酶干扰DHPLC分辨力。本文详细地分析了具校正功能和非校正功能的DNA聚合酶对变性高效液相色谱在基因突变检测中的影响,旨在寻找更适合DHPLC分析的DNA聚合酶。方法:选择长度为268bp、317bp、590bp的3个代表性的片段用于DHPLC分析。选择6种品牌的TaqDNA聚合酶,1种Ampli-TaqgoldDNA聚合酶,4种具校正功能的DNA聚合酶(Pfu和Vent),用这11种酶扩增同一DNA片段,并进行DHPLC检测,分析并鉴定它们对DHPLC峰型的影响。结果:TaqDNA聚合酶对DHPLC分析产生两种明显的负面影响。一是在DHPLC图谱的主峰前,形成一个额外小峰,影响DHPLC对杂合双链的分辨能力。另一种影响是难以形成正常的DHPLC色谱图,导致DHPLC检测的失败。具校正功能的DNA聚合酶和TaqgoldDNA聚合酶对DHPLC几乎不产生这些负面影响。结论:具校正功能的DNA聚合酶比Taq聚合酶更适合于DHPLC突变或SNP分析,尤其是GC含量高的小片段或其它容易受干扰的片段应首选PfuDNA聚合酶用于DHPLC分析。 展开更多
关键词 变性高效液相色谱技术 DNA聚合酶 基因突变 筛查 DHPLC
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中国耐多药结核分枝杆菌临床分离株rpoB基因突变特点 被引量:23
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作者 乐军 曾而良 +3 位作者 谢建平 李瑶 梁莉 王洪海 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第12期1332-1336,共5页
为阐明中国耐多药结核分枝杆菌临床分离株rpoB基因的突变特征 ,对 86株结核分枝杆菌临床分离株rpoB基因两个区域 ,包括 81个碱基利福平抗药性决定区 (rifampinresistancedeterminingregion ,RRDR)和V176F区进行序列测定。其中 72株耐多... 为阐明中国耐多药结核分枝杆菌临床分离株rpoB基因的突变特征 ,对 86株结核分枝杆菌临床分离株rpoB基因两个区域 ,包括 81个碱基利福平抗药性决定区 (rifampinresistancedeterminingregion ,RRDR)和V176F区进行序列测定。其中 72株耐多药分离株中的 6 5株rpoB基因的RRDR区存在 2 2种不同类型突变、2 1种点突变和一个插入突变。最常见的突变部位分别位于密码子 5 31(4 1% )、5 2 6 (4 0 % )和 5 16 (4 % ) ,10 %耐药分离株未检测到突变。鉴定了RRDR内 6个新的等位基因 ,以及RRDR外部区域 5个新的突变。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 耐药性 RPOB基因 突变频率 DNA序列分析
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单核苷酸多态性检测方法的新进展 被引量:19
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作者 赵广荣 扬帆 +2 位作者 元英进 髙秀梅 张军平 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期123-129,共7页
单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism,SNP)是第三代遗传标记,在基因定位、遗传疾病和人类起源等理论研究中具有重大意义,在抗药性或药物过敏反应中扮演着极其重要的角色,正逐步成为分子诊断、临床检验、新药研发的重要手段。... 单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism,SNP)是第三代遗传标记,在基因定位、遗传疾病和人类起源等理论研究中具有重大意义,在抗药性或药物过敏反应中扮演着极其重要的角色,正逐步成为分子诊断、临床检验、新药研发的重要手段。文章综述和分析了几种新建立的SNP检测方法,包括基因芯片、分子探针、荧光偏振、荧光共振、质谱和磁性颗粒分析。在生物化学、工程学和分析软件等方面取得突破的基础上,有望建立灵敏准确、简便易行、高通量、低费用的SNP技术。 展开更多
