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miR-181c通过靶向MICU1调控肺移植小鼠心肺功能康复
1
作者 不艾吉尔·艾力 米尔古丽·艾麦特 +2 位作者 李春丽 段平秀 李金贤 《医学分子生物学杂志》 2025年第4期346-353,共8页
目的探讨微小RNA(miRNA)-181c通过线粒体钙单向转运蛋白1(mitochondrial calcium uniporter 1,MICU1)对肺移植小鼠心肺功能恢复的作用及机制。方法将54只C57BL/6小鼠分为正常组、肺移植组、inhibitor-NC组、肺移植+miR-181c-inhibitor... 目的探讨微小RNA(miRNA)-181c通过线粒体钙单向转运蛋白1(mitochondrial calcium uniporter 1,MICU1)对肺移植小鼠心肺功能恢复的作用及机制。方法将54只C57BL/6小鼠分为正常组、肺移植组、inhibitor-NC组、肺移植+miR-181c-inhibitor组、肺移植+miR-181c-inhibitor+si-NC组和肺移植+miR-181c-inhibitor+si-MICU1组,每组n=9。正常组仅开胸麻醉;其余均行自体左肺原位移植,术后每周静脉注射0.2 mL生理盐水或10 nmol/mL抑制剂/siRNA,持续60 d。qRT-PCR和蛋白质印迹检测miR-181c及MICU1表达,双荧光素酶报告实验验证miR-181c与MICU1的靶向关系;HE染色评估肺组织病理;小动物肺功能仪检测0.15 s用力呼气容积占用力肺活量百分比(FEV_(0.15)/FVC)、呼气峰流速值(PEF)、最大通气量(MVV)、一氧化碳弥散量(DLCO)、残气量(RV);超声心动图检测左心室射血分数(LVEF)、左心室缩短分数(LVFS)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期容积(LVEDV)、左心室收缩末期容积(LVESV)。结果与正常组相比,肺移植组miR-181c上调(P<0.05),MICU1下调(P<0.05),二者负相关(r=-0.378,P=4.21×10^(-4))。报告基因实验显示miR-181c能特异性抑制MICU13′UTR-WT荧光活性(P<0.05)。敲低miR-181c致MICU1表达水平恢复,肺组织病变减轻,FEV_(0.15)/FVC、PEF、MVV、DLCO及LVEF、LVFS增加,RV、LVESD、LVEDV、LVESV减少(P<0.05);联合敲低miR-181c与si-MICU1致上述改善消失(P<0.05)。结论miR-181c通过靶向抑制MICU1显著影响肺移植后小鼠心肺功能;敲低miR-181c有助于改善术后心肺功能。 展开更多
关键词 微小RNA-181c 线粒体钙单向转运蛋白1 肺移植 心肺功能康复
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脑源性神经营养因子DNA甲基化与抑郁
2
作者 廖紫云 王孟雨 +3 位作者 乔靖怡 张润 刘培东 陈新旺 《中国药理学通报》 北大核心 2025年第5期825-829,共5页
抑郁症是一种异质性精神疾病,遗传易感性和环境因素之间的相互作用在其发病过程中扮演着关键角色。该病的具体机制仍需深入研究与阐释,但目前已有广泛共识认为,表观遗传标记对其作用机制具有重要影响。脑源性神经营养因子(brain-derived... 抑郁症是一种异质性精神疾病,遗传易感性和环境因素之间的相互作用在其发病过程中扮演着关键角色。该病的具体机制仍需深入研究与阐释,但目前已有广泛共识认为,表观遗传标记对其作用机制具有重要影响。脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)的DNA甲基化,不仅被视为一种有前景的病理学表观遗传生物标志物,还可能有助于预测抗抑郁药的疗效。该文综述了BDNF的基因结构及其DNA甲基化调控机制,同时分析了抑郁症患者及动物模型中该因子DNA甲基化的变化情况,旨在为临床研究提供新的思路和理论支撑。 展开更多
关键词 脑源性神经营养因子 DNA甲基化 基因结构 抑郁 启动子 外显子
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男性不育患者精子DNA损伤与非整倍体精子的研究 被引量：10
3
