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环氧合酶-2在结直肠癌中的表达及其机制
1
作者 张虹 喻长法 +3 位作者 叶丽君 蔡莎莎 廖南生 方涵 《广东医学》 2025年第7期999-1004,共6页
目的通过检测环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)在结直肠癌组织及癌旁组织中的表达差异,探讨其表达水平与结直肠癌的临床病理特征之间的相关性及其对结直肠癌生物学行为的潜在影响。方法通过免疫组化染色(S-P)和Western blot(WB)检测... 目的通过检测环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)在结直肠癌组织及癌旁组织中的表达差异,探讨其表达水平与结直肠癌的临床病理特征之间的相关性及其对结直肠癌生物学行为的潜在影响。方法通过免疫组化染色(S-P)和Western blot(WB)检测结直肠癌及癌旁组织中COX-2蛋白的表达,通过荧光定量聚合酶链反应检测COX-2在人结直肠癌细胞系中的表达水平,通过CCK-8检测COX-2调控结直肠癌细胞活性的变化,Kaplan-Meier生存曲线评价患者的累积生存率,独立危险因素采用Cox回归分析。结果结直肠癌组中COX-2的高表达率显著高于癌旁组(61.5%vs.21.8%,P<0.05)。TNM分期越高、分化程度越低及有淋巴结转移者COX-2的表达越高(χ^(2)=16.385、5.970、6.307,P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析表明,与COX-2高表达组相比,低表达组的累积生存率较高(χ^(2)=5.774,P<0.05)。Cox回归分析显示,影响结直肠癌患者预后的独立危险因素为TNM分期、组织的分化程度、淋巴结转移和COX-2(χ^(2)=7.382、10.241、4.132、7.728,P<0.05)。在SW480细胞株中敲低COX-2,其细胞活性显著降低,凋亡相关蛋白PARP1和自噬标志蛋白LC3II显著升高;而过表达后,细胞活性显著升高,PARP1和LC3II显著降低(P<0.05)。结论结直肠癌患者中COX-2表达水平升高,可能是通过自噬信号通路对结直肠癌的增殖进行调控,是影响结其预后的独立危险因素。 展开更多
关键词 环氧合酶-2 结直肠癌 表达 自噬
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叉头框蛋白C1在结直肠癌中的表达及机制
2
作者 蒋亚萍 喻长法 +1 位作者 蔡莎莎 符竣惠 《广东医学》 2025年第8期1206-1211,共6页
目的探讨叉头框蛋白C1(FOXC1)在结直肠癌组织中的表达及其调控机制。方法收集2019年1月至2020年12月确诊的60例结直肠癌病例,运用免疫组织化学法(S-P)对比检测癌组织与癌旁组织中FOXC1的蛋白定位及表达差异。采用CCK-8增殖实验评估FOXC... 目的探讨叉头框蛋白C1(FOXC1)在结直肠癌组织中的表达及其调控机制。方法收集2019年1月至2020年12月确诊的60例结直肠癌病例,运用免疫组织化学法(S-P)对比检测癌组织与癌旁组织中FOXC1的蛋白定位及表达差异。采用CCK-8增殖实验评估FOXC1对肿瘤细胞生长的影响,结合蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白及自噬标志物的动态变化。结果免疫组化显示癌组织中FOXC1高表达率较癌旁组织显著提升(P<0.05),其表达强度在TNM分期、组织分化等级及淋巴结转移等方面差异有统计学意义(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析证实FOXC1低表达组患者生存率较高表达组提高(P<0.05)。Cox回归揭示FOXC1表达量、TNM分期、淋巴结转移及分化程度构成独立预后因素(P<0.05)。分子机制研究表明,抑制FOXC1表达可使细胞增殖能力下降,同时激活C-PARP1及LC3Ⅱ等凋亡自噬相关蛋白;而过表达FOXC1则显著增强细胞活力,并抑制C-PARP1及LC3Ⅱ表达。值得注意的是,联合应用自噬抑制剂3MA可逆转FOXC1敲低引发的自噬效应。结论FOXC1在结直肠癌中呈现特异性高表达特征,其通过调控细胞凋亡与自噬平衡发挥促癌作用,可能成为潜在治疗靶点。 展开更多
关键词 叉头框蛋白C1 结直肠癌 表达 自噬
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miRNA-182在结直肠癌患者中的表达及临床意义
3
作者 蒋亚萍 蔡莎莎 廖南生 《广东医学》 2025年第5期732-737,共6页
