蛇莓提取物通过GPX4诱导铁死亡抑制肾癌细胞OS-RC-2增殖 被引量：2

1

作者 游赣花 安群英 +5 位作者 何娟 李凯 杨萌 文周 钱城 朱建国 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期662-670,共9页

目的探讨蛇莓醇提物通过铁死亡抑制肾癌细胞OS-RC-2增殖的作用机制。方法蛇莓醇提物给药,CCK-8试验检测细胞增殖;活性氧(reactive oxygen species,ROS)检测试剂盒、GSH试剂盒、MDA试剂盒、细胞凋亡试剂盒分别检测细胞ROS、GSH、MDA含量... 目的探讨蛇莓醇提物通过铁死亡抑制肾癌细胞OS-RC-2增殖的作用机制。方法蛇莓醇提物给药,CCK-8试验检测细胞增殖;活性氧(reactive oxygen species,ROS)检测试剂盒、GSH试剂盒、MDA试剂盒、细胞凋亡试剂盒分别检测细胞ROS、GSH、MDA含量及凋亡水平;网络药理学分析蛇莓成分-靶点;分子对接检测蛇莓成分与铁死亡核心靶点GPX4的结合能力;Western blot对铁死亡信号通路关键蛋白进行检测;利用铁死亡的抑制剂Fer-1和ROS抑制剂NAC进行回复试验,检测细胞增殖及铁死亡蛋白的变化;蛇莓醇提物中的Dulcitol(卫矛醇)给药,检测细胞增殖及GPX4蛋白的变化。结果蛇莓可在一定程度上呈时间-浓度依赖性抑制细胞增殖,显著增加ROS、MDA水平而降低GSH水平;流式细胞术显示蛇莓可显著促进细胞凋亡,但并没有呈浓度依赖方式;网络药理学和分子对接结果显示蛇莓中的卫矛醇与GPX4结合稳定(-6.5 kJ·mol^(-1));Western blot结果显示蛇莓明显降低GPX4、SLC7A11并升高HO-1及Transferrin蛋白水平;回复试验结果显示,Fer-1与蛇莓联合给药、NAC与蛇莓联合给药均可显著逆转蛇莓单独给药引起的细胞活力降低和铁死亡关键蛋白GPX4、SLC7A11、HO-1及Transferrin的蛋白水平变化。卫矛醇给药可抑制OS-RC-2细胞增殖并降低GPX4蛋白表达水平。结论综上所述,蛇莓醇提物可能通过降低GPX4的表达,促使肾癌细胞发生增殖抑制及ROS积累,进一步驱动细胞铁死亡,且卫矛醇可能是蛇莓中潜在的直接作用于GPX4的药效物质。 展开更多

关键词 蛇莓 卫矛醇 OS-RC-2细胞 谷胱甘肽过氧化物酶4 活性氧 铁死亡

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携带人PPARα基因高效真核表达载体的构建及其意义 被引量：5

2

作者 章涛 杨贵忠 +4 位作者 袁野 李苌清 万敬员 蒋建新 周岐新 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期413-417,共5页

目的构建可以高效表达人过氧化物酶体增殖物激活受体(αhPPARα)的真核细胞表达载体,为筛选作用于PPARα受体的药物提供分子平台。方法将HepG2细胞总RNA经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)克隆hPPARα全长基因,用BamHⅠ、SalⅠ双酶切后,... 目的构建可以高效表达人过氧化物酶体增殖物激活受体(αhPPARα)的真核细胞表达载体,为筛选作用于PPARα受体的药物提供分子平台。方法将HepG2细胞总RNA经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)克隆hPPARα全长基因,用BamHⅠ、SalⅠ双酶切后,与相同双酶切的pIRES2-EGFP载体连接,构建phPPARα-IRES2-EGFP重组质粒,用酶切及基因测序鉴定重组质粒中hPPARα基因的完整性和可靠性;重组质粒转染293细胞,荧光显微镜观察EGFP报告基因表达强度,并对转染细胞的hPPARα表达进行荧光定量PCR及免疫细胞化学检测。结果经酶切和测序证实重组质粒构建正确,并在转染的293细胞中获得hPPARα的高效表达。结论成功构建重组质粒phPPARα-IRES2-EG-FP,为基于hPPARα受体靶点的药物筛选平台的建立提供了高效表达hPPARα的重组载体。 展开更多