作者 徐秀民 于德新 +7 位作者 张志强 谢栋栋 王毅 张涛 陈磊 闵捷 丁德茂 邹慈 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2013年第11期1355-1359,共5页
目的探讨男性不育患者精子DNA完整性和染色体畸变的发生率及临床意义。方法精液标本来自正常已育男性及不育患者,以WHO标准行精液分析,根据结果及不育史分为对照组、少精症组、弱精症组、少弱精症组。精子染色质扩散实验分析精子DNA损... 目的探讨男性不育患者精子DNA完整性和染色体畸变的发生率及临床意义。方法精液标本来自正常已育男性及不育患者,以WHO标准行精液分析,根据结果及不育史分为对照组、少精症组、弱精症组、少弱精症组。精子染色质扩散实验分析精子DNA损伤率和荧光原位杂交实验分析精子染色体(18、X、Y)非整倍体率。结果少精症组、弱精症组和少弱精症组精子DNA损伤率对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);不育组的精子染色体(18、X、Y)非整倍体率与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);精子DNA损伤率与染色体非整倍体率呈明显正相关(r=0.453,P=0.008)。结论不育患者精子DNA损伤率和染色体非整倍体率较对照组明显升高且呈显著正相关。在减数分裂过程中,精子DNA损伤可能是导致非整倍体精子形成的重要原因之一。 展开更多
关键词 不育症 DNA损伤 非整倍体 精子 染色体
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痰液细胞DNA含量分析对肺癌的诊断价值 被引量：9
4
作者 操乐杰 翟志敏 +6 位作者 李俊 徐美清 夏淮玲 徐晓玲 马冬春 梅晓冬 崔皖芳 《中国肺癌杂志》 CAS 2004年第3期202-205,共4页
目的　探讨痰液细胞DNA含量分析对肺癌的诊断价值。方法　用流式细胞仪对 44例患者 ( 2 9例肺癌、15例肺良性疾病患者 )痰液细胞DNA含量进行分析 ,并与痰细胞形态学检查结果作比较。对痰细胞学阴性而DNA含量分析阳性的对照患者组织切片... 目的　探讨痰液细胞DNA含量分析对肺癌的诊断价值。方法　用流式细胞仪对 44例患者 ( 2 9例肺癌、15例肺良性疾病患者 )痰液细胞DNA含量进行分析 ,并与痰细胞形态学检查结果作比较。对痰细胞学阴性而DNA含量分析阳性的对照患者组织切片行 p5 3、PCNA、Ki67免疫组化分析。 结果　以最后病理诊断为标准 ,肺癌患者异倍体检出的敏感性为 82 .8%,显著高于痰细胞学的敏感性 ( 2 7.6%) (P <0 .0 0 5 ) ;肺癌晚期异倍体阳性率高于早期肺癌 ( 87.5 %比 76.9%,P <0 .0 0 2 5 ) ,其中 1例肺癌患者提前临床 10月检出异倍体。部分炎性假瘤及结核球患者痰标本检出异倍体 ,其相应的组织切片PCNA、Ki67免疫组化染色亦阳性。结论　痰液细胞DNA含量分析是肺癌诊断有效的辅助方法 ,可能有利于肺癌的早期诊断。 展开更多
关键词 肺肿瘤 流式细胞仪 DNA含量 痰细胞学
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DNA测序对Ⅱ型单纯疱疹病毒进行分型鉴定的方法研究 被引量：6
5
作者 汪舟佳 刘意 +4 位作者 贾雷立 任翊 孙岩松 黄留玉 陈泽良 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期99-101,共3页
目的建立一种能够对标本中的Ⅱ型单纯疱疹病毒进行准确鉴定分型的方法。方法从生殖器疱疹(GH)患者病变部位采集标本,将标本接种Vero细胞,待出现细胞病变后收获病毒感染物;提取病毒感染物的基因组。根据HSV-1和HSV-2的gD基因序列,设计合... 目的建立一种能够对标本中的Ⅱ型单纯疱疹病毒进行准确鉴定分型的方法。方法从生殖器疱疹(GH)患者病变部位采集标本,将标本接种Vero细胞,待出现细胞病变后收获病毒感染物;提取病毒感染物的基因组。根据HSV-1和HSV-2的gD基因序列,设计合成了一对能够同时扩增两个型的病毒引物,PCR扩增感染物中病毒的序列,PCR产物克隆到pMD18-T载体,然后进行序列测定,测定序列与数据库比对,根据比对结果确定HSV的型。结果用PCR成功扩增出200bp大小的片段;测定序列与数据库的比对结果显示,该序列与HSV-2的gD基因同源性最高,表明在标本中有HSV-2病毒。测定的gD序列与国外分离株的序列存在一定的差异。结论通过PCR扩增和产物的克隆测序,能够实现对临床上难以区分的HSV-1和HSV-2的分型鉴定。 展开更多