目的探讨微小核糖核酸-182(miRNA-182)在结直肠癌患者及结直肠癌细胞中的表达及临床意义。方法选取2019年1月至2023年12月在医院住院的65例结直肠癌患者为研究对象,以同期到医院体检的65例为对照组,通过实时荧光定量PCR检测miRNA-182的... 目的探讨微小核糖核酸-182(miRNA-182)在结直肠癌患者及结直肠癌细胞中的表达及临床意义。方法选取2019年1月至2023年12月在医院住院的65例结直肠癌患者为研究对象,以同期到医院体检的65例为对照组,通过实时荧光定量PCR检测miRNA-182的表达水平,同时对各结直肠癌细胞系中miRNA-182的表达水平进行检测,通过抑制及过表达miRNA-182后评价细胞活性变化。结果结直肠癌组miRNA-182与对照组相比,表达水平有显著提高(t=11.227、21.441,P<0.05);在TNM分期、淋巴结转移和分化程度方面,miRNA-182的表达水平差异有统计学意义(t=7.609、8.078、6.485,P<0.05);结直肠癌的诊断中miRNA-182的曲线下面积(AUC)为0.934,可见其诊断效率较高;Kaplan-Meier生存分析结果表明,miRNA-182低表达组的累积生存率显著高于高表达组的累积生存率;通过Cox回归分析发现,TNM分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移和miRNA-182均为独立危险因子(P<0.05)。另外,miRNA-182在多种结直肠癌细胞系中的表达水平比正常的肠内皮细胞有明显提高;肠癌细胞在抑制miRNA-182的表达后,其活性明显降低,细胞凋亡相关蛋白Cleaved-PARP1(C-PARP1)、自噬标志蛋白LC3Ⅱ的表达呈上升趋势;而经过过表达miRNA-182后,细胞活性增高,凋亡相关蛋白C-PARP1的表达减少,LC3Ⅱ的表达也受到抑制。结论作为一种癌基因,miRNA-182在结直肠癌患者中呈现出上调的表达水平,同时也是一种独立的危险因子。此外,通过调节细胞自噬信号通路,miRNA-182还对结直肠癌细胞起到促进癌症的作用。 展开更多
关键词 微小核糖核酸-182 结直肠癌 增殖 自噬
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温肾健脾方通过p70S6K信号通路调控自噬减轻糖尿病肾病大鼠足细胞损伤的机制
4
作者 史波 李如瑶 +2 位作者 金汀龙 王金 曹晓丹 《中国药理学通报》 北大核心 2025年第3期567-573,共7页
目的探究基于70 ku核糖体S6激酶(phosphoprotein 70 S6 kinase,p70S6K)信号通路的温肾健脾方调控自噬减轻糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠足细胞损伤的作用机制。方法将链脲佐菌素诱导的DN模型大鼠分为5组,每组6只,即DN对照组... 目的探究基于70 ku核糖体S6激酶(phosphoprotein 70 S6 kinase,p70S6K)信号通路的温肾健脾方调控自噬减轻糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠足细胞损伤的作用机制。方法将链脲佐菌素诱导的DN模型大鼠分为5组,每组6只,即DN对照组、温肾健脾方低剂量组(7.5 g·kg^(-1)·d^(-1))、温肾健脾方中剂量组(15 g·kg^(-1)·d^(-1))、温肾健脾方高剂量组(30 g·kg^(-1)·d^(-1))、缬沙坦阳性对照组(25 mg·kg^(-1)·d^(-1)),另以6只正常大鼠作为阴性对照组(等渗NaCl溶液10 mL·kg^(-1)·d^(-1)),各组大鼠连续灌胃8周。测定各组大鼠空腹血糖、尿液白蛋白/肌酐比值(urine albumin/creatinine ratio,UACR)和血液黏滞性,透射电镜观察各组大鼠足细胞结构和自噬小体变化,Western blot检测各组大鼠肾脏组织信号通路因子p70S6K和自噬因子p62的表达水平,免疫组化检测各组大鼠肾脏组织p62的表达水平。结果温肾健脾方可降低DN大鼠空腹血糖和UACR比值,改善血液黏滞性。透射电镜提示,温肾健脾方能够明显改善DN模型大鼠足细胞结构,提高足细胞自噬水平。Western blot结果提示,DN模型大鼠肾脏细胞信号通路因子p70S6K和自噬因子p62表达水平比空白对照组大鼠明显升高,差异有统计学意义( P <0.01)。与模型对照组相比,不同浓度温肾健脾方干预后p70S6K和p62表达水平均有所下降( P <0.05),其中温肾健脾方中剂量组变化最为显著。免疫组化结果显示,与对照组大鼠相比,DN大鼠肾脏组织自噬因子p62水平升高,温肾健脾方对DN大鼠p62的表达有一定的抑制作用。 结论 温肾健脾方可能通过抑制DN大鼠肾脏组织p70S6K水平,降低自噬因子p62表达,诱导肾脏细胞自噬增强进而恢复细胞稳态。 展开更多
关键词 温肾健脾方 糖尿病肾病 自噬 足细胞 P70S6K P62
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CHK2调节PARP1对血管性痴呆大鼠神经功能影响
5
作者 姚婷 邓谦 +3 位作者 周颖 石红梅 蒋军林 吴玉华 《青岛大学学报(医学版)》 2025年第5期659-664,共6页