关键词 单核苷酸多态性 基因芯片 分子探针 荧光偏振 荧光共振 质谱 磁性颗粒
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健康汉族人硫嘌呤甲基转移酶遗传多态性研究 被引量:21
9
作者 张建萍 关永源 +2 位作者 吴珏珩 姜文奇 黄民 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第4期385-388,共4页
背景与目的:近年来发现了多种导致硫嘌呤甲基转移酶(thiopurineS-methyltransferase,TPMT)活性降低或缺乏的TPMT突变等位基因。中国人与白种人TPMT活性的分布比较具有种族差异性。在测定TPMT活性的基础上,本研究对常见的4种TPMT基因突... 背景与目的:近年来发现了多种导致硫嘌呤甲基转移酶(thiopurineS-methyltransferase,TPMT)活性降低或缺乏的TPMT突变等位基因。中国人与白种人TPMT活性的分布比较具有种族差异性。在测定TPMT活性的基础上,本研究对常见的4种TPMT基因突变类型在健康汉族人中的发生频率进行分析和探讨。方法:对225名健康汉族人的TPMT基因型进行测定。采用等位基因特异性的PCR(allele-specificPCR,ASPCR)方法和限制性片段长度多态性(PCR-restrictionfragmentlengthpolymorphism,RFLP)的方法分别检测G238C(TPMT2)、G460A和A719G(TPMT3A、3B、3C)的等位基因频率。结果:在225例健康汉族人中没有找到TPMT2、TPMT3B和TPMT3A,一共找到6例TPMT3C杂合子。这6例TPMT3C杂合子的TPMT活性平均值为(9.62±3.58)U/mlRBC。健康汉族人总的TPMT突变等位基因频率是1.33%(6/450)。结论:TPMT突变基因在中国汉族人的发生频率较低,TPMT3C有可能是该人群中最主要甚至是唯一的突变等位基因。 展开更多
关键词 硫嘌呤甲基转移酶 基因型 TPMT 3C
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人腺病毒3型六邻体基因的克隆与鉴定 被引量:14
10
作者 侯咏 刘佳 +2 位作者 郭彩玲 金玉霞 曲章义 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期245-247,共3页
目的 克隆人腺病毒 3型 (Ad3)六邻体 - L 1(Hexon- L 1)、六邻体 - L 2 (Hexon- L 2 )区基因 ,构建含有该基因的重组质粒 ,并进行测序鉴定 ,为进一步构建表达载体 ,制备基因工程疫苗打下基础。方法 从 Ad3感染的 He L a细胞中提取 Ad3... 目的 克隆人腺病毒 3型 (Ad3)六邻体 - L 1(Hexon- L 1)、六邻体 - L 2 (Hexon- L 2 )区基因 ,构建含有该基因的重组质粒 ,并进行测序鉴定 ,为进一步构建表达载体 ,制备基因工程疫苗打下基础。方法 从 Ad3感染的 He L a细胞中提取 Ad3DNA,用 PCR方法扩增 Hexon- L 1、Hexon- L 2基因 ,将得到的片段定向克隆到克隆载体 p U C19质粒中 ,对克隆片段进行 DNA测序鉴定。结果 构建了重组质粒 p UC19Hexon,测序结果与 Genebank中该序列进行同源性比较证明克隆的片段为 Ad3六邻体序列。结论 成功克隆了 Ad3的 Hexon- L 1、Hexon- L 2区基因。 展开更多
关键词 人腺病毒3型 六邻体 克隆 鉴定 重组质粒 基因表达载体 DNA病毒
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乙型肝炎病毒X基因酵母表达载体构建及表达 被引量:44
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作者 陆荫英 李克 +4 位作者 成军 王琳 刘妍 段惠娟 张玲霞 《世界华人消化杂志》 CAS 2002年第1期15-18,共4页