关键词 疱疹病毒2型 人 聚合酶链反应 序列分析 DNA
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从唾液获取人体DNA的简易方法与应用 被引量：8
6
作者 陈嘉昌 张红宇 +3 位作者 彭瑾瑜 付艳艳 叶伟超 常弘 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第B04期171-173,共3页
[目的]探索一种对人体无伤害、无痛苦的获取基因组DNA的方法。[方法]比对①获取口腔黏膜细胞的不同途径,②改进的微量血提取试剂盒和常规的碘化钾法提取唾液中的DNA的效果,③经过不同的储存条件、时间梯度所获得的DNA的得率和纯度,④分... [目的]探索一种对人体无伤害、无痛苦的获取基因组DNA的方法。[方法]比对①获取口腔黏膜细胞的不同途径,②改进的微量血提取试剂盒和常规的碘化钾法提取唾液中的DNA的效果,③经过不同的储存条件、时间梯度所获得的DNA的得率和纯度,④分别以提取的DNA和唾液沉淀作为模板PCR扩增管家基因GAPDH、唾液特异蛋白基因PRB- 3、线粒体D-loop区。[结果]从0.1 mL的唾液中即可以提取出约4.5μg的基因组DNA。从新鲜唾液中获得的DNA得率和纯度最高,但即使唾液经过长时间的保存,直接使用唾液的细胞沉淀也同样能够扩增出各种正确大小的基因片段。[结论]唾液作为获取基因组DNA的简易来源,完全可以取代常规的取血采样,也比棉拭子刮取口腔细胞、滤纸唾液斑法、漱口水收集等方法简便、经济、快速。该法不会对被收集者造成任何不适,容易被接收,因而能最大限度的扩大复杂遗传疾病研究的取样范围,特别适合分子流行病学大面积调查。 展开更多
关键词 唾液 基因组DNA 遗传疾病 大面积调查
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肺炎性假瘤及球形肺结核细胞增殖研究 被引量：8
7
作者 操乐杰 李润生 +6 位作者 翟志敏 李俊 徐美清 夏淮玲 王晓秋 胡闻 陈柯 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2006年第5期355-357,共3页
目的了解肺炎性假瘤及球形肺结核是否存在细胞增殖异常。方法用流式细胞仪对9例患者(其中5例肺炎性假瘤、4例球形肺结核病)痰液细胞DNA含量进行分析,并与痰细胞学检查、手术及经皮肺活检组织P53、PCNA、Ki67免疫组化分析结果作比较。结... 目的了解肺炎性假瘤及球形肺结核是否存在细胞增殖异常。方法用流式细胞仪对9例患者(其中5例肺炎性假瘤、4例球形肺结核病)痰液细胞DNA含量进行分析,并与痰细胞学检查、手术及经皮肺活检组织P53、PCNA、Ki67免疫组化分析结果作比较。结果以最后病理诊断为标准,肺炎性假瘤及球形肺结核患者异倍体检出率分别为40%(2/5)与50%(2/4),其相应的病变组织切片PCNA、Ki67免疫组化染色也阳性,但P53免疫组化染色阴性。结论部分炎性假瘤及结核球存在细胞增殖异常。痰细胞DNA含量分析是发现增殖异常的有效辅助方法,可能有利于肺癌的早期诊断。 展开更多
关键词 肺炎性假瘤 肺结核 流式细胞仪 DNA含量 痰细胞学 细胞增殖
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原核表达质粒pET15b-PEP-1-SOD1的构建 被引量：9
8
作者 丁鹏 王家宁 +1 位作者 黄永章 杨波 《新乡医学院学报》 CAS 2006年第2期141-144,共4页
目的构建pET15b-PEP-1-SOD1原核表达质粒。方法通过设计含有特定酶切位点的引物,以含有全长人SOD1 cDNA的质粒(pBluescript II SK-SOD1)为模板,扩增出SOD1 cDNA,将SOD1 cDNA和人工合成的编码PEP-1的双链寡核苷酸克隆至pET15b原核表达载... 目的构建pET15b-PEP-1-SOD1原核表达质粒。方法通过设计含有特定酶切位点的引物,以含有全长人SOD1 cDNA的质粒(pBluescript II SK-SOD1)为模板,扩增出SOD1 cDNA,将SOD1 cDNA和人工合成的编码PEP-1的双链寡核苷酸克隆至pET15b原核表达载体上,进行酶切鉴定及测序分析。结果pET15b-PEP-1-SOD1重组质粒经酶切鉴定含有SOD1 cDNA和编码PEP-1的片段,测序分析证实分别与GeneBank“AB087266”登录的人SOD1 cDNA和合成的PEP-1编码序列完全一致。结论成功地构建了pET15b-PEP-1-SOD1重组质粒,为制备PEP-1-SOD1融合蛋白提供了表达载体。 展开更多