目的探讨周期检查点激酶2(CHK2)调节聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP1)对血管性痴呆(VD)大鼠神经功能的影响及相关机制。方法将46只成年雄性SD大鼠分为4组:阴性对照组(13只)、模型组(13只)、CHK2 shRNA组(10只)以及PARP1 shRNA组(10只)。... 目的探讨周期检查点激酶2(CHK2)调节聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP1)对血管性痴呆(VD)大鼠神经功能的影响及相关机制。方法将46只成年雄性SD大鼠分为4组:阴性对照组(13只)、模型组(13只)、CHK2 shRNA组(10只)以及PARP1 shRNA组(10只)。采用苏木精-伊红染色观察大鼠海马组织和神经元的病理变化,TUNEL实验检测大鼠海马组织神经细胞的凋亡,水迷宫实验评估大鼠穿越平台次数和逃避潜伏期时间的变化,酶联免疫吸附试验检测大鼠海马组织的白细胞介素-1β、白细胞介素-6和肿瘤坏死因子-α表达,比色法检测海马组织超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)及丙二醛(MDA)表达,蛋白免疫印迹实验检测大鼠海马组织CHK2与PARP1的表达。结果各检测指标均数多组间比较,差异均有显著性(F=46.850~607.692,P<0.001)。与模型组大鼠比较,CHK2 shRNA组和PARP1 shRNA组损伤的海马组织结构得到改善、海马神经元凋亡数量减少(P<0.05),大鼠穿越平台次数增多、逃避潜伏期时间缩短(P<0.05),海马组织炎症因子及MDA表达降低,而SOD及GSH表达增加(P<0.05)。CHK2 shRNA组大鼠海马组织PARP1的表达降低(P<0.05)。结论抑制VD大鼠体内CHK2表达可改善其认知功能,其机制可能与干扰CHK2后导致PARP1表达降低相关。 展开更多
关键词 痴呆 血管性 周期检测点激酶2 多(ADP核糖)聚合酶1 炎症介导素类 氧化性应激 记忆与学习测试 大鼠 Sprague-Dawley
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基于MAPK/ERK信号通路探讨siRNA介导MAGE-3沉默对胃癌大鼠肠道菌群、胃黏膜PTEN表达及肝转移的作用机制 被引量：2
6
作者 章帅 刘靓靓 +2 位作者 赵轶峰 盛茹 李曙光 《中国药理学通报》 北大核心 2025年第3期508-514,共7页
目的探讨基于MAPK/ERK信号通路探讨siRNA介导MAGE-3沉默对胃癌大鼠肠道菌群、胃黏膜PTEN表达及肝转移的作用机制。方法30只大鼠,随机分为正常(CO)组,模型(MO)组,MAGE-3沉默(SM)组,每组10只,对MO组、SM组采用MNNG灌胃法建模,建模成功后,... 目的探讨基于MAPK/ERK信号通路探讨siRNA介导MAGE-3沉默对胃癌大鼠肠道菌群、胃黏膜PTEN表达及肝转移的作用机制。方法30只大鼠,随机分为正常(CO)组,模型(MO)组,MAGE-3沉默(SM)组,每组10只,对MO组、SM组采用MNNG灌胃法建模,建模成功后,对SM组腹腔注射20μg·kg^(-1) shRNA MAGE-3慢病毒载体,肠道菌群选择性培养基检测大鼠肠道菌群数量,免疫组化法检测胃黏膜PTEN表达,HE染色检测肝转移情况,免疫印迹法检测MAPK/ERK信号通路蛋白表达,体外实验验证siRNA介导MAGE-3沉默对MAPK/ERK信号通路的调节作用。结果与CO组相比,MO组肠球菌、大肠埃希菌含量、p-MEK1、p-ERK1、p-Elk1蛋白表达升高(P<0.05),乳酸杆菌、双岐杆菌含量、PTEN表达降低(P<0.05),与MO组比较,SM组肠球菌、大肠埃希菌含量、p-MEK1、p-ERK1、p-Elk1蛋白表达降低(P<0.05),乳酸杆菌、双岐杆菌含量、PTEN表达升高(P<0.05);与CO组相比,MO组细胞p-MEK1、p-ERK1、p-Elk1蛋白表达无明显差异(P>0.05),与MO组比较,SM组细胞p-MEK1、p-ERK1、p-Elk1蛋白表达降低(P<0.05)。结论siRNA介导MAGE-3沉默可明显改善胃癌大鼠肠道菌群,促进胃黏膜PTEN表达,并抑制肝转移,其作用机制可能与抑制MAPK/ERK信号通路有关。 展开更多
关键词 MAPK/ERK信号通路 MAGE-3 胃癌 肠道菌群 PTEN 肝转移
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枸杞糖肽激活CAMKK2/AMPK/MCU信号通路改善大鼠卵巢颗粒细胞衰老 被引量：1
7
作者 刘晓丹 凌晨 +5 位作者 刘璐 蒲静 马海滨 马会明 张文萍 陈冬梅 《中国药理学通报》 北大核心 2025年第6期1116-1125,共10页
