目的探究同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)调控血小板反应蛋白解整合素金属肽酶8(a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin type 1 motif 8,ADAMTS8)介导铁死亡在动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)中的作用及其机制。...目的探究同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)调控血小板反应蛋白解整合素金属肽酶8(a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin type 1 motif 8,ADAMTS8)介导铁死亡在动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)中的作用及其机制。方法将ApoE^(-/-)小鼠(n=12)随机分为2组,设立正常饮食组(ND组,n=6)和高蛋氨酸饮食组(HMD组,n=6);体外培养RAW264.7巨噬细胞,设立对照组(Control组,0μmol·L^(-1) Hcy)和Hcy干预组(Hcy组,100μmol·L^(-1) Hcy),Hcy干预的巨噬细胞转染腺病毒后设置ADAMTS8过表达阴性对照组(Hcy+Ad-NC)和ADAMTS8过表达组(Hcy+Ad-ADAMTS8),Hcy干预的巨噬细胞转染干扰片段后设置干扰片段对照组(Hcy+si-NC)、ADAMTS8干扰片段组(Hcy+si-ADAMTS8),Hcy干预的巨噬细胞ADAMTS8过表达组(Hcy+Ad-ADAMTS8)和Hcy干预的巨噬细胞ADAMTS8过表达+铁死亡抑制剂组(Fer-1+Hcy+Ad-ADAMTS8);免疫荧光染色观察ADAMTS8、xCT、ACSL4表达差异;Pearson相关系数分析ADAMTS8与铁死亡相关指标xCT、ACSL4的相关性;Western blot检测铁死亡指标xCT、ACSL4表达变化;丙二醛(malondialdehyde,MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性评估细胞氧化水平及抗氧化能力。结果与ND相比,HMD组ADAMTS8表达明显增高,铁死亡相关蛋白xCT的表达水平下降,而ACSL4表达水平明显上升;与Control组相比,Hcy组中ADAMTS8蛋白表达增高,xCT蛋白表达降低,而ACSL4蛋白表达升高,MDA水平升高而SOD活性明显降低;相关性分析显示ADAMTS8表达水平与xCT表达水平呈负相关,与ACSL4表达水平呈正相关;与Hcy+si-NC组相比,Hcy+si-ADAMTS8组中xCT蛋白表达水平明显升高,ACSL4表达量降低,MDA水平下降,SOD活性增强;相反,与Hcy+Ad-NC组相比,Hcy+Ad-ADAMTS8组中xCT蛋白表达水平降低,ACSL4表达量增加,MDA水平增强,SOD活性下降;与Hcy+Ad-ADAMTS8组相比,Fer-1+Hcy+Ad-ADAMTS8组中xCT蛋白表达水平升高,ACSL4表达量降低,MDA水平下降,SOD活性增强。结论ADAMTS8调控铁死亡影响巨噬细胞内氧化与抗氧化平衡,进而促进Hcy致AS的发生发展。展开更多
文摘目的探究同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)调控血小板反应蛋白解整合素金属肽酶8(a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin type 1 motif 8,ADAMTS8)介导铁死亡在动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)中的作用及其机制。方法将ApoE^(-/-)小鼠(n=12)随机分为2组,设立正常饮食组(ND组,n=6)和高蛋氨酸饮食组(HMD组,n=6);体外培养RAW264.7巨噬细胞,设立对照组(Control组,0μmol·L^(-1) Hcy)和Hcy干预组(Hcy组,100μmol·L^(-1) Hcy),Hcy干预的巨噬细胞转染腺病毒后设置ADAMTS8过表达阴性对照组(Hcy+Ad-NC)和ADAMTS8过表达组(Hcy+Ad-ADAMTS8),Hcy干预的巨噬细胞转染干扰片段后设置干扰片段对照组(Hcy+si-NC)、ADAMTS8干扰片段组(Hcy+si-ADAMTS8),Hcy干预的巨噬细胞ADAMTS8过表达组(Hcy+Ad-ADAMTS8)和Hcy干预的巨噬细胞ADAMTS8过表达+铁死亡抑制剂组(Fer-1+Hcy+Ad-ADAMTS8);免疫荧光染色观察ADAMTS8、xCT、ACSL4表达差异;Pearson相关系数分析ADAMTS8与铁死亡相关指标xCT、ACSL4的相关性;Western blot检测铁死亡指标xCT、ACSL4表达变化;丙二醛(malondialdehyde,MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性评估细胞氧化水平及抗氧化能力。结果与ND相比,HMD组ADAMTS8表达明显增高,铁死亡相关蛋白xCT的表达水平下降,而ACSL4表达水平明显上升;与Control组相比,Hcy组中ADAMTS8蛋白表达增高,xCT蛋白表达降低,而ACSL4蛋白表达升高,MDA水平升高而SOD活性明显降低;相关性分析显示ADAMTS8表达水平与xCT表达水平呈负相关,与ACSL4表达水平呈正相关;与Hcy+si-NC组相比,Hcy+si-ADAMTS8组中xCT蛋白表达水平明显升高,ACSL4表达量降低,MDA水平下降,SOD活性增强;相反,与Hcy+Ad-NC组相比,Hcy+Ad-ADAMTS8组中xCT蛋白表达水平降低,ACSL4表达量增加,MDA水平增强,SOD活性下降;与Hcy+Ad-ADAMTS8组相比,Fer-1+Hcy+Ad-ADAMTS8组中xCT蛋白表达水平升高,ACSL4表达量降低,MDA水平下降,SOD活性增强。结论ADAMTS8调控铁死亡影响巨噬细胞内氧化与抗氧化平衡,进而促进Hcy致AS的发生发展。