关键词 铜 锌-超氧化物歧化酶 TA克隆 基因重组 蛋白转导域 PEP-1肽
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甘草次酸对Bloom解旋酶生物学特性的影响 被引量：11
9
作者 刘金河 许厚强 +1 位作者 孟惠惠 罗霂榃 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期919-926,共8页
甘草次酸(glycyrrhetinic acid,GA)是甘草主要活性组分,可诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞生长.然而,其对BLM解旋酶的抑制作用尚未见报道.本文注视甘草次酸对BLM解旋酶构象、二级结构和生化活性的影响.圆二色光谱和紫外光谱分析显示,GA... 甘草次酸(glycyrrhetinic acid,GA)是甘草主要活性组分,可诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞生长.然而,其对BLM解旋酶的抑制作用尚未见报道.本文注视甘草次酸对BLM解旋酶构象、二级结构和生化活性的影响.圆二色光谱和紫外光谱分析显示,GA可破坏BLM642-1290解旋酶α-螺旋结构,改变其构象,并具有2个结合位点.采用荧光偏振技术和自由磷检测证明,GA以浓度依赖的方式抑制BLM642-1290解旋酶与底物dsDNA及ssDNA的结合,抑制BLM642-1290解旋酶活性及ATP酶活性,且抑制类型为混合抑制.综上所述,本文证明GA可通过结合BLM解旋酶,改变BLM解旋酶构象,抑制BLM解旋酶与DNA的结合,从而抑制BLM解旋酶的生化活性.我们的发现将对深入认识GA的抗肿瘤作用有新的启示. 展开更多
关键词 甘草次酸 BLM解旋酶 生化活性 构象 二级结构 圆二色谱 荧光偏振
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利用肺癌特异性结合多肽ZS-6筛选肺癌相关标志物 被引量：5
10
作者 冯文彬 潘雪刁 +4 位作者 周捷 石磊 罗军强 李询 臧林泉 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期44-47,共4页
目的利用本实验室已获得的与肺癌特异性结合的十二肽ZS-6从人类肺癌cDNA文库中筛选出肺癌相关标志物,为肺癌的临床早期诊断和靶向治疗奠定基础。方法以生物素标记的十二肽ZS-6为探针,筛选人类肺癌cDNA噬菌体展示文库,经过四轮减性筛选后... 目的利用本实验室已获得的与肺癌特异性结合的十二肽ZS-6从人类肺癌cDNA文库中筛选出肺癌相关标志物,为肺癌的临床早期诊断和靶向治疗奠定基础。方法以生物素标记的十二肽ZS-6为探针,筛选人类肺癌cDNA噬菌体展示文库,经过四轮减性筛选后,挑取与ZS-6特异性结合的噬菌体单克隆、扩增、纯化,再通过PCR技术扩增、产物纯化后,进行DNA测序,测序结果经过生物信息学分析。结果筛选出18个与ZS-6特异性结合的噬菌体克隆,测序结果显示其中1个为未知功能的新基因,其余的均已确定为肿瘤相关基因。结论从人类肺癌cDNA噬菌体展示文库中筛选出潜在的肺癌肿瘤标志物,为肺癌的早期诊治奠定基础。 展开更多
关键词 多肽ZS-6 CDNA文库 减性筛选 肺癌 肿瘤标志物
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三维凝胶NAT2基因分型芯片的制备与优化 被引量：6
11
作者 刘存刚 李金恒 +1 位作者 孙胜利 曹晓梅 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期272-276,共5页
目的研制N-乙酰化酶2（NAT2）基因分型芯片，以快速、准确检测患者的NAT2单核苷酸基因多态性。方法设计并合成中国人中常见的NAT2酶基因5个突变位点的探针对和包含5个突变位点的两对引物；样本经PCR扩增后，采用丙烯酰胺点样液制备芯片... 目的研制N-乙酰化酶2（NAT2）基因分型芯片，以快速、准确检测患者的NAT2单核苷酸基因多态性。方法设计并合成中国人中常见的NAT2酶基因5个突变位点的探针对和包含5个突变位点的两对引物；样本经PCR扩增后，采用丙烯酰胺点样液制备芯片，并与TEMED反应固化芯片；分别用探针与芯片杂交，采用博奥晶芯LUXSCAN10K微阵列芯片扫描仪分析结果。结果优化了PCR扩增条件，使两组PCR在相同条件下扩增；优化了芯片制备及杂交条件，双链DNA采用碱变性，清除非特异键合采用电泳方法；建立了NAT2酶基因分型标准：信号强度Cy3：Cy5≥5为野生型，Cy3：Cy5为0．6～1．5时为杂合子，Cy3：Cy5≤0．2为突变型；对20例标本的基因分型结果采用直接测序法进行验证，结果均一致。结论三维凝胶NAT2基因点突变分型芯片法是一种特异性强、高通量的NAT2基因分型方法，适用于临床快速基因分型，指导相关药物合理使用。 展开更多