目的探讨枸杞糖肽(Lycium barbarum glycopeptide,LbGP)改善大鼠原代卵巢颗粒细胞衰老的作用机制。方法大鼠原代卵巢颗粒细胞分为正常组,DOX组及DOX加入4种不同浓度的LbGP治疗组干预后,通过CCK-8、EDU和Ki67检测细胞增殖情况、免疫荧光... 目的探讨枸杞糖肽(Lycium barbarum glycopeptide,LbGP)改善大鼠原代卵巢颗粒细胞衰老的作用机制。方法大鼠原代卵巢颗粒细胞分为正常组,DOX组及DOX加入4种不同浓度的LbGP治疗组干预后,通过CCK-8、EDU和Ki67检测细胞增殖情况、免疫荧光法、蛋白免疫印迹法检测衰老标志和线粒体功能相关因子。结果CCK-8、EDU、Ki67与DOX组相比,经LbGP治疗可明显提高细胞活力(P<0.05),促进增殖(P<0.05);与DOX组相比,LbGP治疗后细胞中β-半乳糖苷酶阳性面明显减少(P<0.05);免疫荧光结果显示:与DOX组相比,LbGP治疗后p21、γH2A.X下降(P<0.05)、pRB升高(P<0.05);Western blot结果显示,与DOX组相比,LbGP治疗组衰老表型蛋白p21、p53明显减少(P<0.05),pRB升高(P<0.05);线粒体释放到胞质中的cyt C和活化的caspase-9明显减少(P<0.05);CAMKK2、pAMPK和线粒体钙稳态调节蛋白MCU水平升高(P<0.05);细胞核中能量代谢相关蛋白SIRT1、PGC1α/β和ATP5A1明显升高(P<0.05);与DOX组相比,LbGP治疗后ROS水平明显下降(P<0.05)。结论LbGP可改善DOX诱导的大鼠原代卵巢颗粒细胞衰老,其机制可能是通过上调CAMKK2/AMPK信号通路,进而改善线粒体钙稳态,提高细胞能量代谢相关调节蛋白的表达水平实现的。为LbGP能够辅助改善卵巢功能提供了实验基础。 展开更多
关键词 枸杞糖肽 衰老 CAMKK2/AMPK信号通路 线粒体钙稳态 能量代谢 大鼠原代卵巢颗粒细胞
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香草醛对LPS诱导的BV2细胞TREM2/PI3K表达的影响 被引量：1
8
作者 苏琳琳 梁冰 +1 位作者 袁庆 胡利民 《中国药理学通报》 北大核心 2025年第6期1199-1200,共2页
川芎为伞形科植物川芎(Ligusticum chuanxiong Hort.)的干燥根茎,具有活血行气,祛风止痛的功效[1]。香草醛(vanillin)作为川芎的主要活性成分,具有抗炎、抗氧化、抗菌、抗癌等特性[2]。骨髓细胞表达的触发受体2(triggering receptor exp... 川芎为伞形科植物川芎(Ligusticum chuanxiong Hort.)的干燥根茎,具有活血行气,祛风止痛的功效[1]。香草醛(vanillin)作为川芎的主要活性成分,具有抗炎、抗氧化、抗菌、抗癌等特性[2]。骨髓细胞表达的触发受体2(triggering receptor expressed on myeloid cells-2,TREM2)作为小胶质细胞上特异性蛋白,参与小胶质细胞增殖、存活、迁移和吞噬作用,调控小胶质细胞从M1型向M2型转变,从而减少炎症反应[3]。TREM2可以通过激活磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)信号通路影响小胶质细胞的吞噬和炎症反应[4]。本实验通过LPS诱导的BV2细胞炎症模型,观察香草醛对BV2细胞释放的一氧化氮(nitric oxide,NO)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)水平以及TREM2/PI3K的表达的影响,探讨香草醛是否通过调控TREM2/PI3K信号通路发挥抗炎作用,为香草醛的研究和川芎的临床应用提供依据。 展开更多
关键词 香草醛 BV2 LPS NO TNF-α IL-6 IL-1Β TREM2/PI3K
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基于线粒体自噬探讨加味少腹逐瘀汤治疗子宫内膜异位症纤维化的作用机制 被引量：1
9
作者 黄灿灿 万文文 +7 位作者 吉秀家 岳斌 张育贵 张小花 梁莉 陈国廉 武权生 毛海燕 《中国药理学通报》 北大核心 2025年第6期1177-1185,共9页
目的探讨加味少腹逐瘀汤通过调控线粒体自噬发挥拮抗子宫内膜异位症纤维化的机制。方法构建动物模型后以一般状况、器官含水率、热成像评价证候;以异位灶重量和粘连程度评价疗效;HE染色、透射电镜、Masson和天狼星红染色比较病理变化;... 目的探讨加味少腹逐瘀汤通过调控线粒体自噬发挥拮抗子宫内膜异位症纤维化的机制。方法构建动物模型后以一般状况、器官含水率、热成像评价证候;以异位灶重量和粘连程度评价疗效;HE染色、透射电镜、Masson和天狼星红染色比较病理变化;免疫组化检测PINK1、Parkin的表达;qPCR和Western blot测定mRNA和蛋白表达,ELISA检测血清ROS水平。结果模型小鼠自主活动减弱,脏器含水率增加,热成像见四肢和下腹部温度降低;HE染色可见异位上皮及腺体增生明显,透射电镜可见线粒体、内质网结构损伤,正常自噬结构消失;Masson和天狼星红染色显示胶原沉积加重;免疫组化显示异位灶PINK1、Parkin表达降低;qPCR和Western blot显示模型小鼠异位灶PINK1、Parkin、Beclin1、LC3 mRNA及蛋白表达降低,p62 mRNA及蛋白表达增加,血清ROS升高。加味少腹逐瘀汤干预后模型小鼠证候表现改善;异位灶炎症浸润缓解,线粒体和内质网形态恢复,出现正常自噬结构;胶原沉积及纤维化程度减轻;PINK1、Parkin、Beclin1、LC3 mRNA及蛋白表达增加;p62 mRNA及蛋白表达降低,ROS水平降低。结论加味少腹逐瘀汤可以改善寒湿瘀结证子宫内膜异位症小鼠异位病灶纤维化,可能与调控线粒体自噬有关。 展开更多