目的:为进一步探讨乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白(HBxAg)的功能,在真核生物酵母细胞中表达X基因。 方法:用多聚酶链反应(PCR)的方法以HBV ayw亚型全序质粒pCP10为模板扩增X基因,克隆到pGEM-T载体中扩增并测序鉴定,EcoRI和PstI双酶切后回收连... 目的:为进一步探讨乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白(HBxAg)的功能,在真核生物酵母细胞中表达X基因。 方法:用多聚酶链反应(PCR)的方法以HBV ayw亚型全序质粒pCP10为模板扩增X基因,克隆到pGEM-T载体中扩增并测序鉴定,EcoRI和PstI双酶切后回收连接到酵母表达载体pGBKT-7中并转化酵母AH109,色氨酸缺陷型培养基(SD/-Trp)上筛选阳性菌落,提取酵母蛋白质,进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western免疫印迹分析,以明确HaxAg是否在其中表达。 结果:成功地扩增出HBx基因,测序鉴定符合Gene Bank报告序列;酶切回收的HBx基因成功地克隆入酵母表达载体pGBKT-7并转化入酵母细胞AH109中,Western免疫印迹显示X基因在酵母细胞中表达,表达产物在胞内存在,相对M_r为35000左右。 结论:成功地构建了HBxAg在酵母表达载体,并在酵母细胞中表达。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 X基因 酵母表达载体 构建 表达
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高质量植物基因组DNA的分离 被引量:71
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作者 罗志勇 周钢 +2 位作者 陈湘晖 陆秋恒 胡维新 《湖南医科大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第2期178-180,共3页
为了从富含多酚和多糖的药用植物组织中分离出高质量基因组DNA ,本文通过改良几种已经存在的分离方法 ,获得了一种以CTAB法为基础的分离高质量完整DNA的简便、快速方法。使用该方法从人参、西洋参及三七的新鲜或干燥根组织分离DNA时 ,A2... 为了从富含多酚和多糖的药用植物组织中分离出高质量基因组DNA ,本文通过改良几种已经存在的分离方法 ,获得了一种以CTAB法为基础的分离高质量完整DNA的简便、快速方法。使用该方法从人参、西洋参及三七的新鲜或干燥根组织分离DNA时 ,A2 60 /A2 80 为 1.8左右 ,分子量大小约为 2 1.2kb ,由此所得的DNA可直接用于AFLP分析 ,即用EcoRⅠ /MseⅠ消化DNA后 ,用DNA的限制酶切片段经T4DNA连接酶连接 ,再用巢式PCR扩增 ,构建出可重复的、多态性丰富的人参、西洋参、三七基因组DNAAFLP指纹图谱。结果表明 ,该技术可有效地从富含多酚和多糖的药用植物组织中分离出高质量和高分子量DNA ,此法亦有望用于其它植物DNA的分离。 展开更多
关键词 DNA分离 高质量DNA 改进 CTAB法 药用植物
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分子生物学技术在遗传病诊断中的应用 被引量:36
13
作者 赵春江 王秋菊 李宁 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期333-336,共4页
论述了遗传性疾病的发病机理和遗传病诊断的途径和策略,着重介绍了人类遗传疾病基因诊断技术的原理和发展状况,对该领域的新成果作了介绍和总结,对发展动向和存在的问题作了简要论述。
关键词 分子生物学技术 遗传病 诊断 核苷酸序列 突变 发病机理 人类
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SARS病毒基因组所编码的E蛋白的二级结构和B细胞表位预测 被引量:48
14
作者 吕燕波 万瑛 吴玉章 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期407-410,共4页