关键词 NAT2 单核苷酸多态性 基因芯片 基因分型
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多吡啶钌配合物[(Phen)_2Ru(dppz)](PF_6)_2的抗菌活性及机制研究 被引量：4
12
作者 刘汉杰 付彬 +1 位作者 付爱玲 付琛 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1249-1253,共5页
目的研究多吡啶钌配合物[(Phen)_2Ru(dppz)](PF_6)_2的抗菌活性,并进一步探讨其作用机制。方法采用最小抑菌浓度(MIC)以及最小杀菌浓度(MBC),测定无机配合物[(Phen)_2Ru(dppz)](PF_6)_2的抗菌活性。为了阐明其抗菌机制,首先利用配合物... 目的研究多吡啶钌配合物[(Phen)_2Ru(dppz)](PF_6)_2的抗菌活性,并进一步探讨其作用机制。方法采用最小抑菌浓度(MIC)以及最小杀菌浓度(MBC),测定无机配合物[(Phen)_2Ru(dppz)](PF_6)_2的抗菌活性。为了阐明其抗菌机制,首先利用配合物自身荧光特性和核酸染料对DNA的竞争性结合所导致的荧光强度变化,以确定配合物与DNA的结合能力;然后通过DNA凝胶电泳,检测配合物与细菌基因组DNA结合后产生的效果以检测抗菌活性的机制。结果多吡啶钌配合物[(Phen)_2Ru(dppz)](PF_6)_2对大肠杆菌以及金黄色葡萄球菌具有较强的抗菌活性,最小抑菌浓度达0.2~0.4 g·L^(-1)。荧光检测显示,配合物能够与细菌DNA发生结合,以此为基础,配合物能够干扰细菌的转录过程,抑制细菌生长。结论本研究证明了多吡啶钌配合物[(Phen)_2Ru(dppz)](PF_6)_2的抗菌活性及作用机制,为其进一步开发奠定了基础。 展开更多
关键词 多吡啶钌配合物 抑菌活性 荧光检测 代谢活性 DNA结合 DNA降解
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MAPK通路抑制剂对不同PTEN状态子宫内膜癌细胞作用及机制 被引量：5
13
作者 肖兰 龙腾飞 +1 位作者 何婵 周家德 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2014年第5期613-618,共6页
目的探讨PTEN缺失和表达下p38MAPK通路抑制剂(SB203580)对子宫内膜癌细胞Ishikawa及HEC-1A的作用及其机制。方法 PTEN小分子干扰RNA及PTEN基因转染后,激光共聚焦显微镜检测PTEN蛋白表达;SB203580干预48 h,流式细胞术、MTT法及Western b... 目的探讨PTEN缺失和表达下p38MAPK通路抑制剂(SB203580)对子宫内膜癌细胞Ishikawa及HEC-1A的作用及其机制。方法 PTEN小分子干扰RNA及PTEN基因转染后,激光共聚焦显微镜检测PTEN蛋白表达;SB203580干预48 h,流式细胞术、MTT法及Western blot法分别检测细胞干预后子宫内膜癌细胞早期凋亡、细胞增殖活性、p38MAPK通路的磷酸化水平及其下游底物4E-BP1蛋白的磷酸化情况。结果 PTEN小分子干扰RNA封闭与PTEN稳定转染使两株子宫内膜癌细胞(Ishikawa,HEC-1A)PTEN表达水平改变。SB203580干预使PTEN缺失Ishikawa及HEC-1A细胞生长显著抑制,细胞发生早期凋亡;p38MAPK通路磷酸化水平和磷酸化4E-BP1蛋白表达均显著下降;与PTEN表达两种细胞比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论内外源性PTEN缺失使两株子宫内膜癌细胞中p38MAPK通路活化,对SB203580敏感性增加,其机制可能与PTEN缺失导致PTEN对p38MAPK信号通路负性调控功能丧失,引发p38MAPK信号通路下游底物4E-BP1激活导致p38MAPK通路活化有关。 展开更多