关键词 子宫内膜异位症 寒湿瘀结证 纤维化 加味少腹逐瘀汤 PINK1/Parkin信号通路 线粒体自噬
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抗癌靶点PARP7及其抑制剂研究进展
10
作者 赵桢煜 卢小路 李健 《中国药理学通报》 北大核心 2025年第4期620-625,共6页
PARP7是一种属于PARP家族的单-ADP核糖转移酶,其作用为催化ADP核糖从NAD+转移到自身和其他底物蛋白的特定氨基酸。PARP7在许多肿瘤中过度活跃,可干预干扰素信号通路使癌细胞实现免疫逃逸。通过抑制PARP7可恢复肿瘤细胞中IFN-β表达,从... PARP7是一种属于PARP家族的单-ADP核糖转移酶,其作用为催化ADP核糖从NAD+转移到自身和其他底物蛋白的特定氨基酸。PARP7在许多肿瘤中过度活跃,可干预干扰素信号通路使癌细胞实现免疫逃逸。通过抑制PARP7可恢复肿瘤细胞中IFN-β表达,从而激活T细胞介导的体内抗肿瘤免疫,因此PARP7被认为是癌症治疗新的免疫调节靶点。目前,仅有1个PARP7选择性抑制剂RBN-2397进入临床Ⅰ期研究。该文重点介绍PARP7的结构、生物学功能、PARP7与癌症发生的关联性及PARP7相关抑制剂研究进展进行综述,以期为PARP7新型抑制剂的研发以及RBN-2397的结构优化提供理论基础和新思路。 展开更多
关键词 PARPs PARP7 monoPARPs IFN-1 抗癌靶点 PARP7小分子抑制剂
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日本血吸虫谷胱甘肽-S-转移酶在虫卵阶段的定位 被引量：19
11
作者 王志成 徐元宏 +5 位作者 汪学龙 李敏 罗飞 郑美娟 罗庆礼 沈继龙 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2007年第1期1-4,共4页
目的探讨谷胱甘肽-S-转移酶(Sj26GST)在虫卵阶段的表达、定位和重组蛋白(rSj26GST)的免疫诊断价值。方法从感染日本血吸虫尾蚴6周的兔肝脏中分离虫卵,分别用RT-PCR和免疫印迹(Western blotting)法检测Sj26GST基因在虫卵阶段的转录和翻译... 目的探讨谷胱甘肽-S-转移酶(Sj26GST)在虫卵阶段的表达、定位和重组蛋白(rSj26GST)的免疫诊断价值。方法从感染日本血吸虫尾蚴6周的兔肝脏中分离虫卵,分别用RT-PCR和免疫印迹(Western blotting)法检测Sj26GST基因在虫卵阶段的转录和翻译;同时用兔肝做免疫组化观察Sj26GST在虫卵内的分布。利用纯化的rSj26GST和日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA),采用间接ELISA法检测急、慢性血吸虫病患者和正常人血清。结果RT-PCR从血吸虫虫卵中扩增670bp的基因片断,Western blotting证明在虫卵阶段Sj26GST的表达;同时免疫组化显示Sj26GST主要分布在虫卵内毛蚴两边的侧腺。rSj26GST检测急、慢性血吸虫病患者和正常人血清的阳性率分别为92%、80%和0;用SEA检测以上标本,阳性率分别为96%、84%和2%。结论Sj26GST是SEA的主要组分之一,能刺激机体产生高滴度的抗体;rSj26GST为抗原诊断日本血吸虫病显示出高度的敏感性和特异性,具有实用价值。 展开更多
关键词 血吸虫 日本 血吸虫病/诊断 寄生虫虫卵计数
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重组日本血吸虫26ku谷胱甘肽-硫-转移酶的表达、纯化及其免疫特性分析用于急性血吸虫病免疫诊断 被引量：11
12
作者 罗庆礼 沈继龙 +5 位作者 汪学龙 刘淼 胡元生 钟政荣 王家传 袁小松 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2005年第6期491-494,共4页