目的 预测SARS病毒E蛋白的B细胞表位和二级结构。方法 以SARS病毒基因组序列为基础 ,采用Gar nier Robson方法、Chou Fasman方法和Karplus Schultz方法预测E蛋白质的二级结构 ;用Kyte Doolittle方案预测蛋白质的亲水性 ;用Emini方案... 目的 预测SARS病毒E蛋白的B细胞表位和二级结构。方法 以SARS病毒基因组序列为基础 ,采用Gar nier Robson方法、Chou Fasman方法和Karplus Schultz方法预测E蛋白质的二级结构 ;用Kyte Doolittle方案预测蛋白质的亲水性 ;用Emini方案预测蛋白质的表面可能性 ;用Jameson Wolf方案预测氨基酸的抗原性指数。综合评判 ,预测SARS病毒E蛋白的B细胞表位。结果 在SARS病毒E蛋白N 端的第 1~ 6、13~ 19、39~ 4 3、4 7~ 6 4区段和第 73~ 76区段有 β 折叠中心 ;第 6~ 12区段和第 6 7~ 6 9区段可能形成转角或无规则卷曲 ,是柔性区域。E蛋白N端第 2~ 13区段和第 6 1~ 74区段为B细胞优势表位区域。结论 用多参数预测SARS病毒E蛋白的二级结构和B细胞表位 。 展开更多
关键词 SARS病毒 基因组编码 E蛋白 二级结构 B细胞表位 预测 严重急性呼吸综合征
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脱氧核酶抑制乙型肝炎病毒基因表达的实验研究 被引量:18
15
作者 沃健儿 吴晓玲 +3 位作者 朱海红 周林福 姚航平 陈离伟 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2003年第2期112-115,共4页
目的 :探讨乙型肝炎病毒 (HBV) s基因和 c基因特异性的脱氧核酶 (DNAzyme)对 HBV表面抗原 (HB-s Ag)和 e抗原 (HBe Ag)表达的抑制效应。方法 :设计合成针对 HBV s基因 ORF A157UG、e基因 ORF A1816UG的DNAzyme Drz BS、Drz BC,在 2 .2 ... 目的 :探讨乙型肝炎病毒 (HBV) s基因和 c基因特异性的脱氧核酶 (DNAzyme)对 HBV表面抗原 (HB-s Ag)和 e抗原 (HBe Ag)表达的抑制效应。方法 :设计合成针对 HBV s基因 ORF A157UG、e基因 ORF A1816UG的DNAzyme Drz BS、Drz BC,在 2 .2 .15细胞上观察其对 HBV s基因、c基因的表达抑制效应。结果 :Drz BS、Drz BC作用于 2 .2 .15细胞后 ,可显著抑制 HBV s基因、c基因的表达 ,有效浓度为 0 .1~ 2 .5μmol/ L并呈剂量依赖性 ,最高抑制率分别为 94 .2 %和 91.8% ;有效抑制持续时间可达 72 h;Drz BS、Drz BC在细胞内对 Hbs Ag、Hbe Ag表达的抑制效率 ,明显高于作为对照的反义寡核苷酸 As BS、As BC,有效浓度较后者低至少 10倍。其对 2 .2 .15细胞的 HBVDNA复制无明显影响 ,亦未见明显的细胞毒性作用。结论 :在 2 .2 .15 HBV细胞模型系统 ,Drz BS、Drz BC能高效阻断 HBV s基因、e基因的表达 ,是一种特异性的、高效的抗 HBV基因治疗剂。 展开更多
关键词 脱氧核酶 抑制效应 乙型肝炎病毒 基因表达 实验研究
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Red重组系统在痢疾杆菌基因敲除中的应用研究 被引量:15
16
作者 胡堃 史兆兴 +2 位作者 王恒樑 冯尔玲 黄留玉 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期740-746,共7页
利用λ噬菌体的Red系统在细菌中进行基因敲除的技术 ,最近发展较快 ,但多在大肠杆菌中进行。以alkA、wcaJ、yphF和dam 4个基因为例 ,分别在大肠杆菌和痢疾杆菌中利用Red系统进行基因敲除。对于大肠杆菌 ,除dam基因外 ,其余 3个基因均能... 利用λ噬菌体的Red系统在细菌中进行基因敲除的技术 ,最近发展较快 ,但多在大肠杆菌中进行。以alkA、wcaJ、yphF和dam 4个基因为例 ,分别在大肠杆菌和痢疾杆菌中利用Red系统进行基因敲除。对于大肠杆菌 ,除dam基因外 ,其余 3个基因均能被有效敲除 ,而在痢疾杆菌中只能敲除一个alkA基因。结果表明 ,为使该系统能有效地应用于痢疾杆菌和其它细菌 ,还需对该系统进行改进。 展开更多