关键词 过氧化物酶体增殖物激活受体Α 基因克隆 真核表达

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高糖对人肾系膜细胞GSH-PX和PDGF-B表达影响及茶多酚干预作用 被引量：2

3

作者 王筠 邓红 +1 位作者 曾玉 苏宁 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期476-479,共4页

目的探讨高糖条件下系膜细胞氧化失衡与血小板源性生长因子B(PDGFB)表达之间的关系,通过抗氧化剂茶多酚证实氧化应激在早期糖尿病中的作用。方法将培养的系膜细胞分为正常对照组、高糖组、茶多酚对照组和茶多酚干预组,分别在0、12、24... 目的探讨高糖条件下系膜细胞氧化失衡与血小板源性生长因子B(PDGFB)表达之间的关系,通过抗氧化剂茶多酚证实氧化应激在早期糖尿病中的作用。方法将培养的系膜细胞分为正常对照组、高糖组、茶多酚对照组和茶多酚干预组,分别在0、12、24、36、48h采用分光光度法检测上清液还原型谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPX)活性,以及免疫细胞化学法和RTPCR法检测0、12、36h的PDGFBmRNA和蛋白的表达情况。结果①高糖条件下GSHPX活性下降,抗氧化能力下降,氧化失平衡;茶多酚可增加抗氧化酶GSHPX的活性。②高糖组系膜细胞PDGFBmRNA和蛋白的表达比正常对照组均增加(P<0.05);茶多酚干预组比高糖组有明显下降(P<0.05)。结论高糖能促进系膜细胞活性氧和PDGFB的表达增加,茶多酚可抑制该作用。 展开更多

关键词 高糖 茶多酚 人肾系膜细胞 还原型谷胱甘肽过氧化物酶 血小板源性生长因子—B

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多头带绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因的克隆及序列分析 被引量：1

4

作者 李永光 李文卉 +5 位作者 盖文燕 姚菊霞 曲自刚 贾万忠 Radu Blaga 付宝权 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期67-70,共4页

从自然感染的羊脑内采集脑多头蚴原头节,提取总RNA。根据亚洲牛带绦虫的TaHc2-D11 mRNA序列设计特异引物,采用RT-PCR技术扩增多头带绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(TmTPx)基因。PCR产物连接到pMD18-T载体构建重组质粒pMD-TmTPx,转化大肠埃希... 从自然感染的羊脑内采集脑多头蚴原头节,提取总RNA。根据亚洲牛带绦虫的TaHc2-D11 mRNA序列设计特异引物,采用RT-PCR技术扩增多头带绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(TmTPx)基因。PCR产物连接到pMD18-T载体构建重组质粒pMD-TmTPx,转化大肠埃希菌DH5α后筛选阳性克隆,经限制性酶切及测序鉴定后进行序列分析。扩增获得大小为614bp的TmTPx基因cDNA,该基因的完整开放阅读框架(ORF,591bp)编码196个氨基酸,编码蛋白的相对分子质量为Mr 21690,等电点为7.61。生物信息学分析结果表明TmTPx具有一个典型的2-Cys Prx保守功能结构域。绦虫已知TPx的分子进化分析发现,多头带绦虫与亚洲牛带绦虫的亲缘关系最近,与猪带绦虫和肥头绦虫的亲缘关系次之,与细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫的亲缘关系最远。 展开更多

关键词 多头带绦虫 脑多头蚴 硫氧还蛋白过氧化物酶 克隆 序列分析

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CYP2C19基因多态性在临床医学中的应用研究进展 被引量：6

5

作者 刘建 山峰 《齐鲁医学杂志》 2017年第2期240-244,共5页

细胞色素P450(CYP450)酶系是代谢药物的主要酶系,其系统组成复杂,由基因多样性控制。本文综述了CYP2C19基因多态性对抗凝药物、抗癫痫药物、质子泵抑制剂、抗真菌药物等多种药物代谢的影响,以及CYP2C19基因多态性与肿瘤易感性的关系。