目的将日本血吸虫(中国大陆株)26ku谷胱甘肽硫转移酶(26kuSjGST)基因克隆入pET28a(+)并诱导表达26kurSjGST蛋白,纯化并用于急性血吸虫病免疫诊断。方法构建重组质粒pET28aSjGST,转化到E.coliBL21,经IPTG诱导表达并进行SDS变性蛋白质电泳... 目的将日本血吸虫(中国大陆株)26ku谷胱甘肽硫转移酶(26kuSjGST)基因克隆入pET28a(+)并诱导表达26kurSjGST蛋白,纯化并用于急性血吸虫病免疫诊断。方法构建重组质粒pET28aSjGST,转化到E.coliBL21,经IPTG诱导表达并进行SDS变性蛋白质电泳,以小鼠抗GST单克隆抗体为一抗,进行Westernblot分析。用His·BandPurificationKit亲和层析纯化重组蛋白,以此重组蛋白作为抗原,用ELISA法检测急性血吸虫患者血清和非流行区正常人血清。结果成功地构建了重组质粒pET28aSjGST,SDS变性蛋白质电泳显示可见一与预期分子量大小相符的特异蛋白条带的表达。Westernblot分析表明,该重组蛋白能被小鼠抗GST单克隆抗体识别。ELISA结果表明,rSjGST用于急性血吸虫患者血清中抗体检测的阳性率为92.3%。结论rSjGST得到表达和纯化,该重组蛋白用于急性血吸虫患者血清中抗体的检测具有良好的免疫反应性,为进一步探讨其在血吸虫病诊断中的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 血吸虫 日本 谷胱甘肽转移酶 血吸虫病/诊断 酶 联免疫吸附测定
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米糠蛋白酶解产物中血管紧张素转化酶抑制剂的研究 被引量：5
13
作者 毕昊 刘志国 +2 位作者 屈伸 王亚林 吴琼 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期699-702,706,共5页
目的从米糠蛋白酶解产物中提取制备血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂。方法采用等电点沉淀的方法提取米糠中的蛋白质,先后经胃蛋白酶和胰蛋白酶水解后,采用凝胶层析法分离酶解组分,检测各组分ACE抑制性,对活性较强的组分用阳离子交换树脂SP-... 目的从米糠蛋白酶解产物中提取制备血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂。方法采用等电点沉淀的方法提取米糠中的蛋白质,先后经胃蛋白酶和胰蛋白酶水解后,采用凝胶层析法分离酶解组分,检测各组分ACE抑制性,对活性较强的组分用阳离子交换树脂SP-Sephadex C-25作进一步的分离检测。结果获得的ACE抑制肽分子量为307.1,其等电点在5～6之间。它在消化液中具有稳定性。其IC50为0.061mg/ml。结论从米糠蛋白酶解产物中获取了ACE抑制剂。 展开更多
关键词 米糠蛋白 胃蛋白酶 胰蛋白酶 血管紧张素转化酶抑制剂 分离和提纯
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多重PCR检测鲍曼不动杆菌氨基糖苷乙酰转移酶相关基因 被引量：5
14
作者 刘丁 陈萍 +1 位作者 李玉红 杨程 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第23期2320-2322,共3页
目的分析aac耐药基因亚型在临床分离的耐氨基糖苷类鲍曼不动杆菌中的检出情况,建立检测鲍曼不动杆菌耐药性的分子生物学方法。方法对从临床分离的42株鲍曼不动杆菌,进行药敏试验同时行aac耐药基因PCR检测。结果本地区所分离的鲍曼不动... 目的分析aac耐药基因亚型在临床分离的耐氨基糖苷类鲍曼不动杆菌中的检出情况,建立检测鲍曼不动杆菌耐药性的分子生物学方法。方法对从临床分离的42株鲍曼不动杆菌,进行药敏试验同时行aac耐药基因PCR检测。结果本地区所分离的鲍曼不动杆菌对庆大霉素耐药率最高(57%),对丁胺卡那耐药率较低(29%)。在对妥布霉素、庆大霉素、丁胺卡那至少一种耐药的鲍曼不动杆菌中,除2株细菌外,均检测到乙酰转移酶基因,其中6株有aac(6′)-Ih、20株为aac(3)-Ia、14株含aac(6′)-Ib、14株同时含aac(3)-Ia和aac(6′)-Ib。结论本地区鲍曼不动杆菌对临床常用氨基糖苷类抗生素庆大霉素耐药率高,其耐药主要是由aac(3)-Ia、aac(6′)-Ib编码的酶引起。 展开更多
关键词 鲍曼不动杆菌 多聚酶链反应 氨基糖苷类耐药
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截短人胱硫醚β-合成酶的可溶性表达、纯化及活性鉴定 被引量：3
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作者 王利群 顾雅平 +5 位作者 曹利民 汪庆 于海燕 奚学志 孙培培 沈关心 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期697-703,共7页
目的构建截短人胱硫醚β-合成酶(T-hCBS)基因原核表达载体,得到可溶性的T-hCBS蛋白,为同型半胱氨酸检测试剂盒的开发打下基础。方法通过优化T-hCBS基因,克隆并构建重组表达质粒pET15b/T-hCBS,转化大肠埃希菌BL21。使用Ni 2+亲和层析柱... 目的构建截短人胱硫醚β-合成酶(T-hCBS)基因原核表达载体,得到可溶性的T-hCBS蛋白,为同型半胱氨酸检测试剂盒的开发打下基础。方法通过优化T-hCBS基因,克隆并构建重组表达质粒pET15b/T-hCBS,转化大肠埃希菌BL21。使用Ni 2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,再通过HiTrap脱盐柱脱盐,采用比色法检测目的蛋白活性。结果重组蛋白在大肠埃希菌中可以高效表达,产量为44mg/L,比活约1 100U/mg。15%SDS-PAGE显示其相对分子质量为45kD,与预计大小一致。表达菌体超声破碎后上清及纯化的蛋白溶液均呈现红色。结论成功克隆和表达了T-hCBS蛋白,并得到高产高酶活性的可溶性蛋白,对同型半胱氨酸检测试剂盒的开发有一定的潜在应用价值。 展开更多