关键词 Red系统 基因敲除 突变体 重组系统 痢疾杆菌
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SARS病毒核衣壳蛋白、膜蛋白在大肠杆菌中的高效表达和纯化 被引量:11
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作者 易艳萍 李楚芳 +6 位作者 石玉岭 李林海 李平 黄维 王升启 马清钧 曹诚 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期392-396,共5页
通过反转录 PCR获得了SARS冠状病毒核衣壳蛋白 (N)和膜蛋白 (M)基因 ,其序列分析结果与加拿大多伦多株完全一致。将M基因和N基因克隆到大肠杆菌表达载体pET2 2b和pBV2 2 2上 ,并在大肠杆菌中以包涵体及可溶形式获得高效表达。通过离子... 通过反转录 PCR获得了SARS冠状病毒核衣壳蛋白 (N)和膜蛋白 (M)基因 ,其序列分析结果与加拿大多伦多株完全一致。将M基因和N基因克隆到大肠杆菌表达载体pET2 2b和pBV2 2 2上 ,并在大肠杆菌中以包涵体及可溶形式获得高效表达。通过离子交换、金属螯合层析纯化获得电泳纯制品。所获得的核衣壳蛋白具有良好的抗原性 。 展开更多
关键词 SARS病毒 核衣壳蛋白 膜蛋白 大肠杆菌 表达 纯化
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问号钩端螺旋体lipL32/1-lipL41/1融合基因原核表达系统的构建及其应用 被引量:9
18
作者 罗冬娇 严杰 +3 位作者 毛亚飞 李淑萍 罗依惠 李立伟 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2005年第1期27-32,共6页
目的 :构建问号钩端螺旋体 (简称钩体 ) lip L 32 / 1- lip L 4 1/ 1融合基因及其原核表达系统 ,了解钩体野生株 lip L32和 lip L4 1基因携带和表达情况及钩体患者的血清抗体水平。方法 :采用连接引物 PCR构建 lip L32 / 1- li-p L4 1/ ... 目的 :构建问号钩端螺旋体 (简称钩体 ) lip L 32 / 1- lip L 4 1/ 1融合基因及其原核表达系统 ,了解钩体野生株 lip L32和 lip L4 1基因携带和表达情况及钩体患者的血清抗体水平。方法 :采用连接引物 PCR构建 lip L32 / 1- li-p L4 1/ 1融合基因 ,常规方法构建其原核表达系统。采用 SDS- PAGE检测目的重组蛋白 r L ip L32 / 1- r L ip L4 1/ 1表达情况。采用 Western blot鉴定 r Lip L32 / 1- r Lip L4 1/ 1的免疫原性。采用 PCR和 MAT分别检测 97株问号钩体野生株 lip L32和 lip L4 1基因及其表达情况。采用 EL ISA检测 2 2 8例钩体患者血清 lip L32和 lip L4 1基因产物的抗体。结果 :与报道的相关序列比较 ,lip L 32 / 1- lip L 4 1/ 1融合基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为 99.9%和99.8%。目的重组蛋白 r Lip L32 / 1- r Lip L4 1/ 1表达产量约为细菌总蛋白的 10 % ,主要以包涵体形式存在。r L ip L32 /1和 r Lip L4 1/ 1兔抗血清均能与 r L ip L32 / 1- r L ip L4 1/ 1结合。 97.9%和 87.6 %问号钩体野生株分别有 lip L32和 li-p L4 1基因。95 .9%和 84 .5 %问号钩体野生株分别与 r Lip L32 s和 r Lip L4 1s兔抗血清出现效价 ,为 1∶ 4~ 1∶ 12 8的MAT阳性结果。分别有 94 .7%~ 97.4 %和 78. 展开更多