关键词 子宫内膜癌 PTEN p38MAPK通路抑制剂 敏感性
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线粒体ATPase-6基因多态性与男性精子活力的关系 被引量：3
14
作者 莫毅 梁方方 +3 位作者 谢伟 王娟 叶健 谢丹尼 《山东医药》 CAS 2013年第17期15-17,共3页
目的探讨线粒体ATP合成酶6亚基(ATPase-6)基因多态性与男性精子活力的关系。方法选择弱精子症患者319例(观察组)及精子活力正常者344例(对照组),采用聚合酶链式反应—限制性片段长度多态性分析技术检测其线粒体ATPase-6基因(+9 052 bp)... 目的探讨线粒体ATP合成酶6亚基(ATPase-6)基因多态性与男性精子活力的关系。方法选择弱精子症患者319例(观察组)及精子活力正常者344例(对照组),采用聚合酶链式反应—限制性片段长度多态性分析技术检测其线粒体ATPase-6基因(+9 052 bp)的HaeⅡ酶切位点多态性,并对两组的基因型分布及等位基因频率进行Hardy-Weinberg平衡检测,分析ATPase-6突变基因频率与精子活力的关系。结果观察组的hh、Hh、HH基因型分布分别为19.74%、1.25%、79.01%,对照组分别为4.94%、0.58%、94.45%,两组基因型分布均处于Hardy-Weinberg平衡范围;但观察组的突变型基因(h)频率明显高于对照组(P<0.01)。结论 ATPase-6基因(+9 052bp)HaeⅡ酶切位点突变可能影响ATPase-6基因的翻译效率,进而影响男性精子活力,引起弱精子症。 展开更多
关键词 弱精子症 精子活力 ATPase-6基因 ATP合成酶6亚基 聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析
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一种从唾液中快速提取基因组DNA的方法 被引量：4
15
作者 杨泽民 林静 +2 位作者 陈龙辉 张敏 陈蔚文 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期548-553,共6页
目的探索一种快速、有效且对人体无创伤的基因组DNA提取方法。方法比较碘化钾法和口腔拭子基因组DNA提取试剂盒法对新鲜和室温放置1周的唾液标本的基因组DNA提取和TP53、PRB-3基因PCR扩增效果。同时采集99名健康儿童和成人的唾液标本验... 目的探索一种快速、有效且对人体无创伤的基因组DNA提取方法。方法比较碘化钾法和口腔拭子基因组DNA提取试剂盒法对新鲜和室温放置1周的唾液标本的基因组DNA提取和TP53、PRB-3基因PCR扩增效果。同时采集99名健康儿童和成人的唾液标本验证碘化钾法提取唾液基因组DNA的稳定性。结果两种DNA提取方法都能从新鲜唾液标本中获得高质量的基因组DNA,其中碘化钾法的得率和D260/D280分别为(1.91±0.15)μg和1.99±0.05,试剂盒法分别为(2.64±0.34)μg和1.81±0.02。对于室温放置1周的唾液标本,两种提取方法获得的DNA虽然降解明显,但是对TP53和PRB-3基因都能扩增正确大小的目的片段。碘化钾法提取的99名健康儿童和成人的唾液基因组DNA虽然个体差异明显[得率为(1.89±0.46)μg],但是DNA质量稳定可靠(D260/D280为1.96±0.10)。结论碘化钾法提取唾液基因组DNA不仅廉价、高效,而且对人体无创伤,非常适合大范围分子流行病学研究。 展开更多
关键词 唾液 碘化钾DNA提取 聚合酶链反应
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狼疮模型鼠体内氧化/抗氧化指标与抗dsDNA抗体水平以及肾脏病变的相关性 被引量：3
16
作者 金伟 方雪辉 +1 位作者 苏虹 叶冬青 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2008年第1期24-28,共5页