关键词 胱硫醚Β-合成酶 重组 可溶性蛋白 表达
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丙酮酸脱氢酶激酶-1在人结肠癌中的表达及意义 被引量：4
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作者 童晶涛 梁后杰 +3 位作者 陈建芳 江恒 谢赣丰 刘平 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期257-260,共4页
目的检测丙酮酸脱氢酶激酶-I(pyruvate dehydrogenase kinase-I,PDK1)在人结肠癌组织和细胞中的表达。探讨抑制PDK1对结肠癌细胞活性的影响。方法应用RT-PCR、荧光定量PCR和免疫荧光法、Western blot检测结肠癌组织、癌旁组织以及4种人... 目的检测丙酮酸脱氢酶激酶-I(pyruvate dehydrogenase kinase-I,PDK1)在人结肠癌组织和细胞中的表达。探讨抑制PDK1对结肠癌细胞活性的影响。方法应用RT-PCR、荧光定量PCR和免疫荧光法、Western blot检测结肠癌组织、癌旁组织以及4种人结肠癌细胞PDK1基因的表达情况。在PDK1抑制剂(dichloroacetate,DCA)的诱导下,通过MTT法观察结肠癌细胞活性。结果PDK1基因在结肠癌组织中表达较癌旁组织中高;在4种人结肠癌细胞中明显表达。抑制PDK1能抑制结肠癌细胞增殖活性,抑制效应随药物浓度而递增,其中90 mmol/L DCA的活性细胞率分别为(23.90±2.79)%、(5.90±1.31)%、(32.82±4.50)%和(29.72±3.03)%。结论PDK1基因在结肠癌组织和细胞中高表达,在癌旁组织中低表达,抑制PDK1明显抑制结肠癌细胞增殖活性,PDK1可望成为结肠癌有效治疗靶点。 展开更多
关键词 结肠肿瘤 糖原酵解 丙酮酸脱氢酶激酶-1
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龙马方活性成分配伍通过调控Wnt/β-catenin信号通路促进软骨细胞增殖
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作者 裴梓含 曹寅生 +4 位作者 张琪瑶 蒋堃 周功瑾 董克芳 吴萍 《中国药理学通报》 北大核心 2025年第9期1776-1782,共7页
目的基于Wnt/β-catenin信号通路,研究龙马方中活性成分马钱子碱(brucine,Bru)和蚓激酶(lumbrokinase,LK)配伍促进软骨细胞增殖的作用与机制。方法将原代软骨细胞分为Control、Bru、LK单用组及Bru+LK配伍组,采用CCK-8法筛选最佳配伍浓... 目的基于Wnt/β-catenin信号通路,研究龙马方中活性成分马钱子碱(brucine,Bru)和蚓激酶(lumbrokinase,LK)配伍促进软骨细胞增殖的作用与机制。方法将原代软骨细胞分为Control、Bru、LK单用组及Bru+LK配伍组,采用CCK-8法筛选最佳配伍浓度及干预时间;通过EdU和鬼笔环肽染色验证细胞增殖;蛋白免疫印迹法检测活性成分配伍干预软骨细胞后,Ⅱ型胶原(collagenⅡ)、聚集蛋白聚糖(aggrecan)、SRY相关高迁移率族盒基因9(SRY-related high-mobility group box gene 9,SOX9)的蛋白表达及其对Wnt/β-catenin信号通路的调控。结果龙马方活性成分最佳配伍浓度(Bru 0.025 mg·L^(-1)+LK 5 mg·L^(-1))在48 h时,与Control组、Bru或LK单用组相比,可明显提高软骨细胞存活率,增加软骨细胞S期比率,促进肌动蛋白聚集,上调collagenⅡ、aggrecan的蛋白表达,并通过激活Wnt/β-catenin通路上调SOX9的表达。结论龙马方活性成分Bru与LK的最佳配伍(Bru 0.025 mg·L^(-1)+LK 5 mg·L^(-1))能够有效维持软骨细胞表型,并通过调控Wnt/β-catenin信号通路,进而激活下游关键转录因子SOX9的表达,最终促进软骨细胞增殖。 展开更多
关键词 龙马方 活性成分 马钱子碱 蚓激酶 软骨细胞增殖 WNT/Β-CATENIN信号通路
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成人急性淋巴细胞白血病巯嘌呤甲基转移酶基因多态性研究 被引量：3
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作者 葛健 夏瑞祥 +5 位作者 卜丽佳 左艳 左莉 周青 汪渊 曾庆曙 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2006年第2期185-188,共4页