关键词 钩端螺旋体 问号 lipL32基因 lipL41基因 序列同源性 核酸 序列同源性 氨基酸 基因表达 克隆 分子 lipL32/1-lipL41/1融合基因/免疫学
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人血清白蛋白和人干扰素α2b的融合蛋白在毕赤酵母中的表达 被引量:16
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作者 唱韶红 巩新 +4 位作者 杨志愉 王同映 马国昌 马清钧 吴军 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期173-179,共7页
为了延长IFNα2b在血浆中的半衰期,构建了编码HSA和hIFNα2b的融合基因并在毕赤酵母中获得高效表达,工程菌经5L发酵罐培养后获得的含融合蛋白的培养液经超滤浓缩、蓝色葡聚糖凝胶层析、疏水柱层析以及阴离子柱层析,融合蛋白的纯度达到95... 为了延长IFNα2b在血浆中的半衰期,构建了编码HSA和hIFNα2b的融合基因并在毕赤酵母中获得高效表达,工程菌经5L发酵罐培养后获得的含融合蛋白的培养液经超滤浓缩、蓝色葡聚糖凝胶层析、疏水柱层析以及阴离子柱层析,融合蛋白的纯度达到95%以上。该融合蛋白能与干扰素抗体和人血清白蛋白抗体结合,并表现出与重组干扰素α2b相似的抗病毒活性。以猕猴为动物模型,分别从静脉和皮下单剂量给药,给药浓度为90μg/kg时,在336h后血浆中仍可检测到融合蛋白。其静脉注射的血浆半衰期为101h,皮下注射的半衰期为68.2h。皮下注射的生物利用度为67.9%。IFNα2b与HSA融合后,明显的延长了血浆半衰期,显现了其良好的临床应用前景。 展开更多
关键词 干扰素 人血清白蛋白 融合蛋白 半衰期 毕赤酵母
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应用膜反向斑点杂交技术快速检测结核分支杆菌耐乙胺丁醇基因型的研究 被引量:10
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作者 梁建琴 吴雪琼 +2 位作者 曹立雪 李洪敏 张俊仙 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期215-219,共5页
应用膜反向斑点杂交技术快速检测结核分支杆菌对乙胺丁醇 (EMB)耐药性。设计与合成用于检测结核分支杆菌耐EMB基因embB的寡核苷酸探针 ,点于硝酸纤维素膜上 ,与结核分支杆菌临床分离株生物素标记的聚合酶链反应 (PCR)产物进行反向斑点杂... 应用膜反向斑点杂交技术快速检测结核分支杆菌对乙胺丁醇 (EMB)耐药性。设计与合成用于检测结核分支杆菌耐EMB基因embB的寡核苷酸探针 ,点于硝酸纤维素膜上 ,与结核分支杆菌临床分离株生物素标记的聚合酶链反应 (PCR)产物进行反向斑点杂交 ,并与PCR 单链构象多态性 (PCR SSCP)和PCR 直接测序 (PCR DS)结果比较。对 81株结核分支杆菌临床分离株进行分析 ,31株EMB敏感株中 ,2 6株embB基因的SSCP图谱、膜反向斑点杂交结果与标准株 (H37Rv)完全相同 ;其余 5株SSCP图谱出现泳动变位 ,其中 3株E1b杂交阳性 ,PCR DS分析为embB基因 30 6位密码子ATG→GTG突变 ;2株E1d杂交阳性 ,PCR DS分析为embB基因 30 6位密码子ATG→ATA突变。 5 0株耐EMB菌株中 ,2 4株PCR SSCP图谱与标准菌株相同 ,E1杂交阳性 ;2 6株PCR SSCP图谱出现泳动变位 ,其中 18株E1b杂交阳性 ,2株E1c杂交阳性 ,5株E1d杂交阳性 ,1株E1e杂交阳性 ,未发现E1f杂交阳性 ,与PCR SSCP、PCR DS分析结果一致。突变检出率为 5 2 %。膜反向斑点杂交技术可能成为检测部分结核分支杆菌乙胺丁醇耐药基因型简便、快速的方法。 展开更多
关键词 膜反向斑点杂交 结核分支杆菌 乙胺丁醇 EMBB基因 药物耐受性 结核病
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