关键词 细胞色素P450酶系统 CYP2C19 多态性 单核苷酸 临床医学 综述

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中国青岛文昌鱼硫氧还蛋白过氧化物酶表达、纯化及活性特征 被引量：1

6

作者 廖剑 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期781-786,共6页

目的:将编码青岛文昌鱼硫氧还蛋白过氧化物酶(TPx)的基因克隆于原核表达载体,并通过表达获得重组的TPx蛋白。方法:将已获得的TPxcDNA片段克隆于原核表达载体pET-32a(+)M,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得重组表达质粒pET-32a(+)M-TPx。37℃下... 目的:将编码青岛文昌鱼硫氧还蛋白过氧化物酶(TPx)的基因克隆于原核表达载体,并通过表达获得重组的TPx蛋白。方法:将已获得的TPxcDNA片段克隆于原核表达载体pET-32a(+)M,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得重组表达质粒pET-32a(+)M-TPx。37℃下经IPTG诱导,该融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。获得的重组TPx蛋白再经过纯化,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析重组蛋白。并对重组蛋白进行活性鉴定和结构分析。结果:构建的重组质粒pET-32a(+)M-TPx在大肠杆菌中高效表达,经纯化后的重组TPx蛋白纯度可达90%以上,其单体相对分子质量为24460。重组TPx蛋白是以同源二聚体和单体混合的形式存在,在二硫苏糖醇(DTT)存在时具有还原H2O2活性和对超螺旋DNA或对硫醇基敏感蛋白的保护作用。结论:本实验在大肠杆菌表达系统中高效表达了重组TPx蛋白,并且证实其活性与其高级结构紧密相关。 展开更多

关键词 硫氧还蛋白过氧化物酶 青岛文昌鱼 原核表达 蛋白质纯化 酶活性 结构

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甲状腺过氧化物酶mRNA cRNA探针的构建及意义

7

作者 陈云 朱明华 +1 位作者 周晓军 倪灿荣 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期584-588,共5页

目的探讨甲状腺过氧化物酶(thyroperoxidase,TPO)mRNA cRNA探针的构建及原位表达的检测方法和意义。方法取甲状腺结节新鲜组织,在RT-PCR扩增TPO cDNA的基础上,构建pSPT19-TPO质粒,经HindⅢ和BamHⅠ单酶切后成线性化模板,在SP6和T7 RNA... 目的探讨甲状腺过氧化物酶(thyroperoxidase,TPO)mRNA cRNA探针的构建及原位表达的检测方法和意义。方法取甲状腺结节新鲜组织,在RT-PCR扩增TPO cDNA的基础上,构建pSPT19-TPO质粒,经HindⅢ和BamHⅠ单酶切后成线性化模板,在SP6和T7 RNA聚合酶作用下,体外转录合成地高辛标记的TPO cRNA反义和正义探针,进行TPO mRNA的原位杂交实验。结果TPO mRNA阳性杂交信号分布于甲状腺滤泡细胞的胞质,本组腺瘤2例、结节性甲状腺肿4例、瘤周甲状腺组织1例原位杂交阳性,乳头状癌2例、桥本病1例原位杂交阴性。核酸原位杂交和RT-PCR检测甲状腺组织TPO mRNA的表达,结果一致。结论成功构建甲状腺过氧化物酶mRNA的cRNA探针;检测TPO mRNA是一种较准确反映甲状腺组织TPO状态的方法,TPO mRNA的原位检测可结合组织形态学了解甲状腺滤泡细胞的功能表达状况。 展开更多

关键词 甲状腺过氧化物酶 甲状腺 CRNA探针 原位杂交

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三种消毒剂杀菌效果试验观察 被引量：1

8

作者 钱建东 王洪林 王小萍 《疾病控制杂志》 2005年第5期487-488,共2页

关键词 过氧化物 灭菌 消毒药

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过氧化物酶体增殖物激活受体与心肌缺血再灌注损伤的关系

9

作者 王东 杨兴易 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1312-1313,共2页

关键词 过氧化物酶体增殖物激活受体 心肺复苏术 再灌注损伤

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PPARγ激动剂对妊娠期糖尿病小鼠氧化应激和炎症水平的影响 被引量：12