目的研究我国成人急性淋巴细胞白血病(ALL)患者及健康汉族人群巯嘌呤甲基转移酶(TPMT)基因多态性。方法从78例成人ALL患者和154例健康汉族人外周血提取白细胞基因组DNA,采用等位基因特异性PCR(ASPCR)和PCR结合限制性片断长度多态性(PCRR... 目的研究我国成人急性淋巴细胞白血病(ALL)患者及健康汉族人群巯嘌呤甲基转移酶(TPMT)基因多态性。方法从78例成人ALL患者和154例健康汉族人外周血提取白细胞基因组DNA,采用等位基因特异性PCR(ASPCR)和PCR结合限制性片断长度多态性(PCRRFLP)技术对TPMT2、TPMT3A、TPMT3B和TPMT3C的等位基因频率进行分析。结果在成人ALL患者和健康汉族人中仅检测到6例TPMT3C杂合子,没有检到TPMT2、TPMT3A和TPMT3B。成人ALL患者TPMT总的突变型等位基因频率(1.28%)与健康汉族人群(1.30%)相近。结论TPMT3C可能是中国成人ALL和健康汉族人群最主要的突变型等位基因,预先检测TPMT基因型对使用巯嘌呤类药物治疗的中国成人ALL患者有临床裨益。 展开更多
关键词 白血病 淋巴细胞 急性/遗传学 甲基转移酶类 巯嘌呤 多态现象(遗传学)
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Cobas500与Olympus640检测系统血清酶测定值可比性研究 被引量：3
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作者 翟锬 林景涛 +5 位作者 李华 代艳杰 吴莉莉 陈祥云 唐劲松 苏伟雄 《检验医学与临床》 CAS 2010年第14期1411-1413,共3页
目的通过对不同实验室不同检测系统血清酶测定结果进行偏倚评估和方法比对,研究不同检测系统间血清酶测定结果是否具有可比性,为不同实验室检验结果的互认提供依据。方法以美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)EP9-A2文件指南的规定对不... 目的通过对不同实验室不同检测系统血清酶测定结果进行偏倚评估和方法比对,研究不同检测系统间血清酶测定结果是否具有可比性,为不同实验室检验结果的互认提供依据。方法以美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)EP9-A2文件指南的规定对不同检测系统进行比对。将罗氏Cobas500生化分析仪、罗氏原装试剂、C.f.a.s校准品和质控品组成的检测系统作为目标系统(比较方法 ),Olympus640生化分析仪作为待评系统(实验方法 )。分别在两个不同检测系统测定罗氏质控血清PNU(生理值)、PPU(病理值)和45份新鲜血清的血清酶,评估两个检测系统的精密度,计算实验方法与比较方法间的相对偏差,以CLIA′88规定的室间质评允许误差范围的1/2为标准,判断不同检测系统之间血清酶测定结果的可比性。结果两个系统间血清酶测定结果经配对t检验分析差异无统计学意义,5项血清酶检测结果的系统误差临床可以接受。结论两个检测系统5种血清酶测定结果除丙氨酸氨基转移酶高值外均具有可比性,临床可接受性能可以接受。 展开更多
关键词 血清酶 抽样研究 偏差 检测系统 质量控制
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鲍曼不动杆菌耐药监测及氨基糖苷修饰酶基因分布 被引量：3
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作者 潘晓龙 周东升 +1 位作者 富铮 吴志平 《国际检验医学杂志》 CAS 2007年第4期298-300,303,共4页
目的 了解该院鲍曼不动杆菌的耐药状况和主要氨基糖苷修饰酶基因的分布情况。方法 用K-B法检测鲍曼不动杆菌的药敏情况，用PCR法检测选取的25株菌氨基糖苷修饰酶耐药基因的分布。结果 亚胺培能敏感率为98．3％，其次是头孢哌酮／舒巴坦... 目的 了解该院鲍曼不动杆菌的耐药状况和主要氨基糖苷修饰酶基因的分布情况。方法 用K-B法检测鲍曼不动杆菌的药敏情况，用PCR法检测选取的25株菌氨基糖苷修饰酶耐药基因的分布。结果 亚胺培能敏感率为98．3％，其次是头孢哌酮／舒巴坦、阿米卡星和头孢吡肟，分别为48．6％、44．2％和41.1％。阿米卡星耐药株占43．3％，且呈多重耐药性，与敏感株之间的耐药性有显著差别。15株阿米卡星耐药株均有aacA4基因，13株有aacC1和aadA基因，另外2株含有aphA1基因；10株阿米卡星敏感株均不含有4种待测耐药基因。结论 该院鲍曼不动杆菌的耐药性相当严重，aacA4、aacC1和aadA1氨基糖苷修饰酶耐药基因在多重耐药的鲍曼不动杆菌中普遍存在，aphA1阳性菌则少见。 展开更多
关键词 鲍曼不动杆菌 氨基糖苷类 DNA修饰甲基酶类 药物耐受性 基因 细菌
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