目的探讨狼疮样模型小鼠体内的氧化/抗氧化状态,及其与抗dsDNA抗体以及肾脏病变的关系。方法应用分光光度法测定血浆氧化/抗氧化指标,ELISA法测定血浆抗dsDNA抗体浓度。应用两样本t检验,比较狼疮模型鼠与正常对照组间氧化/抗氧化指标以... 目的探讨狼疮样模型小鼠体内的氧化/抗氧化状态,及其与抗dsDNA抗体以及肾脏病变的关系。方法应用分光光度法测定血浆氧化/抗氧化指标,ELISA法测定血浆抗dsDNA抗体浓度。应用两样本t检验,比较狼疮模型鼠与正常对照组间氧化/抗氧化指标以及干预组与非干预组间氧化/抗氧化指标以及自身抗体指标间的差异,采用pearson相关分析比较机体氧化/抗氧化指标与抗体指标间相关性。光镜和电镜下观察肾脏的病理改变,并比较干预组和非干预组间病理改变的差异。结果狼疮模型鼠的丙二醛高于正常对照组(t=4.92,P<0.01),其抗dsNDA抗体水平也高于正常对照组(t=6.53,P<0.01),而总体抗氧化能力水平则低于正常对照组(t=-4.15,P<0.01)。丙二醛和抗dsDNA抗体呈现正相关(r=0.647,P<0.05)总体抗氧化能力与抗dsDNA抗体呈现负相关(r=0.877,P<0.01),总体抗氧化能力与丙二醛呈现负相关(r=0.773,P<0.01)。干预组丙二醛低于非干预组(t=-2.46,P<0.05),组织病理学观察表明,干预组的肾脏病变程度轻于非干预组。结论狼疮模型鼠体内氧化程度较正常对照组高;狼疮模型鼠体内氧化程度与抗dsDNA抗体水平以及肾脏病变之间存在相关性。 展开更多
关键词 红斑狼疮 系统性 DNA/免疫学 肾/损伤 抗氧化剂 模型 动物
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RPS20 miRNA质粒载体的CT26细胞转染条件优化研究 被引量：3
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作者 高小玲 李茹柳 +3 位作者 郭文峰 徐颂芬 胡灿 陈蔚文 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期318-322,共5页
目的探讨阳离子脂质体法转染CT26细胞适宜的转染条件,为小鼠体内以RNA干扰法进行脾虚证相关基因RPS20的功能鉴定提供参考。方法以6孔培养板培养CT26细胞,利用阳离子脂质体转染pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR-neg Control plasmid进入CT26细胞... 目的探讨阳离子脂质体法转染CT26细胞适宜的转染条件,为小鼠体内以RNA干扰法进行脾虚证相关基因RPS20的功能鉴定提供参考。方法以6孔培养板培养CT26细胞,利用阳离子脂质体转染pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR-neg Control plasmid进入CT26细胞,荧光显微镜、流式细胞仪两种方式观察不同剂量的质粒和转染试剂对转染效率的影响。结果荧光显微镜下细胞计数法检测转染效率,4.0μg和6.0μg质粒的转染效率无明显差异;流式细胞仪检测转染效率,以Lipofectamine2000 15.0μL+质粒4μg转染效率最高,平均为25.3%。结论 6孔培养板,4.0μg质粒+15.0 μL Lipofectamine2000为CT26细胞优化的转染条件。 展开更多
关键词 RNA干扰 CT26细胞 转染条件
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贵州省苗族、水族人群线粒体DNA RegionⅤ遗传多态分析 被引量：5
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作者 何燕 张婷 +3 位作者 单可人 王婵娟 官志忠 任锡麟 《贵阳医学院学报》 CAS 2007年第6期583-585,共3页
目的:分析世居贵州省雷山县苗族、三都县水族人群线粒体DNA(mtDNA)RegionⅤ的遗传多态性。方法:采用聚合酶链反应-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PCR-PAGE)法对91份苗族和96份水族样本的线粒体DNARegionⅤ区进行多态分析。结果:两个群体中均只发... 目的:分析世居贵州省雷山县苗族、三都县水族人群线粒体DNA(mtDNA)RegionⅤ的遗传多态性。方法:采用聚合酶链反应-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PCR-PAGE)法对91份苗族和96份水族样本的线粒体DNARegionⅤ区进行多态分析。结果:两个群体中均只发现标准型和短型(9bp缺失)两种多态,9bp缺失基因频率分别为:雷山苗族25.27%、三都水族25.00%。结论:上述两个少数民族群体中线粒体DNA RegionⅤ区短型多态基因频率较高,与其地域分布相一致。 展开更多