10

作者 徐梦 马艳玲 +4 位作者 赵奇红 胡传来 何修界 秦风云 朱梦 《中华疾病控制杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期195-198,共4页

目的探究过氧化物酶增殖体激活受体γ(peroxisome proliferator-activatedreceptorγ,PPARγ)激动剂对妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)小鼠体内氧化应激和炎症水平的影响。方法 7周C57bl/6J小鼠建立GDM模型,选取24只... 目的探究过氧化物酶增殖体激活受体γ(peroxisome proliferator-activatedreceptorγ,PPARγ)激动剂对妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)小鼠体内氧化应激和炎症水平的影响。方法 7周C57bl/6J小鼠建立GDM模型,选取24只随机均分:GDM模型组和罗格列酮(rosiglitazone,RSG)干预组。选12只孕鼠作空白对照组。记录受孕日期(gestation day,GD)及GD10~GD18孕鼠体重及血糖。葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法测定血糖;放射免疫法(radioimmunoassay,RIA)测血清胰岛素水平;酶联免疫吸附法测定孕鼠血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、白介素-8(interleukin-8,IL-8)水平;WST-1法测定超氧化物歧化酶含量(superoxide dismutase,SOD);过氧化物酶微量测定法检测谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)的含量。结果不同时间段的孕鼠体重(F=306.53,P<0.001),血糖(F=31.20,P<0.001)差异有统计学意义;时间与组别交互效应的影响差别均具有统计学意义(均有P<0.05)。各组孕鼠胰岛素水平差异具有统计学意义(F=6.33,P=0.009);各组孕鼠血清SOD、GSH-Px水平及炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-8)水平差异均有统计学意义(均有P<0.05)。结论 PPARγ激动剂可升高GDM小鼠血清SOD、GSH-Px水平,降低TNF-α水平,改善GDM小鼠体内氧化应激及炎症水平。 展开更多

关键词 妊娠 糖尿病 PPARΓ 氧化性应激 白细胞介素6 白细胞介素8

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脂多糖下调过氧化物酶增殖体激活受体γ在大鼠原代肺泡Ⅱ型上皮细胞的表达 被引量：3

11

作者 肖波 王建春 +3 位作者 王关嵩 邓朝霞 徐静 钱桂生 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第20期1960-1963,共4页

目的观察脂多糖(lipopolysac charide,LPS)作用下大鼠肺泡Ⅱ型上皮(typeⅡalveol arepith elial,AT-Ⅱ)细胞过氧化物酶增殖体激活受体γ(PPARγ)的表达变化情况。方法通过酶消化分离和免疫黏附法纯化原代培养AT-Ⅱ细胞,并进行碱性磷酸... 目的观察脂多糖(lipopolysac charide,LPS)作用下大鼠肺泡Ⅱ型上皮(typeⅡalveol arepith elial,AT-Ⅱ)细胞过氧化物酶增殖体激活受体γ(PPARγ)的表达变化情况。方法通过酶消化分离和免疫黏附法纯化原代培养AT-Ⅱ细胞,并进行碱性磷酸酶、肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)和电镜鉴定。采用RT-PCR法检测细胞经LPS作用后PPARγ、TNF-α、SP-AmRNA的改变,Westernblot法检测LPS作用后细胞PPARγ表达,ELISA法检测TNF-α蛋白表达。结果经碱性磷酸酶、SP-A和电镜鉴定,原代培养AT-Ⅱ细胞成功;在致炎因子LPS作用下,PPARγmRNA和蛋白表达均下降,这一变化伴随炎性因子TNF-α的升高。结论在LPS作用下,AT-Ⅱ细胞内PPARγ表达降低,提示PPARγ参与炎症反应。 展开更多

关键词 过氧化物酶增殖体激活受体Γ 肺泡Ⅱ型上皮细胞 炎症

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CYP450-EETs代谢途径与肥胖诱导2型糖尿病胰岛素抵抗研究进展 被引量：5