关键词 DNA 线粒体 多态现象(遗传学) 苗族 水族
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大鼠BDNF基因复制缺陷型重组腺病毒的构建与鉴定 被引量：2
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作者 王鹏 吴燕峰 +4 位作者 黄文林 唐勇 黄霖 杨睿 沈慧勇 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期135-139,共5页
【目的】构建携带大鼠脑源性神经营养因子(brainderivedneurotrophicfactor,BDNF)目的基因的复制缺陷型重组腺病毒,并初步检测其体外表达目的基因的能力。【方法】提取大鼠脑组织总RNA,使用RT-PCR方法扩增BDNF目的基因并将其克隆入pMD18... 【目的】构建携带大鼠脑源性神经营养因子(brainderivedneurotrophicfactor,BDNF)目的基因的复制缺陷型重组腺病毒,并初步检测其体外表达目的基因的能力。【方法】提取大鼠脑组织总RNA,使用RT-PCR方法扩增BDNF目的基因并将其克隆入pMD18-TSimple载体测序,将测序完全正确的BDNF目的基因克隆入pShuttle2中,然后利用体外连接法将BDNF目的基因克隆入Adeno-XTM腺病毒骨架中,LipofectamineTM2000法转染HEK293细胞包装携带BDNF目的基因的重组腺病毒,少量提取重组腺病毒DNA检测证实为复制缺陷型BDNF基因重组腺病毒后大量扩增,蛋白电泳及Westernblot法初步检测BDNF目的基因在HEK293细胞中的表达。【结果】成功构建了携带大鼠BDNF目的基因的复制缺陷型重组腺病毒,并证实其在HEK293细胞中可高水平表达BDNF目的基因。【结论】利用体外连接法可方便、快捷地构建携带BDNF目的基因的复制缺陷型重组腺病毒,并可在体外高水平表达表达其所携带的目的基因。 展开更多
关键词 脑源性神经营养因子 基因重组 腺病毒载体
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不稳定冠心病循环microRNA表达谱特点及功能分析 被引量：4
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作者 李素芳 陈红 +3 位作者 任景怡 李晶津 宋俊贤 耿强 《中华老年多器官疾病杂志》 2015年第3期196-201,共6页
目的：明确不稳定冠心病患者循环microRNA（miRNA）表达谱，并对差异表达miRNA在细胞增殖中的调控作用进行探讨。方法（1）分别收集不稳定冠心病患者（试验组）及疑似心绞痛的非冠心病患者（对照组）血浆，通过miRNA芯片检测，得到试验... 目的：明确不稳定冠心病患者循环microRNA（miRNA）表达谱，并对差异表达miRNA在细胞增殖中的调控作用进行探讨。方法（1）分别收集不稳定冠心病患者（试验组）及疑似心绞痛的非冠心病患者（对照组）血浆，通过miRNA芯片检测，得到试验组患者循环miRNA表达谱。（2）分别在3个不同的生物信息学数据库——TargetScan、miRanda和DIANAmT，对miRNA靶基因进行预测，得到在3个数据库均有预测的miRNA靶基因。（3）通过DAVID数据库，对上述靶基因在细胞增殖方面的功能进行聚类及信号通路分析。（4）通过实时（real time，RT）-PCR实验，进一步验证循环miRNA-19b（miR-19b）在两组中的表达水平。（5）结合功能聚类分析结果，对差异表达最明显的（miR-19b）在细胞增殖中的调控作用进行验证。结果（1）与对照组相比，试验组存在39个差异表达miRNAs，其中miR-19b差异表达最明显。（2）通过对miRNA靶基因的预测，发现有14个miRNAs与细胞增殖关系密切，其中miR-19b调控的细胞增殖相关基因最多。（3）RT-PCR检测证实不稳定冠心病患者血浆miR-19b水平较对照组明显增高。（4）细胞增殖实验表明，miR-19b明显抑制血管内皮细胞（EA.hy926细胞）增殖。结论不稳定冠心病患者具有特定的循环miRNA表达谱，这些miRNAs可能是不稳定冠心病的潜在生物标志物。miR-19b可能通过抑制内皮细胞增殖，发挥稳定动脉粥样硬化斑块的保护作用。 展开更多
关键词 冠心病 微小RNAS 细胞增殖
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