12

作者 焉晓乘 刘元涛 《青岛大学学报（医学版）》 CAS 2019年第2期247-249,252,共4页

糖尿病(DM)是威胁人类健康的非传染性疾病之一,我国糖尿病患病率显著增加,且发病有年轻化趋势。胰岛素抵抗(IR)与胰岛功能减退是2型糖尿病等代谢性疾病的病理基础。导致IR的病因众多,包括遗传学因素以及肥胖、药物等环境因素。细胞色素P... 糖尿病(DM)是威胁人类健康的非传染性疾病之一,我国糖尿病患病率显著增加,且发病有年轻化趋势。胰岛素抵抗(IR)与胰岛功能减退是2型糖尿病等代谢性疾病的病理基础。导致IR的病因众多,包括遗传学因素以及肥胖、药物等环境因素。细胞色素P450s表氧化酶(CYP450)与其代谢产物环氧-二十碳三烯酸(EETs)在肥胖、IR等方面发挥重要作用。本文就CYP450-EETs代谢途径与肥胖诱导2型糖尿病IR的研究进展作一综述。 展开更多

关键词 细胞色素P450酶系统 环氧-二十碳三烯酸 表氧化酶水解酶 肥胖 炎症 胰岛素抗药性 综述

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硫氧还蛋白过氧化物酶2在人结直肠癌的表达及其对HCT116细胞增殖、迁移的作用

13

作者 陈德波 周艳峰 +3 位作者 许荣誉 王青兰 洪成业 洪志鹏 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期584-587,共4页

目的探讨硫氧还蛋白过氧化物酶2（PRDX2）蛋白在结直肠癌、腺瘤及正常黏膜组织中的差异性表达及其与结直肠癌的生物学关系；利用RNA干扰（RNAi）技术，特异性沉默PRDX2基因的表达，观察沉默PRDX2对结直肠癌细胞HCTJ16增殖与迁移的影响... 目的探讨硫氧还蛋白过氧化物酶2（PRDX2）蛋白在结直肠癌、腺瘤及正常黏膜组织中的差异性表达及其与结直肠癌的生物学关系；利用RNA干扰（RNAi）技术，特异性沉默PRDX2基因的表达，观察沉默PRDX2对结直肠癌细胞HCTJ16增殖与迁移的影响并探讨其机制。方法采用Westernblot、免疫组织化学检测并分析PRDX2蛋白的表达与结直肠癌发生及预后的关系。构建稳定沉默PRDX2细胞株，设立阴性对照组（shContr01）和沉默PRDX2实验组（shPRDX2-F3），通过细胞计数试剂盒（CCK-8）、平板克隆形成实验检测细胞增殖能力，划痕实验和Transwell小室检测体外迁移能力，WesternNot检测E-钙黏蛋白（E—cadherin）、N．钙黏蛋白（N—cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、Snail、Slug蛋白表达。结果PRDX2蛋白在结直肠癌、腺瘤和正常黏膜组织中的表达阳性率依次减低（P〈0．01）。其表达与结直肠癌的TNM分期（P〈0．01）、肿瘤分化程度（P〈0．01）有关，PRDX2蛋白阳性表达者生存率（71．90％）明显低于阴性表达者（86．28％，P〈0．05）。沉默PRDX2基因后能抑制HCTI16细胞的增殖生长；PRDX2沉默后HCT116细胞克隆数量[（69．53±5．20）个]少于空载对照组[（98．33±10．69）个，P〈0．05]；沉默PRDX2的细胞迁移能力增强，且E—cadherin蛋白表达下降，N—cadherin、Vimentiu、Snail、S1ug蛋白表达增强。结论PRDX2蛋白表达参与结直肠癌的发生、发展，并与结直肠癌的预后有关。沉默PRDX2可抑制结直肠癌细胞HCT116增殖，促进迁移，其机制可能与转录因子Snail、Slug表达有关。 展开更多

关键词 硫氧还蛋白过氧化物酶2蛋白 结直肠癌 组织芯片 增殖 转移

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